Title
パーキンソン病モデルマウスにおける認知障害及びその機
構に関する研究( 本文(Fulltext) )
Author(s)
木下, 健一
Report No.(Doctoral
Degree)
博士(獣医学) 甲第478号
Issue Date
2017-03-13
Type
博士論文
Version
ETD
URL
http://hdl.handle.net/20.500.12099/56192
※この資料の著作権は、各資料の著者・学協会・出版社等に帰属します。
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7 ᘬࡁ㉳ࡇࡍ㹙35㹛ࠋ MPTP ࡣ㯮㉁⥺᮲య DA ⚄⤒≉␗ᛶࡀ㧗ࡃ㸪㯮㉁⥺᮲య DA ⚄⤒ࢆ㑅ᢥⓗ⬺ⴠ ࡉࡏࡿࡇࡀ࡛ࡁࡿ㹙35㹛ࠋࡲࡓ㸪MPTP ㄏⓎᛶ PD ࣔࢹࣝື≀ࡣ㸪ࣃ࣮࢟ࣥࢯࢽࢬ࣒ ࡸ㐠ື༠ㄪᛶ㸪㐠ືᏛ⩦⬟ຊࡢపୗ࠸ࡗࡓ㗹యእ㊰≧ࢆ♧ࡋ㸪ࡑࢀࡽ≧ࡣࣞ࣎ࢻ ࣃࡼࡗ࡚ᨵၿࡍࡿ࡞㸪ࣄࢺࡢPD 㠀ᖖࡼࡃఝࡓែࢆ࿊ࡍࡿ㹙35㹛ࠋࡲࡓ㸪PD ྠᵝ㠀㐠ື≧ࢆ♧ࡍࡇࡶከࡃሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙13, 21, 75, 84㹛ࠋࡋࡋ࡞ࡀࡽ㸪 MPTP ࡢᢞࡣྠ୍ື≀✀࠾࠸࡚ࡶᵝࠎ࡞⏝㔞㸪ᢞ᮲௳㸦ᛴᛶ㸪៏ᛶ㸪㛗ᮇᢞ ➼㸧ࡀᥦၐࡉࢀ࡚࠾ࡾ㸪ࡑࡢ᮲௳ࡼࡗ࡚㯮㉁⥺᮲యDA ⚄⤒ࡢയᐖࡢ⛬ᗘࡸ PD ᵝ ≧ࡢ⛬ᗘࡣᵝࠎ࡛࠶ࡿ㹙9, 35㹛ࠋ ࡑࡇ࡛➨1 ❶࡛ࡣ㸪MPTP ࡢᛴᛶᢞἲ㸦20 mg/kg㸪2 㛫࠾ࡁ 4 ᅇᢞ㸧ࡀ PD ࣐࢘ࢫࡢస〇㐺ษ࡛࠶ࡿ࠺ࢆ⤌⧊Ꮫⓗཬࡧ⾜ືᏛⓗゎᯒࢆ⾜ࡗࡓࠋ
8 ᮦ ᮦᩱ࠾ࡼࡧ᪉ἲ ື≀ ᐩኈᖹᕤᴗᰴᘧ♫㸦ᮾி㸧ࡽᑟධࡋࡓ 7 㐌㱋ࡢ C57BL/6J 㞝ᛶ࣐࢘ࢫࢆ◊✲ ⏝ࡋࡓࠋ࣐࢘ࢫࡣࢡࣜࣝ〇ࢣ࣮ࢪෆ࡛ᅛᙧ㣫ᩱ㸦᪥ᮏࢡࣞ㸪ᮾி㸧Ỉࢆ⮬⏤ ᦤྲྀ࡛ࡁࡿ᮲௳ୗ࡛2-3 ༉ࡎࡘ㣫⫱ࡋࡓࠋ㣫⫱ᐊෆࡣ 22s2Υ㸪‵ᗘ 35s5%⥔ᣢࡋ㸪 ༗๓7 ᫂ᮇࡀጞࡲࡿ᫂ᬯ 12 㛫࿘ᮇ࡛⟶⌮ࡋࡓࠋᑟධᚋ 1 㐌㛫ࢆ㣫⫱⎔ቃࡢ㥆 ᮇ㛫ࡋ㸪࡚ࡢᐇ㦂ࡣ8 㐌㱋ࡽ㛤ጞࡋࡓࠋ MPTP ᢞ
MPTP ࡣ SIGMA ♫㸦St. Louis, USA㸧ࡽ㉎ධࡋࡓࡶࡢࢆ⏝࠸ࡓࠋMPTP ࡣ⁛⳦ ⏕⌮㣗ሷỈ࡛⁐ゎࡋ᭱⤊⃰ᗘ2 mg/ml ㄪᩚࡋࡓࠋPD ࣔࢹ࣐ࣝ࢘ࢫࡢసฟࡣ MPTP ࢆ8 㐌㱋ࡢ࣐࢘ࢫ 20 mg/kg ࡢ⏝㔞࡛ 2 㛫࠾ࡁ 4 ᅇ⭡⭍ෆᢞࡍࡿࡇ࡛⾜ࡗࡓࠋ control ࣐࢘ࢫࡣ⁛⳦⏕⌮㣗ሷỈࢆྠ㔞ᢞࡋࡓࠋ⾜ື ᐃࢆࡣࡌࡵࡍࡿ࡚ࡢゎ ᯒࡣMPTP ᢞ 7 ᪥ᚋࡽ㛤ጞࡋࡓࠋࡲࡓ㸪MPTP ᢞ⏝ࡋࡓ࢚ࢵ࣌ࣥࢳ࣮ࣗࣈ㸪 ὀᑕჾཬࡧᢞ࣐࢘ࢫࡢ㣫⫱⏝࠸ࡓᗋᩜࡁ➼ࡣ࡚5%ḟளሷ⣲㓟࡚ฎ⨨ࡋ㸪ṧ␃ ࡍࡿMPTP ࢆኻάࡉࡏࡓࠋ ᢠࢳࣟࢩࣥỈ㓟㓝⣲㸦Tyrosine hydroxylase: TH㸧ᢠయࢆ⏝࠸ࡓච⤌⧊Ꮫཬࡧ TH 㝧ᛶ⣽⬊ᩘࡢホ౯ MPTP ᢞ 7㸪9㸪16 ᪥ᚋࡢ࣐࢘ࢫࡢ⬻ࢆࢪ࢚ࢳ࢚࣮ࣝࢸࣝ㯞㓉ୗ࡛ 4%ࣃ࣒ࣛ࣍ࣝ ࣝࢹࣄࢻ⁐ᾮࢆ⏝࠸࡚℺ὶᅛᐃࡋ㸪ฟᚋ4%ࣃ࣒ࣛ࣍ࣝࣝࢹࣄࢻ⁐ᾮ࡛ᅛᐃࡋ ࡓࠋᅛᐃᚋ㸪࣐ࢡࣟࢫࣛࢧ࣮㸦ᇽ㜰࣮ࣣ࣒ᰴᘧ♫㸪 ி㒔㸧࡛ 40 μm ࡢཌࡉࡢ ษ∦ࢆస〇ࡋࡓࠋస〇ࡋࡓษ∦ࡣ㸪ࡲࡎ 0.5%TritonX-100 ྵ᭷ phosphate-buffered
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10
SDS-PAGE 㸦12% polyacrylamide㸧ᒎ㛤ᚋ㸪ࣈࣟࢵࢸࣥࢢࣂࢵࣇ࣮㸦0.025% SDS, 0.025 M Tris-HCl, 20% methanol㸧୰࡛ࢽࢺࣟࢭ࣮ࣝࣟࢫ⭷㸦Trans-Blot, transfer medium; Bio-Rad, CA, USA㸧㌿ࡋࡓࠋࡑࡢᚋࢽࢺࣟࢭ࣮ࣝࣟࢫ⭷ࢆ TBS-T ࡛ 100 ಸᕼ㔘ࡋࡓࣈࣟࢵࢡ࢚࣮ࢫ㸦㞷༳㸪ᮾி㸧࡛ࣈࣟࢵ࢟ࣥࢢࡋ㸪TBS-T ࡼࡗ࡚ 5,000 ಸᕼ㔘ࡋࡓᢠTH ࣐࢘ࢫࣔࣀࢡ࣮ࣟࢼࣝᢠయ㸦EMD Millipore, Inc, MA, USA㸧࠶ࡿ࠸ ࡣ3000 ಸᕼ㔘ࡋࡓᢠ Ų ࢳࣗࣈ࣐ࣜࣥ࢘ࢫࣔࣀࢡ࣮ࣟࢼࣝᢠయ 㸦Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA㸧ࢆ 4Υࡢ᮲௳ୗ࡛ 24 㛫ᛂࡉࡏࡓࠋTBS-T ࡛Ὑίᚋ㸪TBS-T ࡛ 5,000 ಸᕼ㔘ࡋࡓgoat Anti-Mouse IgG, HRP㸦Promega, Fitchburg㸧ࢆ 1 㛫ᛂࡉࡏࡓࠋ TBS ࡛Ὑίᚋ㸪ImmunoStarLD 㸦ග⣧⸆ᕤᴗᰴᘧ♫㸪㜰㸧ࢆ⏝࠸ࡓࢣ࣑࢝ࣝࣝ ࣑ࢿࢵࢭࣥࢫἲࡼࡾⓎගࡉࡏࡓࠋᶆ㆑ࢱࣥࣃࢡࣂࣥࢻࡣ࣑ࣝࣀ࣓࣮ࢪࢼࣛࢨ࣮ 㸦LAS-3000 mini㸹ᐩኈࣇ࣒ࣝ㸪ᮾி㸧ࡼࡾゎᯒࡋࡓࠋࡲࡓ㸪ᚓࡽࢀࡓࣂࣥࢻࡣ ImageJ ࢯࣇࢺ࢙࢘㸦NIH㸧ࡼࡾᩘ್ࡋࡓࠋ 㐠ື༠ㄪᛶࢆᣦᶆࡋࡓ㗹యእ㊰≧ࡢホ౯ 㐠ື༠ㄪᛶࡢホ౯ࡣ࣮ࣟࢱ࣮ࣟࢵࢻࢸࢫࢺࢆ⏝࠸ࡓ㹙47㹛ࠋ࣮ࣟࢱ࣮ࣟࢵࢻ⨨ 㸦MK-610-A㸹ᐊ⏫ᶵᲔᰴᘧ♫㸪ᮾி㸧ࡣ⮬ື࡛ᅇ㌿ࡍࡿ┤ᚄ 3 cm ࡢࣟࢵࢻࢆ 5 ࣞ ࣮ࣥ᭷ࡋ㸪࣐࢘ࢫࡀࣟࢵࢻࡽⴠୗࡋࡓ㝿ࡣⴠୗ᳨ฟࢭࣥࢧ࣮࡚ឤ▱ࡋ㸪ࣟࢵࢻ ᅾ㛫ࢆ⮬ື ᐃࡍࡿࡇࡀ࡛ࡁࡿࠋࡲࡎึࡵ࣐࢘ࢫࢆప㏿㸦5 rpm㸧㸪60 ⛊㛫ࣟࢵ ࢻࡢୖࡏ័ࡽࡋࢆ⾜ࡗࡓࠋࡑࡢ24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧࣟࢵࢻࡢୖࡏ 30 ⛊ 㛫ࡢ㟼⨨ᚋ㸪➼㏿20 rpm㸦mode A㸧࡚ࣟࢵࢻࢆᅇ㌿ࡉࡏࣟࢵࢻࡽⴠୗࡍࡿࡲ࡛ࡢ 㛫ࢆィ ࡋࡓࠋࡇࡢ㝿㸪ࣟࢵࢻࡢ᭱ᅾ㛫ࢆ600 ⛊タᐃࡋ㸪20 ศ௨ୖࡢ㛫㝸 ࢆ࠶ࡅ2 ᅇヨ㦂ࢆ⾜࠸㸪ࡑࡢᖹᆒ್ࢆࢹ࣮ࢱࡋࡓࠋ ື⾜ືࡢホ౯
11 ື⾜ື ᐃࡣ࣮࣮࣍ࣝ࣎ࢻࢸࢫࢺࢆ⏝࠸ࡓࠋᗋ➼㛫㝸┤ᚄ3 cm ࡢ✰ࡀ㛤࠸ ࡓ505050 cm ࡢ⅊Ⰽࢡࣜࣝ〇ࡢ⮬ື࣮࣮࣍ࣝ࣎ࢻヨ㦂⨨㸦model ST-1㸹ᐊ⏫ ᶵᲔᰴᘧ♫㸪ᮾி㸧࣐࢘ࢫࢆධࢀ㸪5 ศ㛫㸪㸯ᅇࡢ ᐃ࠾ࡅࡿ⥲⾜ື㊥㞳㸪❧ࡕ ୖࡀࡾ⾜ືࡢᅇᩘ࣭㛫㸪࣊ࢵࢻࢹࢵࣆࣥࢢ⾜ື㸦✰ࢆࡢࡒࡃ⾜ື㸧ࡢᅇᩘ࣭㛫࣭ ₯ᅾ㛫ࡢ ᐃࢆ⾜ࡗࡓࠋ࣐࢘ࢫࡢ❧ࡕୖࡀࡾ⾜ືࡸ࣊ࢵࢻࢹࢵࣆࣥࢢ⾜ືࡣቨ㠃 ✰ഛ࠼ࡅࡽࢀࡓ㉥እ⥺ࢭࣥࢧ࣮ࡼࡗ࡚㸪⥲⾜ື㊥㞳ࡣ⨨ୖ᪉ྲྀࡾࡅࡽࢀࡓ CCD ࣓࢝ࣛࡼࡗ᳨࡚ฟࡋࡓࠋ㉥እ⥺࠾ࡼࡧ CCD ࣓࢝ࣛࡢሗࡣᑓ⏝ࡢࣥࢱ࣮ࣇ ࢙ࢫ࠾ࡼࡧࢯࣇࢺ࢙࢘ࡼࡗ࡚㞟⣙㸪ゎᯒ㸪ಖᏑࡋࡓࠋ ⤫ ⤫ィฎ⌮ 2 ⩌㛫ࡢẚ㍑ࡣ➼ศᩓᛶࡢ᳨ᐃࡢࡓࡵ F ᳨ᐃࢆ⾜࠸㸪➼ศᩓࡢሙྜ Student’s t-test ࢆ⾜ࡗࡓࠋ㯮㉁⦓ᐦ㒊ࡢ TH 㝧ᛶ⣽⬊ᩘࡢẚ㍑࡛ࡣ㸪Bartlett’s test ࡛➼ศᩓࢆ ☜ㄆࡋࡓᚋ㸪୍ඖ㓄⨨ศᩓศᯒࢆ⾜ࡗࡓࠋ᭷ពᕪࡀᚓࡽࢀࡓሙྜࡣ㸪Tukey’s test ࡼࡿከ㔜ẚ㍑ࢆ⾜ࡗࡓࠋ࡞࠾㸪p್ࡀ 0.05 ᮍ‶ࡢሙྜࢆ⤫ィᏛⓗ᭷ព࡛࠶ࡿุ᩿ ࡋࡓࠋ࡚ࡢ⤫ィฎ⌮ࡣSPSS ࢯࣇࢺ࢙࢘ࢆ⏝࠸ࡓࠋ
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12 ⤖ ⤖ᯝ MPTP ᢞࡼࡿ㯮㉁⥺᮲య DA ⚄⤒ኚᛶࡢホ౯ MPTP ᢞࡼࡿ㯮㉁⥺᮲య DA ⚄⤒ኚᛶࡢホ౯ࡣ DA ⏘⏕ࡢ㝿ࡢᚊ㏿㓝⣲࡛࠶ࡿ TH ࢆᣦᶆ⾜ࡗࡓࠋMPTP ᢞ 7㸪9㸪16 ᪥ᚋ࠾ࡅࡿ SNpc ࡢ DA ⚄⤒⣽⬊ࢆᢠ TH ᢠయ࡛ᰁⰍࡋ㸪㝧ᛶ⣽⬊ᩘࢆホ౯ࡋࡓࡇࢁ㸪MPTP ᢞ⩌ࡣ control ⩌ẚ㍑ࡋ࡚ ࡢ᪥ᩘ࠾࠸࡚TH 㝧ᛶ⣽⬊ᩘࡢ᭷ព࡞ῶᑡࡀㄆࡵࡽࢀࡓ㸦Fig.1A, B㸧ࠋࡲࡓ㸪ᢞ 7 ᪥ᚋ࠾࠸࡚㸪MPTP ᢞ࣐࢘ࢫ࡛⥺᮲యࡢᢠ TH ᢠయ࡛ࡢᰁⰍᛶࡢపୗࡀㄆࡵࡽࢀ ࡓ㸦Fig. 1A㸧ࠋḟ㸪⥺᮲యࡢ TH ྵ㔞ࢆ࢚࢘ࢫࢱࣥࣈࣟࢵࢸࣥࢢἲ࡛ ᐃࡋࡓࡇ ࢁ㸪MPTP ᢞ 7 ᪥ᚋࡢ⥺᮲య࠾࠸࡚ control ⩌ẚ㍑ࡋ㸪TH ྵ㔞ࡢ᭷ព࡞ῶᑡࡀ ㄆࡵࡽࢀࡓ㸦Fig. 2㸧ࠋࡇࢀࡽࡢ⤖ᯝࡽ㸪MPTP ᢞࡼࡗ࡚࡚ࡢᐇ㦂ࢆ㛤ጞࡍࡿ ᢞ7 ᪥ᚋࡽ㛗ᮇ㛫ࢃࡓࡾ㯮㉁⥺᮲యࡢ DA ⚄⤒ኚᛶࡀㄏᑟࡉࢀࡿࡇࡀศࡗࡓࠋ 㗹యእ㊰≧ࡢホ౯ 㗹యእ㊰≧ࡢホ౯ࡣ࣮ࣟࢱ࣮ࣟࢵࢻࢸࢫࢺࢆ⏝࠸ࡓࠋࡇࡢࢸࢫࢺ࡛ࡣᙉไⓗᅇ ㌿ࡍࡿࣟࢵࢻࡢୖ࣐࢘ࢫࢆࡏ㸪ࣟࢵࢻࡽⴠୗࡍࡿࡲ࡛ࡢ㛫ࢆ ᐃࡍࡿࡇࡼ ࡾ࣐࢘ࢫࡢ㐠ື༠ㄪᛶࡸ㐠ືᏛ⩦⬟ຊࢆ ᐃࡍࡿࡇࡀ࡛ࡁ㹙47㹛㸪࣐࢘ࢫࡢ㐠ື㞀ᐖ ࡢホ౯⏝࠸ࡽࢀࡿࠋ࣐࢘ࢫࢆࣟࢵࢻࡢୖࡏ㸪➼㏿20 rpm ࡢ㏿ࡉ࡛ࣟࢵࢻࢆᅇ㌿ ࡉࡏࡓࡇࢁ㸪MPTP ᢞ⩌ࡣ control ⩌ẚ㍑ࡋ᭷ពࣟࢵࢻࡽⴠࡕࡿࡲ࡛ࡢ㛫 ࡀ▷⦰ࡋࡓ㸦Fig. 3㸧ࠋࡇࡢ⤖ᯝࡽ㸪MPTP ᢞࡼࡾ㗹యእ㊰≧ࡢࡦࡘ࡛࠶ࡿ 㐠ື༠ㄪᛶࡢపୗࡀㄏⓎࡉࢀࡓࡇࡀศࡗࡓࠋ ୍⯡⾜ື୪ࡧື⾜ືࡢホ౯ ࣐࢘ࢫࡢ୍⯡⾜ື࠾ࡼࡧື⾜ືࡣ࣮࣮࣍ࣝ࣎ࢻࢸࢫࢺࢆ⏝࠸࡚ホ౯ࡋࡓࠋࡇࡢࢸࢫ
13 ࢺ࡛ࡣ㸪4 ࡘࡢ✰ࡀ㛤࠸ࡓ᪂つ⎔ቃୗ࠾࠸࡚⥲⾜ື㊥㞳ࡸ❧ࡕୖࡀࡾ⾜ື㸪✰ࢆࡢࡒ ࡃ࣊ࢵࢻࢹࢵࣉ⾜ືࢆ ᐃࡍࡿࡇ࡛㸪࣐࢘ࢫࡢ୍⯡⾜ືࡸື⾜ືࢆホ౯ࡍࡿࡀ ࡛ࡁࡿࠋࡑࡢ⤖ᯝ㸪⥲⛣ື㊥㞳㸪❧ࡕୖࡀࡾᅇᩘ࣭㛫㸪✰ࢆࡢࡒࡃ࣊ࢵࢻࢹࢵࣉ⾜ ືࡢᅇᩘ࣭㛫࣭₯ᅾ㛫࠸ࡎࢀࡢホ౯㡯┠࠾࠸࡚ࡶcontrol ⩌ MPTP ᢞ࣐࢘ࢫ 㛫ᕪࡣㄆࡵࡽࢀࡎ㸦Fig. 4㸧㸪MPTP ᢞࡣ࣐࢘ࢫࡢ୍⯡⾜ືࡸື⾜ືᙳ㡪ࢆ ࠼࡞࠸ࡇࡀศࡗࡓࠋ
14 ⪃
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16 ࢘ࢫ࡛ࡣ㸪㯮㉁⥺᮲యDA ࢩࢫࢸ࣒௨እࡢ⚄⤒ఏ㐩≀㉁ࡸࡑࢀࢆᢸ࠺⚄⤒᰾ࡢᙳ㡪ࡀ ẚ㍑ⓗ㍍ᗘ࡛࠶ࡿࡓࡵ㸪Ᏻᵝ≧➼ࡀㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗࡓࡇࡀ⪃࠼ࡽࢀࡿࠋ ᮏ❶ࡢ⤖ᯝࡽ㸪MPTP ࡢᛴᛶᢞࡣ㸪㯮㉁⥺᮲య DA ⚄⤒⬺ⴠ㐠ື㞀ᐖ࠸ࡗ ࡓPD 㢮ఝࡋࡓែࢆᘬࡁ㉳ࡇࡍࡇࡀศࡗࡓࠋ୍᪉࡛㸪࣐࢘ࢫࡢ୍⯡⾜ືࡸື ⾜ືࡣ୍ษࡢᙳ㡪ࢆ࠼࡞ࡗࡓࠋ MPTP ࡢᛴᛶᢞࡣ࣐࢘ࢫ PD ࡢែ࡛࠶ࡿ DA ⚄⤒⬺ⴠ㐠ື㞀ᐖࢆᘬࡁ㉳ࡇ ࡋࡓࡓࡵ㸪PD ࣔࢹࣝࡋ࡚㐺ษ࡛࠶ࡿุ᩿ࡋ㸪௨㝆ࡢᐇ㦂࡛ࡣᮏ❶࡚ᚓࡽࢀࡓࣔ ࢹ࣐ࣝ࢘ࢫࢆPD ࣐࢘ࢫࡋࡓࠋ
17
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18 ⥴ ⥴ゝ ࣃ࣮࢟ࣥࢯࣥ㸦parkinson’s disease: PD㸧࡛ࡣグ᠈ᶵ⬟ࡢపୗࡸ㉳㞀ᐖ࠸ࡗࡓ ㄆ▱㞀ᐖࢆ㧗⋡ేⓎࡍࡿࡇࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙15, 20, 32㹛ࠋ1-Methyl-4-phenyl- 1,2,3,6-tetrahydropyridine㸦MPTP㸧ㄏⓎᛶ PD ࣔࢹࣝື≀࠾࠸࡚ࡶࣔࣜࢫỈ㏞㊰ࢸ ࢫࢺࡸ♫ㄆ㆑ࢸࢫࢺ㸪᪂つ≀యㄆ㆑ࢸࢫࢺ࠸ࡗࡓ⾜ືヨ㦂࠾࠸࡚ㄆ▱ᶵ⬟ࡢపୗ ࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙13, 21, 84㹛ࠋࡋࡋ࡞ࡀࡽ㸪ࡇࢀࡽሗ࿌ࡣグ᠈ࡢ⋓ᚓࡸᏛ⩦ᶵ⬟ࡑ ࡢࡶࡢᑐࡍࡿゎᯒࡋ⾜ࢃࢀ࡚࠸࡞࠸ࠋ グ᠈ࡣᏛ⩦ࢆ⤒࡚⋓ᚓࡉࢀ㸪⬻ෆᅛᐃࡉࢀࡿࡇ࡛ᙧᡂࡉࢀࡿ㹙82㹛ࠋ㏆ᖺ㸪ᅛᐃ ࡉࢀࡓグ᠈ࡣ㉳ࡍࡿ୍ᗘᏳᐃ࡞≧ែ࡞ࡾ㹙77㹛㸪ᅛᐃ࠸࠺㐣⛬ࢆ⤒࡚㛗ᮇ ⓗ࡛ᙉᅛ࡞グ᠈࡞ࡿࡇࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙49, 51㹛ࠋ୍᪉࡛㸪ᾘཤ࠸࠺㐣⛬ࢆ⤒ ࡿࡇ࡛ᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࡣῶᙅࡍࡿࡇࡶሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙48㹛ࠋࡋࡋ࡞ࡀࡽ㸪PD ࣔࢹ࣐ࣝ࢘ࢫ࠾ࡅࡿグ᠈ࡢᅛᐃ࣭ᅛᐃ࣭ᾘཤᶵ⬟ࡣࢇ࡛᫂࠶ࡿࠋ ᜍᛧ᮲௳ࡅヨ㦂ࡣ࣐࢘ࢫࡢᛂ୍ษࡢᙳ㡪ࢆཬࡰࡉ࡞࠸୰ᛶⓗ࡞่⃭࡛࠶ࡿ᮲ ௳่⃭㸦conditioned stimulus: CS㸧ୗ࡛㸪᎘ᝏ่⃭࡛࠶ࡿ↓᮲௳่⃭㸦unconditioned stimulus: US㸧ࢆ࠼ࡿࡇࡼࡾ㸪CS ᑐࡋ࡚ᜍᛧࢆᏛ⩦ࡉࡏࡿ࠸࠺ࢸࢫࢺ࡛࠶ ࡿࠋᩥ⬦ⓗᜍᛧ᮲௳ࡅヨ㦂ࡣCS ⨨ࡢᭀ㟢㸦⨨ᑐࡍࡿ✵㛫ሗ㸧㸪US ࣇ ࢵࢺࢩࣙࢵࢡࢆ⏝࠸ࡿࡇ࡛㸪⨨ࡢ✵㛫ሗᑐࡋ࡚ᜍᛧࢆᏛ⩦ࡉࡏࡿࡇࡀ࡛ࡁࡿ 㹙18, 43, 76㹛ࠋࡲࡓ㸪ᩥ⬦ⓗᜍᛧ᮲௳ࡅヨ㦂ࡣᜍᛧグ᠈ࡢᅛᐃᚋ㸪CS ᭀ㟢ࡍࡿ ࡇ࡛グ᠈ࡢᅛᐃࡸᾘཤࢆㄏᑟࡍࡿࡇࡀ࡛ࡁࡿࡓࡵ㸪グ᠈ࡢᅛᐃࡸᾘཤᶵ⬟ࡢゎ ᯒከࡃ⏝࠸ࡽࢀ࡚࠸ࡿࠋグ᠈ࡢᅛᐃࡣᜍᛧ᮲௳ࡅᚋ࣐࢘ࢫࢆࡧCS ▷㛫ᭀ 㟢ࡍࡿࡇ࡛ㄏᑟࡉࢀ㹙43, 76㹛㸪グ᠈ࡢᅛᐃࡀ㉳ࡇࡿ CS ᑐࡍࡿᜍᛧグ᠈ࡣ⥔ᣢ ࡉࢀࡿࠋ୍᪉࡛㸪グ᠈ࡢᾘཤࡣ࣐࢘ࢫࢆCS 㛗㛫࠶ࡿ࠸ࡣ㢖ᅇᭀ㟢ࡍࡿࡇ࡛ㄏᑟ ࡉࡿࠋグ᠈ࡢᾘཤࡀ㉳ࡇࡿ㸪CS ᑐࡋ࡚Ᏻ࡛࠶ࡿ࠸࠺グ᠈ࡀᙧᡂࡉࢀࡿࡇ࡛㸪
19 CS ᑐࡍࡿᜍᛧグ᠈ࡣῶᙅࡍࡿ㹙43, 76㹛ࠋ ࡑࡇ࡛ᮏ❶࡛ࡣ㸪ᩥ⬦ⓗᜍᛧ᮲௳ࡅヨ㦂ࢆ⏝࠸࡚ PD ࣐࢘ࢫࡢグ᠈ࡢᅛᐃ࣭ᅛ ᐃ࣭ᾘཤᶵ⬟ࡢゎᯒࢆ⾜ࡗࡓࠋࡲࡓ㸪ᜍᛧ᮲௳ࡅ⏝࠸ࡿUS ࡢᙉᗘࡼࡗ࡚グ᠈ ࡢᅛᐃࡸᾘཤཬࡰࡍຠᯝࡀ␗࡞ࡿࡢሗ࿌ࡀ࠶ࡿ㹙3, 7㹛ࡓࡵ㸪ᮏ◊✲࡛ࡣᙅ่⃭ 㸦1 mA/2 ⛊㸪1 ᅇ㸧ᙉ่⃭㸦2 mA/2 ⛊㸪2 ᅇ㸧ࡢ 2 ✀㢮ࡢ US ࢆ⏝࠸࡚ PD ࣐࢘ࢫ ࡢグ᠈ࡢᅛᐃ࣭ᅛᐃ࣭ᾘཤᶵ⬟ࢆゎᯒࡋࡓࠋ
20 ᮦ ᮦᩱ᪉ἲ ື≀ཬࡧMPTP ᢞ ➨1 ❶ࡢグ㍕‽ࡌ࡚ᐇࡋࡓࠋ ⾜ື ᐃ⨨ ⾜ື⨨ࡣ17.017.014.5 cm ࡢࢡࣜࣝ〇ࡢ⟽㸦᮲௳ࡅ⨨㸧㟁Ẽ่⃭⨨ ࡛ᵓᡂࡉࢀࡿ㸦ST-10㸹࣓ࣝࢡ࢚ࢫࢺ㸪ᐩᒣ㸧ࠋࢡࣜࣝ〇ࡢ⟽ࡣᅄ᪉ࢆ㯮Ⰽࡢࢡࣜࣝ ᯈ࡛ᅖࡗ࡚࠶ࡾ㸪ᗋࡣࢫࢸࣥࣞࢫࢫࢳ࣮ࣝ〇ࡢࣟࢵࢻࡀ1 cm 㛫㝸࡛୪ࢇ࡛࠸ࡿࠋࢫ ࢸࣥࣞࢫࢫࢳ࣮ࣝ〇ࡢࣟࢵࢻࡣ㟁Ẽ่⃭⨨ࡘ࡞ࡀࡗ࡚࠾ࡾ㸪࣐࢘ࢫ㊊㒊㟁Ẽ่⃭ ࢆ࠼ࡿࡇࡀ࡛ࡁࡿࠋࡲࡓ㸪⨨ୖ㒊 CCD ࣓࢝ࣛࢆタ⨨ࡋ㸪࣐࢘ࢫࡢ⾜ືほᐹ㸪 ᐃ㸪ゎᯒ⏝࠸ࡓࠋ ⾜ື ᐃ ࡚ࡢ⾜ື ᐃࡣձᜍᛧ᮲௳ࡅ㸪ղᅛᐃ࣭ᾘཤࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢ㸪ճᅛᐃ࣭ᾘཤࢸ ࢫࢺ࡛ᵓᡂࡉࢀࡿࠋ ᙅUS㸦1 mA/2 ⛊㸪1 ᅇ่⃭㸧ࢆ⏝࠸ࡓ ᐃ ձ࣐࢘ࢫࢆ᮲௳ࡅ⨨ධࢀ148 ⛊ᚋ 1 mA/2 ⛊ࡢ㟁Ẽ่⃭ࢆ 1 ᅇ࠼ࡓࠋࡑࡢ 30 ⛊ᚋ࣐࢘ࢫࢆ᮲௳ࡅ⨨ࡽྲྀࡾฟࡋ㸪࣮࣒࣍ࢣ࣮ࢪෆᡠࡋࡓࠋ ղձࡢ24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ࡅ⨨ධࢀ㸪ᅛᐃ࠶ࡿ࠸ࡣᾘཤࢺ࣮ࣞࢽ ࣥࢢࢆ⾜ࡗࡓࠋᅛᐃࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢࡢሙྜࡣ3 ศ㛫㸪ᾘཤࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢࡢሙྜࡣ 30 ศ 㛫᮲௳ࡅ⨨ෆᅾࡉࡏࡓࠋࡇࡢࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢ୰㸪㟁Ẽ่⃭ࡣ୍ษ࠼࡞ࡗࡓࠋ ࡲࡓ㸪ࡇࡢ㝿ᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࡋ࡚ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ືࡢ ᐃࢆ⾜ࡗࡓࠋ
21 ճղࡢ24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ࡅ⨨ධࢀ㸪ᅛᐃ࠶ࡿ࠸ࡣᾘཤࢸࢫࢺࢆ ⾜ࡗࡓࠋ୧ࢸࢫࢺࡶ࣐࢘ࢫࢆ᮲௳ࡅ⨨ෆ3 ศ㛫ᅾࡉࡏ㸪ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ື ࡢ ᐃࢆ⾜ࡗࡓࠋ ᙉ ᙉUS㸦2 mA/2 ⛊㸪2 ᅇ่⃭㸧ࢆ⏝࠸ࡓ ᐃ ձ࣐࢘ࢫࢆ᮲௳ࡅ⨨ධࢀ74 ⛊ᚋ 148 ⛊ᚋ 2 mA/2 ⛊ࡢ㟁Ẽ่⃭ࢆ࠼ࡓࠋ ࡑࡢ30 ⛊ᚋ࣐࢘ࢫࢆ᮲௳ࡅ⨨ࡽྲྀࡾฟࡋ㸪࣮࣒࣍ࢣ࣮ࢪෆᡠࡋࡓࠋ ղձࡢ24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ࡅ⨨ධࢀ㸪ᅛᐃ࠶ࡿ࠸ࡣᾘཤࢺ࣮ࣞࢽ ࣥࢢࢆ⾜ࡗࡓࠋᅛᐃࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢࡢሙྜࡣ3 ศ㛫㸪ᾘཤࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢࡢሙྜࡣ 30 ศ 㛫᮲௳ࡅ⨨ෆᅾࡉࡏࡓࠋࡇࡢࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢ୰㸪㟁Ẽ่⃭ࡣ୍ษ࠼࡞ࡗࡓࠋ ࡲࡓ㸪ࡇࡢ㝿ᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࡋ࡚ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ືࡢ ᐃࢆ⾜ࡗࡓࠋᾘཤ࠾࠸࡚ࡢ ࡳྠᵝࡢࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢࢆ⩣᪥ࡶ⾜ࡗࡓࠋ ճղࡢ24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ࡅ⨨ධࢀ㸪ᅛᐃ࠶ࡿ࠸ࡣᾘཤࢸࢫࢺࢆ ⾜ࡗࡓࠋ୧ࢸࢫࢺࡶ࣐࢘ࢫࢆ᮲௳ࡅ⨨ෆ3 ศ㛫ᅾࡉࡏ㸪ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ື ࡢ ᐃࢆ⾜ࡗࡓࠋ ᮏ᮲௳࡛ࡣグ᠈ࡢಖᣢࢸࢫࢺࡶ⾜ࡗࡓࠋձྠᵝࡢ᮲௳ࡅᚋ㸪9 ᪥㛫ࢃࡓࡾ 24 㛫ࡈ࣐࢘ࢫࢆ᮲௳ࡅ⨨3 ศ㛫ධࢀ㸪ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ືࢆ ᐃࡋ㸪グ᠈ࡀ ࢀࡔࡅಖᣢࡉࢀࡿࢆẚ㍑㸪ゎᯒࡋࡓࠋ ᅛᐃㄏᑟࡢホ౯ ձᙅUS ࠶ࡿ࠸ࡣᙉ US ࢆ⏝࠸࡚ᜍᛧ᮲௳ࡅࢆ⾜࡞ࡗࡓࠋ ղձࡢ24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ࡅ⨨ 3 ศ㛫ධࢀ㸪ᅛᐃࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢࢆ ⾜ࡗࡓࠋࡇࡢ㝿㸪ᅛᐃࢆ㜼ᐖࡍࡿ┠ⓗ࡛α2 ࢻࣞࢼࣜࣥཷᐜయసື⸆࡛࠶ࡿࢡࣟࢽ ࢪࣥ㸦3 mg/kg㸧㸦ග⣧⸆ᕤᴗᰴᘧ♫㸪ᮾி㸧ࢆ᮲௳ࡅ⨨ࡽ࣐࢘ࢫࢆྲྀࡾฟ
22 ࡋࡓ┤ᚋ⭡⭍ෆᢞࡋࡓࠋᑐ↷⩌ࡣ⁐፹࡛࠶ࡿ⁛⳦⏕⌮㣗ሷỈࢆྠ㔞ᢞࡋࡓࠋ ճղࡢ24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ࡅ⨨ධࢀ㸪ᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࡢホ౯ࢆ⾜ ࡗࡓࠋࡇࡢ㝿㸪ࢡࣟࢽࢪࣥᢞࡼࡿᅛᐃ㜼ᐖస⏝ࡀㄆࡵࡽࢀࢀࡤ㸪ࡑࡢ⏝࠸ࡓᐇ 㦂᮲௳ࡣᅛᐃࡢㄏᑟ㐺ࡋ࡚࠸ࡿࡶࡢ࡛࠶ࡿุ᩿ࡋࡓࠋ ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ືࡢ ᐃ ࣐࢘ࢫࡢグ᠈ࡣ࣐࢘ࢫࡢᜍᛧ⾜ື࡛࠶ࡿࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ືࢆ ᐃࡍࡿࡇࡼࡾ⾜ ࡗࡓࠋCCD ࣓࡚࢝ࣛグ㘓࣭ಖᏑࡋࡓື⏬ࢆ⏝࠸㸪 ᐃ୰ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ືࢆ♧ࡋ ࡓ㛫ࡢྜ㸦ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ㛫 / ⥲ ᐃ㛫100㸧ࢆࢹ࣮ࢱࡋࡓࠋᾘཤࢺ࣮ࣞࢽ ࣥࢢ࠾࠸࡚ࡣ⨨ධࢀ࡚ࡽึࡵࡢ3 ศ㛫᭱ᚋࡢ 3 ศ㛫࠾ࡅࡿࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ ືࢆ ᐃࡋ㸪ࢹ࣮ࢱࡋࡓࠋ ⤫ィฎ⌮ ẚ㍑ࡍࡿ⩌㛫࡛ᅉᏊࡀ」ᩘᏑᅾࡍࡿሙྜ㸪2 ඖ㓄⨨ศᩓศᯒ࠶ࡿ࠸ࡣ 3 ඖ㓄⨨ศᩓศ ᯒ࡛ᅉᏊ㛫ࡢస⏝ࢆゎᯒࡋࡓࠋᅉᏊ㛫స⏝ࡀᏑᅾࡋ࡞࠸ሙྜࡣ Tukey’s test ࢆ⏝࠸࡚ࡑࡢᚋࡢ᳨ᐃࢆ⾜࠸㸪స⏝ࡀᏑᅾࡍࡿሙྜࡣ Wilcoxon signed-rank test ࢆ⏝࠸࡚ࡑࡢᚋࡢ᳨ᐃࢆ⾜ࡗࡓࠋ࡞࠾㸪p್ࡀ 0.05 ᮍ‶ࡢሙྜࢆ⤫ィᏛⓗ᭷ព ࡛࠶ࡿุ᩿ࡋࡓࠋ࡚ࡢ⤫ィฎ⌮ࡣSPSS ࢯࣇࢺ࢙࢘ࢆ⏝࠸ࡓࠋ
23 ⤖ ⤖ᯝ ᙅ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓᩥ⬦ⓗᜍᛧ᮲௳ࡅヨ㦂 ᙅ่⃭㸦1 mA/2 ⛊㸪1 ᅇ㸧ࢆ⏝࠸ࡓᜍᛧ᮲௳ࡅࡢ 24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ ࡅ⨨ධࢀᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࢆホ౯ࡋࡓࡇࢁ㸪control㸪PD ࣐࢘ࢫ⩌ඹ㧗࠸ࣇ࣮ࣜ ࢪࣥࢢྜࢆ♧ࡋ㸪୧⩌㛫᭷ព࡞ᕪࡣㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗࡓ㸦Fig.5A, B㸧ࠋḟ㸪᮲௳ ࡅ⨨▷㛫ᭀ㟢㸦3 ศ㛫㸧ࡋ㸪グ᠈ࡢᅛᐃࢆㄏᑟࡋࡓ 24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ ᮲௳ࡅ⨨ධࢀᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࢆホ౯ࡋࡓࡇࢁ㸪୧⩌ࡶᅛᐃࢸࢫࢺྠ⛬ ᗘࡢࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢྜࢆ♧ࡋ㸪୧⩌㛫᭷ព࡞ᕪࡣㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗࡓ㸦Fig. 5A㸧ࠋࡲࡓ㸪 ᮲௳ࡅ⨨㛗㛫ᭀ㟢㸦30 ศ㛫㸧ࡋ㸪グ᠈ࡢᾘཤࢆㄏᑟࡋࡓ 24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆ ࡧ᮲௳ࡅ⨨ධࢀᾘཤࡉࢀࡓグ᠈ࢆホ౯ࡋࡓࡇࢁ㸪ᅛᐃࢸࢫࢺẚ㍑ࡋ㸪୧ ⩌ࡶ᭷ព࡞ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢྜࡢῶᑡࡀㄆࡵࡽࢀ㸪ࡲࡓ୧⩌㛫᭷ព࡞ᕪࡣㄆࡵࡽࢀ ࡞ࡗࡓ㸦Fig. 5B㸧ࠋ ௨ୖࡢ⤖ᯝࡽ㸪ᙅ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓᜍᛧ᮲௳ࡅヨ㦂ࡢሙྜ㸪PD ࣐࢘ࢫࡢグ᠈ࡢᅛᐃ࣭ ᅛᐃ࣭ᾘཤࡣṇᖖ㉳ࡇࡿࡇࡀศࡗࡓࠋ ᙉ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓᩥ⬦ⓗᜍᛧ᮲௳ࡅヨ㦂 ᙉ่⃭㸦2 mA/ 2 ⛊㸪2 ᅇ㸧ࢆ⏝࠸ࡓᜍᛧ᮲௳ࡅࡢ 24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ ࡅ⨨ධࢀᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࢆホ౯ࡋࡓࡇࢁ㸪control㸪PD ࣐࢘ࢫ⩌ඹ㧗࠸ࣇࣜ ࣮ࢪࣥࢢྜࢆ♧ࡋ㸪୧⩌㛫᭷ព࡞ᕪࡣㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗࡓ㸦Fig. 6A, B㸧ࠋࡲࡓ㸪᮲௳ ࡅ⨨▷㛫ᭀ㟢㸦3 ศ㛫㸧ࡋ㸪グ᠈ࡢᅛᐃࢆㄏᑟࡋࡓ 24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆ ࡧ᮲௳ࡅ⨨ධࢀᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࢆホ౯ࡋࡓࡇࢁ㸪୧⩌ࡶᅛᐃࢸࢫࢺྠ ⛬ᗘࡢࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢྜࢆ♧ࡋ㸪୧⩌㛫᭷ព࡞ᕪࡣㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗࡓ㸦Fig. 6A㸧ࠋ୍ ᪉㸪᮲௳ࡅ⨨㛗㛫ᭀ㟢㸦30 ศ㛫㸧ࡋ㸪グ᠈ࡢᾘཤࢆㄏᑟࡋࡓ 24 㛫ᚋ࠾ࡼࡧ
24 48 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ࡅ⨨ධࢀᾘཤࡉࢀࡓグ᠈ࢆホ౯ࡋࡓࡇࢁ㸪グ᠈ ࡢᅛᐃࢸࢫࢺࡼࡾࡶ᭷ព࡞ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢྜࡢῶᑡࡀPD ࣐࢘ࢫ࡛ࡣ control ࣐࢘ࢫ ẚ㍑ࡋ㸪ࡼࡾ᪩ᮇࡽㄆࡵࡽࢀࡓ㸦Fig. 6B㸧ࠋࡲࡓ㸪ᜍᛧ᮲௳ࡅᚋ 24 㛫ࡈ ▷㛫㸦3 ศ㛫㸧ࡢ᮲௳ࡅ⨨ࡢᭀ㟢ࢆ 9 ᪥㛫ࢃࡓࡾ⾜࠸㸪グ᠈ࡢಖᣢᶵ⬟ࢆ ホ౯ࡋࡓࡇࢁ㸪ᾘཤࢸࢫࢺྠᵝPD ࣐࢘ࢫ࡛ࡣ control ࣐࢘ࢫẚ㍑ࡋ᭷ព࡞ ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢྜࡢῶᑡࡀࡼࡾ᪩ᮇࡽㄆࡵࡽࢀࡓ㸦Fig. 7㸧ࠋ ௨ୖࡢ⤖ᯝࡽ㸪ᙉ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓᜍᛧ᮲௳ࡅヨ㦂ࡢሙྜ㸪PD ࣐࢘ࢫࡢグ᠈ࡢᅛᐃ࣭ ᅛᐃࡣṇᖖ㉳ࡇࡿࡶࡢࡢ㸪ᾘཤࡀஹ㐍ࡋグ᠈ࡢಖᣢᶵ⬟ࡀపୗࡍࡿࡇࡀศࡗࡓࠋ ᅛᐃㄏᑟࡢホ౯ グ᠈ࡢᅛᐃࡣグ᠈㉳ࡼࡿᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࡢᏳᐃࡢࣉࣟࢭࢫࡀᚲせ࡛࠶ ࡾ㸪ᙉ࠸่⃭ࢆ⏝࠸࡚ᜍᛧ᮲௳ࡅࢆ⾜ࡗࡓሙྜࡸࢫࢺࣞࢫࡢከ࠸ᐇ㦂᮲௳ୗ࡛ࡣ㸪 CS ࡢᭀ㟢㸪▷࠸ CS ࡢᭀ㟢࡛ࡣᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࡢᏳᐃࡀ㉳ࡇࡾࡃࡃ㸪 ⤖ᯝࡋ࡚グ᠈ࡢᅛᐃࡀㄏᑟࡉࢀ࡞࠸ࡇࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙11㹛ࠋࡑࡇ࡛㸪ᮏ◊✲ ⏝࠸ࡓᐇ㦂᮲௳ࡀグ᠈ࡢᏳᐃࡸᅛᐃࢆㄏᑟ࡛ࡁ࡚࠸ࡿ࠺ࢆᅛᐃ㜼ᐖ ⸆ᢞࡼࡾゎᯒࡋࡓࠋᙅ่⃭࠶ࡿ࠸ࡣᙉ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓᜍᛧ᮲௳ࡅࡢ24 㛫ᚋ㸪᮲ ௳ࡅ⨨▷㛫ᭀ㟢㸦3 ศ㛫㸧ࡋ㸪࣐࢘ࢫࢆ⨨ࡽྲྀࡾฟࡋࡓ┤ᚋᏳᐃࡋ ࡓグ᠈ࡀᅛᐃࡉࢀࡿ㐣⛬ࢆ㜼ᐖࡍࡿస⏝ࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࢡࣟࢽࢪࣥ㹙23㹛ࢆ⭡⭍ෆ ᢞࡋࡓࠋࡑࡢ24 㛫ᚋ㸪࣐࢘ࢫࢆࡧ᮲௳ࡅ⨨ධࢀᅛᐃࡉࢀࡓグ᠈ࢆホ౯ ࡋࡓࡇࢁ㸪ᙅ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓᐇ㦂᮲௳ࡢሙྜ㸪control㸪PD ࣐࢘ࢫࡶࢡࣟࢽࢪࣥᢞ ⩌ࡣ⁐፹ᢞ⩌ẚ㍑ࡋ᭷ព࡞ࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢ⾜ືࡢῶᑡࡀㄆࡵࡽࢀࡓ㸦Fig. 8A㸧ࠋࡇ ࡢ⤖ᯝࡣ㸪ᙅ่⃭ࡢᐇ㦂᮲௳࡛ࡣグ᠈ࡢ㉳㸪グ᠈ࡢᏳᐃ࣭ᅛᐃࡢ㐣⛬ࡣṇᖖ ㉳ࡇࡗ࡚࠾ࡾ㸪ࡑࡢ㐣⛬ࡣࢡࣟࢽࢪࣥࡼࡗ࡚㜼ᐖࡉࢀࡓࡇࢆ♧၀ࡋ࡚࠸ࡿࠋ୍᪉㸪 ᙉ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓᐇ㦂᮲௳ࡢሙྜ㸪ࢡࣟࢽࢪࣥᢞࡼࡿᅛᐃ㜼ᐖస⏝ࡣㄆࡵࡽ࡞ࡗ
25
ࡓ㸦Fig. 8B㸧ࠋࡇࡢ⤖ᯝࡽ㸪ᙉ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓᐇ㦂᮲௳࡛ࡣ▷㛫ࡢ CS ᭀ㟢グ ᠈ࡢᏳᐃ࣭ᅛᐃࡢ㐣⛬ࡀ㉳ࡇࡽ࡞࠸ࡇࡀศࡗࡓࠋ
26 ⪃
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27 ᇦࡸ㑇ఏᏊ㸪ࢱࣥࣃࢡ㉁ྜᡂኚࡀ⏕ࡌ࡚࠸ࡿྍ⬟ᛶࡀ♧၀ࡉࢀࡓࠋࡲࡓ㸪ᜍᛧグ᠈ ࡢ㉳ᚋ㸪PD ࣐࢘ࢫ࡛ࡣグ᠈ࡢቑᙉࡼࡾࡶῶᙅࢆㄏᑟࡍࡿ㐣⛬ࡢࢩࣇࢺࡀஹ㐍ࡋ࡚ ࠸ࡿྍ⬟ᛶࡶ⪃࠼ࡽࢀ㸪ࡑࢀࡣCS ࡢ▷㛫㢖ᅇᭀ㟢࡛ࡢグ᠈ࡢಖᣢᶵ⬟ῶᙅࡢ⤖ᯝ 㸦Fig. 7㸧ࡶ୍⮴ࡍࡿࠋ ᮏ◊✲࡛ࡣᜍᛧ᮲௳ࡅ࠼ࡿUS ࡢᙉᗘẚ㍑ⓗᙅ࠸่⃭㸦1 mA/2 ⛊㸪1 ᅇ㸧 ᙉ࠸่⃭㸦2 mA/2 ⛊㸪2 ᅇ㸧ࢆ⏝࠸࡚ᐇ㦂ࢆ⾜ࡗࡓࠋࡑࡢ⤖ᯝ㸪ᙅ่⃭࡛ࡣᜍᛧグ ᠈ࡢᾘཤ୧⩌㛫࡛ኚࡣㄆࡵࡽࢀࡎ㸪ᙉ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓሙྜ࡛ࡢࡳPD ࣐࢘ࢫࡢᾘཤஹ 㐍ࡀㄆࡵࡽࢀࡓ㸦Fig.5B, 6B㸧ࠋᮏ◊✲ྠᵝ㸪␗࡞ࡿ US ࡢᙉᗘࡀࡑࡢᚋࡢグ᠈ ␗࡞ࡿᙳ㡪ࢆཬࡰࡍࡇࢆ♧ࡋࡓㄽᩥࡀ࠸ࡃࡘሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋBaldi ࡽࡣ US ᙉᗘ ࡀᙉ࠸ᜍᛧグ᠈ࡢᅛᐃࡸỗࡀቑᙉࡉࢀࡿࡇࢆሗ࿌㹙7㹛ࡋ࡚࠾ࡾ㸪Wiltgen ࡽ ࡣᾏ㤿ࡢᶵ⬟㞀ᐖࢆཷࡅࡓ࣐࢘ࢫࡣᙅ࠸ US ୗ࡛ࡣᜍᛧグ᠈ࡢᅛᐃࡀ㞀ᐖࡉࢀࡿࡶ ࡢࡢ㸪ᙉ࠸US ࡛ࡣᜍᛧグ᠈ࡢᅛᐃࡀṇᖖ㉳ࡇࡿࡇࢆぢฟࡋ࡚࠸ࡿ㹙83㹛ࠋࡇࡢࡼ ࠺㸪グ᠈ࡢᅛᐃࡸᅛᐃ࣭ᾘཤࢆẚ㍑ࡍࡿ࠶ࡓࡗ࡚US ᙉᗘࡢ㑅ᢥࡣ㠀ᖖ㔜せ࡛ ࠶ࡾ㸪ᮏ◊✲࡛⏝࠸ࡓᙉ࠸US ࡣᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤࡸಖᣢᶵ⬟ࢆゎᯒࡍࡿ㝿᭷⏝࡛࠶ࡿ ࡇࡀศࡗࡓࠋ ᅛᐃㄏᑟ┤ᚋᅛᐃ㜼ᐖస⏝ࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࢡࣟࢽࢪࣥࢆᢞࡋࡓࡇࢁ㸪ᙅ ࠸US ᮲௳ୗ࡛ࡣᅛᐃࡀ㜼ᐖࡉࢀࡓࡶࡢࡢ㸪ᙉ࠸ US ᮲௳ୗ࡛ࡣᅛᐃࡀ㜼ᐖࡉࢀ࡞ ࡗࡓ㸦Fig. 8A, B㸧ࠋࢡࣟࢽࢪࣥࡣ㉳ᚋ㸪Ᏻᐃࡋࡓグ᠈ࡀᅛᐃࡉࢀࡿ㐣⛬ࢆ㜼 ᐖࡍࡿࡓࡵ㹙23㹛㸪ᮏ◊✲࡛⏝࠸ࡓᙅ US ᮲௳࡛ࡣグ᠈ࡢᏳᐃ࣭ᅛᐃࡢࣉࣟࢭࢫ ࡀṇᖖ㉳ࡁ࡚࠸ࡿࡢᑐࡋ㸪ᙉUS ᮲௳࡛ࡣグ᠈ࡢᏳᐃࡀ㉳ࡁࡎ㸪ᅛᐃࡀㄏᑟ ࡉࢀ࡞࠸ࡇࡀศࡗࡓࠋᙉ࠸US ࢆ⏝࠸ࡓሙྜ㸪グ᠈ࡢᅛᐃࡀᙉᅛ㉳ࡇࡾ㸪グ᠈ࡢ ㉳Ᏻᐃࡀ㉳ࡇࡾࡃࡃ࡞ࡗࡓࡓࡵ㸪ᅛᐃࡀ⏕ࡌ࡞࠸ࡇࡀ⪃࠼ࡽࢀࡿࠋグ ᠈ࡢᏳᐃࡣCS ࡢᭀ㟢㛫౫Ꮡࡍࡿ㹙11㹛ࡓࡵ㸪ᮏ US ᮲௳࠾࠸࡚グ᠈ࡢ ᅛᐃࢆㄏᑟࡍࡿࡓࡵࡣ㸪ࡼࡾ㛗ᮇ㛫ࡢCS ᭀ㟢ࢆ⾜࠺ᚲせࡀ࠶ࡿࠋࡋࡋ࡞ࡀࡽ㸪
28 ᅛᐃࡀṇᖖ㉳ࡇࡿᙅ࠸US ᮲௳ୗ࠾࠸࡚ PD ࣐࢘ࢫࡢᅛᐃࡣṇᖖ࡛࠶ࡗࡓࡇ ࡽ㸪PD ࣐࢘ࢫࡢᅛᐃ⬟ຊࡣ control ࣐࢘ࢫྠ➼࡛࠶ࡿ⪃࠼ࡽࢀࡿࠋ ᮏ❶ࡢ⤖ᯝࡽ㸪MPTP ㄏⓎᛶ PD ࣔࢹ࣐ࣝ࢘ࢫࡣᜍᛧグ᠈ࡢᅛᐃ୪ࡧᅛᐃࡣṇ ᖖ࡛࠶ࡿࡶࡢࡢ㸪ᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤࡀஹ㐍ࡋ㸪ಖᣢᶵ⬟ࡀῶᙅࡋ࡚࠸ࡿࡇࡀศࡗࡓࠋ ࡇࡢࡇࡽ㸪グ᠈ࡢᾘཤஹ㐍࡞ࡽࡧಖᣢᶵ⬟పୗࡀPD ేⓎࡍࡿㄆ▱㞀ᐖ㛵 ࡋ࡚࠸ࡿྍ⬟ᛶࡀ♧၀ࡉࢀࡓࠋᮏ❶ࡢPD ࣐࢘ࢫ࡛ㄆࡵࡽࢀࡓグ᠈ࡢᾘཤஹ㐍ࢆ MPTP ㄏⓎᛶPD ࣐࢘ࢫ࠾ࡅࡿㄆ▱㞀ᐖᐃ⩏ࡋ㸪ḟ❶࡛ PD ࣐࢘ࢫࡢㄆ▱㞀ᐖࡢⓎᶵᵓ ࢆゎᯒࡋࡓࠋ
29
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3 ❶
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30 ⥴ ⥴ゝ ᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤࡣ᮲௳ࡅグ᠈ࡢ㉳౫Ꮡᛶ㉳ࡇࡾ㸪 ᮲௳่⃭㸦conditioned stimulus: CS㸧ᑐࡍࡿ᪂ࡋ࠸グ᠈ࡢᙧᡂࡼࡗ࡚㸪ᜍᛧグ᠈ࡀῶᙅࡍࡿ⌧㇟࡛࠶ࡿ 㹙48㹛ࠋࡲࡓ㸪ᩥ⬦ⓗᜍᛧ᮲௳ࡅヨ㦂࠾࠸࡚ᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤࡣᾏ㤿㸪ᡥ᱈య㸪๓ 㢌๓⓶㉁㸦medial prefrontal cortex: mPFC㸧ࡀᐦ᥋㛵ࡋ࡚࠸ࡿ㹙43, 46, 48㹛ࠋࡑ ࡢ࡞࡛ࡶᾏ㤿ࡣ㸪グ᠈ࡢ㉳㸪᪂ࡋ࠸グ᠈ࡢᙧᡂࡶ㔜せ࡞㡿ᇦ࡛࠶ࡾ㹙10, 48, 68, 73㹛㸪ᾏ㤿ࡢᶵ⬟ኚࡸᾏ㤿⬻㡿ᇦࡢ┦స⏝ࡢኚࡣᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤᙳ 㡪ࢆཬࡰࡍ㹙56, 78㹛ࡇࡀ▱ࡽࢀ࡚࠸ࡿࠋࡲࡓ㸪ᾏ㤿ࡣ CA1㸪CA3㸪ṑ≧ᅇ㸦dentate gyrus: DG㸧࠸ࡗࡓள㡿ᇦࡀᏑᅾࡋ㸪ᜍᛧグ᠈ᑐࡋ࡚␗࡞ࡗࡓാࡁࢆࡍࡿࠋ࠼ࡤ㸪 CA1 ࡣ CS ࡢᩥ⬦ሗࢆㄆ㆑ࡋ㸪ᡥ᱈య┦స⏝ࡍࡿࡇ࡛ CS ↓᮲௳่⃭ 㸦unconditioned stimulus: US㸧ࡢሗࢆ⤖ࡧࡘࡅࡿᙺࢆᢸ࠺࡞㸪ᜍᛧグ᠈ࡢᅛ ᐃࡸᅛᐃ㔜せ࡞㡿ᇦ࡛࠶ࡿ㹙43, 50㹛ࠋ㏆ᖺ㸪DG ࡀᜍᛧグ᠈ࡢ㉳ࡸᾘཤ㔜せ ࡞ᙺࢆᢸ࠺ࡇࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠾ࡾ㸪ᡥ᱈యࡢ┦స⏝ࡸ⚄⤒⣽⬊ࡢኚࡀグ᠈ࡢ ㉳ࡸᾘཤ㔜せ࡛࠶ࡿࡇࡀ♧၀ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙56, 61, 73㹛ࠋࡲࡓ㸪1-Methyl-4-phenyl- 1,2,3,6-tetrahydropyridine㸦MPTP㸧ㄏⓎᛶࣃ࣮࢟ࣥࢯࣥ㸦parkinson’s disease: PD㸧 ࣔࢹࣝື≀ࢆ⏝࠸ࡓ◊✲࠾࠸࡚ᾏ㤿ࡢᶵ⬟ࡸ✵㛫グ᠈➼ࡢᾏ㤿౫Ꮡᛶグ᠈ࡢ㞀ᐖࡀ ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙21, 47, 84, 85㹛ࠋࡼࡗ࡚㸪ᮏ◊✲࡛ㄆࡵࡽࢀࡓ PD ࣐࢘ࢫࡢᜍᛧグ᠈ ᾘཤஹ㐍ࡶᾏ㤿ࡢᶵ⬟ኚࡀ㛵ࡋ࡚࠸ࡿྍ⬟ᛶࡀ࠶ࡿࠋ cAMP ࡣ⣽⬊ෆࢭ࢝ࣥࢻ࣓ࢵࢭࣥࢪ࣮ࣕࡋ࡚ࡣࡓࡽࡃศᏊࡢ୍ࡘ࡛࠶ࡾ㸪ࢱࣥࣃࢡ ㉁ࣜࣥ㓟㓝⣲ A㸦protein kinase A: PKA㸧ࡢάᛶࢆࡋ࡚ cAMP response element-binding protein㸦CREB㸧ࡢࣜࣥ㓟୪ࡧ CREB ࡀ௰ࡍࡿࢱࣥࣃࢡ㉁ྜ ᡂࢆಁ㐍ࡍࡿ㸦Fig. 9)㹙12, 63㹛ࠋࡇࡢ cAMP-PKA-CREB ⤒㊰ࡣᾏ㤿ࡢ⚄⤒⣽⬊࠾ ࡅࡿ㛗ᮇቑᙉ㸦long-term potentiation: LTP㸧ࡸᾏ㤿౫Ꮡᛶグ᠈㸪ᩥ⬦ⓗᜍᛧグ᠈ࡢ
31
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32 ᮦ ᮦᩱ᪉ἲ ື≀ཬࡧMPTP ᢞ ➨1 ❶ࡢグ㍕‽ࡌ࡚ᐇࡋࡓࠋ ᢠc-Fos ᢠయࢆ⏝࠸ࡓච⤌⧊Ꮫཬࡧ c-Fos 㝧ᛶ⣽⬊ᩘࡢホ౯ ᙉ่⃭ࢆ⏝࠸ࡓᜍᛧ᮲௳ࡅᐇ㦂᮲௳ࡢ2 ᅇ┠ࡢᾘཤ┤ᚋ㸪30㸪60 ศᚋ࣐࢘ࢫࢆ ࢪ࢚ࢳ࢚࣮ࣝࢸ࡚ࣝ㯞㓉ࡋ㸪phosphate-buffered saline㸦PBS㸧 4%ࣃ࣒ࣛ࣍ࣝ ࣝࢹࣄࢻ࡚℺ὶᅛᐃࡢᚋ㸪᩿㢌ࡋ㸪ྲྀࡾ㝖࠸ࡓ⬻ࢆ4%ࣃ࣒ࣛ࣍ࣝࣝࢹࣄࢻ⁐ᾮ ࡛ᅛᐃࡋࡓࠋᅛᐃᚋ㸪࣐ࢡࣟࢫࣛࢧ࣮㸦ᇽ㜰࣮࢚࣒㸪ி㒔㸧࡛40 μm ࡢཌࡉ ࡢษ∦ࢆస〇ࡋࡓࠋస〇ࡋࡓษ∦ࡣ㸪ࡲࡎ 0.5%TritonX-100 ྵ᭷ PBS㸦TPBS㸧࡛ 1 㛫ᐊ ࡚ฎ⨨ࡋࡓࠋḟPBS ࡛ 100 ಸᕼ㔘ࡋࡓ㐣㓟Ỉ⣲ࢆ 40 ศ㛫ฎ⨨ࡋ㸪TPBS ࡛Ὑίᚋ㸪TPBS ࡛ 100 ಸᕼ㔘ࡋࡓࣈࣟࢵࢡ࢚࣮ࢫ㸦㞷༳㸪ᮾி㸧ࢆᐊ ࡛ 1 㛫ฎ ⨨ࡋࡓࠋTPBS ࡛Ὑίᚋ㸪TPBS ࡛ 5,000 ಸᕼ㔘ࡋࡓᢠ c-Fos ࢘ࢧࢠ࣏ࣜࢡ࣮ࣟࢼࣝᢠ య㸦EMD Millipore, MA, USA㸧ࢆ 4Υࡢ᮲௳ୗ࡛ 24 㛫ฎ⨨ࡋࡓࠋࡑࡢᚋ㸪TPBS ࡛Ὑίࡋ㸪TPBS ࡛ 500 ಸᕼ㔘ࡋࡓ 2 ḟᢠయ㸦ࣅ࢜ࢳࣥ anti-rabbit IgG; Vector, CA, USA㸧ࢆ 4Υࡢ᮲௳ୗ࡛ 2 㛫ฎ⨨ࡋࡓࠋฎ⨨ࡋࡓษ∦ࢆ TPBS ࡛Ὑίࡋ㸪 avidine-biotin-horseradish peroxide ࢆ 4Υࡢ᮲௳ୗ࡛ 2 㛫ฎ⨨ࡋ㸪PBS ࡛Ὑίࡋࡓ ᚋ㸪3,3-diaminobenzidine etrhydrochloride㸦ග⣧⸆ᕤᴗ㸪㜰㸧ࢆ⏝࠸࡚ⓎⰍࡋࡓࠋ ࡑࡢᚋ㸪ษ∦ࢆPBS ࡛ 5 ศ㛫㸪3 ᅇὙίࡋ㸪ࢫࣛࢻ࢞ࣛࢫ⛣ࡋ㸪50%ࢢࣜࢭ࣮ࣟ ࣝPBS ࡛ᑒධᚋ㸪ගᏛ㢧ᚤ㙾ୗ࡛ほᐹ࠾ࡼࡧ㸪ᾏ㤿㸦ࣈࣞࢢ࣐ᚋ᪉ 1.82 - 2.06 mm㸧࣭ mPFC㸦ࣈࣞࢢ࣐๓᪉ 1.34 - 1.94 mm㸧࣭ᡥ᱈య㸦ࣈࣞࢢ࣐ᚋ᪉ 1.58 - 1.94 mm㸧࠾ ࡅࡿc-Fos 㝧ᛶ⣽⬊ࡢィ ࢆ⾜ࡗࡓࠋࡇࡢ㝿㸪ᾏ㤿ࡣ CA1㸪ṑ≧ᅇ㸦dentate gyrus: DG㸧 㸪ᡥ᱈యࡣእഃ㒊㸦lateral amygdala: LA㸧㸪እഃᇶᗏ㒊㸦basolateral amygdala: BLA㸧㸪
33
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35 ṇ
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36 ⤫
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2 ⩌㛫ࡢẚ㍑ࡣ➼ศᩓᛶࡢ᳨ᐃࡢࡓࡵ F ᳨ᐃࢆ⾜࠸㸪➼ศᩓࡢሙྜ Student’s t-test ࢆ⾜ࡗࡓࠋከ⩌ẚ㍑࡛ࡣ㸪Bartlett’s test ࡛➼ศᩓࢆ☜ㄆࡋࡓᚋ㸪1 ඖ㓄⨨ศᩓศ ᯒࢆ⾜ࡗࡓࠋ᭷ពᕪࡀᚓࡽࢀࡓሙྜࡣ㸪Tukey’s test ࡼࡿከ㔜ẚ㍑ࢆ⾜࠸㸪᭷ពᕪ ࡀᚓࡽࢀ࡞࠸ሙྜࡣ Kruskal-Wallis ᳨ᐃཬࡧ㸪ࡑࡢᚋࡢ᳨ᐃ Mann-Whitney U-tests ࢆ⏝࠸࡚ከ㔜ẚ㍑ࢆ⾜ࡗࡓࠋẚ㍑ࡍࡿ⩌㛫࡛ᅉᏊࡀ」ᩘᏑᅾࡍࡿሙྜ㸪2 ඖ㓄 ⨨ศᩓศᯒ࠶ࡿ࠸ࡣ3 ඖ㓄⨨ศᩓศᯒ࡛ᅉᏊ㛫ࡢస⏝ࢆゎᯒࡋࡓࠋᅉᏊ㛫స ⏝ࡀᏑᅾࡋ࡞࠸ሙྜࡣTukey’s test ࢆ⏝࠸࡚ࡑࡢᚋࡢ᳨ᐃࢆ⾜࠸㸪స⏝ࡀᏑᅾࡍ ࡿሙྜࡣWilcoxon signed-rank test ࢆ⏝࠸࡚ࡑࡢᚋࡢ᳨ᐃࢆ⾜ࡗࡓࠋ࡞࠾㸪p್ࡀ 0.05 ᮍ‶ࡢሙྜࢆ⤫ィᏛⓗ᭷ព࡛࠶ࡿุ᩿ࡋࡓࠋ࡚ࡢ⤫ィฎ⌮ࡣ SPSS ࢯࣇ ࢺ࢙࢘ࢆ⏝࠸ࡓࠋ
37 ⤖ ⤖ᯝ ᜍᛧグ᠈ᾘཤᚋࡢc-Fos 㝧ᛶ⣽⬊ᩘࡢホ౯ ᜍᛧグ᠈ᾘཤ┤ᚋ㸪30 ศ㸪60 ศᚋᜍᛧグ᠈㛵ࢃࡿ⬻㡿ᇦ࡛࠶ࡿᾏ㤿࣭ᡥ᱈య࣭ ๓㢌๓⓶㉁࠾ࡅࡿ⚄⤒άᛶࢆc-Fos 㝧ᛶ⣽⬊ᩘࢆᣦᶆホ౯ࡋࡓࠋࡲࡓ㸪ᾏ㤿ࡣ CA1㸪 DG㸦Fig. 10A-C㸧㸪ᡥ᱈యࡣ LA㸪BLA㸪CeA㸦Fig. 11A-D㸧㸪mPFC ࡣ PL㸪IL㸦Fig. 12A-C㸧 ࠸ࡗࡓ⚄⤒᰾ศࡅ࡚ゎᯒࡋࡓࠋࡑࡢ⤖ᯝ㸪࡚ࡢ⬻㡿ᇦ࠾ࡅࡿ⚄⤒᰾࠾࠸࡚ control ཬࡧ PD ࣐࢘ࢫ⩌ඹᜍᛧグ᠈ᾘཤ┤ᚋẚ㍑ࡋ㸪30 ศࡸ 60 ศᚋ࡛ c-Fos 㝧ᛶ ⣽⬊ᩘࡢቑຍࡀㄆࡵࡽࢀࡓࡶࡢࡢ㸪୧⩌㛫᭷ព࡞ᕪࡣㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗࡓࠋࡘࡲࡾ㸪ᾘ ཤᚋ࠾࠸࡚୧⩌㛫ࡢ⚄⤒άᛶ᭷ព࡞ᕪࡣ࡞ࡃ㸪PD ࣐࢘ࢫࡢᜍᛧ㛵㐃⚄⤒ᅇ㊰ࡑࡢ ࡶࡢࡣṇᖖᶵ⬟ࡋ࡚࠸ࡿࡇࡀศࡗࡓࠋ ᾏ㤿࠾ࡅࡿᜍᛧグ᠈ᾘཤ๓ᚋ࡛ࡢcAMP ⃰ᗘࡢ ᐃ ᾘཤࢺ࣮ࣞࢽࣥࢢࡢ┤ᚋ࠶ࡿ࠸ࡣ㸪୍ษࡢᜍᛧ᮲௳ࡅ➼ࢆ⾜ࢃ࡞࠸࣐࢘ࢫࡢᾏ㤿ࢆ ฟࡋ㸪ELISA ἲ࡚ cAMP ࡢ⃰ᗘࢆ ᐃࡋࡓࠋࡑࡢ⤖ᯝ㸪ᜍᛧ᮲௳ࡅࢆ⾜ࡗ࡚࠸ ࡞࠸᮲௳ཬࡧᜍᛧグ᠈ᾘཤ┤ᚋࡢᾏ㤿࠾࠸࡚ PD ࣐࢘ࢫࡢ cAMP ⃰ᗘࡣ control ࣐࢘ ࢫẚ㍑ࡋ᭷ពῶᑡࡋ࡚࠸ࡓ㸦Fig. 13A, B㸧ࠋࡘࡲࡾ㸪ᾘཤࢆ㏻ࡋ࡚ PD ࣐࢘ࢫࡢᾏ 㤿࡛ࡣcAMP ࡢ⃰ᗘࡀῶᑡࡋ࡚࠸ࡿࡇࡀศࡗࡓࠋ ᾏ㤿࠾ࡅࡿᜍᛧグ᠈ᾘཤᚋࡢp-CREB ࡢⓎ⌧ゎᯒ ᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤ30 ศᚋ㸪ᾏ㤿࠾ࡅࡿ p-CREB ࡢⓎ⌧ࢆゎᯒࡋࡓࠋࡑࡢ⤖ᯝ㸪ᾏ㤿 CA1㸪CA3 㡿ᇦ࡛ࡣ control㸪PD ࣐࢘ࢫࡶ p-CREB 㝧ᛶ⣽⬊ࡢⓎ⌧ࡣࢃࡎㄆࡵ ࡽࢀࡿ⛬ᗘ࡛࠶ࡗࡓ㸦Fig. 14A, B㸧ࠋ୍᪉ᾏ㤿 DG 㡿ᇦ࠾࠸࡚ࡣ㸪୧⩌ࡶ㧗ᐦᗘ
38
࡞p-CREB 㝧ᛶ⣽⬊ᩘࡢⓎ⌧ࡀㄆࡵࡽࢀ㸪ࡑࡢⓎ⌧ᩘࢆホ౯ࡋࡓࡇࢁ㸪PD ࣐࢘ࢫ⩌ ࡣcontrol ࣐࢘ࢫ⩌ẚ㍑ࡋ࡚᭷ព p-CREB 㝧ᛶ⣽⬊ᩘࡀῶᑡࡋ࡚࠸ࡓ㸦Fig. 15A, B㸧ࠋ ࡲࡓ㸪p-CREB 㝧ᛶ⣽⬊ࡣ୧⩌ࡶᡂ⇍⚄⤒⣽⬊ࡢ࣐࣮࣮࡛࢝࠶ࡿ NeuN 30%‶ ࡓ࡞࠸⛬ᗘࡢඹⓎ⌧ࢆㄆࡵࡓ㸦Fig. 16A, B㸧ࠋ୍᪉㸪ࢫࢺࣟࢧࢺࡢ࣐࣮࣮࡛࢝࠶ࡿ GFAP ࡣࢇඹⓎ⌧ࡏࡎ㸦Fig. 17A㸧㸪ᮍ⇍⚄⤒⣽⬊ࡢ࣐࣮࣮࡛࢝࠶ࡿ DCX ࡣ ከࡃࡢඹⓎ⌧ࡀㄆࡵࡽࢀࡓ㸦Fig. 17B㸧ࠋࡇࡢ⤖ᯝࡽ㸪ᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤᚋ㸪PD ࣐࢘ࢫ ࡣᾏ㤿DG 㡿ᇦࡢ p-CREB Ⓨ⌧ࡀῶᑡࡋ࡚࠾ࡾ㸪ࡑࡢ p-CREB Ⓨ⌧ࡢከࡃࡣᮍ⇍⣽⬊㸪 ୰⛬ᗘࡣᡂ⇍⚄⤒⣽⬊ㄆࡵࡽࢀࡿࡇࡀศࡗࡓࠋ ࣟ ࣟࣜࣉ࣒ࣛࡢPD ࣐࢘ࢫᾘཤஹ㐍࠾ࡼࡧ p-CREB Ⓨ⌧ῶᑡᑐࡍࡿᨵၿຠᯝࡢゎᯒ ࣍ࢫ࣍ࢪ࢚ࢫࢸ࣮ࣛࢮPDEIV 㑅ᢥⓗ㜼ᐖ⸆ࣟࣜࣉ࣒ࣛᢞࡼࡿ PD ࣐࢘ࢫࡢᾘཤ ஹ㐍ࡢᨵၿຠᯝࢆ᳨ウࡋࡓࠋࡑࡢ⤖ᯝ㸪PD ࣐࢘ࢫ⁐፹࡛࠶ࡿ 1%DMSO ࢆᢞࡋࡓ ⩌࡛ࡣࡇࢀࡲ࡛ࡢ⤖ᯝྠᵝcontrol ࣐࢘ࢫࡼࡾ᪩ᮇࡽࡢࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢྜࡢῶᑡ㸪 ࡘࡲࡾᾘཤࡢஹ㐍ࡀㄆࡵࡽࢀࡓࠋ୍᪉࡛㸪PD ࣐࢘ࢫࣟࣜࣉ࣒ࣛࢆᢞࡋࡓ⩌࡛ࡣ⏝ 㔞౫Ꮡⓗࣇ࣮ࣜࢪࣥࢢྜࡢ᪩ᮇῶᑡࡀᨵၿࡋࡓࠋࡲࡓ㸪㧗⏝㔞⩌㸦2, 3 mg/kg㸧 ࠾࠸࡚ࡣ㸪control ࣐࢘ࢫ⩌ࣞ࣋ࣝࡲ࡛ᾘཤᶵ⬟ࢆᨵၿࡉࡏࡓ 㸦Fig. 18B㸧ࠋ୍᪉㸪control ࣐࢘ࢫ⩌ࣟࣜࣉ࣒ࣛࢆᢞࡋࡓሙྜ࡛ࡣ㸪1%DMSO ࢆᢞࡋࡓ⩌ࡢ㛫᭷ព࡞ᕪ ࡣㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗࡓ㸦Fig. 18A㸧ࠋ
ḟ㸪ࣟࣜࣉ࣒ࣛᢞࡼࡿPD ࣐࢘ࢫᾘཤஹ㐍ࡢᨵၿᚋ㸪ᾏ㤿 DG 㡿ᇦࡢ p-CREB Ⓨ⌧ࢆゎᯒࡋࡓࠋࡑࡢ⤖ᯝ㸪PD ࣐࢘ࢫ࡛ㄆࡵࡽࢀࡓ p-CREB ࡢⓎ⌧ῶᑡࡣࣟࣜࣉ࣒ࣛ ᢞࡼࡾ control ࣐࢘ࢫࣞ࣋ࣝࡲ࡛ᅇࡋࡓ㸦Fig. 19A, B㸧ࠋࡲࡓࠊࣟࣜࣉ࣒ࣛࡣ p-CREB 㝧ᛶ⣽⬊ NeuN ࡢඹⓎ⌧ྜࡣᙳ㡪ࢆཬࡰࡉ࡞ࡗࡓ㸦Fig. 20A, B㸧ࠋ ௨ୖࡢ⤖ᯝࡽ㸪ࣟࣜࣉ࣒ࣛࡣPD ࣐࢘ࢫࡢᾘཤஹ㐍ᑐࡋ࡚⾜ືᏛⓗࡶศᏊ⏕ ≀Ꮫⓗࡶᨵၿຠᯝࢆ᭷ࡍࡿࡇࡀศࡗࡓࠋ
39 SNpc ࡽMRN ࡢ⚄⤒ᢞᑕࡢゎᯒ PD ࡛ࡣ㯮㉁⥺᮲యࢻࣃ࣑ࣥ㸦dopamine: DA㸧⚄⤒ࡢኚᛶࡔࡅ࡛ࡣ࡞ࡃ㸪MRN ࡢࢭࣟ ࢺࢽࣥ㸦serotonin, 5-hydroxytryptamine: 5-HT㸧ࢩࢫࢸ࣒ࡢᶵ⬟పୗࡶሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙15, 20, 25㹛ࠋࡋࡋ࡞ࡀࡽ㸪㯮㉁ DA ⚄⤒ࡀ MRN ࡢ 5-HT ⚄⤒ࡢ㛵ಀᛶࡘ࠸࡚ࡣ࠶ࡲ ࡾ⌮ゎࡉࢀ࡚࠸࡞࠸ࠋࡑࡇ࡛㸪㯮㉁ࡢDA ⚄⤒ࡀ MRN ᢞᑕࡋ࡚࠸ࡿ࠺ࢆ MRN ㏫ྥᛶࢺ࣮ࣞࢧ࣮㸦2%fluorogold㸧ࢆᢞࡍࡿࡇࡼࡾゎᯒࡋࡓ㸦Fig. 21A㸧ࠋࡑࡢ ⤖ᯝ㸪fluorogold ࡣ㯮㉁୰ㄆࡵࡽࢀࡓࡶࡢࡢ TH 㝧ᛶ⣽⬊ࡣඹⓎ⌧ࡋ࡚࠸࡞ࡗࡓ 㸦Fig. 21B㸧ࠋ୍᪉࡛㸪GAD67 㝧ᛶ⣽⬊ࡣඹⓎ⌧ࡀㄆࡵࡽࢀ㸦Fig. 21B㸧㸪㯮㉁ࡢ GABA ⚄⤒ࡀMRN ᢞᑕࡋ࡚࠸ࡿࡇࡀศࡗࡓࠋ
40 ⪃ ⪃ᐹ PD ࣐࢘ࢫࡣᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤᚋ㸪ᜍᛧグ᠈㛵㐃⬻㡿ᇦ࡛࠶ࡿᾏ㤿࣭ᡥ᱈య࣭๓㢌๓⓶ ㉁࡚ࡢ㡿ᇦ࠾࠸࡚㸪⚄⤒άᛶࡢ࣐࣮࣮࡛࢝࠶ࡿc-Fos Ⓨ⌧㔞ࡣ control ⩌ࡢ㛫࡛ኚ ࡀㄆࡵࡽࢀ࡞ࡗࡓ㸦Fig. 10, 11, 12㸧ࠋࡇࡢ⤖ᯝࡣ㸪PD ࣐࢘ࢫࡢᜍᛧグ᠈ᾘཤ㛵ࢃ ࡗ࡚࠸ࡿ⚄⤒ᅇ㊰ࡣṇᖖᶵ⬟ࡋ࡚࠸ࡿࡇࢆ♧၀ࡋ࡚࠸ࡿࠋᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤࡀṇᖖ ㉳ࡇࡿࡓࡵࡣ⚄⤒᰾ࡢάᛶࡔࡅ࡛ࡣ࡞ࡃ㸪㑇ఏᏊⓎ⌧ࡸ᪂つࢱࣥࣃࢡ㉁ࡢྜᡂࢆ ࡋࡓࢩࢼࣉࢫྍረᛶࡢኚ࡞ࢆᚲせࡍࡿ㹙43, 49, 50, 76㹛ࠋc-Fos ࡣάᛶࡋࡓ⚄⤒ ⣽⬊ࡽⓎ⌧ㄏᑟࡉࢀࡿ๓ึᮇ㑇ఏᏊ࡛࠶ࡿࡓࡵ㸪⚄⤒άᛶࡢᣦᶆࡋ࡚⏝࠸ࡽࢀࡿ 㹙39㹛ࡀ㸪ࢩࢼࣉࢫྍረᛶࡢኚࡸࡑࢀ㛵ࢃࡿ㑇ఏᏊⓎ⌧㸪ࢱࣥࣃࢡ㉁ྜᡂ➼ࡢኚ ࢆᫎࡋ࡚࠸ࡿࢃࡅ࡛ࡣ࡞࠸ࠋࡘࡲࡾ㸪PD ࣐࢘ࢫࡢᾘཤஹ㐍ࡣᜍᛧグ᠈ᅇ㊰ࡑࡢࡶࡢ ࡢ㞀ᐖ㉳ᅉࡍࡿࢃࡅ࡛ࡣ࡞ࡃ㸪㛵㐃⬻㡿ᇦ࠾ࡅࡿ㑇ఏᏊⓎ⌧ࡸ᪂つࢱࣥࣃࢡ㉁ྜᡂ㸪 ࢩࢼࣉࢫྍረᛶࡢኚ㉳ᅉࡋ࡚࠸ࡿ⪃࠼ࡽࢀࡿࠋ ᮏ◊✲࡛ࡣᾏ㤿 cAMP-PKA-CREB ⤒㊰ࡢ PD ࣐࢘ࢫᜍᛧᾘཤஹ㐍ࡢ㛵ࢆ⢭ᰝࡋ ࡓࠋᾏ㤿ࡣᜍᛧ᮲௳ࡅグ᠈࠾࠸࡚㸪CS ࡢᩥ⬦ሗࢆᡥ᱈య㏦ࡾ US 㛵㐃ࡅ ࡿᙺࡸグ᠈㉳ࡢᩥ⬦ㄆ㆑ࡢᙺ➼ࢆᢸࡗ࡚࠾ࡾ㹙68, 69, 73㹛㸪ᜍᛧグ᠈ࡢ⋓ᚓ࣭ ㉳࣭ᅛᐃ࣭ᅛᐃ࣭ᾘཤࡢ࠸ࡎࢀࡢࣉࣟࢭࢫ࠾࠸࡚ࡶᚲせྍḞ࡞㡿ᇦ࡛࠶ࡿࠋᾏ 㤿ࡣCA1㸪CA3㸪DG ࠸ࡗࡓள㡿ᇦࡀᏑᅾࡍࡿࡀ㸪ࡑࡢ୰࡛ࡶ㏆ᖺ㸪DG ࡀᜍᛧグ ᠈ࡢ㉳ࡸᾘཤ࠾࠸࡚㔜せ࡞ᙺࢆᢸࡗ࡚࠸ࡿࡇࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋ࠼ࡤ㸪DG ࡣᡂ⇍ࡋࡓಶయ࠾࠸࡚ࡶ⚄⤒⣽⬊ࡢ᪂⏕ࡀ⾜ࢃࢀࡿ㡿ᇦ࡛࠶ࡾ㸪⚄⤒⣽⬊ࡢ᪂⏕ᩘࡸ ᪂⏕ࡋࡓ⚄⤒⣽⬊ࡀ⚄⤒ᅇ㊰ືဨࡉࢀࡿྜࡢኚᜍᛧグ᠈ᾘཤࡢ㛵㐃ᛶࡀ♧ ၀ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙56㹛ࠋࡲࡓ㸪DG ࠾ࡅࡿ CREB Ⓨ⌧ࡢቑຍࡀᜍᛧグ᠈ࡢ㉳ࢆቑᙉࡍ ࡿ㹙73㹛ࡇࡸ㸪DG ࠾ࡅࡿ LTP ࡸࢫࣃࣥࡢᙧᡂࡀグ᠈ࡢ㉳ CS ࡢሗࢆᡥ ᱈య㏦ࡿ㝿ᶵ⬟ࡋ࡚࠸ࡿࡇࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ㹙61, 68㹛ࠋᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤࡣグ᠈ࡢ
41 ㉳౫Ꮡⓗ㉳ࡇࡿࡓࡵ㸪DG ࡢᜍᛧグ᠈㉳㛵ࡍࡿᙺࡣᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤ࠾࠸ ࡚ࡶྠᵝ㔜せ࡛࠶ࡿࡇࡀ♧၀ࡉࢀࡿࠋࡲࡓ㸪ᾏ㤿࠾ࡅࡿ cAMP-PKA-CREB ࡣᜍ ᛧグ᠈ࡢᅛᐃ࣭ᅛᐃ࣭ᾘཤ࠾࠸࡚㔜せ࡞ࢩࢢࢼࣝ࢝ࢫࢣ࣮ࢻࡢࡦࡘ࡛࠶ࡿࠋᾏ㤿 ࠾ࡅࡿcAMP ࡢ㧗Ⓨ⌧ࡣᜍᛧグ᠈ࡢ⋓ᚓࢆቑᙉࡋᜍᛧグ᠈ᾘཤࢆ㐜ᘏࡉࡏ㹙45㹛㸪PKA ࢆᢚไࡋࡓࢺࣛࣥࢫࢪ࢙ࢽࢵࢡ࣐࢘ࢫ࡛ࡣᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤࡀಁ㐍ࡍࡿ㹙34㹛ࠋࡉࡽ㸪 ᜍᛧグ᠈ᾘཤࡣᾏ㤿࡛CREB ࡢⓎ⌧ࡀቑຍࡍࡿ㹙14㹛࡞㸪ᜍᛧグ᠈ᾘཤᑐࡍࡿ cAMP-PKA-CREB ࢩࢢࢼࣝࡢᙺࡣᩘከࡃሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋᮏ◊✲࡛ࡣ㸪PD ࣐࢘ࢫࡢ ᾘཤ࠾࠸࡚㸪ᾏ㤿࡛ࡢcAMP ࣞ࣋ࣝࡢῶᑡཬࡧᾏ㤿 DG ࡛ࡢ p-CREB ࡢⓎ⌧ῶᑡࡀ ㄆࡵࡽࢀ㸦Fig.13, 15㸧㸪ࣟࣜࣉ࣒ࣛࡼࡾᾏ㤿 cAMP-CREB ⤒㊰ࢆቑᙉࡍࡿࡇ࡛ PD ࣐࢘ࢫࡢᾘཤஹ㐍ࡣᨵၿࡋࡓ㸦Fig. 18, 19㸧ࠋࡇࡢ⤖ᯝࡽ㸪PD ࣐࢘ࢫࡣᾏ㤿 DG ࡢ cAMP-PKA-CREB ⤒㊰ࡢῶᙅࡼࡗ࡚㸪ᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤஹ㐍ࡀ⏕ࡌ࡚࠸ࡿࡇࡀ♧၀ࡉ ࢀࡓࠋ ᮏ◊✲࡛ㄆࡵࡽࢀࡓ p-CREB Ⓨ⌧ࡣᡂ⇍⣽⬊ࡸࢢࣜ⣽⬊࡛ࡣ࡞ࡃᮍ⇍⣽⬊࡛ከࡃ ㄆࡵࡽࢀࡓ㸦Fig. 16, 17, 20㸧ࠋᾏ㤿 DG ࡣᡂ⇍ࡋࡓಶయ࠾࠸࡚ࡶ⚄⤒⣽⬊ࡢ᪂⏕ࡀ⾜ ࢃࢀࡿ㡿ᇦ࡛࠶ࡾ㸪⚄⤒᪂⏕ࡸࡑࢀక࠺⚄⤒ᅇ㊰ᙧᡂࡣᏛ⩦ࡸグ᠈㸪⢭⚄ᶵ⬟ࡁ ࡞ᙳ㡪ࢆ࠼ࡿ㹙4㹛ࠋ㏆ᖺ㸪ᾏ㤿 DG ࠾ࡅࡿ⚄⤒⣽⬊᪂⏕ࡢቑຍࡣᜍᛧグ᠈ࡢᾘཤࢆ ஹ㐍ࡋ㹙56㹛㸪ࡉࡽᮍ⇍⣽⬊ࡑࡢࡶࡢࡀᾏ㤿౫Ꮡᛶグ᠈ᙳ㡪ࢆཬࡰࡍ࠸ࡗࡓሗ࿌ ࡀ࠶ࡿ㹙28㹛ࠋࡋࡋ࡞ࡀࡽ㸪ᮍ⇍⣽⬊ᜍᛧグ᠈ᾘཤࡢ㛵㐃ᛶࡘ࠸࡚ࡣᮍࡔ᫂ ࡞Ⅼࡀከ࠸ࠋᚋ㸪ᾏ㤿DG ᮍ⇍⣽⬊࠾ࡅࡿ p-CREB ࡢⓎ⌧ᜍᛧグ᠈ᾘཤࡢ㛵㐃 ᛶࡘ࠸࡚᭦࡞ࡿ◊✲ࡀᚲせ࡛࠶ࡿࠋ PDE ࡣᵓ㐀ⓗ࠾ࡼࡧᶵ⬟ⓗ≉ᚩࡽ 11 ࡢࣇ࣑࣮ࣜศ㢮ࡉࢀ㸪21 ࡢ㑇ఏᏊࡼࡗ ࡚ࢥ࣮ࢻࡉࢀ࡚࠾ࡾ㸪cAMP ࡸ cGMP ࡢ⎔≧ࣜࣥ㓟ࢪ࢚ࢫࢸࣝࢆຍỈศゎࡍࡿ㸦Fig. 9㸧 㹙63㹛ࠋࡑࡢ୰࡛ࡶ PDEIV ࡣᮎᲈ⤌⧊ࡔࡅ࡛ࡣ࡞ࡃ୰ᯡ⚄⤒⣔ࡶከࡃࡢⓎ⌧ࡀㄆࡵࡽ ࢀ㸪≉ᾏ㤿ࡸ⓶㉁㸪ᡥ᱈య㸪⥺᮲య࡞ࡢグ᠈ࡸ⢭⚄ᶵ⬟ࢆྖࡿ㡿ᇦ㧗࠸Ⓨ⌧ࡀㄆ
