ScienceJb乙zzη310]fKanagawa乙Tniversity17:101‑102(2006)
■報告書 ■2005年 度神奈川 大学総合理学研 究所助成 共同研 究
微量DNAか らの塩基配 列決定法 を用 い たホ タテ母 貝個 体群 の推 定
鈴 木 祥 弘1'2井 出 功 一1
EstimationofParentalPopulationsofScallop withSequencingMethodfromTotalDNAinIndividualLarva
YoshihiroSuzukil,2andKoiciIdes 1DepartmentofBiologicalSciencesSchoolofScienceKanagawauniversity
2946Tsuchiya,Hiratsuka,259‑1205,Japan
2Towhomcorrespondenceshouldbeaddressed .E.mail:[email protected]‑u.ac.jp
Abstract:TotalDNAwasextractedfromeachindividuallarvaofscallop(」%伽 ρρθo孟θ刀
yessoensis)collectedatSaromakoLagoonHokkaidoJapaninMayandJune2005and sequenceofNcRIIinmitochondrialDNAofeachindividualwasdeterminedwithasmall scalesequencingmethod.Wecouldclassify146individualsto4groupswithNcRIIsequence.
PopulationofAHG12increasedparticularlyduringrecent5yearscorrespondingtothehigh temperatureinSaromakoLagooninSummer.
KeywordsmitochondrialDNA,NcRII,SaromakoLagoon,scallop
序 論
養 殖 漁 業 に お い て 、母 貝 ・母 魚 の 保 全 は 優 良 な 稚 貝 ・ 稚 魚 を 採 苗 し 、 効 率 よ く養 殖 を行 うた め に 不 可 欠 で あ る 。 し か し 多 く の 魚 介 類 で は 、 海 中 を 広 範 囲 に 浮 遊 す る 微 少 な プ ラ ン ク トン 幼 生 を 種 苗 に 用 い る た め 、 母 貝 ・母 魚 の 特 定 が 困 難 で あ っ た 。 プ ラ ン ク トン 幼 生 を 種 苗 に 用 い る 養 殖 漁 業 の 一 つ に ホ タ テ 貝 (Patinopectenyessoensis)が あ る。 こ れ ま で の 研 究 で プ ラ ン ク トン 幼 生 の 個 体 群 間 の 違 い をDNA塩 基 配 列 を 指 標 に 検 出 す る 方 法 を 開 発 し 、 そ の 結 果 に 基 づ く母 貝 集 団 の 変 化 を 追 跡 して き た 。本 研 究 で は 、 2005年5〜6.月 に 出 現 した プ ラ ン ク トン 幼 生 の 個 体 群 構 成 を 詳 細 に 解 析 し 、 過 去 の 結 果 と比 較 し た 。
材 料 と 方 法
北 海 道 サ ロ マ 湖 で は5〜6月 に プ ラ ン ク ト ン幼 生 が 出 現 す る。 本 年 は5/30、6/2、6/6と6/9の4回 、 サ ロ マ 湖 内 の2海 域 で 採 水 を 行 い プ ラ ン ク ト ン幼 生 を 採 集 し た 。 試 水 中 の プ ラ ン ク トン 幼 生 を 顕 微 鏡 下 で マ イ ク ロ マ ニ ュ ピ レー シ ョ ン に よ り単 離 し 、 岩 谷 ら のChelex100法 に よ り個 体 毎 に 全DNAを 抽 出 し た 。 抽 出 し た 全DNAを 鋳 型 と し て 、 ホ タ テ 個 体 群 の 識 別 に しば し ば 用 い られ る ミ トコ ン ド リ アDNA上 の NcRII領 域 をPCR法 に よ っ て 増 幅 し 、ABI PRISM310GeneticAnalyzerを 用 い て 、塩 基 配 列 を
決 定 し た 。 ソ フ ト ウエ アClastalWver.1.83を 用 い て 塩 基 配 列 を 整 理 し 、 系 統 群 に 分 類 した 。
結 果
湖 口 付 近 の 採 水 海 域 で は6/2、 湖 内 奥 の 採 水 海 域 で は6/6に プ ラ ン ク トン 幼 生 の 密 度 が 最 大 と な っ た 。4 回 の 採 水 で 計1536個 体 を 単 離 し 、 全DNAを 抽 出 した 。 抽 出DNAの 全 て に ホ タ テ 貝 に 特 異 的 に 反 応 す る プ ラ イ マ ー を 用 い てPCRを 行 っ た と こ ろ 、780 試 料 でDNAが 増 幅 し た 。 こ の 時 期 、 外 見 が 非 常 に 類 似 した イ ガ イ の 幼 生 が ホ タ テ 貝 の 幼 生 と 共 存 す る た め 、 単 離 個 体 に 多 く の イ ガ イ 幼 生 が 混 入 した こ と が 、 低 い 収 率 の 原 因 と 考 え られ る 。 こ の う ち 無 作 為
に 選 ん だ200試 料 に つ い て 、塩 基 配 列 を 解 析 し 、146 試 料 に つ い てNcRII領 域 の 塩 基 配 列 を 決 定 し た 。塩 基 配 列 よ り試 水 中 の 個 体 群 に33種 の ハ プ ロ タ イ プ を 確 認 で き た 。これ を長 島 ら の 系 統 群 で 分 類 す る と 、 4系 統 が 確 認 され た 。
討 論
本 研 究 で検 出 され た ハ プ ロ タイ プ を過 去 に北 海 道 全 域 の ホ タ テ ガ イ につ い て 行 わ れ た 解 析 結 果 と比 較 す る と、33ハ プ ロタ イ プ の 内14が 新 規 なハ プ ロタ イ プ で あ っ た。 この 結 果 は 、NcRII領 域 に は極 め て 多
OResearchInstituteforIntegratedScience,KanagawaUniversity
102ScienceJournalofKanagawaUniversityTool.17,2006
くの 変 異 が あ り 、 個 体 群 の 識 別 に 充 分 な 多 様 性 を 持 つ こ と を 示 し て い る 。 ま た 、 よ り詳 細 な 解 析 を 行 う た め に は 、 さ ら に 多 く の 個 体 の 解 析 が 必 要 で あ る こ と が 明 ら か に な っ た 。 こ れ ら の ハ プ ロ タ イ プ を NcRII領 域 の 中 の 指 標 塩 基 を 用 い て 系 統 群 に 分 類 す る と、HGO1、HGO4、HG12とHG21の4系 統 群 が 確 認 で き た 。4系 統 群 の 割 合 は1980、1998お よ び2000年 の 解 析 結 果 と ほ ぼ 一 致 した も の の 、HG12 系 統 群 が 急 激 に 増 加 す る傾 向 が 認 め ら れ た 。 こ の 個 体 群 は ホ タ テ 貝 分 布 の 南 限 付 近 で 特 徴 的 に 優 先 す る
こ とが 知 られ て い る。 近年 の 下記 海 水 温 の 上昇 との 関連 も疑 われ る。 今 後 の継 続 した解 析 が 極 めて 重要 で あ る こ とが改 め て示 され た 。
謝 辞
本 研 究 を行 うに あ た り、 多 大 な ご支 援 をい た だ き ま した 、 サ ロマ湖 養 殖 漁 業 協 同 組 合 ・サ ロマ 湖養 殖 調 査研 究 セ ン タ0・ 研 究 部 長 ・前川 公 彦 氏 に深 く感 謝 い た します 。
