• 検索結果がありません。

Asahi YAMADA, Noriaki MURAKAMI & Hidetoshi KATO* Arbuscular mycorrhizal symbiosis of fern gametophytes in the Ogasawara Islands ����0����0���� * �������������� ���������������� AM

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2021

シェア "Asahi YAMADA, Noriaki MURAKAMI & Hidetoshi KATO* Arbuscular mycorrhizal symbiosis of fern gametophytes in the Ogasawara Islands ����0����0���� * �������������� ���������������� AM"

Copied!
32
0
0

読み込み中.... (全文を見る)

全文

(1)

����������������

AM��������������

��� �0����0����*

Arbuscular mycorrhizal symbiosis of fern gametophytes in the Ogasawara Islands

Asahi YAMADA, Noriaki MURAKAMI & Hidetoshi KATO*

������������������192-0397 ����������1-1 Makino Herbarium, Department of Biological Sciences, Graduate School of Science, Tokyo Metropolitan University, Hachioji, Tokyo 192-0397, Japan

* [email protected] (Author for correspondence)

��

� ������������������������0�����������

������AM�����������������������������

�����1AM��������������������0��0�����

�����������1������������������0������

������������������������1������������0

���������������������������AM��������

�������0AM ��������������������������1

��������0�������������AM�������������

�����0��������������AM�������0���-AM��

����������������������0���������AM���

����0�������������AM���������1

� ���0�������5������������������1�����

���2������0������������������������0�

��������AM����������1

� ����������������0����������1015�����

(2)

�����������������1������������013�����

������AM������������������1����03����

������0�������������AM����1����������

��������1����0���3������AM�����������

�������1��04��������������100%��������0 AM�����������������1

AM���������0���1125����AM��rDNA���25

������1���������97%���������MOTU�������

������������������0AM23��������Glomus

Septoglomus�0���������Acaulospora���8MOTUsGlo1~6, Sep1, Aca10����AM��5MOTUsUnc1~50����������������

��5MOTUsNew1~5����18MOTUs������1��0���6����0

�������������0������������0����0�����

�0�������������AMMOTU���������0��0AM 5MOTUsNew1, Glo4, Glo5, Unc3, Sep1��0�����������������

������0��������������AM��������������

��������1

� �������������������AM��rDNA 25����0����

�0��0�����0�����������AM�������������

��Glo10Glo40Glo50Sep10Aca10Unc10Unc20Unc30Unc5���������

���1���0���������������������AM������

���1�������0������������������0������

����������2�����������1

�����

AM�0�����0��0������0���������

1. ����

11���������������

� ������0��������1,000 km�������������0��30

���������1���������������������������

�����1����������������������0��������

(3)

���0���������0�����������������������1

����������island syndrome �������0�����������1

���0����������36.5%������������02018����0

���������island syndrome������0������������m�

����1

� �������0����������������������m�����

������0�������m��������������1�������

���0����������������0����������������

������������Abe, 2006Abe et al., 2008����020151�����

���������������0����������1����������

��������������������0����������������

��m�������������0���m����������������

��������1

12AM���

AM���������������0������������������

�1������80%�����������0���������������

�1�����200�������������020181�����0�����

�����������m���������m��1AM����������

�����������������1�������0������m����

��m����0�������������1���0���������Arbuscle

�����m����1������m�������0AM���������

����0���������1�������������������0��

�����������������0�������������������

��������11

� �����AM��������������0��������m�����

������������Araim et al., 2009���020141����0�����

����������AM �m�������������1Gemma��2002

�0��������Sesbania tomentosaColubrina oppositifolia��������

�����������0����AMGlomus aggregatum��������m

��02�������AM������������������2.147.0��

(4)

2,000������������������0����AM���������

��������1

13���������AM���

� �������������� AM �������������������1

�����2��������0������2n��������n������21

��0���������������������0��������1���

������0���0��������0������1����������

���1��0����2�������������1�����0�0��3

��������0���������12~13m��������������1

��0����0���������0��������������0�����

�������������0�����������������1 cm���1

��������AM����0��������������0�������

��������0����������������������������

��������1���0Ogura-Tsujita��2013�����0���������

Fig. 2

N kr+j* Šch!1mV

^+®u2‚¨*m*q®ž)^w6…, }v”6

`ˆ4}v”6Q$ ‚¨&*K¶hX6j

(5)

D�����������������������AM��������1��

�������0�����������������������������

������Ogura-Tsujita et al., 2016���02007���02010���02012���0 2013���02013�����0��������������AM�������

����������1��0AM���������������������

������020151���2016��0����������� AM �����

100%��������Osmunda japonica��75%�����������Arachniodes

standisii��2�����AM����������1����0������AM

�����������������������������0�������

������������������������0AM����������

��2�������������1�����0��������AM����

������������D�1

Fig. 3

N 78kr+wpv(^dzs`

<@‚¨*‰UY+®u”&¡_”*Ÿ‡–2ˆ4��®u”%g†©

½‰ ®u`ˆ5 5s¥54��£P ®u+¡_”

&(3 0$‰ƒ[V’¸[ ’Š[6`ˆ$|Š o-®

u”&(4��®u”+m b µ*[V©Mf254*)•$ ¡ _”+· 9A<EG Nm2ˆ4*.% [V©M+f25(��

(6)

� ������������������������������������

����������������1���������������������

����������������������������������1���

AM�����������������������������������

�����������������������1�������������

�����������������AM ����������������AM

��������������������������1

14����������AM����������������

� ���������������AM��������������2008���

��1���2008�������������4073����������AM

�������������������65����AM����������

������1����������70�����������������20141

��������AM���������������������������

���1�����������AM��������������������

������������������������������1������

���AM��������������������������������

������1

� �������������������������� AM ��������

���-AM�������������������������1������

�������������������������������������

��� rbcL �������������������������������

��������1����������������������������

������������������������������������1

�������������������������������������

��������������������1����������������

AM��������������������28S rDNA����� AM���

��������1����������������������������

AM����������������������1

(7)

2� �����

21����

2017��6�09���2018��7���������������0���

�����������1�������CA0���CH0������CC0CL

3��0��������HC�����HS��2��0��5�������

���31

22�������������

� ���������������������1��������������

�������������������������41����������

��������������������0����������������

�������0����1���������������0��������

������ �����B-4�����0����4℃�����1

23���������������

� ����������������0������LEICA EZ4 HD�������

�1�����������������������0�����������

�������������1�����������������������

N g{}+ŽiP

− 27 −

(8)

��m������������m�������m��-����2������

��50��m���������0����� FAA�������0��AM

������������ Fig. 4

Fig. 5

N 78kr+‘GFw†!1mV

N ‘GF6D>C+Iu

p~ ¡_”+ ˜—§&\§6c7!)L"$#)3© ��

I­6���©u{œ™) “­6q®ž§*��^w*R )t´ ��

(9)

24���������

241 DNA��

� ���DNA���CTAB��Doyle & Doyle, 1987�m������1�����

������m2 ml�������������01.5 ml�����������

��BIO-BIK 1005-39�m�������1���CTAB������2%����

�������������CTAB0 0.1M Tris HClpH8.002.0mM EDTApH8.00 1.4M NaCl00.1%v/vβ-�����������250 µlm��0�������

IWAKI ALB-120���55℃020�����������1���CIA����

����������������0 24:1 v/v�m250 µl��0����Scientific

Industries VORTEX-GENE 2�m�������1���0���������

HITACHI himac CF15R�m��������15,000 rpm × 5�020℃�m��0�

150 µlm1.5 ml���������1���-20℃�������������

150 µlm��0�����0�����15,000 rpm × 10�04℃�m���1���

��������DNAm�������0�������m���1����-20℃

70%�����250 µlm��0������1�����15,000 rpm × 5�04℃ m���0��m���1������m������������� 10 ���

�����0�����m����1���25 µl ���50 µl TE�����

0.01M Tris-HCl00.001M EDTApH8.0�m������m���0DNA���

��-20℃�����1

242�������rbcL���PCR���DNA���

� ��������������������DNAm�����0���rbcL

����1,200 bp���m������aF3��cR3���������m���

PCR��m���1������������m�1����1����1���

����0Prime STAR Max DNA PolymeraseTaKaRa5 µl010 µM�������

0.6 µl0���3.3 µl0Template DNA 0.5 µl����������1�������

95℃ 10�������������0���98℃ 10�058℃ 10�072℃ 5 m 35 ����0��� 72℃ 7 �����������������Applied Biosystems GeneAmp PCR System 9700m����1PCR�����ExoStarillustra m���037℃ 30�080℃ 15����m�����������1

(10)

243AM28S rDNA���PCR���DNA���

� ������������DNA241DNA���m���0AM28S rDNA

���nested PCR�����m���1��������28S r DNA��m���

�����LR1���DNAm���������FLR22���������

m���1st PCRm��0��AM�����FLR3��FLR4��������

2nd PCRm��0�350 bpDNAm����1��������������

1����1�����������PCR���������1��������

PCR��95℃ 10�����098℃ 10�055℃ 10�072℃ 5�m35����0

���72℃ 7������1PCR���������������������1

244������������0����

Big Dye terminator v3.1��� m����������m���1����rbcL

�����������aF30cR30bF0aR4��������m0AM��rDNA

��������FLR3FLR42��������m������11���

�����96℃ 1�����096℃ 10�050℃ 5�060℃ 1�m25����04℃

�����1��������0������DNA������ABI 3130 Genetic AnalyzerApplied Biosystems) m������1������m ChromasPro 1.5

Technelysium�m������0MEGA7Kumar et al., 2016)��������m

���1��������0BLAST���NCBI����0DNA��������

��rbcL���������������m����1���0��������

������2~3�������������0���������������1

aF3 5’-ATGTCACCACAAACGGAGACTAAAGC-3’ Forward Hori et al. 2018 cR3 5’-GCGGCAGCCAATTCCGGACTCCA-3’ Reverse Hori et al. 2018 bF 5’-TATCCCCTGGATTTATTTGAGGAAGGTTC-3’ Forward Hasebe et al. 1994 aR 5’-CTTCTGCTACAAATAAGAATCGATCTCTCCA-3’ Reverse Hasebe et al. 1994 LR1 AM 5’-GCATATCAATAAGCGGAGGA-3’ Forward van Tuinen et al. 1998 FLR2 AM 5’-GTCGTTTAAAGCCATTACGT-3’ Reverse van Tuinen et al. 1998 FLR3 AM 5’-TTGAAAGGGAAACGATTGAAGT-3’ Forward Gollotte et al. 2004 FLR4 AM 5’-TACGTCAACATCCTTAACGAA-3’ Reverse Gollotte et al. 2004

� ��� �������� 645. ��� �� �� ����6��� ��� ��� �������������

(11)

AM������0BLAST���NCBI������0DNA����������

rDNA��������1�����0�����������������97%

���������AMMOTU��������������������1�

��AM ������097%��������������0MEGA7 �����

NJ��Saitou & Nei, 19870Kimura 2-parameter modelKimura, 1980�������

�����1

25������������������AM������

251��������

FAA �������������������������50%060%070%0 80%090%099.5%��1����0����1���2%�����in 50%���

���������100%������1�������1���100%�����

��������1�����1

� ��������0��������1100%����������������

KULZER Technovit 7100����0��������������1������0

���������21���1��0111��0122��0����

24�����1����������151�������0���300 µl

������������1�������������0����������

����������1���2�����0����������300 µl���

���0�����������������1���������������

�0���������������1���0�������������0�

������������������1���������� ��������

���������������1�������������0�������

���1

� ��0�������Marshall SCIENTIFIC Leitz 1512������0�����

-������������03 µm �����������1��������

�����0������������������160℃����������

�����10�������0�������������������1

� ���0���������������0����������������

��0������������1����60℃���������������

�������1

(12)

� �����������

1) 2%�����ZnCl2)��� 1

2) �� 1

3) �������� 5

4) ��� 5

5) ���������0.2%����������� 6��60℃

6) �� 5��2

7) ��� 5

8) 2%������5%�������� 30

9) �� 5��2

10) ��� 5

11) 5%�������� 45

12) �� 2

13) 0.2%������������ 1

14) �� 2

15) ��� 5

� ��������������m���������������������

������ ���������m������������m��������

������m���������������LEICA DM 2500������m�

��������������m�������������������LEICA

MC170 HD����m�����

252����������

� ���������������9��������������������

�������������������������������������

������������������������������AM�����

��m���������������m�������������m����

������������FAA�������������m��������10%

KOH������������60������30������10% KOHm���

�������������2% HClm���20������2% HClm�����

��������m���60��20���������m�����������

(13)

�����������1����������LEICA DM 2500�����0��

�������������������������0�����������

����LEICA MC170 HD���������1

3� ��

31�������������

� �������3������������0��283�����������

����������1����0181������rbcLPCR�������1

������0�������������� Osmunda banksiifoliaC.Presl) Kuhn0

������ Cyathea spinulosa Wall. ex Hook.0��� Cyathea ogurae Hayata) Domin0���� Cyathea mertensianaKunze) Copel.0�������������

�������� Lindsaea repanda Kunze0����������������

Histiopteris incisaThunb.) J. Sm.������ Microlepia strigosaThunb.) C.Presl0

��������������������Pteris boninensis H.Ohba0�����

������������ Asplenium trigonopterum Kunze0����������

Thelypteris parasitica (L.) Tardieu0����������� Diplazium wichuraeMett.) Diels������� Deparia bonincolaNakaiM.Kato0�����������

Ctenitis lepigeraBaker) Tagawa ����������� Cyrtomium falcatum

L.f.) C.Presl subsp. australe S.Matsumoto0 � � � � � � � � � � Nephrolepis cordifoliaL. C.Presl1015��������������������1�

��15����07����������08����������1�����

�����02014����02016����02017���������������

2��D1

� ��0����������11����������0��0���0����0

�������������0�����0������������0����0

������0������0��������0�����11��������

��0��0������0�����0������������0�����

����0����0������0�������0����������0�

������������08 ����������0��0����0����

�0������������0����0������0����������

�����������1

(14)

32���������AM�������

� ����AM�������m�6��������������������

�0������11����������0��0���0����������

���0�����0������������0����0������0��

����0��������25����AM��rDNA25���������

������0�����Glomus������6MOTUsGlo1~Glo60����

�����Septoglomus������1MOTUSep10��������Acaulospora

������1MOTUAca10����AM5MOTUsUnc1~50������

�����DNA���������������AM5MOTUsNew1~5��0

��18MOTUs��������������18MOTUs�����������

����������������0�����Glo10Glo20 Glo30Glo40Glo50 Glo60Unc10Unc30Unc40Unc50New20New40New5 13MOTUs0�����

Unc20New10New30Sep10Aca15MOTUs������

33��������������

� ��������013�����������������0��0���0�

���0�������������0������0�����0������

������0����0������0������0�������0���

������������������������ 708����������

�������������������������������������

m�9�����13����9����������0��0���0����0

�������������0������0������0������0��

�����������0���������������������4 ���

����0������������0����0�������������0

���������������������

34�������������������

� �����������0������������������������

10�������9����������0��0�������������0

�����0������������0���������0����0���

���0�����������0��0������0��������3��

����������������6��������������������

(15)

ch076 u. Glomus (KP265028) G. sp. rp29 (AM040396) hs037

hs068 hs059

Rhizophagus intraradices (EU234492) F. mosseae (AY769968) Rhizophagus cf. intraradices (AY639303)

R. intraradices (AY541905) G. sp. 26 ZHNL-2013a (KF836905)

u. Glomeromycotina (EU118714) cl003

Rhizophagus clarus (AJ510243) u. Glomeromycotina (AB280263) uncultured Glomeromycotina (EU118722) uncultured Glomeromycotina (AB280258)

cc003 G. sp. (MF335888)

G. sp. (MF337354) u. Glomus (AB710219) cc008 G. sp. (MF340131)

G. sp. rp40 (AM040420) u. Glomeromycotina (JF717428) ch048

cc006

Glomus microaggregatum (AF389021) u. Glomeromycotina (JX096618)

u. Glomeromycotina (GQ149186) ch007

hs008

u. Glomeromycotina (DQ468714) u. Glomerales (KC411264) cc005

cc007 u. Glomus (AB369764) G. sp. lpp23 (AJ459367) G. sp. hr11 (AM040407)

ca003 G. sp. (MF338378) ch080 ca005

u. Glomerales (KC411360) G. sp. BG4 47 (KY114650) ch072

u. Glomeromycotina (KJ484695) hs069

u. Glomeromycotina (JF798533) u. Glomeromycotina (JF798534)

ch021

uncultured Glomeromycotina (FJ566198) u. Glomus (KP265030)

ch043 u. Glomus (AB750744)

G. sp. (MF339326) Septoglomus constrictum (MH590070) u. Septoglomus (KM879863)

hs047 hs058

u. Glomeromycotina (AB893071) ch074

u. Glomeromycotina (JF798569) Gigaspora rosea (AM040348) Acaulospora spinosa (AF378429) A. sp. (KY565429)

hs052 A. foveata (LN736027) u. Acaulospora (HM570008)

hs056 u. fungus (HQ857180)

Mortierella verticillata (AF157199) 70

24 26 90 96 68

86 96 82 99

96 96

27 22 88 99

75 72 85

59 55

55 80 59

53

75

74 87 47

64 91 47

98

58

43 98 73

23

93 11 20 53

34

7

76 14

4 15

29

72 49

18

9 94

4 56 71

63 65

11 40

70

38 27 45 53 25

0.050

'

&#"

Glomeromycotina

''

'

' $

''

'

&#"

%!' '

&#"

'!

&#"

Glo1 New1

Glo4

Unc1 Unc2

Glo5

New4

Sep1

Aca1 Glo2 New2

Glo3

Glo6 Unc3 Unc4 New3

New5

Unc5

2017

,#3 3 .3$3 .33 2&1,3

%3,3 (1,3-1,3 123%3 1(3'23 +3

&3

$3

"23

!31,3

2*&3 23 33 ( /,#3 ,03 2$3 3 -)23 3

N ’Q+TR‘LbS*R%Y~MZx78“+‘GF*ch &# Š+JVƒn” o'l•

‹„Œ„%y *¯e]%25 ^*¡¼%3 55¦š¬š

*'*{*<@»¡_”225 6yz*<@»+ n)y<@»

*a›})(2"$ O&)„©$y 89>A<EG¤ky$

4/*+ B?CG92 ^*¡¼%3 ³(‚¨2d€5

(16)

���0����������������������m����������

�0�������9�������������

�����

��������������������

� �������15����������2��0��������������

�������������������������������������

�����������02014����02016����02017�m�������0 13��0�������������������������0�������

������0�������������������������0����

�������� 1 ���������������0�����������0

��������������������������������0����

1����������������0���2������0��������

�����������������������������0�������

��������������m���������������������0

����m�����0���������������������������

50 µm

Fig. 7

Fig. 8 N 5D@43;9+‘GF+‚‡H'X2#Š€

^w}*v*1)q©v q®ž)i"$4��

(17)

E> PCAQGA PCHQ

4;> PCC, CLQ5D> PHCQKO PHSQ Osmundaceae1+%3%Osmunda banksiifolia (C.Presl) KuhnB:6@-73-1 Cyatheaceae#Cyathea spinulosa Wall. ex Hook.B:6@-11-8 (#Cyathea ogurae(Hayata) Domin=N79F-2--- %0Cyathea mertensiana (Kunze) Copel.=N79F11-1- Lindsaeaceae'3$3Lindsaea repanda Kunze=N79F-25-- Dennstaedtiaceae,&Histiopteris incisa(Thunb.) J. Sm.B:6@---1- %Microlepia strigosa (Thunb.) C.PreslB:6@-2239 Pteridaceae2.-Pteris boninensis H.Ohba=N79F-3-410 Aspleniaceae ! Asplenium trigonopterum Kunze=N79F---3- Thelypteridaceae$Thelypteris parasitica (L.) TardieuB:6@12052717 Athyriaceae/Diplazium wichurae(Mett.) DielsB:6@-1--- Deparia bonincola (Nakai) M.Kato=N79F-8--3 Dropteridaceae 3)Ctenitis lepigera (Baker) Tagawa=N79F311254 '3+"Cyrtomium falcatum(L.f.) C.Presl subsp. australe S.Matsumoto=N79F---21 Oleandraceae%Nephrolepis cordifolia (L.) C.PreslB:6@---1-

L8M8<86@JC

I?H?

g{}'‘GF_02#78|("+J[sa”Y~MOf.#,]QJ[•)0-*6D>Ce”eW,_02#‘GF+e•

(18)

a

b

c

d

e

f

##

!

"#

'&% $(%

N 78“ |+‘GF+nˆKq(Šch

¡_”)Zr5 ^WŽ*§H6¢±J%y =:FC

(19)

g h i j k l m

,&

%,'"

*

# +)!(

0/. -1.

$

N ”„• 78“ |+‘GF+nˆKq(Šch–

(20)

0%20%

40%

60%

80%100% 4.)6)

' ,' )3#

+ 6(6 /"*!

) 51#0

$"%"

(

"2 6- "

+ 6 .&

)

9 7 = ?

@<97=8;:> 97=8;:>

n=115216431432224 N78“|+‘GF+Šcht ^W޹+ }x«6Zr ¡_”*‘;GDF†)•4 ^WŽZr5 ;GD*Tl&$y

(21)

N :B<D=CEh‰*/$&X2#‘GFH+Š€

°Sª^w^&²Sª^w^%+(^*º­Zr5 Sª6¢±J%y =:FC

参照

関連したドキュメント

In this section, we establish some uniform-in-time energy estimates of the solu- tion under the condition α − F 3 c 0 &gt; 0, based on which the exponential decay rate of the

It is natural to conjecture that, as δ → 0, the scaling limit of the discrete λ 0 -exploration path converges in distribution to a continuous path, and further that this continuum λ

In this paper, we will study the “islands” (geodesic balls with all sectional curvatures bounded from below by a positive constant) at infinity on complete Riemannian manifolds

Taking care of all above mentioned dates we want to create a discrete model of the evolution in time of the forest.. We denote by x 0 1 , x 0 2 and x 0 3 the initial number of

○事 業 名 海と日本プロジェクト Sea級グルメスタジアム in 石川 ○実施日程・場所 令和元年 7月26日(金) 能登高校(石川県能登町) ○主 催

PHC Natural Mini Plug is a mycorrhizal fungal inoculant for potting soils used in miniature container plugs for organic production.. The concentration of VAM fungal spores is very

Amount of Remuneration, etc. The Company does not pay to Directors who concurrently serve as Executive Officer the remuneration paid to Directors. Therefore, “Number of Persons”

bottarga, butternut pumpkin, Mie “Tiger tail” green chilli, Italian parsley, Goto Islands' fish