( 5 7 ) 【 特 許 請 求 の 範 囲 】 【 請 求 項 １ 】 白 血 病 、 悪 性 リ ン パ 腫 、 及 び 、 卵 巣 が ん か ら な る 群 か ら 選 ば れ る が ん の が ん 検 体 に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 を 認 め た 場 合 に 、 当 該 が ん に お け る Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 若 し く は そ の 誘 導 体 の 剤 、 及 び 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 の 効 果 の 否 定 的 デ ー タ と す る 、 薬 剤 の 効 果 の 予 測 デ ー タ の 取 得 方 法 。 【 請 求 項 ２ 】 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 は 、 （ １ ） 一 方 の ア レ ル に ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 型 の 変 異 が あ り 、 他 方 の ア レ ル で 第 １ ７ 染 色 体 短 腕 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 存 在 領 域 の Ｌ Ｏ Ｈ ( l o s s o f h e t e r o z y g o s i t y ) が 認 め ら れ る 変 異 、 （ ２ ） 双 方 の ア レ ル に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 型 の ホ モ 変 異 も し く は コ ン パ ウ ン ド ヘ テ ロ 変 異 、 （ ３ ） 第 １ ７ 番 染 色 体 短 腕 の 欠 失 変 異 、 若 し く は 、 第 １ ７ 番 染 色 体 の 欠 失 変 異 、 及 び 、 （ ４ ） 一 方 の ア レ ル に ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 型 変 異 の み が 認 め ら れ 、 他 方 の ア レ ル の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 に は 変 異 は 認 め ら れ な い が 、 四 量 体 構 造 を 取 る ｐ ５ ３ 分 子 の サ ブ ユ ニ ッ ト と し て 、 変 異 ｐ ５ ３ サ ブ ユ ニ ッ ト が ラ ン ダ ム に 組 み 合 わ さ れ て 機 能 阻 害 が 認 め ら れ る 変 異 、 か ら 選 ば れ る １ 種 以 上 の 変 異 で あ る 、 請 求 項 １ に 記 載 の 予 測 デ ー タ の 取 得 方 法 。 【 請 求 項 ３ 】 一 方 の ア レ ル に ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 型 の 変 異 が あ り 、 他 方 の ア レ ル で 第 １ ７ 染 色 体 短 腕 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 存 在 領 域 の Ｌ Ｏ Ｈ ( l o s s o f h e t e r o z y g o s i t y ) が 認 め ら れ る 変 異 、 の 検 10 20
出 は 、 Ｌ Ｏ Ｈ の 検 出 に よ っ て 行 わ れ る 、 請 求 項 ２ に 記 載 の 予 測 デ ー タ の 取 得 方 法 。 【 請 求 項 ４ 】 Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 若 し く は そ の 誘 導 体 の 剤 、 及 び 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 を 含 有 す る こ と を 特 徴 と す る 、 白 血 病 、 悪 性 リ ン パ 腫 、 及 び 、 卵 巣 が ん か ら な る 群 か ら 選 ば れ る が ん で あ っ て 、 か つ 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 が 認 め ら れ な い 上 記 が ん 、 若 し く は 、 事 後 的 に ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 修 復 が な さ れ た 上 記 が ん の 治 療 剤 。 【 請 求 項 ５ 】 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 は 、 ク ロ ロ キ ン 類 、 ３ − メ チ ル ア デ ニ ン 、 バ フ ィ ロ マ イ シ ン Ａ 、 又 は 、 ウ ォ ル ト マ ニ ン で あ る 、 請 求 項 ４ に 記 載 の が ん の 治 療 剤 。 【 請 求 項 ６ 】 ク ロ ロ キ ン 類 は 、 ク ロ ロ キ ン （ ク ロ ロ キ ノ リ ン ） 、 又 は 、 ハ イ ド ロ オ キ シ ク ロ ロ キ ン で あ る 、 請 求 項 ５ に 記 載 の が ん の 治 療 剤 。 【 請 求 項 ７ 】 Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 若 し く は そ の 誘 導 体 の 剤 、 及 び 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 を 含 有 す る 医 薬 用 組 成 物 で あ る 、 請 求 項 ４ ∼ ６ の い ず れ か １ 項 に 記 載 の が ん の 治 療 剤 。 【 請 求 項 ８ 】 Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 若 し く は そ の 誘 導 体 の 剤 、 及 び 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 を 別 個 の 構 成 薬 剤 と し て 含 む 薬 剤 の セ ッ ト で あ る 、 請 求 項 ４ ∼ ６ の い ず れ か １ 項 に 記 載 の が ん の 治 療 剤 。 【 請 求 項 ９ 】 さ ら に Ｌ − ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 阻 害 薬 を 含 有 す る 、 請 求 項 ４ ∼ ８ の い ず れ か １ 項 に 記 載 の が ん の 治 療 剤 。 【 発 明 の 詳 細 な 説 明 】 【 技 術 分 野 】 【 ０ ０ ０ １ 】 本 発 明 は 、 が ん に 対 す る 薬 剤 療 法 の 効 果 の 予 測 手 段 に 関 す る 発 明 、 及 び 、 が ん 治 療 剤 に 関 す る 発 明 で あ る 。 【 背 景 技 術 】 【 ０ ０ ０ ２ 】 が ん 細 胞 が 増 殖 す る に は 、 様 々 な 物 質 が 必 要 で あ り 、 蛋 白 質 を 構 成 す る ア ミ ノ 酸 の 一 つ で あ る ア ス パ ラ ギ ン （ Ａ ｓ ｐ ） も そ の 一 つ で あ る 。 ア ス パ ラ ギ ン は 、 ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 に よ っ て 生 成 さ れ 、 Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ (Ｌ -asparaginase（ Ｌ − ａ ｓ ｐ ） )に よ っ て 分 解 さ れ る 。 【 ０ ０ ０ ３ 】 が ん の 中 に は 、 細 胞 中 の ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 が 不 足 し て お り 、 ア ス パ ラ ギ ン 不 足 に な っ て い る も の が あ り 、 さ ら に Ｌ − ａ ｓ ｐ を 与 え る と 当 該 が ん 細 胞 の 増 殖 が 阻 害 さ れ る こ と が 知 ら れ て お り （ 非 特 許 文 献 １ ） 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ を 用 い た 抗 が ん 剤 （ Ｌ − ａ ｓ ｐ 剤 ） が 、 白 血 病 や 悪 性 リ ン パ 腫 等 を 対 象 と し て 実 用 化 さ れ て い る 。 【 ０ ０ ０ ４ 】 Ｌ − ａ ｓ ｐ 剤 が キ ー ド ラ ッ グ と な る が ん の 一 つ と し て 、 急 性 リ ン パ 性 白 血 病 （ Ａ Ｌ Ｌ ） が 知 ら れ て い る 。 治 療 手 段 の 進 歩 に よ り 、 治 療 成 績 は 向 上 し て い る も の の 、 小 児 Ａ Ｌ Ｌ の ２ ０ ％ 、 成 人 Ａ Ｌ Ｌ の ４ ０ ％ は 治 療 不 応 性 と な り 、 依 然 と し て 予 後 不 良 で あ る （ 非 特 許 文 献 ２ 、 ３ ） 。 【 ０ ０ ０ ５ 】 そ の 中 に あ っ て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 剤 は 単 剤 で ６ ０ ％ の Ａ Ｌ Ｌ に 完 全 寛 解 を も た ら す こ と が 可 能 で あ り 、 さ ら に Ｌ − ａ ｓ ｐ の 投 与 量 や 投 与 頻 度 を 工 夫 す る こ と で 、 Ａ Ｌ Ｌ に 対 す る 無 病 生 存 率 を 向 上 さ せ る こ と が 可 能 に な っ て い る （ 非 特 許 文 献 ４ ） 。 【 ０ ０ ０ ６ 】 し か し な が ら 、 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 の Ｌ − ａ ｓ ｐ に 対 す る 感 受 性 の 低 下 に よ り 再 発 率 の 上 昇 や 治 療 不 応 に つ な が る こ と も 知 ら れ て い る （ 非 特 許 文 献 ５ ） 。 10 20 30 40 50
【 ０ ０ ０ ７ 】 と こ ろ で 、 オ ー ト フ ァ ジ ー は リ ソ ソ ー ム に よ る 細 胞 内 の 分 解 系 の 一 つ で あ り 、 長 く 存 在 し た 蛋 白 質 、 細 胞 内 小 器 官 、 及 び 、 蛋 白 質 凝 集 態 が オ ー ト フ ァ ゴ ソ ー ム 内 に 捕 捉 さ れ 、 そ の 後 リ ソ ソ ー ム と 融 合 し て 分 解 さ れ る と い う 、 高 度 に 制 御 さ れ た プ ロ セ ス で あ る 。 特 に 、 ア ミ ノ 酸 欠 乏 や 酸 化 ス ト レ ス と い っ た 各 種 ス ト レ ス の 悪 条 件 下 で 細 胞 の 生 存 を 可 能 に す る た め の ア ミ ノ 酸 供 給 源 と な る も の で あ る 。 近 年 、 卵 巣 が ん 細 胞 と Ａ Ｌ Ｌ に お い て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ が オ ー ト フ ァ ジ ー を 誘 導 す る こ と が 報 告 さ れ て い る （ 非 特 許 文 献 ６ 、 ７ ） 。 ま た 慢 性 骨 髄 性 白 血 病 に お い て は 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ に よ り 誘 導 さ れ る オ ー ト フ ァ ジ ー が が ん 細 胞 の 生 存 に 有 利 に 働 き 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 薬 を 併 用 す る こ と で 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ の 殺 細 胞 効 果 が 増 強 さ れ る こ と が 報 告 さ れ た （ 非 特 許 文 献 ８ ） 。 【 先 行 技 術 文 献 】 【 非 特 許 文 献 】 【 ０ ０ ０ ８ 】
【 非 特 許 文 献 １ 】 Oettgen, H. F.et al., Cancer research 27, 2619-2631(1967).
【 非 特 許 文 献 ２ 】 Curran, E. & Stock, Blood 125, 3702-3710, doi:10.1182/blood-2014 -11-551481(2015).
【 非 特 許 文 献 ３ 】 Locatelli, F., Schrappe, M., Bernardo, M.E. & Rutella, Blood 120 , 2807-2816, doi:10.1182/blood-2012-02-265884(2012).
【 非 特 許 文 献 ４ 】 Pieters, R. et al., Cancer 117, 238-249, doi:10.1002/cncr.25489( 2011)
【 非 特 許 文 献 ５ 】 Hongo, T., Yajima, S., Sakurai, M., Horikoshi, Y. & Hanada, R. B lood 89, 2959-2965(1997).
【 非 特 許 文 献 ６ 】 Yu, M. et al., Journal of cellular and molecular medicine 16, 23 69-2378, doi:10.1111/j.1582-4934.2012.01547x(2012).
【 非 特 許 文 献 ７ 】 Hermanova, I. et al., Leukemia, doi:10.1038/leu.2015.213(2015). 【 非 特 許 文 献 ８ 】 Song, P. et al., Oncotarget 6, 3861-3873(2015)
【 発 明 の 開 示 】 【 発 明 が 解 決 し よ う と す る 課 題 】 【 ０ ０ ０ ９ 】 し か し な が ら 、 上 記 の Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 薬 の 併 用 療 法 に お い て も 、 奏 功 す る 場 合 と 、 抵 抗 性 を 示 す 場 合 が 認 め ら れ る 。 本 発 明 は 、 こ の Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 薬 の 組 合 せ の が ん 細 胞 に お け る 作 用 機 序 を 明 ら か に し 、 当 該 併 用 療 法 が 奏 功 す る か 否 か の 指 標 を 見 出 し 、 か つ 、 当 該 指 標 を 活 用 し 得 る が ん 治 療 剤 を 提 供 す る こ と を 課 題 と し て な さ れ た 発 明 で あ る 。 【 課 題 を 解 決 す る た め の 手 段 】 【 ０ ０ １ ０ 】 本 発 明 者 ら は 、 今 般 下 記 （ １ ） ∼ （ ６ ） を 見 出 し 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 薬 の 併 用 療 法 を 行 う 上 で 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 が 決 定 的 な 役 割 を 果 た し て い る こ と を 見 出 し た 。 （ １ ） Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 に お い て Ｌ − ａ ｓ ｐ が オ ー ト フ ァ ジ ー を 惹 起 す る こ と 、 （ ２ ） Ｌ − ａ ｓ ｐ 誘 導 性 オ ー ト フ ァ ジ ー は ミ ト コ ン ド リ ア の 質 の 維 持 に 重 要 で あ り 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 薬 の 併 用 に よ り Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 内 の 酸 化 ス ト レ ス が 蓄 積 す る こ と 、 （ ３ ） 過 剰 に 蓄 積 し た 活 性 酸 素 （ Ｒ Ｏ Ｓ ） に よ る Ｄ Ｎ Ａ ダ メ ー ジ が ｐ ５ ３ 遺 伝 子 を 介 し て 更 な る 酸 化 ス ト レ ス を 誘 導 し 、 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 の ア ポ ト ー シ ス 細 胞 死 を 惹 起 す る こ と 、 （ ４ ） ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の ノ ッ ク ダ ウ ン Ａ Ｌ Ｌ 株 と 変 異 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 を 有 す る Ａ Ｌ Ｌ 臨 床 検 体 に お い て は 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 の 効 果 が 乏 し い こ と 、 （ ５ ） 機 能 が 欠 失 し た 変 異 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 を 有 す る Ａ Ｌ Ｌ 臨 床 検 体 に 対 し て 正 常 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 導 入 処 理 を 行 う こ と に よ り 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 の 効 果 が 回 復 す る こ と 、 （ ６ ） ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 の 発 現 上 昇 を 示 す Ｌ − ａ ｓ ｐ 耐 性 Ａ Ｌ Ｌ に お い て も Ｌ − ａ 10 20 30 40 50
ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 に よ る 効 果 が 認 め ら れ る こ と 。 【 ０ ０ １ １ 】 上 記 （ １ ） ∼ （ ６ ） の 事 項 は 、 第 １ に 、 被 験 者 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 有 無 を 指 標 に す る こ と に よ り 、 が ん 患 者 に お け る Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 薬 の 併 用 療 法 の 有 効 性 を 判 断 す る こ と が 可 能 で あ る こ と を 示 す も の で あ る 。 【 ０ ０ １ ２ 】 す な わ ち 、 本 発 明 は 、 が ん 検 体 に お け る 遺 伝 子 変 異 に よ る ｐ ５ ３ の 機 能 欠 失 を 認 め た 場 合 に 、 当 該 が ん に お け る Ｌ − ａ ｓ ｐ （ Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ ） 若 し く は そ の 誘 導 体 の 剤 、 及 び 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 の 効 果 の 否 定 的 デ ー タ と す る 、 薬 剤 の 効 果 の 予 測 デ ー タ の 取 得 方 法 （ 以 下 、 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 と も い う ） を 提 供 す る 。 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 は 、 が ん 検 体 に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 を 認 め た 場 合 に 、 当 該 が ん に お け る Ｌ − ａ ｓ ｐ 若 し く は そ の 誘 導 体 の 剤 、 及 び 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 の 効 果 の 否 定 的 予 測 を 行 う 、 薬 剤 の 効 果 の 予 測 方 法 、 と し て 表 現 す る こ と も 可 能 で あ る 。 【 ０ ０ １ ３ 】 本 発 明 に お い て 「 Ｌ − ａ ｓ ｐ 又 は Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 」 は 、 Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ そ の も の を 意 味 す る も の で あ る 。 ま た 、 「 Ｌ − ａ ｓ ｐ 誘 導 体 又 は Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 誘 導 体 」 と し て は 、 ポ リ エ チ レ ン グ リ コ ー ル 化 ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 等 が 例 示 さ れ る 。 「 Ｌ − ａ ｓ ｐ 又 は そ の 誘 導 体 の 剤 」 と は 、 抗 が ん 用 途 を 有 す る 剤 で あ り 、 有 効 成 分 で あ る Ｌ − ａ ｓ ｐ 又 は Ｌ − ａ ｓ ｐ 誘 導 体 そ の も の 、 及 び 、 こ れ に 何 ら か の 製 剤 手 段 を 施 し た も の （ 医 薬 組 成 物 ） を 含 む 概 念 で あ る 。 さ ら に 、 以 下 「 Ｌ − ａ ｓ ｐ 若 し く は そ の 誘 導 体 の 剤 」 を 、 「 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 」 と も い う 。 【 ０ ０ １ ４ 】 ま た 「 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 」 は 、 そ の 有 効 成 分 で あ る オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 成 分 と 、 こ れ に 何 ら か の 製 剤 手 段 を 施 し た も の （ 医 薬 組 成 物 ） を 含 む 概 念 で あ る 。 【 ０ ０ １ ５ 】 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 の 対 象 と な る が ん 検 体 は 、 基 礎 的 に Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 の 投 与 の 有 効 可 能 性 が 認 め ら れ る 、 す な わ ち 、 当 該 が ん 治 療 の 選 択 肢 と し て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 の 投 与 が 選 択 さ れ 得 る が ん の 検 体 で あ る 。 こ の 選 択 は 、 が ん 治 療 の 過 程 と し て 通 常 的 に 認 め ら れ る 場 合 の み な ら ず 、 そ れ 以 外 の チ ャ レ ン ジ 的 な 選 択 も 含 ま れ る 。 具 体 的 に は 、 白 血 病 、 悪 性 リ ン パ 腫 、 卵 巣 が ん 等 が 挙 げ ら れ る が 、 こ れ ら に 限 定 さ れ る も の で は な い 。 上 述 の よ う に Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 は 、 急 性 リ ン パ 性 白 血 病 （ Ａ Ｌ Ｌ ） の 第 １ 選 択 薬 と し て 用 い ら れ て お り 、 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 を 行 う 対 象 と し て 典 型 的 な が ん で あ る 。 【 ０ ０ １ ６ 】 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 に お い て 用 い ら れ る が ん 検 体 は 、 当 該 検 体 中 の が ん 細 胞 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 を 検 出 す る 必 要 性 か ら 、 直 接 的 に が ん 細 胞 が 含 ま れ る も の で あ る 必 要 が あ る 。 よ っ て 、 白 血 病 等 の 血 液 が ん で あ れ ば 白 血 病 細 胞 が 含 ま れ る 血 液 検 体 及 び ／ 又 は 骨 髄 検 体 が 、 固 形 が ん の 場 合 に は 、 当 該 が ん の 生 検 検 体 又 は 当 該 が ん が 含 ま れ る 体 液 検 体 が 、 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 に お い て 用 い ら れ る が ん 検 体 と し て 挙 げ ら れ る 。 【 ０ ０ １ ７ 】 上 記 （ １ ） ∼ （ ６ ） の 事 項 は 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 単 独 投 与 に 対 し て 抵 抗 性 を 有 す る が ん に 対 し て も 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 投 与 が 有 効 で あ る こ と を 示 し て い る 。 【 ０ ０ １ ８ 】 よ っ て 本 発 明 は 、 第 ２ に 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 を 含 有 す る こ と を 特 徴 と す る 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 単 独 投 与 に 対 し て 抵 抗 性 を 有 す る が ん の 治 療 剤 （ 以 下 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 と も い う ） を 提 供 す る 。 【 ０ ０ １ ９ 】 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 は 特 に 限 定 さ れ ず 、 例 え ば 、 ク ロ ロ キ ン （ ク ロ ロ キ ノ リ ン ） 、 ハ イ ド ロ オ キ シ ク ロ ロ キ ン 等 の ク ロ ロ キ ン 類 、 ３ − メ チ ル ア デ ニ ン 、 バ フ ィ ロ マ イ シ ン Ａ 、 10 20 30 40 50
ウ ゥ ル ト マ ニ ン 等 が 挙 げ ら れ る が 、 こ れ ら に 限 定 さ れ る も の で は な い 。 【 ０ ０ ２ ０ 】 本 発 明 の が ん 治 療 剤 は 、 （ ａ ） Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 を 含 有 す る 医 薬 用 組 成 物 で あ っ て も 、 （ ｂ ） Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 、 及 び 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 を 別 個 の 構 成 薬 剤 と し て 含 む 薬 剤 の セ ッ ト で あ っ て も よ い 。 【 ０ ０ ２ １ 】 本 発 明 の が ん 治 療 剤 は 、 さ ら に Ｌ − ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 阻 害 剤 （ sulfoximine-based inhibitor、 Bioorganic & Medicinal Chemistry 20 (2012) 5915-5927等 ） が 含 有 さ れ て
い て も よ い 。 こ の Ｌ − ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 阻 害 剤 の 含 有 形 態 は 、 上 記 と 同 様 に （ ａ ） 医 薬 用 組 成 物 中 に 含 有 さ れ て い て も 、 （ ｂ ） Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 、 及 び 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 と は 別 個 の 構 成 薬 剤 と し て 含 有 さ れ て い て も よ い 。 【 ０ ０ ２ ２ 】 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 投 与 対 象 は 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 単 独 投 与 に 対 し て 抵 抗 性 を 有 し 、 か つ 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 が 認 め ら れ な い 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 の 投 与 の 有 効 可 能 性 が 認 め ら れ る が ん で あ り 、 具 体 的 な が ん の 種 類 は 、 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 の 対 象 と 同 じ く 、 白 血 病 、 悪 性 リ ン パ 腫 、 卵 巣 が ん 等 、 好 適 に は 急 性 リ ン パ 性 白 血 病 、 急 性 骨 髄 性 白 血 病 、 慢 性 骨 髄 性 白 血 病 、 Ｎ Ｋ ／ Ｔ 細 胞 リ ン パ 腫 が 挙 げ ら れ る が 、 チ ャ レ ン ジ 的 な も の も 含 み 、 こ れ ら に 限 定 さ れ る も の で は な い 。 ま た 、 元 々 は ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 が 認 め ら れ た も の で あ っ て も 、 事 後 的 に 当 該 遺 伝 子 の 修 復 が な さ れ た が ん で あ れ ば 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 投 与 対 象 と な る 。 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 修 復 は 、 い わ ゆ る 遺 伝 子 治 療 に よ っ て 行 う こ と が で き る 。 【 ０ ０ ２ ３ 】 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 有 無 を 指 標 と し た 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 投 与 の 適 否 に つ い て は 、 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 に よ っ て 得 ら れ た デ ー タ に 基 づ い て 判 断 す る こ と が 可 能 で あ る 。 す な わ ち 、 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 に よ っ て 得 ら れ た デ ー タ が 、 機 能 欠 失 と な る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 変 異 の 存 在 を 示 し て い れ ば 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 即 時 の 投 与 は 適 当 と は い え ず 、 他 の 治 療 手 段 を 選 択 す る か 、 又 は 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 修 復 を 行 っ た 後 に 改 め て 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 投 与 を 行 う ス ケ ジ ュ ー ル が 選 択 さ れ 得 る 。 な お 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 投 与 に よ る 治 療 前 に 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 が 行 わ れ た 場 合 に は 、 ま ず は Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 投 与 に よ る 治 療 も 選 択 さ れ 得 る 。 逆 に 、 当 該 デ ー タ に お い て ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 が 認 め ら れ な い 場 合 に は 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 投 与 の 対 象 と な り 得 る 。 な お 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 投 与 に よ る 治 療 前 に 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 が 行 わ れ た 場 合 に は 、 ま ず は Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 投 与 に よ る 治 療 も 選 択 さ れ 得 る 。 【 ０ ０ ２ ４ 】 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 投 与 対 象 は 、 少 な く と も 「 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 単 独 投 与 に 対 し て 抵 抗 性 を 有 す る が ん 」 で あ り 、 当 該 抵 抗 性 の が ん は 、 事 前 の Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 の 体 内 投 与 に よ る 当 該 が ん に 対 す る 否 定 的 な 抗 が ん 効 果 デ ー タ 、 又 は 、 事 前 の 当 該 が ん 細 胞 の 体 外 に お け る Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と の 接 触 に よ る 否 定 的 な 抗 が ん 効 果 デ ー タ 、 に 基 づ い て 規 定 す る こ と が で き る 。 【 発 明 の 効 果 】 【 ０ ０ ２ ５ 】 本 発 明 に よ り 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 若 し く は そ の 誘 導 体 の 剤 、 及 び 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 の 効 果 の 予 測 手 段 が 提 供 さ れ 、 さ ら に 当 該 予 測 結 果 を 活 か す こ と が 可 能 な が ん 治 療 剤 が 提 供 さ れ る 。 【 図 面 の 簡 単 な 説 明 】 【 ０ ０ ２ ６ 】 【 図 １ 】 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 変 異 の 検 出 工 程 の 一 態 様 を フ ロ ー 化 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ２ ー Ａ 】 ３ 種 の Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 に 対 し て Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 を 、 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 、 あ る い は 両 者 共 に 作 用 さ せ な い 場 合 の オ ー ト フ ァ ジ ー 誘 導 を 、 Ｌ Ｃ ３ Ｂ − IIを 指 標 と し て 電 気 泳 動 で 検 討 し た 結 果 を 示 し た 図 面 で あ る 。 10 20 30 40 50
【 図 ２ ー Ｂ 】 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 で あ る Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 に 対 し て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 、 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 の オ ー ト フ ァ ジ ー 誘 導 を 、 Ｌ Ｃ ３ Ｂ − IIを 指 標 と し て 検 討 し た 組 織 免 疫 染 色 像 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ２ ー Ｃ 】 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 で あ る Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 に 対 し て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 、 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 、 あ る い は 両 者 共 に 作 用 さ せ な い 場 合 の オ ー ト フ ァ ジ ー 誘 導 に つ い て 、 電 子 顕 微 鏡 像 に よ り 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ２ ー Ｄ 】 図 ２ − Ｃ の 電 気 顕 微 鏡 像 に お け る １ 細 胞 当 た り の オ ー ト フ ァ ジ ー 小 胞 の 個 数 と 面 積 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ２ ー Ｅ 】 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 で あ る Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 に 対 し て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 の 、 障 害 性 ミ ト コ ン ド リ ア 数 を 蛍 光 色 素 染 色 に 基 づ い て 計 数 し た 結 果 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ２ ー Ｆ 】 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 で あ る Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 に 対 し て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 の 、 細 胞 内 ミ ト コ ン ド リ ア の 膜 電 位 を 、 Ｔ Ｍ Ｒ Ｅ （ ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｍ ｅ ｔ ｈ ｌ ｒ ｈ ｏ ｄ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ） を 用 い て 検 討 し た 結 果 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ２ ー Ｇ 】 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 で あ る Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 に 対 し て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 の 、 Ｄ Ｃ Ｆ Ｄ Ａ （ ５ − （ ａ ｎ ｄ − ６ ） − ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｘ ｙ − ２ ′ ， ７ ′ − ｄ ｉ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｉ ｎ ｄ ｉ ａ ｃ ｅ ｔ ａ ｔ ｅ ） を 用 い た 細 胞 内 活 性 酸 素 種 （ Ｒ Ｏ Ｓ ） （ 左 図 ） と 、 Ｍ ｉ ｔ ｏ Ｓ ｏ ｘ （ 登 録 商 標 ） − Ｒ ｅ ｄ を 用 い た ミ ト コ ン ド リ ア Ｒ Ｏ Ｓ の 評 価 を 行 っ た 結 果 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ａ 】 ３ 種 の Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 に 対 し て Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 を 、 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 の 細 胞 死 の 度 合 い を 、 フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー と ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ 解 析 で 検 討 し た 結 果 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｂ 】 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 で あ る Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 に 対 し て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 作 用 さ せ る こ と に よ り 惹 起 さ れ る 細 胞 死 に 対 す る 、 汎 ア ポ ト ー シ ス 関 連 分 子 阻 害 薬 で あ る ｚ − Ｖ Ａ Ｄ に よ る 抑 制 作 用 を 検 討 し た 結 果 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｃ 】 Ｌ − ａ ｓ ｐ 耐 性 株 ６ ９ ７ − Ｒ の 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 添 加 量 増 加 に 対 す る 生 細 胞 率 を 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｄ 】 Ｌ − ａ ｓ ｐ 耐 性 株 ６ ９ ７ − Ｒ に お け る 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と 、 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 Ｃ Ｑ の 組 合 せ 添 加 の 生 細 胞 率 に 与 え る 影 響 を 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｅ 】 Ｌ − ａ ｓ ｐ 耐 性 株 ６ ９ ７ − Ｒ に お け る ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 （ Ａ Ｓ Ｎ Ｓ ） の 蛋 白 発 現 レ ベ ル を 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 、 あ る い は 両 者 共 に 作 用 さ せ な い 場 合 に つ い て 、 ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ 解 析 を 行 っ た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｆ 】 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 で あ る Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 の Ａ Ｓ Ｎ Ｓ 遺 伝 子 を 異 な る 部 位 に お い て ノ ッ ク ダ ウ ン を 行 っ た 「 ｓ ｈ -Ａ Ｓ Ｎ Ｓ １ 」 と 「 ｓ ｈ -Ａ Ｓ Ｎ Ｓ ２ 」 に お け る 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 、 あ る い は 両 者 共 に 作 用 さ せ な い 場 合 に つ い て 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｇ 】 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 に よ り 誘 導 さ れ る ア ポ ト ー シ ス 細 胞 死 の 原 因 と な る 機 構 を 検 討 し た ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ 解 析 の 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｈ 】 図 ３ − Ｇ の 細 胞 培 養 系 に Ｒ Ｏ Ｓ の 阻 害 薬 で あ る ア セ チ ル シ ス テ イ ン （ Ｎ Ａ Ｃ ） を 添 加 し た 場 合 の 殺 細 胞 効 果 に 対 す る 影 響 を 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｉ 】 Ｐ ｒ ｏ ｐ ｉ ｄ ｉ ｕ ｍ Ｉ ｏ ｄ ｉ ｄ ｅ 染 色 を 用 い た フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー に よ り 、 細 胞 周 期 評 価 を 行 っ た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 10 20 30 40 50
【 図 ３ ー Ｊ 】 日 単 位 の 継 続 的 薬 剤 接 触 に よ る 影 響 を 、 生 細 胞 数 を カ ウ ン ト す る こ と に よ り 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｋ 】 in vivoで の 治 療 評 価 を 行 う た め 、 ル シ フ ェ ラ ー ゼ 遺 伝 子 を 導 入 し た Ｒ Ｅ Ｈ ／ Ｌ ｕ ｃ ２ 細 胞 を 、 免 疫 不 全 マ ウ ス に 対 し て 経 尾 静 脈 移 植 を 行 い 、 そ の 経 過 を 蛍 光 分 布 検 出 に よ り 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｌ 】 in vivoで の 治 療 評 価 を 行 う た め 、 ル シ フ ェ ラ ー ゼ 遺 伝 子 を 導 入 し た Ｒ Ｅ Ｈ ／ Ｌ ｕ ｃ ２ 細 胞 を 、 免 疫 不 全 マ ウ ス に 対 し て 経 尾 静 脈 移 植 を 行 い 、 そ の 経 過 を 蛍 光 の 光 子 フ ラ ッ ク ス 率 を 基 に 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ３ ー Ｍ 】 図 ３ − Ｋ と 図 ３ − Ｌ に お け る Ｒ Ｅ Ｈ ／ Ｌ ｕ ｃ ２ 細 胞 を 移 植 し た 免 疫 不 全 マ ウ ス の 経 時 的 な 生 存 率 を 日 単 位 で 検 討 し た 全 生 存 解 析 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ４ ー Ａ 】 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 で あ る Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 に 対 し て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 の 経 時 的 な Ｄ Ｎ Ａ ダ メ ー ジ を ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ 解 析 に よ り 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ４ ー Ｂ 】 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 株 で あ る Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 に 対 し て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 単 独 又 は 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ 、 さ ら に こ れ に Ｒ Ｏ Ｓ 抑 制 薬 で あ る ア セ チ ル シ ス テ イ ン （ Ｎ Ａ Ｃ ） を 作 用 さ せ た 場 合 の 、 Ｄ Ｎ Ａ ダ メ ー ジ の 指 標 で あ る γ Ｈ ２ Ａ Ｘ と 共 に 、 ｐ ５ ３ 蛋 白 の 増 減 を ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ 解 析 に よ り 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ４ ー Ｃ 】 ｓ ｈ （ ｓ ｈ ｏ ｒ ｔ ｈ ａ ｉ ｒ ｐ ｉ ｎ ） Ｒ Ｎ Ａ に よ り ｐ ５ ３ 遺 伝 子 を ノ ッ ク ダ ウ ン し た Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 株 （ ｓ ｈ -ｐ ５ ３ ） に お け る 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） を 組 み 合 わ せ て 作 用 さ せ た 場 合 の Ｄ Ｎ Ａ ダ メ ー ジ を 、 ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ 解 析 に よ り 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ４ ー Ｄ 】 図 ４ − Ｃ と 同 じ く ｐ ５ ３ ノ ッ ク ダ ウ ン Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 株 （ ｓ ｈ -ｐ ５ ３ ） に お け る 、 細 胞 内 Ｒ Ｏ Ｓ の 蓄 積 を 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ４ ー Ｅ 】 図 ４ − Ｃ と 同 じ く ｐ ５ ３ ノ ッ ク ダ ウ ン Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 株 （ ｓ ｈ -ｐ ５ ３ ） に お け る 細 胞 死 の 抑 制 に つ い て 、 Ａ ｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ Ｖ の 取 り 込 み （ 左 の グ ラ フ ） と 、 ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ 解 析 （ 右 の 電 気 泳 動 図 ） に よ り 検 討 し た 結 果 を 示 す 図 面 で あ る 。 【 図 ５ ー Ａ 】 Ａ Ｌ Ｌ の 臨 床 血 液 検 体 （ 初 発 例 １ ２ 例 と 再 発 例 ２ 例 の 計 １ ４ 例 ） に お け る 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） の 組 み 合 わ せ 投 与 の 効 果 を 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 有 無 と 併 せ て 検 討 し た 結 果 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ５ ー Ｂ 】 図 ５ − Ａ に お い て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） の 組 み 合 わ せ 投 与 の 効 果 が 認 め ら れ た Ａ Ｌ Ｌ の 臨 床 血 液 検 体 ３ 例 に お け る オ ー ト フ ァ ジ ー 活 性 評 価 の 結 果 を ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ 解 析 に よ り 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ５ ー Ｃ 】 図 ５ − Ａ に お い て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） の 組 み 合 わ せ 投 与 の 効 果 が 認 め ら れ な か っ た 、 遺 伝 子 変 異 に よ り ｐ ５ ３ が 機 能 欠 失 し た Ａ Ｌ Ｌ の 臨 床 血 液 検 体 （ 症 例 １ ４ ） に 対 し て 、 ア デ ノ ウ イ ル ス に よ る 正 常 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 導 入 を 行 っ た 場 合 の 効 果 を 、 ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ 解 析 に よ り 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ５ ー Ｄ 】 図 ５ − Ａ に お い て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） の 組 み 合 わ せ 投 与 の 効 果 が 認 め ら れ な か っ た 、 遺 伝 子 変 異 に よ り ｐ ５ ３ が 機 能 欠 失 し た Ａ Ｌ Ｌ の 臨 床 血 液 検 体 （ 症 例 １ ４ ） に 対 し て 、 ア デ ノ ウ イ ル ス に よ る 正 常 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 導 入 を 行 っ た 場 合 の 効 果 を 、 生 細 胞 数 で 検 討 し た 結 果 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ５ ー Ｅ 】 ｓ ｈ (short hairpin)Ｒ Ｎ Ａ に よ り ｐ ５ ３ 遺 伝 子 を ノ ッ ク ダ ウ ン し た Ｒ Ｅ Ｈ 細 胞 株 （ ｓ ｈ -ｐ ５ ３ ） を 、 免 疫 不 全 マ ウ ス に 経 尾 静 脈 移 植 し た 場 合 の 投 薬 の 効 果 を 検 討 し た 結 果 を 示 し た 図 面 で あ る 。 【 図 ５ ー Ｆ 】 Ｌ − ａ ｓ ｐ と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 で あ る Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｅ （ Ｃ Ｑ ） 10 20 30 40 50
の 組 み 合 わ せ 投 与 に よ る 、 Ａ Ｌ Ｌ 細 胞 の ア ポ ト ー シ ス 誘 導 の 仕 組 み を チ ャ ー ト 化 し て 示 し た 図 面 で あ る 。 【 発 明 を 実 施 す る た め の 形 態 】 【 ０ ０ ２ ７ 】 １ ． 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 の 基 礎 デ ー タ は 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 検 出 デ ー タ で あ り 、 が ん 検 体 に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 検 出 を 行 う こ と が 前 提 と な る 。 【 ０ ０ ２ ８ 】 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 は 進 化 的 に 保 存 さ れ て お り 、 ヒ ト 以 外 の 種 に も 認 め ら れ る 。 ヒ ト ｐ ５ ３ 遺 伝 子 は 、 第 １ ７ 番 染 色 体 短 腕 上 （ １ ７ ｐ １ ３ ． １ ） に 存 在 す る 。 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 は 、 が ん 抑 制 遺 伝 子 と し て 知 ら れ て お り 、 細 胞 内 の 恒 常 性 の 維 持 や 代 謝 調 節 、 細 胞 内 Ｒ Ｏ Ｓ 産 生 の 調 節 、 ア ポ ト ー シ ス の 誘 導 等 の 細 胞 増 殖 を 制 御 す る 働 き を 担 っ て い る こ と が 知 ら れ て い る 。 ｐ ５ ３ の 機 能 欠 失 と な る 変 異 は 、 染 色 体 上 の 両 ア レ ル に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 が 失 活 す る も の で あ る 。 こ の 機 能 欠 失 変 異 の 基 本 的 類 型 と し て 下 記 ４ 種 が 挙 げ ら れ る 。 （ １ ） 一 方 の ア レ ル に ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 型 の 変 異 が あ り 、 他 方 の ア レ ル で 第 １ ７ 染 色 体 短 腕 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 存 在 領 域 の Ｌ Ｏ Ｈ (loss of heterozygosity)が 認 め ら れ る 類 型 （ 以 下 、 第 １ 類 型 と も い う ） 。 が ん 細 胞 に 生 じ る 第 １ 類 型 の 機 能 欠 失 型 変 異 は 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の Ｌ Ｏ Ｈ に 先 だ っ て 機 能 欠 失 型 の ミ ス セ ン ス 変 異 （ Ｒ １ ７ ５ Ｈ や Ｒ ２ ４ ８ Ｑ 等 ） 、 ナ ン セ ン ス 変 異 、 フ レ ー ム シ フ ト 変 異 等 が 生 じ た も の で あ る 。 （ ２ ） 一 方 の ア レ ル の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 に 上 記 の よ う な 機 能 欠 失 型 の 変 異 が 生 じ 、 他 方 の ア レ ル の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 に も 同 じ く 機 能 欠 失 型 の 変 異 が 生 じ 、 ホ モ 変 異 、 又 は 、 コ ン パ ウ ン ド ヘ テ ロ 変 異 と な っ て い る 類 型 （ 以 下 、 第 ２ 類 型 と も い う ） 。 （ ３ ） 第 １ ７ 番 染 色 体 短 腕 の 欠 失 変 異 、 若 し く は 、 第 １ ７ 番 染 色 体 の 欠 失 変 異 （ 以 下 、 第 ３ 類 型 と も い う ） （ ４ ） 一 方 の ア レ ル に ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 型 変 異 の み が 認 め ら れ 、 他 方 の ア レ ル の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 に は 変 異 は 認 め ら れ な い が 、 ド ミ ナ ン ト ・ ネ ガ テ ィ ブ 作 用 に よ っ て 、 四 量 体 構 造 を 取 る ｐ ５ ３ 分 子 の サ ブ ユ ニ ッ ト と し て 、 変 異 ｐ ５ ３ サ ブ ユ ニ ッ ト が ラ ン ダ ム に 組 み 合 わ さ れ て 機 能 阻 害 を 及 ぼ し 、 全 体 と し て の が ん 抑 制 作 用 （ ア ポ ト ー シ ス 誘 導 作 用 ） の 効 率 を 低 下 さ せ る 類 型 （ 以 下 、 第 ４ 類 型 と も い う ） 。 【 ０ ０ ２ ９ 】 こ れ ら の ４ 種 類 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 類 型 の う ち 、 第 １ 類 型 が 最 も 高 頻 度 で あ る 。 第 １ 類 型 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 は 、 高 度 に ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 変 異 が 進 行 し た が ん 細 胞 に お け る も の で あ る か ら 、 Ｌ Ｏ Ｈ の み を 検 出 す る こ と に よ っ て 、 併 せ て 存 在 す る 他 ア レ ル の 機 能 欠 失 型 変 異 を 含 め て の 検 出 と す る こ と が で き る 。 無 論 の こ と 、 例 え ば 、 Ｌ Ｏ Ｈ の 検 出 と ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス 解 析 を 併 せ て 行 う こ と も 可 能 で あ る 。 【 ０ ０ ３ ０ 】 第 １ 類 型 の Ｌ Ｏ Ｈ の 検 出 は 、 例 え ば 、 マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト マ ー カ ー を 用 い た ゲ ノ ム 不 安 定 性 試 験 （ マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト 不 安 定 性 検 査 ） 、 Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ 法 、 特 開 ２ ０ ０ ０ − ９ ３ １ ８ ５ 号 に 記 載 の 方 法 、 サ ザ ン ブ ロ ッ ト 法 等 が 挙 げ ら れ る 。 【 ０ ０ ３ １ 】 マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト 不 安 定 性 検 査 に お い て は 、 標 的 が ん 細 胞 の 遺 伝 子 に お け る 「 ゲ ノ ム の 不 安 定 状 態 」 を 、 マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト （ ゲ ノ ム 中 に お け る （ Ａ ） n、 （ Ｃ Ａ ） n等 の 単 塩 基 か ら 数 塩 基 単 位 の 反 復 配 列 （ 数 回 か ら 数 十 回 の 反 復 ） で あ っ て 、 １ ０４∼ １ ０５個 存 在 す る ） の う ち 、 特 定 の も の を マ ー カ ー と し て 用 い て 、 第 １ 類 型 の Ｌ Ｏ Ｈ の 検 出 を 行 う こ と が で き る (Vita Vol.15 NO.3 1998 / 7.8.9)。
【 ０ ０ ３ ２ 】
Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ 法 ［ 蛍 光 in situ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン （ Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ ： Ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ｉ ｎ ｓ ｉ ｔ ｕ ｈ ｙ ｂ ｒ ｉ ｄ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ） :Yasui,K., Imoto,I., Fukuda,Y. , Pimkhaokham,A., Yang,Z.Q., Naruto,T., Shimada,Y., Nakamura,Y., and Inazawa,J:
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Identification of target genes within an amplicon at 14q12-q13 in esophageal squ amous cell carcinoma. Genes Chromosomes Cancer, 32, 112-118, 2001］ で は 、 核 酸 の
ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に よ る シ グ ナ ル を 基 に 、 第 １ 類 型 の Ｌ Ｏ Ｈ を 検 出 す る こ と が で き る 。 こ の 場 合 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 領 域 の Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ プ ロ ー ブ を 作 成 し 、 が ん 検 体 に お け る 染 色 体 と ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を 行 い 、 シ グ ナ ル 数 の 変 化 を 観 察 す る こ と で 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の Ｌ Ｏ Ｈ を 検 出 す る こ と が で き る 。 【 ０ ０ ３ ３ 】 特 開 ２ ０ ０ ０ − ９ ３ １ ８ ５ 号 に 記 載 の 方 法 は 、 が ん 検 体 の 遺 伝 子 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 下 流 域 に 存 在 す る 、 Ｎ ａ ／ Ｋ − Ａ Ｔ Ｐ ａ ｓ ｅ ｂ ｅ ｔ ａ ２ ｓ ｕ ｂ ｕ ｎ ｉ ｔ 遺 伝 子 内 の 遺 伝 子 多 型 マ ー カ ー に お け る ヘ テ ロ 接 合 性 の 消 失 を 特 定 す る 方 法 で あ り 、 こ の 方 法 に よ っ て も ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の Ｌ Ｏ Ｈ を 検 出 す る こ と が で き る 。 【 ０ ０ ３ ４ 】 サ ザ ン ブ ロ ッ ト 法 を 用 い る 場 合 、 が ん 検 体 か ら 得 ら れ る ゲ ノ ム Ｄ Ｎ Ａ を 制 限 酵 素 消 化 し 、 そ れ を ゲ ル 電 気 泳 動 後 、 ニ ト ロ セ ル ロ ー ス 膜 上 に 固 定 し 、 こ れ と 、 標 識 し た ｐ ５ ３ 遺 伝 子 領 域 の Ｄ Ｎ Ａ と ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を 行 い 検 出 す る こ と に よ り 、 検 体 中 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の Ｌ Ｏ Ｈ の 存 在 を 検 出 す る 。 正 常 由 来 の 検 体 か ら 得 ら れ る 検 出 量 （ バ ン ド の 濃 さ ） に 対 し 、 が ん 検 体 か ら 得 ら れ る 検 出 量 が 少 な い こ と と 共 に 、 異 な る バ ン ド の 出 現 が 認 め ら れ る こ と に よ り 、 検 体 中 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の Ｌ Ｏ Ｈ の 存 在 を 検 出 す る こ と が で き る 。 【 ０ ０ ３ ５ 】 第 ２ 類 型 の 機 能 欠 失 型 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 変 異 は 、 例 え ば 、 ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス 解 析 に よ り 検 出 す る こ と が で き る 。 さ ら に 具 体 的 に は 、 サ ン ガ ー 法 や 、 い わ ゆ る 次 世 代 シ ー ク エ ン ス 法 に よ り 検 出 す る こ と が で き る 。 後 述 す る 実 施 例 で 検 出 さ れ た ｐ ５ ３ 遺 伝 子 変 異 は 、 こ の 第 ２ 類 型 で あ る 。 た だ し 、 第 ２ 類 型 は 、 上 述 の 第 １ 類 型 に 比 べ る と 低 頻 度 で あ る 。 【 ０ ０ ３ ６ 】 サ ン ガ ー 法 は 、 ｉ ） ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 一 本 鎖 Ｄ Ｎ Ａ に 相 補 的 な オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を ア ニ ー ル さ せ 、 こ れ を プ ラ イ マ ー と し て 相 補 鎖 を Ｄ Ｎ Ａ ポ リ メ ラ ー ゼ に よ っ て 合 成 さ せ 、 ii） 基 質 と し て ４ 種 の デ オ キ シ ヌ ク レ オ チ ド 三 リ ン 酸 お よ び ジ デ オ キ シ ヌ ク レ オ チ ド 三 リ ン 酸 を 加 え 、 相 補 鎖 を 合 成 さ せ 、 iii） さ ら に 化 学 発 光 物 質 で 標 識 し た プ ラ イ マ ー や dＮ Ｔ Ｐ を 加 え る こ と に よ り 、 合 成 さ れ る Ｄ Ｎ Ａ を 標 識 し 、 塩 基 配 列 を 決 定 す る 。 こ の 配 列 と リ フ ァ レ ン ス 配 列 を 比 較 す る こ と で 第 ２ 類 型 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 を 検 出 す る こ と が 可 能 で あ る 。 【 ０ ０ ３ ７ 】 次 世 代 シ ー ク エ ン ス 法 で は 、 ラ ン ダ ム に 切 断 さ れ た 数 千 万 の Ｄ Ｎ Ａ 断 片 の 塩 基 配 列 を 同 時 並 行 的 に 決 定 す る こ と が で き る 。 Ｐ Ｃ Ｒ 産 物 の プ ー ル シ ー ク エ ン ス に よ り 、 高 効 率 に ｐ ５ ３ の 遺 伝 子 領 域 の デ ィ ー プ シ ー ク エ ン ス を 行 う こ と が で き る 。 こ れ に よ り 低 頻 度 で も 第 ２ 類 型 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 を 検 出 す る こ と が で き る 。 【 ０ ０ ３ ８ 】 第 ３ 類 型 の 第 １ ７ 番 染 色 体 短 腕 の 欠 失 変 異 、 又 は 、 第 １ ７ 番 染 色 体 の 欠 失 変 異 は 、 上 記 の Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ 法 又 は 染 色 体 検 査 で 検 出 す る こ と が で き る 。 染 色 体 検 査 は 、 典 型 的 に は Ｇ 分 染 法 等 の 染 色 体 検 査 で あ る 。 と は ギ ム ザ （ Ｇ ｉ ｅ ｍ ｓ ａ ） の 略 で 、 ト リ プ シ ン 処 理 後 ギ ム ザ 染 色 を 行 う も の で あ る 。 こ れ に よ り 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 が 座 位 す る 第 １ ７ 番 染 色 体 短 腕 の 欠 失 や 、 第 １ ７ 番 染 色 体 そ の も の の 欠 失 （ モ ノ ソ ミ ー ） の 有 無 を 確 認 す る こ と が で き る 。 【 ０ ０ ３ ９ 】 第 ４ 類 型 の ｐ ５ ３ 蛋 白 の サ ブ ユ ニ ッ ト の 立 体 構 造 に よ る 機 能 欠 失 型 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 変 異 は 、 上 記 の サ ン ガ ー シ ー ク エ ン ス 法 の 他 、 変 異 を 有 す る ｐ ５ ３ 蛋 白 に つ い て は 半 減 期 が 延 長 し て 細 胞 内 （ 特 に 核 内 ） に 蓄 積 す る こ と を 利 用 し た ｐ ５ ３ 蛋 白 の 免 疫 組 織 化 学 染 色 、 さ ら に 変 異 を 有 す る ｐ ５ ３ 蛋 白 に 対 す る 、 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ キ ッ ト に よ る 自 己 抗 体 の 検 出 等 を 行 う こ と が で き る 。 【 ０ ０ ４ ０ 】 上 記 の よ う に 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 に つ い て の が ん 検 体 か ら の デ ー タ を 10 20 30 40 50
取 得 す る こ と が で き る 。 上 記 の 検 出 手 法 を 組 み 合 わ せ て 、 第 １ 類 型 、 第 ２ 類 型 、 第 ３ 類 型 、 及 び 、 第 ４ 類 型 、 全 て の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 遺 伝 子 変 異 に つ い て の 検 出 を 行 う こ と が で き る が 、 こ れ ら を 類 型 毎 に 個 別 の 検 出 を 行 う こ と も 可 能 で あ る 。 こ の 場 合 、 頻 度 の 高 い 第 １ 類 型 を 優 先 さ せ て 行 う こ と が 好 ま し い 。 【 ０ ０ ４ １ 】 図 １ は 、 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 変 異 の 検 出 工 程 の 一 態 様 を フ ロ ー 化 し た 図 面 で あ る 。 【 ０ ０ ４ ２ 】 ボ ッ ク ス Ａ １ は 、 が ん 検 体 が 「 固 形 が ん の 組 織 検 体 」 で あ る 場 合 の 検 出 工 程 開 始 を 示 す 。 組 織 検 体 と は 、 内 臓 組 織 、 骨 組 織 、 筋 肉 組 織 、 皮 膚 組 織 、 神 経 組 織 等 で あ る 。 ボ ッ ク ス Ａ ２ は 、 が ん 検 体 が 「 固 形 が ん の 液 性 検 体 」 で あ る 場 合 の 検 出 工 程 開 始 を 示 す 。 液 性 検 体 と は 、 胸 水 、 腹 水 、 尿 残 渣 等 で あ る 。 ボ ッ ク ス Ａ ３ は 、 が ん 検 体 が 「 白 血 病 又 は 悪 性 リ ン パ 腫 」 で あ る 場 合 の 検 出 工 程 開 始 を 示 す 。 【 ０ ０ ４ ３ 】 固 形 が ん の 組 織 検 体 （ Ａ １ ） の 検 出 工 程 の 第 １ 段 階 は 、 「 マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト マ ー カ ー に よ る Ｌ Ｏ Ｈ 解 析 」 で あ る （ ボ ッ ク ス Ｂ １ ） 。 固 形 が ん の 液 性 検 体 （ Ａ ２ ） の 検 出 工 程 の 第 １ 段 階 は 、 「 マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト マ ー カ ー に よ る Ｌ Ｏ Ｈ 解 析 」 （ Ｂ １ ） 又 は 「 Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ 解 析 」 （ ボ ッ ク ス Ｂ ２ ） で あ る 。 ま た 、 白 血 病 又 は 悪 性 リ ン パ 腫 の が ん 検 体 （ Ａ ３ ） の 検 出 工 程 の 第 １ 段 階 は 、 「 マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト マ ー カ ー に よ る Ｌ Ｏ Ｈ 解 析 」 （ Ｂ １ ） 、 「 Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ 解 析 」 （ Ｂ ２ ） 又 は 「 染 色 体 検 査 」 で あ る 。 【 ０ ０ ４ ４ 】 マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト マ ー カ ー に よ る Ｌ Ｏ Ｈ 解 析 （ Ｂ １ ） の 結 果 、 「 Ｌ Ｏ Ｈ 陽 性 」 （ Ｒ １ ／ １ ） で あ る 場 合 は 、 が ん 検 体 の 種 類 に よ ら ず 「 機 能 欠 失 変 異 陽 性 」 （ Ｊ １ ／ １ ） と し て 検 出 が 行 わ れ る 。 当 該 Ｌ Ｏ Ｈ 解 析 （ Ｂ １ ） の 結 果 、 「 正 常 」 （ Ｒ １ ／ ０ ） で あ る 場 合 は 、 第 ２ 段 階 の 検 出 工 程 で あ る 「 ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス 解 析 」 （ ボ ッ ク ス Ｃ １ ） が さ ら に 行 わ れ る 。 ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス 解 析 は 、 サ ン ガ ー 法 又 は Ｎ Ｇ Ｓ 法 等 が 用 い ら れ る 。 【 ０ ０ ４ ５ 】 「 Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ 解 析 」 （ Ｂ ２ ） 又 は 「 染 色 体 検 査 」 （ Ｂ ３ ） の 結 果 、 「 正 常 」 （ Ｒ ２ ／ ０ ） で あ る 場 合 に は 、 初 発 の が ん 検 体 の 種 類 に よ ら ず に 前 記 「 ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス 解 析 」 （ Ｃ １ ） が さ ら に 行 わ れ る 。 「 Ｆ Ｉ Ｓ Ｈ 解 析 」 （ Ｂ ２ ） 又 は 「 染 色 体 検 査 」 （ Ｂ ３ ） の 結 果 、 「 第 １ ７ 番 染 色 体 短 腕 の 欠 失 （ １ ７ ｐ − ） 又 は 第 １ ７ 番 染 色 体 そ の も の の 欠 失 （ − １ ７ ） 」 （ Ｒ ２ ／ ０ ） で あ る 場 合 に は 、 初 発 の が ん 検 体 の 種 類 に よ ら ず に 「 機 能 欠 失 変 異 陽 性 」 （ Ｊ １ ／ ２ ） と し て 検 出 が 行 わ れ る 。 【 ０ ０ ４ ６ 】 ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス 解 析 （ Ｃ １ ） の 結 果 、 既 知 の ホ モ 又 は コ ン パ ウ ン ド へ テ ロ の 機 能 欠 失 変 異 （ Ｒ ３ ／ １ ） が 認 め ら れ た 場 合 に は 、 初 発 の が ん 検 体 の 種 類 に よ ら ず に 「 機 能 欠 失 変 異 陽 性 」 （ Ｊ １ ／ １ ） と し て 検 出 が 行 わ れ る 。 ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス 解 析 （ Ｃ １ ） の 結 果 、 「 正 常 」 （ Ｒ ３ ／ ０ ） と 認 め ら れ た 場 合 に は 、 初 発 の が ん 検 体 の 種 類 に よ ら ず に 「 機 能 欠 失 変 異 陰 性 」 （ Ｊ ０ ） と し て 検 出 が 行 わ れ る 。 ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス 解 析 （ Ｃ １ ） の 結 果 、 「 未 知 の ミ ス セ ン ス 変 異 」 （ Ｒ ３ ／ ２ ） が 検 出 さ れ た 場 合 に は 、 初 発 の が ん 検 体 の 種 類 に よ ら ず に 、 第 ３ 段 階 の 検 出 工 程 で あ る 「 免 疫 組 織 化 学 染 色 」 （ ボ ッ ク ス Ｄ １ ） が 行 わ れ 、 そ の 結 果 「 核 淡 染 」 （ Ｒ ４ ／ ０ ） の 場 合 に は 。 「 「 機 能 欠 失 変 異 陰 性 」 （ Ｊ ０ ） と し て 検 出 が 行 わ れ 、 「 核 濃 染 」 （ Ｒ ４ ／ １ ） の 場 合 に は 、 「 機 能 欠 失 変 異 陽 性 」 （ Ｊ １ ／ ２ ） と し て 検 出 が 行 わ れ る 。 【 ０ ０ ４ ７ 】 ま た 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 変 異 の 検 出 手 段 と し て 、 フ ァ ン ク シ ョ ナ ル ア ッ セ イ （ Ka to, Ishioka et al., PNAS, vol. 100, no. 13, pp. 8424-8429 (2003)、 Shimada, Kato,
Ishioka et al., Cancer Res. 59, 2781-2786 (1999)、 Ishioka et al., NATURE GENETI CS (Oct;5(2): 124-129) (1993)） を 行 う こ と も 可 能 で あ る 。 こ の 方 法 に よ れ ば 、 新 規 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 変 異 が 認 め ら れ た 場 合 に お い て も 、 そ の 機 能 欠 失 評 価 を 行 う こ と が 可 能 で 10 20 30 40 50
あ る 。 【 ０ ０ ４ ８ 】 な お 、 上 記 の 機 能 欠 失 型 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 変 異 を 検 出 す る 際 に 行 わ れ る が ん 検 体 核 酸 の 精 製 は 、 バ ッ ク グ ラ ン ド ノ イ ズ の 低 減 、 ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン 性 能 の 確 保 、 効 率 の 良 い 標 識 等 を 行 う 上 で 好 ま し い 場 合 が 多 い 。 「 精 製 」 と は 、 抽 出 、 分 離 、 分 取 と 同 義 語 の 意 味 で 使 用 さ れ る 。 ま た 、 そ の た め の 手 段 と し て 、 シ リ カ や セ ル ロ ー ス 誘 導 体 な ど の 核 酸 吸 着 性 膜 を 担 持 し た カ ー ト リ ッ ジ を 用 い た 方 法 、 エ タ ノ ー ル 沈 殿 や イ ソ プ ロ パ ノ ー ル 沈 殿 、 フ ェ ノ ー ル − ク ロ ロ ホ ル ム 抽 出 、 イ オ ン 交 換 樹 脂 や オ ク タ デ シ ル 基 な ど の 疎 水 性 置 換 基 を 結 合 し た シ リ カ 担 体 や サ イ ズ 排 除 効 果 を 示 す 樹 脂 を 使 用 し た 固 相 抽 出 カ ー ト リ ッ ジ 、 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー な ど に よ る 方 法 を 含 む こ と が で き る 。 さ ら に 、 電 気 泳 動 法 に よ る 精 製 も 含 め る こ と が で き る 。 ま た 、 溶 媒 置 換 も 広 い 意 味 で 精 製 で あ る 。 精 製 工 程 は 、 単 回 又 は 複 数 回 を 必 要 に 応 じ て 行 う こ と が で き る 。 【 ０ ０ ４ ９ 】 上 記 の 検 出 工 程 に よ り 特 定 さ れ た 、 が ん 検 体 に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 の 有 無 は 、 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 の 基 礎 デ ー タ と な る 。 す な わ ち 、 が ん 検 体 に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 が 認 め ら れ る 場 合 （ 陽 性 ） は 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 に 対 し て 抵 抗 性 を 有 す る こ と が 予 測 さ れ る た め に 、 当 該 併 用 療 法 を 、 少 な く と も 当 初 の が ん 治 療 の ス ケ ジ ュ ー ル か ら 除 外 す る こ と が 好 ま し い と 判 断 す る こ と が で き る 。 こ の 場 合 は 、 当 該 併 用 療 法 以 外 の 治 療 手 段 を 選 択 す る こ と の 他 に 、 事 前 に ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 修 復 治 療 を 行 っ て か ら 当 該 併 用 療 法 を 行 う ス ケ ジ ュ ー ル と す る こ と も 可 能 で あ る 。 【 ０ ０ ５ ０ 】 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 修 復 治 療 は 、 い わ ゆ る 遺 伝 子 治 療 で あ り 、 正 常 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 を 少 な く と も が ん 細 胞 に 導 入 す る こ と に よ り 行 わ れ る 。 例 え ば 、 マ ウ ス 白 血 病 ウ イ ル ス ベ ク タ ー 、 レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー 等 の レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー 、 ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー 、 ア デ ノ 随 伴 ウ イ ル ス ベ ク タ ー 、 単 純 ヘ ル ペ ス Ｉ 型 ベ ク タ ー 、 Ｈ Ｖ Ｊ − リ ポ ソ ー ム 等 の 改 変 ウ イ ル ス 性 ベ ク タ ー を 用 い て 正 常 の ｐ ５ ３ 遺 伝 子 を が ん 細 胞 に 導 入 す る こ と が で き る 。 【 ０ ０ ５ １ 】 例 と し て ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー に よ る 導 入 を 説 明 す る 。 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 組 み 込 ま れ た ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を 腫 瘍 内 注 射 す る と 、 腫 瘍 細 胞 上 の レ セ プ タ ー と 結 合 し 、 ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー は 腫 瘍 細 胞 内 に 取 り 込 ま れ エ ン コ ー ド さ れ た 外 来 性 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 が 発 現 さ れ る 。 そ の の ち に Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 の 効 果 が 有 効 と な る こ と が 予 想 さ れ る 。 【 ０ ０ ５ ２ 】 本 発 明 の デ ー タ 取 得 方 法 に お い て 、 が ん 検 体 に お け る ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 能 欠 失 と な る 変 異 が 認 め ら れ な い 場 合 （ 陰 性 ） は 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 併 用 療 法 が 有 効 で あ る こ と が 予 測 さ れ る た め に 、 当 該 療 法 を 積 極 的 に 治 療 ス ケ ジ ュ ー ル に 組 み 込 む こ と が 可 能 と な る 。 【 ０ ０ ５ ３ 】 ２ ． 本 発 明 の が ん 治 療 剤 本 発 明 の が ん 治 療 剤 は 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 を 有 効 成 分 と す る も の で あ る 。 【 ０ ０ ５ ４ 】 （ １ ） Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 （ Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 類 ） 上 述 の よ う に Ｌ − ａ ｓ ｐ は 、 蛋 白 質 を 構 成 す る ア ミ ノ 酸 の 一 つ で あ る ア ス パ ラ ギ ン （ Ａ ｓ ｎ ） を 分 解 す る 酵 素 で あ り 、 ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 の 不 足 に よ り 慢 性 的 な ア ス パ ラ ギ ン 不 足 と な っ て い る が ん に 対 し て 投 与 を 行 う こ と に よ り 、 当 該 が ん の 増 殖 を 阻 害 す る が ん 治 療 剤 と し て 既 に 急 性 リ ン パ 性 白 血 病 等 に 対 し て 用 い ら れ て い る 。 【 ０ ０ ５ ５ 】 が ん 細 胞 が 増 殖 す る に は 、 様 々 な 物 質 が 必 要 で あ り 、 蛋 白 質 を 構 成 す る ア ミ ノ 酸 の 一 つ 10 20 30 40 50
で あ る ア ス パ ラ ギ ン （ Ａ ｓ ｎ ） も そ の 一 つ で あ る 。 ア ス パ ラ ギ ン は 、 ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 に よ っ て 生 成 さ れ 、 Ｌ − ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ （ Ｌ − ａ ｓ ｐ ａ ｒ ａ ｇ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ （ Ｌ − ａ ｓ ｐ ） )に よ っ て 分 解 さ れ る 。 【 ０ ０ ５ ６ 】 が ん の 中 に は 、 細 胞 中 の ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 が 不 足 し て お り 、 ア ス パ ラ ギ ン 不 足 に な っ て い る も の が あ り 、 さ ら に Ｌ − ａ ｓ ｐ を 与 え る と 当 該 が ん 細 胞 の 増 殖 が 阻 害 さ れ る こ と が 知 ら れ て お り （ 非 特 許 文 献 １ ） 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ を 用 い た 抗 が ん 剤 が 、 白 血 病 や 悪 性 リ ン パ 腫 等 を 対 象 と し て 実 用 化 さ れ て い る 。 Ｌ − ａ ｓ ｐ 自 体 は 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ を コ ー ド す る 遺 伝 子 で 形 質 転 換 を 行 っ た 微 生 物 （ 大 腸 菌 や ジ ャ ガ イ モ 黒 あ し 病 菌 に お い て 実 用 化 ） を 宿 主 と し て 、 公 知 の 方 法 に よ り 製 造 す る こ と が 可 能 で あ り 、 市 販 品 を 用 い る こ と も 可 能 で あ る 。 ま た 上 述 し た よ う に 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ に 化 学 的 な 修 飾 を 施 し た Ｌ − ａ ｓ ｐ の 誘 導 体 も 、 上 記 の よ う な 抗 が ん 効 果 が 認 め ら れ る 限 り に お い て 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 に 含 ま れ る 。 当 該 誘 導 体 と し て は 、 例 え ば 、 ポ リ エ チ レ ン グ リ コ ー ル 化 ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 等 が 挙 げ ら れ る 。 ま た Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 は 、 何 ら か の 製 剤 処 理 を 施 し た 形 態 で あ っ て も 良 く 、 例 え ば 、 赤 血 球 内 封 入 ア ス パ ラ ギ ナ ー ゼ 等 が 挙 げ ら れ る 。 【 ０ ０ ５ ７ 】 本 発 明 の が ん 治 療 剤 に よ る Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 （ 有 効 成 分 ） の 投 与 量 は 、 １ 日 成 人 1人 当 た り ５ ０ ∼ ２ ０ ０ 単 位 ／ 体 重 ｋ ｇ 程 度 で あ り 、 効 果 に 応 じ て 増 減 す る こ と が 可 能 で あ る 。 投 与 間 隔 は 、 １ 日 １ 回 、 さ ら に 連 日 な い し 数 日 お き に 行 う こ と も 可 能 で あ る 。 【 ０ ０ ５ ８ 】 （ ２ ） オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 前 述 の 通 り に オ ー ト フ ァ ジ ー は 、 リ ソ ソ ー ム に よ る 細 胞 内 の 分 解 系 の 一 つ で あ り 、 長 く 存 在 し た 蛋 白 質 、 細 胞 内 小 器 官 、 及 び 、 蛋 白 質 凝 集 態 が オ ー ト フ ァ ゴ ソ ー ム 内 に 捕 捉 さ れ 、 そ の 後 リ ソ ソ ー ム と 融 合 し て 分 解 さ れ る と い う 、 高 度 に 制 御 さ れ た プ ロ セ ス で あ り 、 特 に 、 酸 化 ス ト レ ス な ど の 種 々 の ス ト レ ス の 悪 条 件 下 で 細 胞 の 生 存 を 可 能 に す る こ と が 知 ら れ て い る 。 こ の 現 象 に よ り 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 に よ っ て 障 害 を 受 け た ミ ト コ ン ド リ ア が 産 生 す る 細 胞 内 Ｒ Ｏ Ｓ が 貯 留 し た が ん が 、 そ の 生 存 を 確 保 し て い る も の と 考 え ら れ て い る 。 【 ０ ０ ５ ９ 】 オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 有 効 成 分 は 、 こ の オ ー ト フ ァ ジ ー を 阻 害 す る 機 能 を 有 す る 成 分 で あ り 、 具 体 的 に は 、 ク ロ ロ キ ン （ ク ロ ロ キ ノ リ ン ） 、 ハ イ ド ロ オ キ シ ク ロ ロ キ ン 等 の ク ロ ロ キ ン 類 、 ３ − メ チ ル ア デ ニ ン 、 バ フ ィ ロ マ イ シ ン Ａ 等 が 挙 げ ら れ る が 、 こ れ ら に 限 定 さ れ る も の で は な い 。 こ れ ら の オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 成 分 は 、 公 知 の 方 法 に よ り 製 造 が 可 能 で あ り 、 市 販 品 を 用 い る こ と が 可 能 で あ る 。 【 ０ ０ ６ ０ 】 本 発 明 の が ん 治 療 剤 に よ る オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 の 投 与 量 （ 有 効 成 分 ） は 、 当 該 薬 剤 の 種 類 や 投 与 間 隔 に よ っ て も 異 な る が 、 例 え ば 、 ク ロ ロ キ ン 類 の 場 合 は １ 日 成 人 1人 当 た り ２ ０ ０ ∼ ４ ０ ０ ｍ ｇ 程 度 で あ り 、 効 果 に 応 じ て 増 減 す る こ と が 可 能 で あ る 。 投 与 間 隔 は 、 １ 日 １ 回 、 さ ら に 連 日 な い し 数 日 お き に 行 う こ と も 可 能 で あ る 。 【 ０ ０ ６ １ 】 （ ３ ） が ん 治 療 剤 の 効 果 本 発 明 の が ん 治 療 剤 を 投 与 す る こ と に よ り 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 の 作 用 に よ り 、 標 的 の が ん 細 胞 は Ｌ − ア ス パ ラ ギ ン が 枯 渇 状 態 と な る と 同 時 に 、 緊 急 的 生 命 維 持 の た め に オ ー ト フ ァ ジ ー が 誘 導 さ れ る 。 特 に 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 標 的 の が ん 細 胞 で あ る 「 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 単 独 投 与 に 対 し て 抵 抗 性 を 有 す る が ん 」 に お い て は 、 ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 の 増 強 が 認 め ら れ る 。 し か し な が ら 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 に お け る オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 に よ り 、 上 記 の オ ー ト フ ァ ジ ー が 阻 害 さ れ て 、 そ の 際 に が ん 細 胞 内 に 多 量 の 活 性 酸 素 が 蓄 積 し 、 次 い で ｐ ５ ３ 蛋 白 質 の 作 用 に よ り 当 該 が ん 細 胞 は ア ポ ト ー シ ス へ と 誘 導 さ れ る 。 こ の が ん 細 胞 内 に お け る 活 性 酸 素 の 蓄 積 と ア ポ ト ー シ ス の サ イ ク ル の 繰 り 返 し に よ り 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 に お い て は 非 常 に 優 れ た が ん 治 療 効 果 が 発 揮 さ れ る 。 こ れ は 、 上 記 の 「 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 単 独 投 与 に 対 す る 抵 抗 性 」 の 有 無 に 係 わ ら な い 有 効 性 で あ る 。 し か し な が ら 、 ｐ ５ ３ 遺 伝 子 の 機 10 20 30 40 50
能 欠 失 と な る 変 異 が 認 め ら れ る が ん 細 胞 に 対 し て は 、 上 記 の ア ポ ト ー シ ス に 至 る 過 程 が 損 な わ れ て し ま い 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 を そ の ま ま 投 与 し て も が ん 治 療 効 果 を 期 待 す る こ と は で き な い 。 【 ０ ０ ６ ２ 】 （ ４ ） が ん 治 療 剤 の 態 様 本 発 明 の が ん 治 療 剤 は 、 （ ａ ） Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 が 単 一 の 医 薬 組 成 物 中 に 含 有 さ れ て い る 形 態 、 （ ｂ ） Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 が 、 互 い に 別 個 の 医 薬 組 成 物 と し て 組 み 合 わ さ っ た セ ッ ト の 形 態 、 の ２ 通 り の 形 態 に 大 別 さ れ る 。 【 ０ ０ ６ ３ 】 単 一 形 態 （ ａ ） は 、 投 与 が 一 剤 で 済 む と い う 利 点 が あ る が 、 そ の 反 面 で 性 質 の 異 な る 薬 剤 を 組 み 合 わ せ る た め に 、 薬 剤 量 と 投 与 間 隔 の 細 か な 調 節 が 難 し い 欠 点 が あ る 。 【 ０ ０ ６ ４ 】 セ ッ ト 形 態 （ ｂ ） は 、 二 剤 投 与 に な る も の の 、 薬 剤 量 と 投 与 間 隔 等 の 細 か な 調 節 が 容 易 で あ る 。 【 ０ ０ ６ ５ 】 前 述 の よ う に 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 に は 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と オ ー ト フ ァ ジ ー 阻 害 剤 に 加 え て 、 さ ら に Ｌ − ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 阻 害 剤 を 含 有 さ せ る こ と が で き る 。 こ れ は 、 「 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 単 独 投 与 に 対 し て 抵 抗 性 を 有 す る が ん 」 に お い て 増 強 さ れ る Ｌ − ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 を 阻 害 す る こ と で 、 当 該 が ん 細 胞 に お け る Ｌ − ア ス パ ラ ギ ン の 枯 渇 を 促 進 さ せ る こ と で 、 が ん 治 療 効 果 を 向 上 さ せ る こ と が 可 能 で あ る こ と に 基 づ い て い る 。 【 ０ ０ ６ ６ 】 Ｌ − ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 阻 害 剤 は 、 上 記 の （ ａ ） 単 剤 型 、 （ ｂ ） セ ッ ト 型 、 い ず れ の 態 様 に お い て も 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 に 含 有 さ せ る こ と が 可 能 で あ る 。 セ ッ ト 型 の 場 合 は 、 ３ 剤 共 に 異 な る 組 成 物 で あ る 場 合 以 外 に 、 い ず れ か ２ 剤 が 組 み 合 わ さ っ た 医 薬 組 成 物 で あ る 場 合 も 有 り 得 る 形 態 で あ る 。 特 に 、 Ｌ − ａ ｓ ｐ 類 と Ｌ − ア ス パ ラ ギ ン 合 成 酵 素 阻 害 剤 の 組 合 せ 組 成 物 は 、 そ の 作 用 機 序 か ら 好 ま し い 組 合 せ で あ る 。 【 ０ ０ ６ ７ 】 本 発 明 の が ん 治 療 剤 は 、 両 者 と も 「 医 薬 組 成 物 」 と し て 人 体 に 投 与 さ れ る 。 当 該 が ん 治 療 剤 の 有 効 成 分 の 直 接 投 与 の 場 合 も 、 例 え ば 、 注 射 剤 等 を 用 時 混 合 す る こ と に な る の で 、 こ れ も 医 薬 組 成 物 に 含 め ら れ る 。 【 ０ ０ ６ ８ 】 本 発 明 の が ん 治 療 剤 と し て 用 い ら れ る 医 薬 組 成 物 は 、 上 記 の 有 効 成 分 と 共 に 適 切 な 医 薬 製 剤 担 体 を 配 合 し て 製 剤 組 成 物 の 形 態 に 調 製 さ れ る 。 当 該 製 剤 担 体 と し て は 、 使 用 形 態 に 応 じ た 担 体 を 選 択 す る こ と が 可 能 で あ り 、 充 填 剤 、 増 量 剤 、 結 合 剤 、 付 湿 剤 、 崩 壊 剤 、 界 面 活 性 剤 等 の 賦 形 剤 な い し 希 釈 剤 を 使 用 す る こ と が で き る 。 組 成 物 の 形 態 は 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 を 効 果 的 に 含 有 可 能 な 形 態 で あ れ ば 特 に 限 定 さ れ る も の で は な く 、 錠 剤 、 粉 末 剤 、 顆 粒 剤 、 丸 剤 等 の 固 剤 で あ っ て も よ い が 、 通 常 は 、 液 剤 、 懸 濁 剤 、 乳 剤 等 の 注 射 剤 形 態 と す る の が 好 適 で あ る 。 ま た 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 を 適 切 な 担 体 の 添 加 に よ っ て 使 用 時 に 液 状 と な し 得 る 乾 燥 品 と す る こ と も 可 能 で あ る 。 さ ら に 本 発 明 の 医 薬 品 組 成 物 に お い て 、 シ ク ロ デ キ ス ト リ ン 含 有 ポ リ マ ー で 構 成 さ れ た ナ ノ 粒 子 、 高 分 子 ミ セ ル 、 赤 血 球 、 安 定 核 酸 脂 質 粒 子 （ Ｓ Ｎ Ａ Ｌ Ｐ ） 、 多 機 能 エ ン ベ ロ ー ブ 型 ナ ノ 構 造 体 （ Ｍ Ｅ Ｎ Ｄ ） 等 の ド ラ ッ グ デ リ バ リ ー シ ス テ ム を 活 用 し て 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 効 果 を よ り 向 上 さ せ る こ と が 可 能 で あ る 。 【 ０ ０ ６ ９ 】 得 ら れ た 医 薬 品 組 成 物 は 、 そ の 形 態 に 応 じ た 適 切 な 投 与 経 路 、 例 え ば 、 注 射 剤 形 態 の 医 薬 品 組 成 物 は 、 静 脈 内 、 筋 肉 内 、 皮 下 、 皮 内 、 腹 腔 内 投 与 等 に よ り 、 固 剤 形 態 の 医 薬 品 組 成 物 は 、 経 口 な い し 経 腸 に て 投 与 さ れ る 。 医 薬 品 組 成 物 中 の 本 発 明 の が ん 治 療 剤 の 量 は 、 当 該 組 成 物 の 投 与 方 法 、 投 与 形 態 、 使 用 目 的 、 患 者 の 症 状 等 に 応 じ て 適 宜 選 択 さ れ 一 定 で は な い が 、 通 常 、 本 発 明 の が ん 治 療 剤 を 、 ０ ． １ ∼ ９ ５ 質 量 ％ 程 度 含 有 す る 組 成 物 形 態 に 調 製 し て 、 上 述 し た 投 与 形 態 に て 投 与 を 行 う こ と が 好 ま し い 。 10 20 30 40 50
