ラ ッ トハ ロ タ ン肝 障 害 モ デ ル に対 す る
亜 鉛 の肝 障 害 発 生 予 防作 用 の 可 能 性
岡 山大 学 医 学 部 麻 酔 ・蘇 生 学 教 室(指 導:平 川 方 久 教 授) 小 山 祐 介 (平成7年3月27日 受 稿) Key words:ハ ロ タ ン,肝 障 害,亜 鉛,チ トク ロ ー ムP450 緒 言 ハ ロ タ ン は, 1956年 に 臨 床 応 用 され て 以 来1), 優 れ た揮 発 性 全 身 麻 酔 薬 と して 世 界 中 で 広 く使 用 され て き た.と こ ろ が,臨 床 使 用 ま も な く, ハ ロ タ ン 麻 酔 後 に 発 生 す る肝 障 害 の 報 告 が み ら れ る よ うに な っ た2)3).こ の 肝 障 害 は ハ ロ タ ン 肝 炎 と名 付 け られ,そ の 発 生 機 序 を解 明 す る研 究 が 続 け られ て い る.肝 障 害 の 発 生 す る 原 因 と し て,ハ ロ タ ン 自 身 に よ る 直 接 的 な 肝毒 性,体 内 でハ ロ タ ン が 代 謝 さ れ る こ とに よ り生 じ る代 謝 産 物 に よ る 肝 毒 性4),ハ ロ タ ン も し くは 代 謝 産 物 に よ る過 敏 性 反 応5)6),ま た はハ ロ タ ン に よ る 肝 血 流 量 の 減 少7)8)などが 考 え られ て い る が,そ の 発 生 機 序 は 未 だ 明 ら か に され て い な い. 動 物 実 験 で は,ラ ッ トに フ ェ ノ バ ル ビ ター ル を 前 投 与 した 後 絶 食 させ,低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を投 与 す る と,広 範 な 肝 壊 死 が み られ る こ とが 明 らか と な り9)10)11),ハロ タ ン肝 障 害 の 実 験 モ デ ル と して 用 い ら れ て い る.ま た,こ の モ デ ル に お い て,ハ ロ タ ンの 代 謝 に 関 与 す る 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 膜 に 存 在 す るヘ ム 酵 素 で あ る チ ト ク ロー ム P450(以 下P450と 略)の 含 量12)13)14)およ び そ の 酵 素 活 性13)14)が低 下 す る こ とが 明 らか に な って お り,ハ ロ タ ン 肝 障 害 にP450が 重 要 な 役 割 を果 た して い る と考 え られ て い る. 亜 鉛 は,生 体 に と っ て 必 須 微 量 元 素 の1つ で あ り,成 長,発 達,創 傷 治癒 等 に 関 与 し15),ま た, 生 体 膜 お よ び 膜 に 存 在 す る 酵 素 の 活 性 に 影 響 を 与 え る16)17)18).さら に,亜 鉛 は ヘ ム 代 謝 調 節 作 用 も有 す る こ とが 知 られ て い る19)20).これ らの 亜 鉛 の 生 理 作 用 を考 慮 して,ラ ッ トの ハ ロ タ ン 肝 障 害 モ デ ル に 対 して,低 酸 素 下 ハ ロ タ ン 吸 入 前 に 亜 鉛 を投 与 した と こ ろ,肝 障 害 が 軽 減 さ れ る こ とが 報 告 さ れ て い る21). 本 研 究 で は,ま ず ラ ッ トハ ロ タ ン肝 障 害 モ デ ル を用 い て,亜 鉛 が,低 酸 素 下 ハ ロ タ ン肝 障 害 を軽 減 す る 作 用 を有 す る こ と を確 か め た.そ し て,亜 鉛 の ハ ロ タ ン 肝 障 害 発 生 予 防 作 用 の 機 序 を明 らか に す る た め に,ハ ロ タ ン 肝 障 害 モ デ ル 作 成 の 各 段 階 に お い て,亜 鉛 が 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム P450量 お よ び そ の 酵 素 活 性 に 及 ぼ す 影 響 を検 討 し た. 材 料 と 方 法 1. 実 験 動 物 とそ の 処 置 実 験 に は, Wistar系 雄 性 ラ ッ ト7週 齢(体 重 180∼220g)を 用 い た.ラ ッ ト(日 本 ク レ ア 社 よ り購 入)は,飼 料(オ リエ ン タ ル 酵 母 社 製 固 形 飼 料)を 自 由 に 与 え,処 置 の 各 段 階 に 応 じ て 以 下 の 如 く群 分 け を 行 い,各 群6匹 ず つ を 使 用 し た. Ⅰ群:水 道 水 を5日 間 飲 ませ た 無 処 置 群 Ⅱ群: 0.1%フ ェ ノバ ル ビ ター ル 入 り水 道 水 を 5日 間 飲 ませ た 群 Ⅲ 群:0.1%フ ェ ノバ ル ビ ター ル 入 り水 道 水 を 6日 間 飲 ま せ,う ち 最 後 の24時 間 を絶 食 した 群 Ⅳ 群: Ⅲ 群 の 処 置 後, 14%酸 素 下 で1%ハ ロ タ ン を2時 間 吸 入 投 与 し た群 Ⅴ群: Ⅳ 群 の 処 置 後, 24時 間 経 過 し た群 Ⅲ 群, Ⅳ 群, Ⅴ群 の 各 群 に つ い て は, 24時 間 205絶 食 の 直 前 に 生 理 食 塩 水1mlを 筋 注 投 与 し た 群 (S群)お よ び,亜 鉛10mg/kgを 生 理 食 塩 水1ml 中 に 溶 解 し て 筋 注 投 与 し た群(Z群)の2群 を そ れ ぞ れ 設 け, ⅢS群, ⅢZ群, ⅣS群, ⅣZ 群, ⅤS群, ⅤZ群 と し た. 図1に 示 す よ うに,各 群 の ラ ッ トは,そ れ ぞ れ の 処 置 終 了 直 後 に ケ タ ミ ン麻 酔(100mg/kg筋 注)下 に 開 腹 し た.腹 部 大 動 脈 よ り採 血 後,氷 冷 ヘ パ リ ン加 生 理 食 塩 水50mlに て 肝 臓 を 潅 流, 摘 出 し犠 死 せ しめ た. Ⅰ群, Ⅱ群, Ⅲ 群, Ⅳ 群 の 各 群 につ い て は,血 清alanine aminotransfer ase(以 下ALTと 略)値,肝 亜 鉛 濃 度 な ら び に 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 亜 鉛 濃 度,肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450 量 お よ び 肝 ミ ク ロ ゾー ムP450の ア ミノ ピ リ ン脱 メ チ ル 化(以 下ADと 略)活 性 な ら び に ア ニ リ ン水 酸 化(以 下AHと 略)活 性 の 測 定 を行 っ た. ま た,ハ ロ タ ン投 与24時 間 後(Ⅴ 群)の ラ ッ ト に つ い て は,血 清ALT値 の 測 定 お よ び,摘 出 肝 の 右 側 二 葉 を組 織 標 本 に 供 し肝 障 害 の程 度 を 光 顕 的 に 評 価 し た. 図1 実 験 方 法 図 中の Ⅰ∼ ⅤZ群 は,以 下 の 処 置群 を示 す. Ⅰ 群:水 道 水 を5日 間 飲 ませ た無 処 置群 Ⅱ 群:フ ェ ノバ ル ビ ター ル 入 り水道 水 を5 日間 飲 ませ た群 ⅢS群:フ ェ ノバ ル ビ ター ル 入 り水道 水 を5 日間 飲 ませ た後,生 理 食塩 水1mlを 筋注 し, 24時 間 絶 食 した群 ⅢZ群:フ ェ ノバ ル ビ ター ル入 り水道 水 を5 日間 飲 ませ た後,亜 鉛 を含 む 生理 食 塩 水1mlを 筋 注 し, 24時 間 絶 食 した 群 ⅣS群: ⅢS群 の処 置 後,低 酸 素 下 に ハ ロタ ン を投 与 した群 ⅣZ群: ⅢZ群 の処 置 後,低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を投 与 した群 ⅤS群: ⅣS群 の処 置 後, 24時 間経 過 した群 ⅤZ群: ⅣZ群 の処 置 後, 24時 間経 過 した群 2. 酸 素 お よ び ハ ロ タ ン の 投 与9)10) Ⅳ 群 お よ び Ⅴ群 の ラ ッ トに 対 す る酸 素 お よ び ハ ロ タ ン の 投 与 は 以 下 の 方 法 で 行 っ た.空 気: 窒 素=2:1の 混 合 で 得 た 酸 素 濃 度14%の ガ ス に,ハ ロ タ ン気 化 器(Cyprane社 製FLUOTEC MARK3)を 使 用 し て1%ハ ロ タ ン を 添 加 し, 6l容(20×30×10cm)の プ ラ ス チ ッ ク ケ ー ス 内 に 流 量9l分 で 吹 送 し た.こ の 混 合 ガ ス を, ケー ス 内 に 入 れ た ラ ッ トに 自発 呼 吸 下 に2時 間 吸 入 投 与 した. 3. 測 定 試 料 の 調 製 1) 血 清 の 調 製 採 血 した 血 液 を60分 間 静 置 し,その 後3000rpm で10分 間,室 温 下 で 遠 心 分 離 し,そ の 上 清 を 採 取 した. 2) 肝 亜 鉛 濃 度 測 定 用 試 料 の 調 製 摘 出 した 肝 臓 の 一 部 を採 取 し, 120℃, 3時 間 乾 燥 させ た 後,乾 燥 重 量 を測 定 した.こ の 乾 燥 し た 試 料 に 濃硝 酸3mlを 加 え,加 熱 湿 式 分 解 を 1時 間 行 い,そ の 後, 0.05N塩 酸 で10mlに 定 容 し,濾 紙(ア ドバ ン テ ッ ク東 洋 製 定 性 濾 紙N0. 2) を用 い て 濾 過 し た.さ ら に こ の 濾 液 を0.05N塩 酸 で10倍 希 釈 し,肝 亜 鉛 濃 度 測 定 用 試 料 と し た. 3)肝 ミ ク ロ ゾー ム 画 分 の 調 製 摘 出 した 肝 に2倍 容 の10mM Tris-HCl緩 衝 液(pH 7.4)を 加 え てPotter-Elverjemのhomo genizerに て 肝 ホ モ ジ ネ ー トを調 製 した.得 られ た肝 ホ モ ジ ネ ー トを12,000×gで40分 間, 4℃ 下 に 遠 心 分 離 し,そ の 上 清 を105,000×gで60分 間, 4℃ 下 に 遠 心 分 離 を行 っ た.得 られ た 沈 渣 は, 1.15% KCl溶 液15mlに て ホ モ ジ ネ ー トを調 製 し,亜 鉛 測 定 に 供 す るべ く1mlを 分 取 した 後, さ らに105,000×gで60分 間, 4℃ 下 に 遠 心 分 離 し,得 ら れ た 沈 渣 をpH 7.4の 保 存 液(1M EDTA, 1Mジ チ オ ス レ イ トー ル, 30%グ リセ ロー ル を 含 む0 .1Mリ ン酸 カ リウ ム 緩 衝 液)に 懸 濁 して-70℃ で 保 存 し, P450の 含 量 お よ び, AD 活 性 な らび にAH活 性 の 測 定 に 供 し た. 得 ら れ た ミ ク ロ ゾ ー ム 画 分1mlに そ れ ぞ れ 濃 硝 酸2mlを 加 え,加 熱 湿 式 分 解 を1時 間 行 い, 0.05N塩 酸 で5mlに 定 容 後 濾 過 し,肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 亜 鉛 濃 度 測 定 用 試 料 と した.ま た,ミ ク ロ ゾー ム 画分 の 蛋 白 濃 度 は, Biuret法22)に よ り測
定 し た. 4. 血 清ALT値 の 測 定 血 清ALT値 の 測 定 は,自 動 臨 床 化 学 分 析 装 置(デ ュ ポ ン社 製ACA-SX型)を 使 用 し,必 要 に 応 じて 血 清 を 蒸 留 水 で希 釈 して 測 定 し た. 5. 亜 鉛 の 定 量 肝 組 織 お よ び 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 画 分 の 亜 鉛 定 量 は,原 子 吸 光 光 度 計(島 津 製 作 所 製AA-640-12) を使 用 して,原 子 吸 光 法 に よ り測 定 した.な お, 亜 鉛 標 準 液 と して は,原 子 吸 光 分 析 用 亜 鉛 標 準 液(和 光 純 薬 製)を0.05N塩 酸 で希 釈 し た も の を使 用 した.亜 鉛 濃 度 は,肝 組 織 につ いて は μg/g 乾 燥 重 量,肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 画 分 に つ い て は μg/100mg蛋 白 で そ れ ぞ れ 表 し た. 6. 肝 ミ ク ロ ゾー ムP450量 お よびP450のAD, AH活 性 の 測 定 1) 肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450量 の 測 定 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 中 のP450量 は, Omura and Satoの 方 法23)に従 い,分 光 光 度 計(日 本 分 光 製 Ubest-55型)を 用 い て 差 ス ペ ク トル を測 定 し, ミ クロ ゾ ー ム 蛋 白1mgあ た りの 比 含 量 と し て 算 出 した. 2) AD活 性 の 測 定 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム のAD活 性 は, Nashの 方 法24) に 従 い,反 応 生 成 物 のformaldehydeを,分 光 光 度 計(日 本 分 光 製Ubest-55型)を 用 い て, 412 nmに お け る 吸 光 度 を測 定 してAD活 性 を 算 出 し,こ の 値 をP450 1nmoleあ た りの 比 活 性 と し て 算 出 した. 3) AH活 性 の 測 定 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム のAH活 性 は, Imaiの 方 法25) に 従 い,反 応 生 成 物 のp-aminophenolを,分 光 光 度 計(日 本 分 光 製Ubest-55型)を 用 い て, 630 nmに お け る吸 光 度 を 測 定 し てAH活 性 を算 出 し,こ の 値 をP450 1nmoleあ た りの 比 活 性 と し て 算 出 した. 7. 組 織 標 本 作 製 お よ び 形 態 変 化 の 解 析 VS群 な ら び にVZ群 で の 肝 組 織 標 本 は,肝 の 右 側 二 葉 を 結 紮 切 離 し, 10%中 性 緩 衝 ホ ル マ リン 浸 漬 固 定 を行 っ た.固 定 され た 肝 組 織 標 本 は,十 分 な水 洗 の 後,ア ル コー ル 系 列 に よ る 脱 水,パ ラ フ ィ ン 包 埋 し, 5μmの 厚 さ に 薄 切 した. そ の 後 常 法 に 従 い ヘ マ トキ シ リ ン ・エ オ ジ ン 染 色 を行 い,光 学 顕 微 鏡 に よ り検 鏡 した. 組 織 学 的 な 形 態 の 変 化 は, Jeeら10)の ス コア リ ン グに 従 い 評 価 し た.す な わ ち, 200倍 の 拡 大 率 下 の 視 野 を 各 群6視 野 ず つ 無 作 為 に 選 び,各 視 野 に お い て, 0:正 常 1: 25%未 満 の 面 積 領 域 に 炎 症 細 胞 浸 潤 を 認 め る. 2: 25%以 上, 50%未 満 の 面 積 領 域 に 炎 症 細 胞 浸 潤 を 認 め,風 船 様 腫 大,空 胞 変 性 を 伴 う. 3: 50%以 上 の 面 積 領 域 に 炎 症 細 胞 浸 潤 を 認 め る. 4:小 葉 中 心 壊 死 を点 在 性 に 伴 う広 範 な 炎 症 細 胞 浸 潤 を認 め る. 5: 25%以 上 の 面 積 領 域 に 小 葉 中 心 壊 死 を認 め る. の い ず れ か の 点 数 を 付 け た. 8. 統 計 学 的 処 理 肝 細 胞 逸 脱 酵 素 で あ る 血 清ALT値 は,常 用 対 数 を と り統 計 処 理 を行 い,代 表 値 と し て は 中 央 値 を用 い た. 肝 組 織 の ス コア に つ い て は,各 群 の 平 均 値 で 表 し,そ の 他 の 全 て の 測 定 値 は,平 均 値 ± 標 準 偏 差 で 表 し た. 統 計 処 理 は,肝 組 織 の ス コ ア に つ い て は, Wilcoxonのt検 定 を用 い た.そ の 他 の 値 に つ い て は,分 散 分 析 を 行 っ た 後Student-Newman -Keuls法 あ る い はKriskal-Wallisの 検 定 を 用 い て 行 い,危 険 率5%以 下(P<0.05)を 有 意 差 あ り と し た. 結 果 1. 肝 障 害 の 評 価 1) 血 清ALT値 の 変 化 図2に 示 す よ うに,血 清ALT値 の 中 央 値 は, Ⅰ群, Ⅱ群, ⅢZ群, ⅢS群, ⅣZ群, ⅣS群, ⅤZ群, ⅤS群 で そ れ ぞ れ, 8.5, 10, 83, 10, 148, 401, 175, 1005 (IU/l)で あ っ た. Ⅰ群 に 対 す る 比 較 で は, Ⅱ群 な らび に ⅢS群 と の 間 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た が, ⅢZ群, ⅣZ群, ⅣS群, ⅤZ群 な ら び に ⅤS群 は,有 意 に 高 値 を示 した.
群 間 の 比 較 で は, ⅢZ群 は Ⅱ 群 に 比 して,有 意 に 高 値 を示 し た が, Ⅱ群 と ⅢS群 の 間 に 有 意 差 は 認 め られ な か っ た. ⅣZ群 は ⅢZ群 に 比 し, ⅣS群 は ⅢS群 に 比 して,そ れ ぞ れ 有 意 に 高 値 を示 し た.ま た, ⅣZ群 と ⅤZ群 の 間 に 有 意 差 は 認 め られ な か っ た が, ⅤS群 は ⅣS群 に 比 し て,有 意 に 高 値 を 示 し た. さ ら に,亜 鉛 投 与 群 と非 投 与 群 の 比 較 で は, ⅢZ群 は ⅢS群 に 比 して,有 意 に 高 値 を示 した. しか し, ⅣZ群 は ⅣS群 に 比 し, ⅤZ群 は ⅤS 群 に 比 し て,そ れ ぞ れ 有 意 に低 値 を 示 し た. 2) ハ ロ タ ン投 与 終 了24時 間 後 の 肝 組 織 像 お よ び ス コア ⅤS群 で は,中 心 静 脈 周 辺 に 広 範 な 壊 死 が 認 め られ た(図3-A).一 方, ⅤZ群 で は,門 脈 周 囲 領 域 に 肝 細 胞 の 風 船 様 腫 大 が 認 め ら れ,炎 症 細 胞 浸 潤 が 中 心 静 脈 周 辺 に 散 在 す る が, ⅤS 群 で 観 察 さ れ た 広 範 な壊 死 領 域 は 認 め ら れ な か っ た(図3-B). a: Ⅰ群 に対 して 有 意 差 あ り b:群 間 で有 意 差 あ り (p<0.05) 図2 血 清ALT値 の 変 化 図 中 の Ⅰ∼ ⅤS群 は,以 下 の 処 置 群 を示 す. Ⅰ 群:水 道 水 を5日 間 飲 ま せ た 無 処 置 群 Ⅱ 群:フ ェ ノ バ ル ビ タ ー ル 入 り水 道 水 を5日 間 飲 ま せ た 群 ⅢZ群:フ ェ ノバ ル ビ タ ー ル 入 り水 道 水 を5日 間 飲 ま せ た 後,亜 鉛 を含 む 生 理 食 塩 水1mlを 筋 注 し, 24時 間 絶 食 し た 群 ⅢS群:フ ェ ノバ ル ビ タ ー ル 入 り水 道 水 を5日 間 飲 ませ た 後,生 理 食 塩 水1mlを 筋 注 し, 24時 間 絶 食 し た 群 ⅣZ群: ⅢZ群 の 処 置 後,低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を 投 与 し た 群 ⅣS群: ⅢS群 の 処 置 後,低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を 投 与 し た 群 ⅤZ群: ⅣZ群 の 処 置 後, 24時 間 経 過 し た 群 ⅤS群: ⅣS群 の 処 置 後, 24時 間 経 過 し た 群 ス コ ア に よ る 評 価 で は, ⅤS群 お よ び ⅤZ群
図3 ハ ロ タ ン 投 与 終 了24時 間 後 の 肝 組 織 像(×50) A:亜 鉛 非 投 与 群(ⅤS群)の 代 表 的 な 像 を 示 す.中 心 静 脈 周 辺 に 広 範 な 壊 死 が 認 め ら れ, Jeeら の ス コ ア リ ン グ に よ る と, 5に 相 当 す る. B:亜 鉛 投 与 群(ⅤZ群)の 代 表 的 な像 を 示 す.門 脈 周 囲 領 域 に 肝 細 胞 の 風 船 様 腫 大 が 認 め ら れ,炎 症 細 胞 浸 潤 が 中 心 静 脈 周 辺 に 散 在 す る が, ⅤS群 で 観 察 さ れ た 広 範 な 壊 死 領 域 は 認 め られ な い. Jeeら の ス コ ア リ ン グ に よ る と, 3に 相 当 す る. 各6例 の ス コ ア の 平 均 値 は, ⅤS群 が4.8, ⅤZ群 が2.5で あ り, ⅤZ群 が ⅤS群 に 比 し て 有 意 に(p<0.05) 低 値 を 示 し た. C:中 心 静 脈P:門 脈 枝
の 平 均 値 は,そ れ ぞ れ4.8お よ び2.5で あ り, Ⅴ Z群 は ⅤS群 に 比 し て,有 意 に 低 値 を 示 し た. 2. 肝 亜 鉛 濃 度 お よ び 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 亜 鉛 濃 度 の 変 化 1) 肝 亜 鉛 濃 度 の 変 化 図4-Aに 示 す よ う に,肝 亜 鉛 濃 度 は, Ⅰ群, Ⅱ 群, ⅢZ群, ⅢS群, ⅣZ群, ⅣS群 で そ れ ぞ れ, 107±29.0, 119±19.2, 352±63.5, 117± 29.6, 322±46.0, 159±25.2 (μg/g乾 燥 重 量) で あ っ た. Ⅰ群 に 対 す る 比 較 で は, Ⅱ 群, ⅢS群 な ら び に ⅣS群 と の 間 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た. し か し, ⅢZ群 な ら び に ⅣZ群 は,有 意 に 高 値 を 示 し た. 群 間 の 比 較 で は, ⅢZ群 は Ⅱ 群 に 比 し て,有 意 に 高 値 を 示 し た が, Ⅱ 群 と ⅢS群 の 間 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た.ま た, ⅢZ群 と ⅣZ群, お よ び ⅢS群 と ⅣS群 の 間 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た. さ ら に,亜 鉛 投 与 群 と 非 投 与 群 の 比 較 で は, ⅢZ群 は ⅢS群 に 比 し, ⅣZ群 は ⅣS群 に 比 し て,そ れ ぞ れ 有 意 に 高 値 を 示 し た. 2) 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 亜 鉛 濃 度 の 変 化 図4-Bに 示 す よ う に,肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 亜 鉛 濃 度 は, Ⅰ群, Ⅱ 群, ⅢZ群, ⅢS群, ⅣZ群, ⅣS群 で そ れ ぞ れ, 7.58±0.81, 7.81±0.75, 15.9±2.21, 7.52±0.91, 14.3±1.31, 7.09± 0.63 (μg/100mg蛋 白)で あ っ た. Ⅰ群 に 対 す る 比 較 で は, Ⅱ 群, ⅢS群 な ら び に ⅣS群 と の 間 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た. し か し, ⅢZ群 な ら び に ⅣZ群 は,有 意 に 高 値 を 示 し た. 群 間 の 比 較 で は, ⅢZ群 は Ⅱ 群 に 比 し て,有 意 に 高 値 を 示 し た が, Ⅱ 群 と ⅢS群 の 間 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た.ま た, ⅢZ群 と ⅣZ群, お よ び ⅢS群 と ⅣS群 の 間 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た. さ ら に,亜 鉛 投 与 群 と 非 投 与 群 の 比 較 で は, ⅢZ群 は ⅢS群 に 比 し, ⅣZ群 は ⅣS群 に 比 し て,有 意 に 高 値 を 示 し た. 3. 肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450量 お よ びP450のAD, AH活 性 の 変 化 1) 肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450量 の 変 化 A:肝 亜 鉛 濃 度 の 変化 B:肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 亜 鉛 濃 度 の 変 化 図4 肝 亜 鉛 濃 度 お よ び 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 亜 鉛 濃 度 の 変 化 図 中 の Ⅰ∼ ⅣS群 は,以 下 の 処 置 群 を示 す. Ⅰ 群:水 道 水 を5日 間 飲 ませ た 無 処 置 群 Ⅱ 群:フ ェ ノ バ ル ビ タ ー ル 入 り水 道 水 を5 日間 飲 ませ た 群 ⅢZ群:フ ェ ノ バ ル ビ タ ー ル 入 り水 道 水 を5 日間 飲 ま せ た 後,亜 鉛 を 含 む 生 理 食 塩 水1mlを 筋 注 し, 24時 間 絶 食 し た 群 ⅢS群:フ ェ ノ バ ル ビ タ ー ル 入 り水 道 水 を5 日間 飲 ま せ た 後,生 理 食 塩 水1mlを 筋 注 し, 24時 間 絶 食 し た群 ⅣZ群: ⅢZ群 の 処 置 後,低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を 投 与 し た 群 ⅣS群: ⅢS群 の 処 置 後,低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を 投 与 し た 群 図5-Aに 示 す よ う に,肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450 量 は, Ⅰ群, Ⅱ 群, ⅢZ群, ⅢS群, ⅣZ群,
ⅣS群 で そ れ ぞ れ, 1.12±0.08, 1.94±0.23, 2.31±0.10, 2.52±0.13, 0.96±0.05, 1.12± 0.03 (nmole/mg蛋 白)で あ っ た. Ⅰ群 に 対 す る 比 較 で は, Ⅱ 群, ⅢZ群 な ら び に ⅢS群 は 有 意 に 高 値 を 示 し た.し か し, ⅣZ 群 は Ⅰ群 に 比 し て 有 意 に 低 値 を 示 し, Ⅰ群 と Ⅳ S群 の 間 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た. 群 間 の 比 較 で は, ⅢZ群 な ら び に ⅢS群 は Ⅱ 群 に 比 し て,そ れ ぞ れ 有 意 に 高 値 を 示 し た.ま た, ⅣZ群 は ⅢZ群 に 比 し, ⅣS群 は ⅢS群 に 比 して,そ れ ぞ れ 有 意 に 低 値 を 示 した. さ らに,亜 鉛 投 与 群 と非 投 与 群 の 比 較 で は, ⅢZ群 は ⅢS群 に 比 し, ⅣZ群 は ⅣS群 に 比 し て,有 意 に 低 値 を示 し た. 2) AD活 性 の 変 化 A:肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450量 の 変 化 B: AD活 性 の 変化 C: AH活 性 の 変化 図5 肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450量 お よ びP450のAD, AH活 性 の 変 化 図 中 の Ⅰ∼ ⅣS群 は,以 下 の 処 置 群 を示 す. Ⅰ 群:水 道 水 を5日 間 飲 ませ た 無 処 置 群 Ⅱ 群:フ ェ ノバ ル ビ タ ー ル 入 り水 道 水 を5日 間 飲 ませ た 群 ⅢZ群:フ ェ ノバ ル ビ タ ー ル 入 り水 道 水 を5日 間 飲 ませ た 後,亜 鉛 を 含 む 生 理 食 塩 水1mlを 筋 注 し, 24時 間 絶 食 し た 群 ⅢS群:フ ェ ノバ ル ビ タ ー ル 入 り水 道 水 を5日 間 飲 ませ た 後,生 理 食 塩 水1mlを 筋 注 し, 24時 間 絶 食 し た 群 ⅣZ群: ⅢZ群 の 処 置 後,低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を 投 与 し た 群 ⅣS群: ⅢS群 の 処 置 後,低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を 投 与 し た 群 図5-Bに 示 す よ う に, AD活 性 は, Ⅰ群, Ⅱ 群, ⅢZ群, ⅢS群, ⅣZ群, ⅣS群 で そ れ ぞ れ, 78.2±10.5, 130±6.2, 91.2±13.2, 80.3± 7.5, 73.1±4.4, 41.9±4.9 (nmole HCHO/20 分/P 450nmole)で あ っ た.
Ⅰ群 に 対 す る比 較 で は, Ⅱ群 な ら び に ⅢZ群 は 有 意 に 高 値 を示 し た.ま た, ⅣS群 は Ⅰ群 に 比 し て 有 意 に 低 値 を示 し た.し か し, Ⅰ群 とⅢ S群 な ら び に ⅣZ群 の 間 に 有 意 差 は 認 め られ な か っ た. 群 間 の 比 較 で は, ⅢZ群 な ら び に ⅢS群 は Ⅱ 群 に 比 し て,そ れ ぞ れ 有 意 に 低 値 を 示 した.ま た, ⅣZ群 は ⅢZ群 に 比 し, ⅣS群 は ⅢS群 に 比 し て,そ れ ぞ れ 有 意 に 低 値 を示 した. さ らに,亜 鉛 投 与 群 と非 投 与 群 の 比 較 で は, ⅢZ群 と ⅢS群 の 間 に 有 意 差 は 認 め られ な か っ た.し か し, ⅣZ群 は ⅣS群 に 比 して,有 意 に 高 値 を 示 した. 3) AH活 性 の 変 化 図5-Cに 示 す よ う に, AH活 性 は, Ⅰ群, Ⅱ 群, ⅢZ群, ⅢS群, ⅣZ群, ⅣS群 で そ れ ぞ れ, 19.6±2.7, 17.9±1.2, 15.6±2.9, 14.9± 2.3, 16.0±2.5, 15.0±2.2 (nmole P-aminoph./20分/P450nmole)で あ っ た. Ⅰ群 に 対 す る比 較 で は, Ⅱ 群 との 間 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た が, ⅢZ群, ⅢS群, ⅣZ 群 な ら び に ⅣS群 は 有 意 に 低 値 を 示 し た. 群 間 の 比 較 で は, Ⅱ群 と ⅢZ群 な らび に ⅢS 群 の 間 に,有 意 差 は 認 め ら れ なか っ た.ま た, ⅢZ群 とⅣZ群,お よ び ⅢS群 とⅣS群 の 間 に 有 意 差 は 認 め られ な か っ た. さ らに,亜 鉛 投 与 群 と非 投 与 群 の 比 較 で は, ⅢZ群 と ⅢS群,お よ びⅣZ群 とⅣS群 の 間 に, 有 意 差 は 認 め られ な か っ た. 考 察 フ ェ ノ バ ル ビ ター ル 投 与 に よ る 酵 素 誘 導 を行 っ た ラ ッ トに 絶 食 後,低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を 吸 入 さ せ る と 肝 障 害 を お こ す こ とが 知 ら れ て い る9)10)11).本研 究 に お い て も,フ ェ ノ バ ル ビ ター ル を5日 間 投 与 し絶 食 後, McLainら9}お よびJee ら10)の方 法 に準 じて酸 素 濃 度14%下 に1%ハ ロ タ ン を吸 入 投 与 した 結 果,ハ ロ タ ン 投 与 終 了24時 間 後(ⅤS群)に 著 し い 血 清ALT値 の 上 昇 が 認 め ら れ(図2),ま た,肝 組 織 像 に お い て も広 範 な 小 葉 中心 性 の 壊 死 が 観 察 され,肝 障 害 の 生 じ る こ とが 確 認 さ れ た(図3-A). こ の ラ ッ トハ ロ タ ン 肝 障 害 モ デ ル で,亜 鉛 前 投 与 に よ り,ハ ロ タ ン 投 与 直 後(ⅣZ群)な ら び に 投 与24時 間 後(ⅤZ群)の 血 清ALT値 は, 亜 鉛 を 投 与 し て い な い群(ⅣS群 な ら び に ⅤS 群)に 比 し て 有 意 な 低 値 を 示 し た(図2).ま た, ハ ロ タ ン投 与24時 間 後 の 肝 組 織 像 で も,亜 鉛 投 与 群(図3-B)で は 肝 細 胞 の 風 船 様 腫 大 お よ び 炎 症 細 胞 浸 潤 が 認 め ら れ た が,亜 鉛 非 投 与 群 (図3-A)で 観 察 さ れ た 広 範 な 小 葉 中 心 性 壊 死 は 認 め られ な か っ た.さ らに, Jeeら10)の ハ ロ タ ン肝 障 害 ス コ ア に した が っ て 行 っ た 組 織 の 評 価 で も,亜 鉛 投 与 群(平 均 値2.5)は,非 投 与 群(平 均 値4.8)に 比 べ 有 意 に 肝 障 害 の 程 度 が 軽 か っ た. 以 上 の 結 果 は,亜 鉛 前 投 与 が ラ ッ トの 低 酸 素 下 ハ ロ タ ン 肝 障 害 モ デ ル で の 肝 障 害 発 生 予 防 作 用 を有 す る と い う,日 高21)の報 告 に 一 致 し て い る. な お, ⅢZ群 で血 清ALT値 の 軽 度 の 上 昇 が み られ た(図2)が, ⅢS群 お よ び,予 備 実 験 で 水 道 水 を5日 間 飲 ませ た 後 亜 鉛(10mg/kg)を 投 与 し24時 間 絶 食 さ せ た ラ ッ トで は 血 清ALT値 の 有 意 な 上 昇 は 認 め られ な か っ た.し た が っ て, ⅢZ群 に お け る血 清ALT値 の 上 昇 に は フ ェ ノ バ ル ビ タ ー ル に よ る酵 素 誘 導 と亜 鉛 投 与 の 両 処 置 が 関 わ っ た と考 え られ る. ラ ッ トに 低 酸 素 下 で ハ ロ タ ン を 投 与 す る と, 肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450量 の 著 明 な 減 少 が み ら れ る12)13)14).本研 究 で もハ ロ タ ン 投 与(ⅣS群)に よ り肝 ミク ロ ゾー ムP450量 の 減 少 が 観 察 さ れ た (図5-A).ま た,フ ェ ノバ ル ビ タ ー ル で 前 処 置 し た ラ ッ トの 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム に 極 低 酸 素 下 でハ ロ タ ン を 作 用 させ る と,ミ ク ロ ゾ ー ム のP450含 量 は減 少 す る こ とが 報 告 され て い る27).一 方,亜 鉛 を 投 与 し た 場 合(ⅢZ群)の 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム P450量 は,非 投 与 群(ⅢS群)に 比 べ て 軽 度 の 低 下 を示 し た(図5-A).ま た,フ ェ ノ バ ル ビ ター ル 投 与 後 の 肝 亜 鉛 濃 度 お よ び 肝 ミ クロ ゾ ー ム 亜 鉛 濃 度 は,亜 鉛 投 与 群(ⅢZ群)で 非 投 与 群(ⅢS群)に 比 べ て 有 意 な 高 値 を 示 し た (図4-Aお よ びB). 肝 に お け るヘ ム 代 謝 は, δ-Aminolevulinate synthase(以 下ALASと 略)と ヘ ム オ キ シ ゲ ナ ー ゼ(以 下HOと 略)に よ り調 節 さ れ て い る19). す な わ ち,ヘ ム はALASに よ りサ ク シニ ル-CoA お よ び グ リシ ンか ら合 成 が 開 始 さ れ, HOに よ
り分 解 され る26).ま た, in vivoに お い て,亜 鉛 は,肝 のALAS活 性 を抑 制 す る と と も にHO を肝 内 に 誘 導 し,そ の 結 果,ヘ ム を活 性 中心 と す るP450量 は 減 少 す る19).本研 究 で のP450量 の 減 少 は,亜 鉛 が ヘ ム 代 謝 を 調 節 す る酵 素 類 に 影 響 を 及 ぼ した ため で あ るか もしれ な い.日 高21)は, フ ェ ノバ ル ビ ター ル投 与 に よ っ て増 加 したP450 量 が 亜 鉛 の 投 与 量 依 存 性 に 減 少 し た こ と か ら, 亜 鉛 に よ る 肝 障 害 発 生 予 防 作 用 の 機 序 と して, P450量 の 減 少 に よ る 低 酸 素 下 に お け るハ ロ タ ン とP450と の 相 互 反 応 の 低 下 を示 唆 し た.ま た, ⅢZ群 に お け る 血 清ALT値 の 軽 度 上 昇 の 機 序 と し て,亜 鉛 に よ るヘ ム 分 解 の 亢 進 に よ っ て 生 じた鉄,一 酸 化 炭 素,ビ リル ビ ン な ど の ヘ ム 代 謝 産 物 が 細 胞 障 害 的 に 作 用 し た 可 能 性 が 考 え ら れ る. 本 研 究 に お い て, P450のAD活 性 は フ ェ ノ バ ル ビ ター ル 投 与 に よ っ て 有 意 に 増 加 し(Ⅱ 群), また,亜 鉛 非 投 与 群 で の ハ ロ タ ン 投 与 後 のAD 活 性(ⅣS群)は,ハ ロ タ ン 投 与 前(ⅢS群) に 比 べ て 著 し く減 少 し た(図5-B).一 方, AH 活 性 に つ い て は,フ ェ ノバ ル ビ ター ル 投 与 に よ って 変 化 が み ら れ ず,ハ ロ タ ン投 与 に よ っ て も 投 与 前 と比 較 して 変 化 が み られ な か っ た. P450 は 単 一 の 酵 素 で は な く,酵 素 誘 導 に 用 い る薬 物 の 種 類 に よ っ て異 な っ た型 のP450か 誘 導 され る. Knightsら13)は,フ ェ ノバ ル ビ ター ル で 酵 素 誘 導 を行 っ た ラ ッ トに 低 酸 素 下 で ハ ロ タ ン を投 与 す る と,肝 ミ ク ロ ゾー ムP450のAD活 性 が 減 少 す る こ と を認 め て い る. Bakerら28)は, in vitro に お い て フ ェ ノバ ル ビ ター ル で 誘 導 さ れ た ラ ッ ト肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450が,低 酸 素 下 で ハ ロ タ ン と反 応 し複 合 体 を 形 成 す る こ と を 示 した.さ ら に平 山 は,フ ェ ノバ ル ビ ター ル 投 与 に よ っ て 肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450のAD活 性 が 増 加 し,低 酸 素 下 ハ ロ タ ン 投 与 に よ っ て そ の 活 性 が 著 明 に 減 少 す る こ と を認 め14),こ の と き, P450の 分 子 種 の う ち3A229)が 特 徴 的 に減 少 して い るこ とを報 告 して い る30).こ の 分 子 種 は,フ ェ ノバ ル ビ ター ル に よ っ て 誘 導 を う け,テ ス ト ス テ ロ ン の 6β-水 酸 化 を行 い, AD活 性 を 有 す る30).ハ ロ タ ン の 代 謝 に 関 わ るP450の3A2以 外 の分 子 種 につ い て は 未 だ 明 らか で な い.そ の 他 の 揮 発 性 麻 酔 薬 の代 謝 に 関 わ るP450の 分 子 種 につ い ては, エ ン フ ル ラ ンがP450 2E1に よ っ て 主 に 代 謝 さ れ る との 報 告31)が あ る. 以 上 よ り,ラ ッ トに 低 酸 素 下 で ハ ロ タ ン を 投 与 し た と き の 肝 障 害 は,ハ ロ タ ン が 低 酸 素 下 で ミク ロ ゾー ム の 膜 成 分 で あ るP450に 結 合 し,細 胞 膜 の 破 壊 を起 こ した 結 果 で あ る と考 え られ32), こ の と きAD活 性 を有 す るP450の 分 子 種 が こ の 肝 障 害 に 深 く関 与 し て い る と考 え られ る.な お,酵 素 誘 導 後 の 絶 食 に よ っ て(ⅢS群),ミ ク ロ ゾー ム 蛋 白 あ た りのP450量 は 増 加 した が, AD 活 性 は そ の 後 の 絶 食 に よ っ て 減 少 した.こ の 場 合,絶 食 に よ っ て 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 総 蛋 白 量 は 有 意 に 減 少 す る14)こ とか ら, P450の 絶 対 量 は 増 加 し て い な い と考 え られ る.さ ら に, P450あ た り のAD活 性 は 絶 食 に よ っ て 減 少 し た こ とか ら, AD活 性 を持 っ たP450の 絶 対 量 は絶 食 に よ っ て 減 少 した.こ の 事 実 と,絶 食 に よ る 肝 障 害 発 生 頻 度 の 増 加33)との 関 連 に つ い て は 明 らか で な い. 図5-Bに 示 す よ うに,亜 鉛 投 与 群 に お い て, ハ ロ タ ン投 与 後(ⅣZ群)のAD活 性 は,ハ ロ タ ン投 与 前(ⅢZ群)に 比 べ て 有 意 に 減 少 した. しか し,ハ ロ タ ン 投 与 後 のAD活 性 を 亜 鉛 投 与 群(ⅣZ群)と 非 投 与 群(ⅣS群)間 で 比 較 す る と,亜 鉛 投 与 群 のAD活 性 は 非 投 与 群 に 比 べ て そ の 減 少 が 有 意 に 抑 制 さ れ た.す な わ ち,亜 鉛 非 投 与 群(ⅣS群)で は ハ ロ タ ン投 与 に よ り 約50%と 大 幅 なAD活 性 の 減 少 が み ら れ た の に 対 し,亜 鉛 投 与 群(ⅣZ群)で はAD活 性 の 減 少 は 約20%と 軽 度 に と ど ま っ た.一 方, AH活 性 に つ い て は,亜 鉛 投 与 に よ る影 響 は 認 め られ なか っ た(図5-C).以 上 の 結 果 よ り,亜 鉛 は, フ ェ ノ バ ル ビ ター ル に よ っ て 増 加 したAD活 性 を有 す るP450に 対 して,そ の 活 性 を 保 護 し た こ と が 考 え ら れ た.こ の 保 護 作 用 の 機 序 と し て は, 以 下 の 可 能 性 が 考 え られ る. す な わ ち,亜 鉛 は,肝 ミ ク ロ ゾ ー ム に 対 し て 膜 安 定 化 作 用 を 発 揮 し,そ の 結 果,ハ ロ タ ン と 特 異 的 に 反 応 す るAD活 性 を有 す るP450の 分 子 種 を 保 護 した 可 能 性 が 考 え ら れ る. Chvapilら は,ラ ッ ト肝 の ラ イ ソ ゾ ー ム 膜 か ら遊 離 す る β-グ ル ク ロ ニ ダ ー ゼ 活 性 を膜 の 安 定 化 の 指 標 と し,亜 鉛 が 濃 度 依 存 的 に 遊 離 酵 素 活 性 を 抑 制 す
る こ と を 示 し17),さ ら に,ラ ッ トに お け る 四 塩 化 炭 素 に よ る 肝 障 害 が,亜 鉛 を あ らか じめ 投 与 す る こ とに よ り抑 制 さ れ,こ れ が ラ イ ソ ゾー ム 膜 か ら遊 離 す るβ-グ ル ク ロ ニ ダー ゼ 活 性 の 減 少 と 関 係 す る こ と を証 明 し て い る18).これ らの 事 実 よ り,彼 ら は,亜 鉛 が ミ ク ロ ゾ ー ム,ミ ト コ ン ド リア な ら び に ラ イ ソ ゾー ム 等 の 生 体 膜 に 対 す る 安 定 化 作 用 を有 す る こ と を示 唆 して い る.し た が っ て 亜 鉛 は,肝 ミ クロ ゾー ム 膜 に お け る, P 450の 分 子 種 全 体 を安 定 化 させ た結 果,ハ ロ タ ン と特 異 的 に 反 応 す るAD活 性 を有 す るP450の 分 子 種 を保 護 し た と思 わ れ る. Yamaguchiら34)は,ラ ッ トの 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 膜 の β-グ ル ク ロ ニ ダ ー ゼ 活 性 が,ミ ク ロ ゾ ー ム か ら亜 鉛 を取 り除 く こ とに よ り減 少 す る こ とか ら,亜 鉛 が, β-グ ル ク ロニ ダ ー ゼ 活 性 に 対 す る 保 存 作 用 を有 す る こ と を示 す と と も に,同 じ肝 ミ ク ロ ゾ ー ム の 膜 酵 素 で あ るUDP-グ ル ク ロ ニ ル トラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ 活 性 に 対 して は 影 響 を与 え な い こ と を 認 め た.し た が っ て,亜 鉛 は,膜 酵 素 活 性 保 存 作 用 を有 す る が,そ の 保 存 作 用 に は 酵 素 に よ る 差 異 が あ り, P450に 関 して もAD 活 性 あ る い はAH活 性 を もつ 分 子 種 で は,程 度 の 異 な る保 護 作 用 を有 す る 可 能 性 が あ る.亜 鉛 は, P450と ハ ロ タ ン との 相 互 反 応 を選 択 的 に 阻 害 す る こ と に よ っ て, AD活 性 に 対 す る保 護 作 用 を 発 揮 し た の か も しれ な い. 以 上 よ り,亜 鉛 は 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 膜 の 安 定 化 作 用 あ る い は 膜 酵 素 活 性 の 保 存 作 用 を介 し て, 低 酸 素 下 で の ハ ロ タ ン 投 与 に お い て 肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450のAD活 性 を保 護 す る役 割 を 果 た し た の か も しれ な い.さ ら に,亜 鉛 は,低 酸 素 下 に お け るハ ロ タ ン とP450と の 相 互 反 応 を低 下 さ せ る こ とに よ り, P450のAD活 性 を保 護 し, そ の 結 果 肝 障 害 発 生 予 防 作 用 を 示 した 可 能 性 が 考 え られ た. 結 論 ラ ッ トに フ ェ ノ バ ル ビ タ ー ル 投 与 後 に 絶 食 を 行 い,続 い て 低 酸 素 下 に ハ ロ タ ン を 投 与 し肝 障 害 を発 生 させ た.こ の ラ ッ ト低 酸 素 ハ ロ タ ン肝 障 害 モ デ ル に 対 して,ハ ロ タ ン 投 与24時 間 前 に 亜 鉛 の 投 与 を行 い,亜 鉛 が ハ ロ タ ン 投 与 後 の 肝 障 害,肝 亜 鉛 濃 度 お よび 肝 ミ ク ロ ゾ ー ム 亜 鉛 濃 度,肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450量 お よ び そ の 酵 素 活 性 に 及 ぼ す 影 響 に つ い て 検 討 し,以 下 の 結 果 を 得 た. 1. 血 清ALT値 は,亜 鉛 前 投 与 に よ りハ ロ タ ン投 与 直 後 お よ び 投 与 終 了24時 間 後 に お い て そ の 上 昇 が 有 意 に 抑 制 さ れ た.ま た,ハ ロ タ ン 投 与 終 了24時 間 後 の 肝 組 織 像 に お い て,亜 鉛 前 投 与 に よ り肝 障 害 の 軽 減 が 認 め ら れ た. 2. 肝 亜 鉛 濃 度 お よ び 肝 ミ ク ロ ゾー ム 亜 鉛 濃 度 は,亜 鉛 前 投 与 に よ り有 意 に 増 加 した. 3. フ ェ ノ バ ル ビ タ ー ル に よ っ て 誘 導 され た 肝 ミ ク ロ ゾ ー ムP450量 は,亜 鉛 前 投 与 に よ り有 意 に 減 少 し た.ま た,肝 ミク ロ ゾー ムP450のAD 活 性 は,低 酸 素 下 ハ ロ タ ン 投 与 に よ り有 意 に 減 少 した が,亜 鉛 前 投 与 に よ り有 意 に 抑 制 さ れ た. 4. 亜 鉛 前 投 与 に よ り肝 障 害 発 生 予 防 作 用 が 認 め られ,そ の 作 用 機 序 と し て,亜 鉛 は,ハ ロ タ ン投 与 直 前 の 肝 ミク ロ ゾー ムP450量 の 減 少 の み な らず,低 酸 素 下 ハ ロ タ ン投 与 に お け るハ ロ タ ン とP450の 相 互 反 応 を低 下 させ, P450のAD 活 性 を保 護 した こ と が 考 え ら れ た.以 上 よ り, 亜 鉛 の 前 投 与 は ハ ロ タ ン 肝 障 害 の 発 生 を予 防 す る可 能 性 が あ る こ と が 示 唆 さ れ た. 稿 を終 え るに臨 み,終 始 懇切 な る御指 導,御 校 閲 を賜 りま した,岡 山大 学 医 学部 麻 酔 ・蘇 生 学 教室 平 川 方久 教 授 に 深謝 致 します.ま た,本 研 究 に お い て 御指 導,御 助 言 を戴 き ま した同教 室 山 田輝 夫 先 生(現 第一 解 剖 学 教 室),太 田 吉 夫先 生,高 橋 徹 先 生 に感 謝 致 す とと もに,教 室 の 皆 様 に 御礼 申 し上 げ ます. 本稿 の要 旨は,第42回 日本 麻 酔学 会 総 会(1995年, 浜 松)に お い て発 表 した.
文
献
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