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Table 1 Source of 1,898 strains of Vibrio cholerae non-o1 non-o139

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(1)

Vibrio cholerae

non-O1

non-O139の

血 清 型 分 布,

そ の毒 素 産 生 性 お よ び新 血 清 型 の 追 加 に つ い て

神奈川県衛生研究所細菌病理部

山 井

志 朗

沖 津

忠 行

国立感染症研 究所腸管系細菌室

島 田

俊 雄

日本大学生物資源科学部獣医公衆衛生学研究室

勝 部

泰 次

(平成9年5月19日 受付)

(平成9年7月8日

受理)

Key words : Vibrio cholerae non-O1 non-O139, serogroup, cholera toxin, NAG-ST

要 旨

1994∼1996年 の3年 間 に,世 界 各 地 か ら収 集 したVibrio cholerae non-O1 non-O139に つ い て,そ の 分 布 を把 握 す るた め に そ れ ら の血 清 型 別 を行 い,さ ら に そ れ ら の 菌 株 の コ レ ラ 毒 素(CT)遺 伝 子(ctx)お よ びNAG-ST遺 伝 子 の 保 有 状 況 を検 査 し,ctx陽 性 株 に つ い て は さ ら にCT産 生 性 を 調 べ た.ま た,型 別 不 明 株 を 用 い て 新 血 清 型 の追 加 を 試 み た.

供 試 し たV.cholerae non-O1 non-O139菌 株1,898株 は,R型 の50株 お よ び 型 別 不 明 の74株 を 除 き128 血 清 型 に 分 け られ た が,そ の血 清 型 分 布 に は 地 域 お よび 由 来 に よ る 明 らか な相 違 は 認 め ら れ な か っ た.

型 別 不 明 株 の 中 に38の 新 しい 血 清 型(O156-O193)を 認 め,抗 原 構 造 表 に 追 加 し た.

V.choleraeの 免 疫 血 清 中 に はR抗 体 が か な り含 まれ,実 際 の 検 査 に 用 い る診 断 用 抗 血 清 はR菌 株 で 吸 収 し た もの を使 用 し な け れ ば な ら な い.

白糖 非 分 解 性,VP反 応 陰 性 菌 株 の 中 に,ル ミネ セ ン ス を 産 生 し た も の が 見 られ た が,DNA相 同 性 試 験 か ら何 れ もV.choleraeと 同 定 さ れ た.こ れ までVibrio mimicusと 同 定 され た 菌 株 中 に,ル ミ ネ セ ン ス産 生 性V.choleraeが 紛 れ 込 ん で い た 可 能 性 が あ り,両 菌 種 の 同 定 に お い て は 必 ず 発 光 性 を 確 認 し な け れ ぼ な ら な い. 供 試 し た1,898株 中,CT遺 伝 子 を保 有 し,CTを 産 生 した も の は わ ず か37株(約2%)で あ っ た.し か し な が ら,特 に血 清 型O141菌 株 はCT産 生 株 の 割 合 が,16株 中10株(約63%が 陽 性)と 極 め て 高 か っ た.今 後,CT産 生 性 のO141菌 群 に よ る コ レ ラ様 下 痢 症 の 動 向 に 注 目 した い.

コ レ ラ流 行 地 で は,コ

レ ラ菌 に類 似 した性 状 を

保 有 し て い るが,コ

レ ラ菌 の抗 血 清 に凝 集 しな い

菌 群 が 以 前 か ら知 られ,NAG

(Non agglutinable)

ビ ブ リオ と通 称 さ れ て い た.そ の 後,こ の 菌 群 は コ レ ラ 菌 本 来 の 学 名 で あ っ たV.choleraeに 統 合 さ れ,従 来 の コ レ ラ 菌 は01,そ の 他 の も の はnon-O1と 総 称 さ れ る 様 に な っ た. コ レ ラ の 激 し い 下 痢 は コ レ ラ 菌 の 産 生 す る コ レ ラ 毒 素(CT)に 起 因 す る が,non-O1菌 株 でCTを 産 生 す る も の は 極 め て 少 な く,し か もCT産 生 菌 別 刷 請 求 先:(〒241)神 奈 川 県横 浜 市 中 尾 町1-1 -1 神 奈 川 県衛 生 研 究所 山井 志朗 平 成9年10月20日

(2)

で さ え も 過 去 に 大 き な コ レ ラ 流 行 を 起 こ し た こ と は ほ と ん ど な く,わ ず か に1971年 に ス ー ダ ン で 局 地 的 小 流 行 が 見 ら れ た の み で あ っ た. 1992年10月,突 如 イ ン ドでCT産 生 株 のnon-O1 に よ る 激 症 コ レ ラ の 大 流 行 が 発 生 し,翌 年 に は バ ン グ ラ デ シ ュ に 侵 入 し,多 数 の 犠 牲 者 を 見 た.そ の 後,こ の 流 行 は パ キ ス タ ン,ミ ャ ン マ ー,マ レ ー シ ア,タ イ,中 国 へ と拡 大 し て 行 っ た1).当 時,V. choleraeはO1-O138の 血 清 群 に 型 別 さ れ て い た が,こ の 大 流 行 で 分 離 さ れ た 菌 株 は,こ れ ら の い ず れ の0群 に も 該 当 し な か っ た.し か し な が ら, 全 株 と も 同 一 の 新 し い0群 に 含 ま れ る 菌 群 で あ る こ と を 確 認 し,新 血 清 型0139と し て 抗 原 表 に 追 加 し,"Bengal"と い う 通 称 名 を 与 え た2).WHOで は 該 菌 に よ る 下 痢 症 患 者 お よ び 死 亡 事 例 を い ち 早 く コ レ ラ と し た が,我 が 国 で はV.cholerae O139 は 所 謂NAGビ ブ リ オ の 範 疇 に 入 り,本 菌 に 起 因 す る 下 痢 症 は 食 中 毒 と し て 処 理 さ れ,コ レ ラ と し て は 計 上 し て い な い. 今 回,1994∼1996年 の3年 間 に,世 界 各 地 か ら 収 集 し たV.cholerae non-O1 non-O139 1, 898株 に つ い て,そ の 分 布 を 把 握 す る た め に そ れ ら の 血 清 型 別 を 行 っ た.さ ら に 型 別 不 明 菌 株 に 関 し て は, 新 血 清 型 の 追 加 を 試 み,V.cholerae抗 原 構 造 表 の 更 な る 充 実 を 図 っ た.ま た,血 清 型 別 に 供 し た 菌 株 に つ い て コ レ ラ 毒 素(CT)遺 伝 子(ctx)お よ び NAG-ST遺 伝 子 の 保 有 状 況 を 検 討 し,さ ら にctx 陽 性 菌 株 に つ い て はCT産 生 性 を 調 べ た. 材 料 お よ び 方 法 供 試 菌:1994∼1996年 ま で の3年 間 に 収 集 し た V.cholerae non-O1 non-O139菌 株1,898株 の 由 来 お よ び 菌 株 数 はTable 1に 示 し た.ヒ ト由 来 1,110株 の う ち1,067株 は 下 痢 症 由 来 で,残 り の43 株 は 血 液,耳 漏 お よ び 化 膿 創 か ら分 離 さ れ た も の で あ る.63株 は 冷 凍 エ ビ な ど の 食 品,725株 は 河 川 水 ま た は 沿 岸 海 水 由 来 で あ る.な お,日 本 の ヒ ト 由 来 株 の 大 部 分 は 海 外 渡 航 者 か ら分 離 さ れ た も の で あ る.ま た,V.choleraeのO参 考 菌 株(O1-O155),R参 考 菌 株(CA385),基 準 株 (ATCC14035)お よ びV.mimicusの 基 準 株 (ATCC33653)も 併 せ て 用 い た.

Table 1 Source of 1,898 strains of Vibrio cholerae non-O1 non-O139 生 理 ・生 化 学 的 性 状 テ ス ト:Sakazaki & Shimadaの 方 法3)に よ っ て 検 査 し た.ま た,発 光 性 (ル ミネ セ ン ス)は ト リ プ ト ソ ー ヤ 寒 天 培 地(日 水) で,22℃ で1夜 培 養 し た 後,暗 室 で 観 察 し た. DNA相 同 性 テ ス ト:供 試 菌 を ハ ー トイ ン フ ユ ジ ョ ン プ ロ ス で1夜 培 養 後,DNAの 抽 出 を 従 来 の 方 法 で 行 っ た4).標 識DNAは フ ォ ト ビ オ チ ン ・ ラ ベ リ ン グ ・シ ス テ ム(GibcoBRL)を 使 用 し た. マ ニ ュ ア ル に 従 っ て,供 試 菌 株,V.choleraeお よ びV.mimicusの 基 準 株 を ラ ベ リ ン グ し た.DNA 相 同 値 は 江 崎 の 方 法5)に よ っ て,マ イ ク ロ プ レ ー ト を 使 用 し,40℃ で6時 間 反 応 後,蛍 光 分 光 光 度 計(Titertek Fluoroscan II)で 蛍 光 を 測 定 す る こ

と に よ り求 め た. 抗 血 清 の 作 製,凝 集 テ ス トお よ び 凝 集 素 吸 収 テ ス ト:Shimadaら6)7)の 方 法 に 準 拠 し た.診 断 用 抗 血 清 は 全 てR抗 体 を 吸 収 し た も の を,ま た 凝 集 テ ス ト用0抗 原 に は 加 熱(100℃,1時 間)後,遠 心 洗 浄 し た 菌 を 使 用 し た. CT遺 伝 子(ctx)お よ びNAG-ST遺 伝 子 の 検 出:ctxの 検 出 は 東 洋 紡 製CT用DNAプ ロ ー ブ8)を,ま たNAG-ST遺 伝 子 の 検 出 はTakeda ら9)のNAG-ST検 出 用DNAプ ロ ー ブ を 用 い,ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン 法 で 行 っ た. CT産 生 性 テ ス ト:デ ン カ 生 研 のVET-RPLA 感 染 症 学雑 誌 第71巻 第10号

(3)

Table 2 O-serogroup of 1,898 strains of Vibrio cholerae non-O1 non-O139 isolated from various sources

(4)
(5)

(N)キ ッ ト を 用 い た.毒 素 産 生 用 培 地 に は 酵 母 エ キ ス ブ イ ヨ ン(酵 母 エ キ ス5g,バ ク トペ プ ト ン10 g,食 塩5g,精 製 水IL,pH7.4)を 用 い,30℃, 18時 間 震 盟 培 養 液 を15,000rpm15分 遠 心 後,上 清 を ろ 過 滅 菌 し た も の を 粗 毒 素 と し て 供 試 し た. 成 績 収 集 し た 分 離 菌1,898株 は,殆 ど 全 て がV. choleraeの 定 義3)に 一 致 す る 性 状 を 示 し た が,白 糖 非 分 解 菌 が8株 み ら れ,う ち4株 はVP反 応 陰 性 で ル ミ ネ セ ン ス 産 生 性 で あ り,残 り の4株 は VP反 応 陽 性 で ル ミ ネ セ ン ス を 産 生 し な か っ た. こ れ ら の 白 糖 非 発 酵 菌8株 はV.choleraeお よ びV.mimiczasと のDNA相 同 性 試 験 に よ る 鑑 別 を し た.そ の 結 果,こ れ ら の8株 は,い ず れ もV. choleraeの 基 準 株 と 高 い 相 同 性(79∼82%)を 示 し,V.mimiczasと は 低 い(40∼45%)相 関 し か 認 め ら れ な か っ た こ と か ら,V.choleraeと 同 定 し た. 供 試 し たV.choleraenon-O1non-O1391,898 株 は,R型 の50菌 株(2.6%)除 き,1,774株 が129 の0群 に 型 別 さ れ た.し か し な が ら,残 り の74株 (3.9%)は 既 知 の153の 血 清 型(O2-O138お よ び O140-O155)の 何 れ の0お よ びR抗 血 清 に も 反 応 し な か っ た. そ れ ら の 内 訳 を 由 来 別 にTable2に 示 し た.比 較 的 多 いO群 は,O10(7.9%),O14(7.3%), O8(3.8%),O6(5.5%),O5(5.3%),O2(3.6%), O12(3.2%),O39(3.2%),O41(2.6%), O34(2.3%),O37(2.1%)で あ っ た.ま た,由 来 別 の 血 清 型 分 布 で も 同 様 の 傾 向 が 見 ら れ た. 下 痢 症 由 来 以 外 の 菌 株 は43株 あ り,血 液 由 来 は 32株 で そ の0群 は05-5株,O2お よ び034一 そ れ ぞ れ4株,O24-3株,O10,O14,O17お よ び O40― そ れ ぞ れ2株,O6,O19,O26,O56,O59, O81,O95,O137― そ れ ぞ れ1株;耳 漏 由 来 は9株 で そ のO群 はO26―3株,O7,O8,O10,O23, O28,O46― そ れ ぞ れ1株;化 膿 由 来 は2株 でO6 お よ びO40― そ れ ぞ れ1株 で あ っ た. 一 方,1994年 ペ ル ー の リ マ で 発 生 し たV. choleraenon-01non-0139に よ る 激 症 下 痢 症 の 集 団 事 例 で は,患 者 か ら分 離 さ れ た 菌 株 の 血 清 型 の

殆 どが012で

あ っ た13).

0140群 が3株 含 まれ て い た が,該 菌 群 は以 前 血

清 群Hakataと

仮 称 さ れ て い た もの で あ る.血 清

型140菌 株 は,コ

レ ラ菌 のC(稲

葉 型)抗 原 因 子 を

保 有 す る こ とか ら,コ レ ラ菌(O1)血

清 に凝 集 を

示 す の で,コ

レ ラ菌 の 同定 の 際 に は この こ とに留

意 しな けれ ば な ら な い.ま た,こ れ まで該 菌 は魚

介 類,沿

岸 海 水 や 河 川 水 か らの み分 離 さ れ て い た

Table 3 Reference strains for new O-serogroup of Vibrio cholerae

*CT positive strain

(6)

Table 4 O-serogroups of CT gene positive and CT producing strains of Vibrio cholerae O1 non-O139

が,今

回初 め て ヒ トの下 痢 症 か ら検 出 さ れ た.

型 別 不 明 の74株 は,新

し い血 清 群 で 構 成 さ れ て

い る こ とが 予 測 さ れ,代 表 菌 株 を用 い て免 疫 血 清

を作 製 し,交 差 凝 集 テ ス トお よび凝 集 素 吸 収 テ ス

トを 行 っ た.そ

の 結 果,型 別 不 明74株

は38のO

群 に分 け られ,こ れ らの0群

は新 血 清

型(Ol56-O193)と

してV.choleraeの

抗 原 構 造 表 に追 加 し

た(Table3).

な お,新 血 清 型Ol56か

らO193の

参 考 菌 株 で 免

疫 した抗 血 清 の凝 集 素 価 は,640∼1,280倍

の 範 囲

に あ った が,そ

れ ら の 中 に は か な り のR抗

(18∼160倍)が

含 まれ て い た.

新 血 清 型 の 参 考 菌株 と既 知 の 血 清 型 との 抗 原 関

係 を調 べ た と こ ろ,0156と0137と

の 間 にa,b-a,

c型 の交 差 抗 原 関 係 が認 め られ た.

供 試 した1,898株 中,CT遺

伝 子 を保 有 し,CTを

産 生 した 菌 が37株(約2%)認

め られ(Table4),

ま た そ れ らのCT産

生 量 は1ng/mlか

ら100ng/ml

の範 囲 に分 布 した.

特 に血 清 型Ol41菌

株 は,16株 中 の約63%(10株)

がCTを

産 生 し,極 め て高 い 陽 性 率 を示 した.こ

れ らのCT産

生 菌10株 は,米 国 の 環 境 由 来 の2株

を 除 い て,す

べ て 散 発 下 痢 症 事 例 由来 で,5株

米 国,残

りの3株

は スペ イ ン,イ ン ド,台 湾 で そ

れ ぞ れ 分 離 さ れ た 菌 株 で あ る.

一 方

,NAG-ST遺

伝 子 の 保 有 状 況 を 調 べ た

1,898株 中,2.8%(53株)が

陽性 で あ り(Table5),

Table 5 O-serogroups of NAG-ST gene positive strains of Vibrio cholerae non-O1 non-O139

ま た 供 試 し た 菌 株 が10株 以 上 の 血 清 群 で は,014 群 の 菌 株 のNAG-ST遺 伝 子 の 保 有 率 が20%と 比 較 的 高 率 で あ っ た. 考 察 今 回 収 集 し た 菌 株 の 中 に,白 糖 非 分 解 性 でVP 反 応 陰 性 のV.choleraenon-O1が4株 認 め ら れ た が,全 て ル ミ ネ セ ン ス を 産 生 し,O群 はO28で あ っ た.こ れ ら の 菌 株 は1,994年 琵 琶 湖 で 発 生 し た ス ジ ェ ビ の 伝 染 性 光 り病,所 謂 ホ タ ル エ ビ か ら分 離 さ れ た も の で,ス ジ エ ビ を 用 い た 実 験 で エ ビ に 対 す る 病 原 性 お よ び 発 光 性 が 再 現 さ れ た10).魚 介 類 の 敗 血 症(所 謂 ビ ブ リオ 病)は 主 にV.anguillarum に 起 因 し,V.choleraeが 淡 水 魚 の 敗 血 症 の 原 因 と 報 告 さ れ た 事 例 は 少 な い が,今 迄 に 報 告 さ れ た 事 例 は い ず れ も 夏 期 に 発 生 し,猛 暑 に よ る 川 の 水 温 の 異 常 上 昇 や,水 不 足 等 が 疾 病 の 発 生 に 強 く影 響 し て い た.こ れ か ら も,V.choleraeに よ る 魚 介 類 の 症 状 に も 目 を む け る 必 要 が あ ろ う. 一 般 にV .mimicusとV.choleraeと は 白 糖 分 解 性 お よ びVP反 応 で 鑑 別 さ れ,白 糖 非 分 解 で VP陽 性 菌 株 はV.choleraeと,ま たVP陰 性 株 は V.mimicusと 同 定 さ れ,両 者 の 区 別 に 発 光 性 テ ス トを 実 施 す る こ と は ま ず な か っ た.し か し な が ら,VP陰 性 菌 の 中 で,ル ミ ネ セ ン ス を 産 生 す る も の はV.choleraeで あ る こ と が 示 さ れ て い る11). 感 染 症 学雑 誌 第71巻 第10号

(7)

従 っ て,こ れ ま で に 私V.nunucusと

同 定 され た 菌

株 中 にル ミネ セ ン ス産 生 性 のV.choleraeが

紛 れ

込 ん で い た 可 能 性 は否 定 で き な い.今 後,両 者 の

同定 にお い て は必 ず 発 光 性 を確 認 しな けれ ば な ら

な い.

V.choleraeに

は 多 数 の0抗

原 が 認 め られ て い

るが,R抗

原 は全 て の 血 清 型 で 同 一 で あ る12).V.

choleraeの 参 考 菌 株 で 免 疫 した す べ て の抗 血 清 中

に は か な りのR抗

体 が 含 まれ て,こ の ま まの 血 清

を希 釈 した の み で,実 際 の ス ライ ド凝 集 テ ス トを

行 っ た場 合 に は,血 清 中 に含 まれ るR抗

体 に よ る

類 属 反 応 が 強 く現 れ,正 確 な血 清 型 別 は行 う こ と

が 不 可 能 で あ る.従 っ て,実 際 の 血 清 型 別 に 用 い

る診 断 用 抗 血 清 は,血 清 中 に含 まれ る全 て のR抗

体 をV.choleraeのR菌

株 の参 考 菌 株 で あ るCA

385株 で 吸 収 す る必 要 が あ る.

また,交 差 反 応 を示 す血 清 群 の型 別 に は,そ れ

ぞ れ の 特 異 吸収 血 清 を準 備 し な け れ ば な らな い.

血 清 型 別 に 際 して,大 部 分 の菌 株 は生 菌 で 当該

の抗 血 清 に凝 集 を示 した が,あ

る菌 株 で は生 菌 で

は非 凝 集 性 で あ り,100℃,1時

間 の加 熱 菌 で 初 め

て 凝 集 した もの が 見 られ た.恐 ら く これ は0凝

を 阻 止 す る 表 在 性 物 質 に起 因 す る も の と思 わ れ

る.従 っ て,V.choleraeのO凝

集 テ ス トは加 熱 抗

原 を用 い て 行 っ て い る.

V.choleraeの

抗 原 構 造 表 に 追 加 さ れ た 新 血 清

型(O156-O193)の

参 考 菌 株 をTable3に

示 す.

こ こで 拡 大 され たV.choleraeの

抗 原 構 造 表 は,

散 発 事 例 お よ び集 団 発 生 事 例 や そ れ らに係 わ りを

持 つ 食 品 や飲 料 水 か ら分 離 さ れ た 菌 株 との 因 果 関

係 を調 査 す る疫 学 マ ー カ ー と して,ま た 生 態 学 的

研 究 ま た は病 因 究 明 の 手 段 と し て も有 用 で あ ろ

う.

新 血 清 型O156はOl37群

とa,b-a,c型

の交 差 抗

原 関係 が 認 め られ,こ

れ ら両 血 清 型 菌 株 の正 確 な

同定 に は,交 差 吸 収 した 特 異 因 子 血 清 を用 意 す る

必 要 が あ る.

今 回 血 清 型 別 に供 した1,898株 の 血 清 型 は,Rお

よ び型 別 不 明 株 を除 き128に も及 び,そ の 分 布 の 多

様 性 が 示 され た.ま た,そ

の 血 清 型 の分 布 に は地

域 や 由 来 に よ る 明 らか な 相 違 は認 め ら れ な か っ

た.し か し な が ら,今 回 報 告 し た ペ ル ー で の 集 団 事 例 由 来 菌 株 の 殆 ど の 血 清 型 が 同 一 で あ り13),ま た1971年 の ス ー ダ ン の コ レ ラ様 下 痢 症 に お け る 流 行 株 の ほ と ん ど の も の が037群 で あ っ た こ と や, さ ら に 過 去 に 見 ら れ た 集 団 食 中 毒 事 例 も そ れ ぞ れ の 分 離 菌 株 の 血 清 型 が 均 一 で あ っ た こ と か ら,V. choleraeの 血 清 型 は 病 原 性 と は 相 関 性 が 無 い に し て も,疫 学 マ ー カ ー と し て は 有 用 で あ る. V.choleraeの 重 要 な 病 原 因 子 と し て はCTが あ り,下 痢 症 か ら 分 離 さ れ る コ レ ラ 菌 や γ choleraeO139菌 株 の 殆 ど す べ て がCTを 産 生 す る.一 方,こ れ ま で の 報 告 で はV.choleraenon-O1 non-O139でCTを 産 生 す る も の は 極 め て 少 な く14),ま た,今 回 の 我 々 の 調 査 に お い て も供 試 し た 1,898株 中 約2%にCT遺 伝 子 保 有 株 が 認 め ら れ た に す ぎ な か っ た.し か し な が ら,O141菌 株 はV. choleraenon-O1 non-O139を 除 い た 他 の 血 清 型 に 比 較 し てCT産 生 菌 株 の 割 合 が 極 め て 高 く,今 後 CT産 生 性 のO141菌 群 に よ る コ レ ラ 様 下 痢 症 の 動 向 に 注 目 し た い. 本 来V.choleraeは 熱 帯,亜 熱 帯 の 常 在 菌 で あ っ た が,現 在 で は 我 が 国 や 欧 米 諸 国 の 河 川 や 汽 水 域 に 定 着 し て お り,ま た コ レ ラ 菌 で さ え も,患 者 の 発 生 と は 無 関 係 に こ れ ら の 国 々 の 河 川,下 水, 沿 岸 海 水,沿 岸 に 棲 息 す る 渡 り鳥 の 糞 便 な ど か ら し ば し ば 分 離 さ れ て い る15).こ の よ う な 近 年 の 著 し い 環 境 汚 染 は,必 然 的 に 魚 介 類 の 汚 染 に 繋 が り, 輸 入 魚 介 類,特 に エ ビ はV.choleraenon-O1 non-O139に 高 度 に 汚 染 さ れ て い る16). 我 が 国 に お け るV.choleraenon-O1に よ る 下 痢 症 事 例 は,コ レ ラ と 同 様 に か つ て は 東 南 ア ジ ア や イ ン ド亜 大 陸 か ら の 帰 国 者 に 限 ら れ て い た が,最 近 で は 国 内 発 生 と 思 わ れ る事 例 が し ば し ば あ り, そ の 殆 ど は 散 発 例 で あ る が,集 団 事 例 の 報 告 も見 ら れ て い る17). こ こ 数 年,海 外 渡 航 者 と無 関 係 に 突 発 す る コ レ ラ の 散 発 事 例 の 増 加 が 目 立 っ て い る18).恐 ら く こ れ は コ レ ラ 流 行 地 か ら 輸 入 し た 魚 介 類 を 介 し て, 検 疫 の 眼 を 潜 り抜 け た コ レ ラ 菌 の 持 ち 込 み に起 因 す る 疑 い が 最 も濃 厚 で あ り,V.choleraenon-O1 non-O139下 痢 症 で も コ レ ラ の 場 合 と 同 様 な こ と 平成9年10月20日

(8)

が 起 こ っ て い る こ と が 推 察 さ れ る. エ ル トー ル コ レ ラ 史 上 最 大 の 流 行 と な っ た 南 米 大 陸 の コ レ ラ や,誰 し もが 予 想 だ に し な か っ たV. cholerae O139"Bengal"に よ る 新 型 コ レ ラ の 突 発 な ど,こ れ か ら もVcholeraeは 新 興 ・再 興 感 染 症 と し て,様 々 に 姿 を 変 え,我 々 に 脅 威 を 与 え 続 け る こ と で あ ろ う. 本研 究 は平 成9年 度 国 際 医療 協 力研 究(腸 管感 染 症 の発 症,診 断,治 療 お よ び予 防 の研 究)委 託 費 の補 助 を受 けて 行 った もので あ る. 文 献 1) 島 田 俊 雄, 荒 川 英 二, 竹 田 美 文: 新 型 コ レ ラ 菌 Vibrio cholerae O139 Bengalに よ る コ レラ の流 行二. 日細誌1995; 50: 1005-1017.

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diar-rhea in Lima, Peru. J Clin Microbiol 1994 ; 33:

2715-2722.

14) 堤 英 明, 甫 立 八 洲, 大 高 道 也, 島 田 俊 雄: 入 国 下 痢 患 者 由 来 のVibrio cholerae non-O1に っ い

て. 感 染 症 誌1995; 69: 637-641. 15) 山 井 志 朗, 沖 津 忠 行, 勝 部 泰 次: 河 川 水 に お け る Vibrio choleraeの 検 出 状 況. 感 染 症 誌1996; 70: 1234-1241. 16) 白 石 祥 吾, 武 田 浩 二, 多 賀 賢 一 郎, 平 田 堅 司, 林 和, 本 田 武 司: 輸 入 冷 凍 魚 貝 類 に お け るVibrio choleraeの 汚 染 状 況 と毒 性 産 生 性 に つ い て. 感 染 症 誌1996; 70: 175-1179. 17) 島 田 俊 雄: ナ グ ビ ブ リ オ. 総 合 食 品 安 全 事 典 編 集 委 員 会 編, 総 合 食 品 安 全 事 典, 産 業 調 査 会 事 典 出 版 セ ン タ ー, 東 京, 1994; 1009-1012. 18) 島 田 俊 雄: 最 近 注 目 さ れ る 感 染 症, コ レ ラ. 臨 床 科 学1997; 33(9): (印 刷 中). 感 染症 学 雑 誌 第71巻 第10号

(9)

Distribution

of Serogroups

of Vibrio cholerae non-O1 non-O139 with

Specific Reference to Their Ability to Produce Cholera Toxin, and

Addition of Novel Serogroups

Shiro YAMAI1), Tadayuki

OKITSU1), Toshio SHIMADA2) & Yasuji KATSUBE3)

1)

Department of Bacteriology and Pathology, Kanagawa Prefectural Public Health Laboratory

2)Department of Enteric Infection 1, National Institute of Infectious Disease 3)Laboratory of Veterinary Public Health, College of Bioresouce Sciences,

University of Nihon

A total of 1898 strains

of Vibrio cholerae non-O1 non-O139, which had been collected

worldwide

for the past 3 year period of 1994-1996, were serogrouped.

The strains were also

examined

for presence of cholera toxin (CT) gene (ctx) and NAG-ST gene, and strains which

carried the ctx were further analyzed for their ability to produce CT. In addition, attempts were

made to establish novel serogroups

for those serologically

untypable strains.

Of those examined,

1,774 strains of V. cholerae non-O1 non-O139 was classified into 128

known serogroups

while 50 strains were found to belong to R type, and the rest of the 74 strains

could not be serotyped.

Distribution

of the serogroups

did not seem to correspond

to either the

strains' geographic

distribution

or sources of isolation.

Of those serologically

untypable

strains, 38 novel serogroups

(O156-O193) were established

and added to our reference of V. cholerae antigenic schema. It was also found that antisera raised

against

many V. cholerae strains

included R antibodies.

This indicates that any V. cholerae

antisera for diagnostic purpose should be absorbed with the reference R strains, CA385, before

use.

There were luminescence

producing strains among those sucrose and VP reaction negative

strains. Subsequent

DNA/DNA

homology

analysis revealed

that they were identified

as V.

cholerae. This points to a possibility

that strains tentatively

identified

as Vibrio mimicus by

conventional

biochemical

tests may have included luminescent

strains of V. cholerae. It is thus

highly recommended

that strains in question should be tested for the luminescence production in

order to differentiate

V. cholerae from V. mimicus.

Of those 1989 strains examined, 37 strains (ca. 2%) were found to produce CT. Interestingly,

CT producing strains were prevalent in serogroup O141

; 10 strains out of 16 strains (63%) were

positive for CT. The evidence calls for a caution to possible occurrence

of cholera-like

diarrhea

caused by V. cholerae O141 in the future.

Table  1  Source  of  1,898  strains  of  Vibrio  cholerae non-O1  non-O139 生 理 ・生 化 学 的 性 状 テ ス ト:Sakazaki  & Shimadaの 方 法3)に よ っ て 検 査 し た.ま た,発 光 性 (ル ミネ セ ン ス)は ト リ プ ト ソ ー ヤ 寒 天 培 地(日 水) で,22℃ で1夜 培 養 し た 後,暗 室 で 観 察 し た
Table  2 O-serogroup  of  1,898  strains  of  Vibrio  cholerae  non-O1  non-O139  isolated  from  various  sources
Table  3  Reference  strains  for  new O-serogroup  of Vibrio  cholerae
Table  5 O-serogroups  of  NAG-ST  gene  positive strains  of  Vibrio  cholerae  non-O1  non-O139

参照

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