24
感染症学雑誌 第84巻 第 1 号
1992 年〜2007 年に沖縄県の人，動物および環境から分離された Salmonella Weltevreden の薬剤感受性と耐性遺伝子
1）沖縄県八重山家畜保健衛生所，2）沖縄県環境衛生研究所
又 吉 正 直
１）久 高 潤
２）（平成 21 年 5 月 22 日受付）
（平成 21 年 9 月 11 日受理）
Key words : antimicrobial susceptibility,SalmonellaWeltevreden
要 旨
1992 年〜2007 年 に 沖 縄 県 の 人 の 下 痢 症 患 者，動 物 お よ び 動 物 の 飼 育 環 境 か ら 分 離 し たSalmonella Weltevreden 86 株の薬剤感受性，薬剤耐性遺伝子保有状況を調べた．下痢症患者由来は 41 株，動物種別で は採卵鶏 25 株，肉用牛 5 株，豚 5 株，乳用牛 3 株，ネズミ 2 株，馬 1 株，ハエ 1 株および配合飼料原料 3 株である．薬剤耐性が認められた株は 7 株（8.1％）であった．最高は肉用牛由来株で 12 薬剤のうち 6 剤に 耐性であった．薬剤別耐性はストレプトマイシン 6 株（7.0％），オキシテトラサイクリン 6 株（7.0％），ア ンピシリン 2 株（2.3％），カナマイシン 2 株（2.3％），クロラムフェニコール 2 株（2.3％），スルファメト キサゾール!トリメトプリム 2 株（2.3％）．一方，ゲンタマイシン，セフロキシム，コリスチン，ナリジク ス酸，ホスホマイシンおよびオフロキサシンにはすべて感受性であった．耐性型は ABPC-SM-KM-OTC-CP- ST，ABPC-SM-ST，SM-KM-OTC，SM-OTC-CP，SM-OTC，OTC の 6 耐性型に区分された．薬剤耐性遺 伝子はアンピシリン耐性 2 株がすべてblaTEMを保有し，ストレプトマイシン耐性株ではaadA 4 株，strA 2 株，オキシテトラサイクリン耐性株ではtetA 2 株およびtetB 3 株，クロラムフェニコール耐性株ではcatA1 2 株の耐性遺伝子が検出された．
〔感染症誌 84：24〜27，2010〕
序 文
Salmonellaは自然界に広く生息し，人や動物の胃腸
炎，下痢症，敗血症および流産などの原因菌となる．
また，本菌は発生件数，患者数とも毎年上位に位置す る食中毒の原因菌として，公衆衛生および食品衛生上，
最も注目されている細菌の一つである．Salmonellaは 現在 2,500 余の血清型が報告１）されているが，このう ちSalmonellaWeltevreden は東南アジアを中心と し て分離され２），国内では沖縄県でのみ人および動物か ら高頻度で検出される血清型である３）〜５）．今回，1992 年から 2007 年までの 16 年間に，人，動物および動物 の環境から分離されたS.Weltevreden について薬剤 感受性試験および薬剤耐性遺伝子の検出を行ったので その概要を報告する．
材料と方法
供試菌株：1992 年から 2007 年までの 16 年間に，人
の下痢症患者由来 41 株，動物の病性鑑定，各種事業 において分離した 20 農場由来 45 株（採卵鶏 25 株，肉 用牛 5 株，豚 5 株，乳用牛 3 株，ネズミ 2 株，馬 1 株，
ハ エ 1 株，配 合 飼 料 原 料 3 株）合 計 86 株 のS.
Weltevreden.
供試菌株の生化学的性状検査：供試菌株の同定は常 法に従い，生化学的性状試験を行い同定した．Salmo-
nellaと同定された菌株の血清型別はサルモネラ免疫
血清「生研」（デンカ生研）を用いた．
薬剤感受性試験：臨床検査標準委員会（CLSI）の 抗菌薬ディスク感受性試験実施基準に基づき，SN ディスク（日水製薬）を用いて行った．使用薬剤はア ンピシリン（ABPC），ストレプトマイシ ン（SM），
カナマイシン（KM），ゲンタマイシン（GM），セフ ロキシム（CXM），オキシテトラサイクリン（OTC），
コリスチン（CL）クロラムフェニコール（CP），ナ リジクス酸（NA），ホスホマイシン（FOM），スルファ メトキサゾール!トリメトプリム（ST）およびオフロ 原 著
別刷請求先：（〒907―0022）石垣市字大川 99
沖縄県八重山家畜保健衛生所 又吉 正直
SalmonellaWeltevreden の薬剤感受性と耐性遺伝子 25
平成22年 1 月20日
Table 1 Antimicrobialresistance and resistance genesofSalmonellaWeltevreden
catA1 tetG tetE tetD tetC tetB tetA aadA strA blaTEM
OFLX ST FOM NA CP CL OTC CXM GM KM SM ABPC origin
－
－
－
－
－
＋
－
－
＋
－ S S S S S S R S S R R＊ S＊ human
－
－
－
－
－
＋
－
－
－
－ S S S S S S R S S S R S swine
－
－
－
－
－
－
＋
－
＋
－ S S S S S S R S S S R S swine
＋
－
－
－
－
－
－
＋
－
－ S S S S R S R S S S R S swine
－
－
－
－
－
－
－
＋
＋
＋ S R S S S S S S S S R R layer
－
－
－
－
－
－
＋
－
－
－ S S S S S S R S S S S S pony
＋
－
－
－
－
＋
－
－
＋
＋ S R S S R S R S S R R R cattle
＊ S:Susceptible,R:Resistant
キサシン（OFLX）の 12 薬剤を用いた．
薬剤耐性遺伝子の検出：薬剤感受性試験で耐性と判 定された株については，既報２）６）により以下の薬剤耐性 遺伝子の検出を PCR 法で行った．ABPC 耐性遺伝子
（blaTEM），SM 耐性遺伝子（strA，aadA），OTC 耐性遺 伝 子（tetA，tetB，tetC，tetD，tetE，tetG），CP 耐 性 遺伝子（catA1）
成 績
供試菌株の由来：人由来は沖縄本島，宮古島市およ び石垣市の病院において下痢由来患者から分離された ものである．動物由来では馬由来 1 株と肉用牛由来 1 株が病性鑑定で分離された．馬は 1999 年 4 月 12 日九 州 K 県より石垣市の農場に導入され，当初は異常は 認められなかった．4 月 22 日昼，食欲不振の症状を 示した他，著変はなかったが夜に死亡した．治療はさ れてなかった．4 月 23 日剖検，泡沫鼻汁，軟便〜下 痢便が認められた．菌は脳，心臓を始めとする全身の 主要臓器から分離された．肉用牛は 2007 年 5 月 11 日 に石垣市の農場で生まれた子牛で 5 月 19 日，下痢症 で初診を受けた．5 月 29 日に死亡し，同日病性鑑定 を行った．菌は脾臓から純培養状に分離され，病理組 織学的検査では血栓形成性壊死性小腸炎と診断され た．その他の株は農林水産省の各種衛生事業等で採材 された健康動物由来である．
薬剤感受性試験：薬剤耐性が認められた株は 7 株
（8.1％）であった（Table 1）．耐性型は肉用牛でアン ピシリン・ストレプトマイシン・カナマイシン・オキ シテトラサイクリン・クロラムフェニコール・スル ファメトキサゾール!トリメトプリムの 6 剤耐性型を はじめ 6 耐性型に区分された．豚由来 3 株はすべて 2 剤以上の多剤耐性株であった．
薬剤耐性遺伝子の検出：薬剤耐性遺伝子の検出状況 は Table 1に示した．
考 察
S.Weltevreden は 採 卵 鶏，馬，豚，肉 用 牛，乳 用 牛，ネズミ，ハエ，飼料など多種類の動物や検体から 分離された．動物別の由来では採卵鶏由来株が 25 株 で動物由来株の 47.2％ を占めた．これは，鶏卵衛生
に関する農林水産省の事業が過去十数年間継続して行 われ，他の動物と比較して鶏からのサンプリング数が 多かったことがその理由として考えられた．馬と肉用 牛由来 1 株を除き，すべて健康動物からの分離であり，
病性鑑定由来が少なかったことはS. Weltevreden の 病原性がS. Typhimurium やS. Dublin などの固有宿 主に強い病原性を示す血清型に比較して低いものであ ることが示唆された．S. Weltevreden は沖縄県にお いて人由来ではS. Enteritidis に次いで分離され４），動 物由来でもS. Bareilly に次いで 2 番目に多く分離さ れている５）．しかし，国内では極めて稀な血清型３）であ り，沖縄県以外のS. Weltevreden による集団発生報 告は 1994 年栃木県内の温泉旅館のイカ刺身が原因と なった事例７）と 2005 年岩手県の飲食店の仕出し料理が 原因となった事例８）のみである．また，これまでの分 離例も東南アジアなどの海外渡航歴のある旅行者下痢 症患者にほぼ限られている９）．S. Weltevreden は東南 アジアでは高頻度に分離される血清型であり，フィリ ピンでは散発下痢症患者から最も多く分離され１０），タ イ１１），マレーシア１２）でも分離されたSalmonella血清型 の第一位を占める．また，ハワイ・ホノルルにおける 小児下痢症においても 23％ と最も高率に分離されて いる１３）．さらにベトナムのメコンデルタでの家畜や家 禽の保菌調査１４）でも高頻度で検出されている．沖縄県 では 1999 年 8 月にS. Weltevreden に汚染された山羊 肉が原因となり 84 名が発症し，15 名が入院した集団 食中毒事例７）があり，山羊肉が原因となった集団食中 毒ではこれまで 3 件のうち 2 件でS. Weltevreden の 関与が指摘されている．国内ではインドネシア旅行後 にS. Weltevreden が原因となった腸炎による死亡例９）
もあることから，今後その病原性についても詳細な検 討が必要であると考えられる．
薬剤感受性試験では，人由来株は 41 株中耐性を示 したのは SM・KM・OTC の 3 剤耐性の 1 株（2.4％）
だけであり，薬剤耐性に関しては人医療への影響は比 較的少ないものと考えられた．動物別では豚由来株が 3 株でいずれも多剤耐性株であった．これは他の動物 に比較して養豚場での抗菌性物質の使用頻度の多さが
又吉 正直 他 26
感染症学雑誌 第84巻 第 1 号 薬剤耐性の出現に反映した結果であると推察された．
一方，採卵鶏由来 25 株のうち耐性株は 1 株（4.0％）
のみであった．一般に採卵鶏由来株における耐性株の
出現はSalmonellaや大腸菌などの菌種では全体的に少
ないことが知られている１５）．これは採卵鶏に使用され る抗菌剤が極めて少ないことが反映されているものと 考えられた．薬剤耐性が認められた 7 株（8.1％）の うち OTC 耐性と SM 耐性がそれぞれ 6 株を占めた．
県内でこれまで分離されたSalmonellaの薬剤感受性調 査４）５）でも OTC 耐性株や SM 耐性株が高頻度に検出さ れており，S. Weltevreden でも同様な傾向が認めら れた．Aarestrup ら２）は地域的に異なる 10 カ国から分
離されたS. Weltevreden の薬剤感受性調査を行って
い る が，S. Weltevreden の 薬 剤 耐 性 はS. Enteritidis やS. Typhimurium などの主要な血清型のSalmonella に比較して低い成績となっている．今回の成績でも既 報２）とほぼ同様な成績となった．
薬剤耐性遺伝子の検出においては，blaTEMが 2 株の ABPC 耐性株から検出された．blaTEMはこれまでもS.
Typhimurium をはじめに種々の血清型のSalmonella か ら 検 出 さ れ て い る１６）１７）．ま た Aarestrup ら２）のS.
Weltevreden の薬剤感受性調査でもすべての ABPC 耐 性 株 か ら 検 出 さ れ て い る．今 回 の 成 績 か らS.
Weltevreden の ABPC 耐 性 の 主 要 な 耐 性 遺 伝 子 は blaTEMであることが推察された．SM の耐性遺伝子は strA保有株が 4 株，aadA保有株が 1 株，strAとaadA 保有株が 1 株であった．豚由来 1 株と馬由来 1 株はい ずれの耐性遺伝子も保有していなかった．Aarestrup ら２）の調査ではaadAはstrAより多く検出されている が，県内の株ではstrAが優勢な SM 耐性遺伝子であ ると考えられた．Salmonellaにおいてはテトラサイク リン系薬剤の耐性遺伝子はtetAとtetBの検出率が高 いことが知られている２）６）が，今回の成績ではtetB保 有株が 3 株，tetA保有株が 2 株であり，主要なテトラ サイクリン耐性遺伝子であると考えられた．クロラム フェニコール耐性は 2 株であったが，うち 2 株とも
catA1の保有が確認された．
S. Weltevreden は最近ノルウェーを中心とした北 欧でアルファルファもやし用の種子が原因となった人 の胃腸炎患者からの集団感染の分離報告１８）がある．さ らに国内に輸入された海洋食品の調査１９）においても，
ブラックタイガーから唯一分離されている血清型であ る．世界的な食品の物流が盛んなことから，今後は医 学・公衆衛生分野の機関と連携を深めながら，多様な 観点からそのリスクを検討し，野外から分離されるS.
Weltevreden の諸性状を継続的に監視していくこと が必要であると考えられた．
文 献
1）Grimont PA, Weil FX：Antigenic formulae of the Salmonella serovars 2007, 9th ed. Institute Pasteur, Paris, 2007.
2）Aarestrup FM, Lertworapreecha M, Evans MC, Bangtrakulnonth A, Chalermchaikit T, Hendrik- sen RS,et al.：Antimicrobial susceptibility and occurrence of resistance genes among Salmo- nella enterica serovar Weltevreden from differ- ent countries. J Antimicrob Chemother 2003；
52：715―8.
3）松下 秀，観 照雄：サルモネラ食中毒とその
発生状況．獣畜新報 2003；56：672―6.
4）Kudaka J, Itokazu K, Taira K, Iwai A, Kondo M, Susa M,et al.：Characterization of Salmonella isolated in Okinawa, Japan. Jpn J Infect Dis 2006；59：15―9.
5）又吉正直，大城 聡，新田芳樹，多嘉良功，高
木和香子，安里 仁，他：1992 年から 2005 年に 沖縄県の動物および環境から分離されたSalmo-
nellaの血清型と薬剤耐性．日獣会誌 2006；59：
259―65.
6）Frech G, Schwarz S：Molecular analysis of tet- racycline resistance in Salmonella eterica subsp.
enterica serovars Typhimurium, Enteritidis, Dublin, Choleraesuis, Hadar and Saintpaul : con- struction and application of specific gene probes. J Appl Microbiol 2000；89：633―41.
7）国立予防衛生研究所：山羊肉を原因としたSal-
monella Weltevreden による食中毒事例と県内外
の 発 生 状 況―沖 縄 県．病 原 微 生 物 検 出 情 報 2000；21：164.
8）国 立 予 防 衛 生 研 究 所：同 時 期 にSalmonella Weltevreden およびSalmonella Saintpaul が分離 された食中毒 2 事例―岩手県．病原微生物検出 情報 2006；27：318.
9）小花光夫，鈴木 厚，松岡康夫，入交昭一郎：
イ ン ド ネ シ ア 旅 行 後 に 発 症 し たSalmonella Weltevreden 腸炎の 1 死亡例．感染症誌 1996；
70：251―4.
10）松下 秀，山田澄夫，太田建爾，工藤泰雄：フィ
リピンにおいて 1992-1994 に散発下痢症患者より 分 離 さ れ た サ ル モ ネ ラ に つ い て．感 染 症 誌 1996；70：1154―9.
11）Bangtrakulnonth A, Pornrunangwong S, Pulsri- karn C, Sawanpanyalert P, Hendriksen RS, Lo Fo, Wong DM,et al.：Salmonella serovars from humans and other source in Thailand. 1993- 2002. Emerg Infect Dis 2004；10：131―6.
12）Yasin RY, Cheah CT, Jegathesan M：Human Salmonellosis in Malaysia for the period 1989- July 1994. Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health 1995；26：457―60.
13）Wittler RR, Bass JW：Nontyphoidal Salmonella enteric infections and bacteremia. Pediatr Infect Dis J 1989；8：364―7.
14）Ogasawara N, Phan TT, Khai LTL, Tam NT,
SalmonellaWeltevreden の薬剤感受性と耐性遺伝子 27
平成22年 1 月20日
Iwata T, Okatani AT：Antimicrobial suscepti- bilities ofSalmonellafrom domestic animals, food and human in the Mekong Delta, Vietnam. J Vet Med Sci 2008；70：1159―64.
15）田村 豊：動物用抗菌剤の使用動向と薬剤耐性
菌対策．日獣会誌 2003；56：685―91.
16）Gallardo F, Ruiz J, Marco F, Towner KJ, Vila J：Increase in incidence of resistance to am- picillin, chloramphenicol and trimethoprim in clinical isolates of Salmonella serotype Ty- phimurium with investigation of molecular epi- demiology and mechanism of resistance. J Med Microbiol 1999；48：367―74.
17）Ahmed AM, Ishida Y, Shimamoto T：Molecular
Characterization of antimicrobial resistance in Salmonella isolated from animals in Japan. J Appl Microbiol 2009；106：402―9.
18）Emberland KE, Etherberg S, Kuusi M, Lind- stedt BA, Nygård K, Kjelsø C,et al.：Outbreak of SalmonellaWeltevreden infections in Norway, Denmark, Finland associated with alfalfa sprouts, July-October 2007. Eurosurveillance 2007；12：48.
19）Asai Y, Kaneko M, Ohtsuka K, Morita Y, Kaneko S, Noda H,et al.：Salmonella prevalence in seafood imported into Japan. J Food Prot 2008；71：1460―4.
Antimicrobial Susceptibility and Resistance Genes Among Salmonella enterica Serovar Weltevreden Isolates from Humans, Farm Animals, and the Environment in Okinawa Prefecture Between 1992 and 2007
Masanao MATAYOSHI１）& Jun KUDAKA２）
１）Yaeyama Livestock Hygiene Service Center and２）Department of Biological Science, Okinawa Prefectual Insititute of Health and Environment
Between 1992 and 2007, a total of 86 isolates ofSalmonella entericaWeltevreden were obtained from clini- cal human samples (n＝41), 45 farm animals and their environment on 20 farms, including poultry (n＝25), beef cattle (n＝5), swine (n＝5), dairy cattle (n＝3), mice (n＝2), pony (n＝1), fly (n＝1) and feed samples (n＝3), in Okinawa Prefecture, Japan. Only seven isolates (8.1％) of the isolates were resistance to one or more an- timicrobial agents tested ; six streptomycin (7.0％), six oxytetracycline (7.0％), two ampicillin (2.3％), two ka- namycin, (2.3％), two chloramphenicol (2.3％), two suffamethoxazole!trimethoprim (2.3％), whereas all iolates were susceptible to gentamicin, sefuroxime, colistin, nalidixic acid, fosfomycin and ofloxacin. Drug resistance patterns showed six patterns ; ABPC-SM-KM-OTC-CP-ST, ABPC-SM-ST, SM-KM-OTC, SM-OTC-CP, SM- OTC, OTC. Two ampicillin-resistant isolates harbored theblaTEM genes, streptomycin-resistant isolates (four aadA, two strA), tetracycline-resistant isolates (two tetA, three tetB), chloramphenicol-resistant isolates (two catA1), respectively.
