LC/MS/MS によるフェノール類分析日本ウォーターズ株式会社 2015 Waters Corporation 1 対象化合物 Cl HO HO HO フェノール 2- クロロフェノール (2-CPh) Cl 4-クロロフェノール (4-CPh) HO Cl HO Cl HO Cl Cl 2,4

(1)

LC/MS/MSによるフェノール類分析

によるフェノール類分析

日本ウォーターズ株式会社

対象化合物

O

H

Cl

O

H

Cl

O

H

Cl

O

H

Cl

O

H

Cl

O

H

フェノール

2-クロロフェノール

(2-CPh)

4-クロロフェノール

(4-CPh)

2,4-ジクロロフェノール

(2,4-DPh)

2,6-ジクロロフェノール

(2,6-DPh)

2,4,6-トリクロロフェノール

(2,4,6-TPh)

(2)

サンプル調製（検量線⽤標準液）

精製水250mL(

HClにてpH=2.0に調製,(0.01M-HCl×250uL)

)

Oasis HLB Plusコンディショニング

(メタノール5mL、精製水5mL)

通液(10mL/min)

洗浄(精製水5mL)

乾燥(10min 空気吸引)

バックフラッシュ溶出(メタノール)

(溶出液が1mLとなるまで)

精製水にて5mLに定容

LC/MS分析

500 ppb標準溶液添加

(0,20,40,100,200,500uL)

Oasis HLB Plusコンディショニング

(メタノール5mL、精製水5mL)

通液(10mL/min)

洗浄(精製水5mL)

乾燥(10min 空気吸引)

バックフラッシュ溶出(メタノール)

(溶出液が1mLとなるまで)

精製水にて5mLに定容

LC/MS分析

500 ppb標準溶液添加

(0,40uL)

L-アスコルビン酸Na25mg (50mg/mL×250uL)

水道水250mL(

)

サンプル調製（水道水サンプル溶液）

(3)

LC

LC分析条件

分析条件

LC 条件

条件

LC システム:

ACQUITY UPLC H-Class

カラム:

ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 100 mm, 1.8µm

カラム温度:

40 ℃

移動相 A:

水

移動相 B:

メタノール

注入量:

20 µL(50 uLループ)

流速：

0.45 mL/min

グラジエント:

分析時間:

13 分

Time(min)

A%

B%

Curve

0.00

80

20 Initial

0.33

60

40

6

3.33

60

40

6

10.00

20

80

6

11.00

80

20

11 MS

MS分析条件

分析条件

MS 条件

条件

MS システム:

Xevo TQ-S micro

イオン化モード:

APCI negative

分析モード:

SIR

コロナ:

10 uA(1.5 kV)

ソース温度:

150 ℃

プローブ温度:

200 ℃

脱溶媒ガス:

1100 L/hr

コーンガス:

150 L/hr

SIR

Name

モニター

_イオン

コーン電圧

(V)

RT

IonMode

Phenol

92.75

68

2.19 APCI-2-CPh

126.80

30

3.73 APCI-4-CPh

126.80

46

4.59 APCI-2,6-DCPh

160.80

56

5.90 APCI-2,4-DCPh

160.80

52

7.32 APCI-2,4,6-TCPh

194.80

62

8.86

(4)

水道水添加

水道水添加SIRクロマトグラム

クロマトグラム

添加濃度

添加濃度0.08ppb(最終溶液

最終溶液

最終溶液4ppb)

Tap 0.08 ppb Time 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 % 18 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 % 9 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 % 3 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 % 2 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 % 2 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 % 2

1226_120 7: SIR of 1 Channel AP-

194.8 (246-TCPh) 5.42e4 8.87

1226_120 6: SIR of 1 Channel AP- 160.8 (24-DCPh) 7.72e4

7.31

160.8 (26-DCPh) 6.97e4

5.92

126.8 (4-CPh) 1.31e5 4.56

126.8 (2-CPh) 7.32e4

3.72

1226_120 2: SIR of 1 Channel AP- 92.75 (Phenol) 9.72e4 2.18

フェノール

2-クロロフェノール

4-クロロフェノール

2,6-ジクロロフェノール

2,4-ジクロロフェノール

2,4,6-トリクロロフェノール

SIRクロマトグラム

クロマトグラム

クロマトグラム(最終溶液

最終溶液

最終溶液4ppb)

最終溶液

フェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) フェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) min 2.000 2.500 % 15 1226_119 Phenol min 2.000 2.500 % 18 1226_120 Phenol m in 3.500 4.000 % 5 1226_119 2-CPh m in 3.500 4.000 % 10 1226_120 2-CPh m in 4.500 5.000 % 3 1226_120 4-CPh m in 4.500 5.000 % 2 1226_119 4-CPh m in 5.50 6.00 % 1 1226_119 26-DCPh m in 5.50 6.00 % 2 1226_120 26-DCPh m in 7.000 7.500 % 2 1226_120 24-DCPh m in 7.000 7.500 % 1 1226_119 24-DCPh m in 8.50 9.00 9.50 % 2 1226_119 246-TCPh m in 8.50 9.00 9.50 % 3 1226_120 246-TCPh 2-クロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 4-クロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,6-ジクロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,4-ジクロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,4,6-トリクロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2-クロロフェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 4-クロロフェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,6-ジクロロフェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,4-ジクロロフェノール標準水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,4,6-トリクロロフェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb)

(5)

検量線

フェノールフェノールフェノールフェノール R^2=0.999 2-クロロフェノールクロロフェノールクロロフェノールクロロフェノール R^2=0.99８８８８ 4-クロロフェノールクロロフェノールクロロフェノールクロロフェノール R^2=0.998 2,6-ジクロロフェノールジクロロフェノールジクロロフェノールジクロロフェノール R^2=0.999 2,4-ジクロロフェノールジクロロフェノールジクロロフェノールジクロロフェノール R^2=0.999 2,4,6-トリクロロフェノール トリクロロフェノールトリクロロフェノールトリクロロフェノール R^2=0.999

Compound name: Phenol

Correlation coefficient: r = 0.999616, r^2 = 0.999233 Calibration curve: 982.757 * x + 954.662 Response type: External Std, Area

Curve type: Linear, Origin: Exclude, Weighting: 1/x, Axis trans: None

ppb -0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 R e s p o n s e -0 50000 Compound name: 2-CPh Correlation coefficient: r = 0.999101, r^2 = 0.998202 Calibration curve: 1332.8 * x + -232.778 Response type: External Std, Area

ppb -0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 R e s p o n s e -0 100000 Compound name: 26-DCPh Correlation coefficient: r = 0.999469, r^2 = 0.998938 Calibration curve: 1418.12 * x + -214.19 Response type: External Std, Area

ppb -0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 R e s p o n s e -0 50000 Compound name: 246-TCPh Correlation coefficient: r = 0.999595, r^2 = 0.999191 Calibration curve: 980.66 * x + 216.967 Response type: External Std, Area

妥当性評価結果

化合A物

検量線範囲

(ppb)

R^2

基準値*1/10

(ug/L=ppb)

基準値*1/10

(ug/L=ppb)

基準値

*1/10(u

g/L=ppb)

最終溶液

換算

測定濃度

(ppb)最終

溶液換算

1日目 n=5

(ppb)

真度 (%)

併行精度

%RSD n=5

Phenol

0.04 -

1

0.999

0.5

0.08

4

4 3.7218

93

4.8 2-CPh

0.04 -

1

0.998

0.08

4

4 3.8854

97

5.4 4-CPh

0.04 -

1

0.998

0.08

4

4 3.9250

98

4.2 2,6-DCPh

0.04 -

1

0.999

0.08

4

4 3.7992

95

3.9 2,4-DCPh

0.04 -

1

0.999

0.08

4

4 3.7876

95

4.5 2,4,6-TCPh 0.04

-

1

0.999

0.08

4

4 4.0468

101

7.0 化合物

1日目 n=5

(ppb)

2日目 n=2

(ppb)

3日目 n=2

(ppb)

4日目 n=2

(ppb)

5日目 n=2

(ppb)

室内精度

%RSD

Phenol

3.7218

3.3945

3.8000

3.4800

3.6280

4.6 2-CPh

3.8854

3.3835

3.8395

3.4965

3.8495

6.3 4-CPh

3.9250

3.6830

4.1530

3.9095

3.9265

4.2 2,6-DCPh

3.7992

3.4960

4.0335

3.5450

3.8675

6.0 2,4-DCPh

3.7876

3.7070

3.9045

3.7450

3.8235

2.0 2,4,6-TCPh

4.0468

3.7540

4.0395

3.9400

3.7475

3.8

(6)

LC/MS/MSによるフェノール類分析

によるフェノール類分析

日本ウォーターズ株式会社

対象化合物

O

H

Cl

O

H

Cl

O

H

Cl

O

H

Cl

O

H

Cl

O

H

フェノール

2-クロロフェノール

(2-CPh)

4-クロロフェノール

(4-CPh)

2,4-ジクロロフェノール

(2,4-DPh)

2,6-ジクロロフェノール

(2,6-DPh)

2,4,6-トリクロロフェノール

(2,4,6-TPh)

(7)

サンプル調製（検量線⽤標準液）

精製水250mL(

)

Oasis HLB Plusコンディショニング

(メタノール5mL、精製水5mL)

通液(10mL/min)

洗浄(精製水5mL)

乾燥(10min 空気吸引)

バックフラッシュ溶出(メタノール)

(溶出液が1mLとなるまで)

精製水にて5mLに定容

LC/MS/MS分析

500 ppb標準溶液添加

(0,20,40,100,200,500uL)

Oasis HLB Plusコンディショニング

(メタノール5mL、精製水5mL)

通液(10mL/min)

洗浄(精製水5mL)

乾燥(10min 空気吸引)

バックフラッシュ溶出(メタノール)

(溶出液が1mLとなるまで)

精製水にて5mLに定容

LC/MS/MS分析

500 ppb標準溶液添加

(0,40uL)

L-アスコルビン酸Na25mg (50mg/mL×250uL)

水道水250mL(

)

サンプル調製（水道水サンプル溶液）

(8)

LC

LC分析条件

分析条件

LC 条件

条件

LC システム:

ACQUITY UPLC H-Class

カラム:

ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 100 mm, 1.8µm

カラム温度:

40 ℃

移動相 A:

水

移動相 B:

メタノール

注入量:

20 µL(50 uLループ)

流速：

0.45 mL/min

グラジエント:

分析時間:

13 分

Time(min)

A%

B%

Curve

0.00

80

20 Initial

0.33

60

40

6

3.33

60

40

6

10.00

20

80

6

11.00

80

20

11 MS

MS分析条件

分析条件

MS 条件

条件

MS システム:

Xevo TQ-S micro

イオン化モード:

APCI negative

分析モード:

SRM

コロナ:

10 uA(1.5 kV)

ソース温度:

150 ℃

プローブ温度:

200 ℃

脱溶媒ガス:

1100 L/hr

コーンガス:

150 L/hr

SRM

Name プレカーサイオンプロダクトイオンコーン電圧 (V) ｺﾘｼﾞｮﾝｴﾈﾙｷﾞｰ (eV) RT IonMode Phenol 92.75 64.70 68 17 2.19 APCI-2-CPh 126.80 34.80 30 14 3.73 APCI-4-CPh 126.80 34.80 46 16 4.59 APCI-2,6-DCPh 160.80 34.80 56 17 5.90 APCI-2,4-DCPh 160.80 124.65 52 14 7.32 APCI-2,4,6-TCPh 194.80 34.80 62 20 8.86

(9)

APCI-©2015 Waters Corporation 7 Tap 0.08 ppb Time 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 % 12 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 % 0 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 % 0 100 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 % 0 100 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 % 0 100 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 % 0 100 1226_120 13: MRM of 1 Channel AP- 194.8 > 34.8 (246-TCPh) 1.38e3 8.88 1226_120 12: MRM of 1 Channel AP- 160.8 > 124.65 (24-DCPh) 7.20e3 7.31 1226_120 11: MRM of 1 Channel AP- 160.8 > 34.8 (26-DCPh) 1.95e3 5.93 1226_120 10: MRM of 1 Channel AP- 126.8 > 34.8 (4-CPh) 2.73e3 4.57 1226_120 9: MRM of 1 Channel AP- 126.8 > 34.8 (2-CPh) 1.60e3 3.72 1226_120 8: MRM of 1 Channel AP- 92.75 > 64.7 (Phenol) 1.60e3 2.18

水道水添加

水道水添加SRMクロマトグラム

クロマトグラム

添加濃度

添加濃度0.08ppb(最終溶液

最終溶液

最終溶液4ppb)

フェノール

2-クロロフェノール

4-クロロフェノール

2,6-ジクロロフェノール

2,4-ジクロロフェノール

2,4,6-トリクロロフェノール

SRMクロマトグラム

クロマトグラム

クロマトグラム(最終溶液

最終溶液

最終溶液4ppb)

フェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) フェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2-クロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 4-クロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,6-ジクロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,4-ジクロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,4,6-トリクロロフェノール標準溶液0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2-クロロフェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 4-クロロフェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,6-ジクロロフェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,4-ジクロロフェノール標準水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) 2,4,6-トリクロロフェノール水道水0.08 ppb (最終溶液 4 ppb) min 2.000 2.500 % 12 1226_119 Phenol 1.79 min 2.000 2.500 % 15 1226_120 Phenol 1.91 min 3.500 4.000 % 0 100 1226_119 2-CPh min 3.500 4.000 % 0 1226_120 2-CPh min 4.500 5.000 % 0 1226_119 4-CPh min 4.500 5.000 % 0 100 1226_120 4-CPh min 5.50 6.00 % 0 100 1226_120 26-DCPh min 5.50 6.00 % 0 100 1226_119 26-DCPh min 7.000 7.500 % 0 1226_119 24-DCPh min 7.000 7.500 % 0 100 1226_120 24-DCPh min 8.50 9.00 % 0 100 1226_119 246-TCPh 9.04 min 8.50 9.00 % 0 100 1226_120 246-TCPh 9.13

(10)

検量線

フェノールフェノールフェノールフェノール R^2=0.999 2-クロロフェノールクロロフェノールクロロフェノールクロロフェノール R^2=0.999 2,6-ジクロロフェノールジクロロフェノールジクロロフェノールジクロロフェノール R^2=0.999 2,4-ジクロロフェノールジクロロフェノールジクロロフェノールジクロロフェノール R^2=0.999 2,4,6-トリクロロフェノール トリクロロフェノールトリクロロフェノールトリクロロフェノール R^2=0.999

Compound name: Phenol

Correlation coefficient: r = 0.999471, r^2 = 0.998942 Calibration curve: 15.8863 * x + 14.0526 Response type: External Std, Area

ppb -0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 R e s p o n s e -0 5000 Compound name: 246-TCPh Correlation coefficient: r = 0.999744, r^2 = 0.999487 Calibration curve: 29.7239 * x + -4.09353 Response type: External Std, Area

LC/MS/MS によるフェノール類分析 日本ウォーターズ株式会社 2015 Waters Corporation 1 対象化合物 Cl HO HO HO フェノール 2- クロロフェノール (2-CPh) Cl 4-クロロフェノール (4-CPh) HO Cl HO Cl HO Cl Cl 2,4

LC/MS/MSによるフェノール類分析

によるフェノール類分析

によるフェノール類分析

によるフェノール類分析

日本ウォーターズ株式会社

日本ウォーターズ株式会社

日本ウォーターズ株式会社

日本ウォーターズ株式会社

対象化合物

O

H

Cl

O

H

Cl

O

H

Cl

Cl

O

H

Cl

Cl

O

H

Cl

Cl

Cl

O

H

フェノール

2-クロロフェノール

(2-CPh)

4-クロロフェノール

(4-CPh)

2,4-ジクロロフェノール

(2,4-DPh)

2,6-ジクロロフェノール

(2,6-DPh)

2,4,6-トリクロロフェノール

(2,4,6-TPh)

サンプル調製（検量線⽤標準液）

精製水250mL(

)

Oasis HLB Plusコンディショニング

(メタノール5mL、精製水5mL)

通液(10mL/min)

洗浄(精製水5mL)

乾燥(10min 空気吸引)

バックフラッシュ溶出(メタノール)

(溶出液が1mLとなるまで)

精製水にて5mLに定容

LC/MS分析

500 ppb標準溶液添加

(0,20,40,100,200,500uL)

Oasis HLB Plusコンディショニング

(メタノール5mL、精製水5mL)

通液(10mL/min)

洗浄(精製水5mL)

乾燥(10min 空気吸引)

バックフラッシュ溶出(メタノール)

(溶出液が1mLとなるまで)

精製水にて5mLに定容

LC/MS分析

500 ppb標準溶液添加

(0,40uL)

水道水250mL(

)

サンプル調製（水道水サンプル溶液）

LC

LC分析条件

分析条件

分析条件

分析条件

分析条件

分析条件

分析条件

分析条件

LC 条件

LC/MS/MS によるフェノール類分析日本ウォーターズ株式会社 2015 Waters Corporation 1 対象化合物 Cl HO HO HO フェノール 2- クロロフェノール (2-CPh) Cl 4-クロロフェノール (4-CPh) HO Cl HO Cl HO Cl Cl 2,4