サ ル コ イ ドー シ ス 肺 リ ンパ 球 のPropionibacterium
acnes
に 対 す る 反 応 性 に 関 す る 研 究
第
2
編
P. acnesに
対 す る 反 応 性 と 臨 床 検 査 と の 相 関
岡山大学 医学部 第二 内科 学教 室(指 導:木 村郁 郎教 授)
前
田
剛
(平成5年3月26日
受稿)
Key words: Sarcoidosis, alveolar-lymphocyte, P. acnes, Angiotensin-converting enzyme, Gallium-scintigraphy
緒 言
サ ル コ イ ドー シ ス(サ 症)は 肺 を 中 心 に 全 身 性 に 類 上 皮 細 胞 肉 芽 腫 の 形 成 を来 す 原 因 不 明 の 疾 患 で あ る.近 年,気 管 支 肺 胞 洗 浄 法(Bron choalveolar lavage: BAL)の 発 達 に よ り,肺 病 巣 に お け る免 疫 担 当 細 胞,な か で も リン パ 球 の 異 常 が 明 らか に さ れ て き た.即 ち リ ン パ 球 数 の 増 加,CD4+T-cellの 著 明 な 増 加1)2),3H-thymidineの 取 り 込 み 亢 進3),Interferon4), Interleukin-2 (IL-2)分 泌 の 亢 進5)な ど,肺 病 巣 に お け るT-cell特 にCD4+T-cellの 活 性 化 と増 殖 亢 進 が 認 め ら れ て い る.し か し,こ れ ら リ ン パ 球 の 活 性 化 の 原 因 に つ い て は依 然 と して 不 明 で あ る.一 方,サ 症 病 巣 か ら高 頻 度,高 濃 度 に 分 離 さ れ るPropionibacterium acnes( P. acnes)6)7)に て サ 症 肺 リンパ 球 を刺 激 培 養 した と こ ろ,幼 若 化 反 応 の 亢 進8)と と もにIL-2産 生 の 亢 進 を来 す こ と9)が明 らか に な った.今 回はP. acnes の 本 症 の 臨 床 病 態 へ の 関 与 を検 討 す る た め に こ の 肺 胞 リ ン パ 球 のP. acnes刺 激 幼 若 化 反 応 と 臨 床 成 績 と の 相 関 に つ い て 検 討 し た. 対 象 対 象 は 未 治 療 サ 症34例 で,男 性20例,女 性14 例,年 齢 は19歳 か ら70歳,中 央 値 は48歳 で あ る. 喫 煙 者14例,非 喫 煙 者20例 で,組 織 診 断 確 定 例 は28例,他 は 臨 床 成 績 に よ っ た.胸 部x線 病 型 で は,両 側 肺 門 リ ン パ 節 腫 大 の み の Ⅰ型11例, 両 側 肺 門 リ ンパ 節 腫 大 と肺 野 異 常 陰 影 を伴 う Ⅱ 型16例,肺 野 異 常 陰 影 の み の Ⅲ 型4例,異 常 の 認 め られ な いO型3例 で あ っ た. 検 査 方 法 BALは 気 管 支 フ ァ イバー ス コー プ を使 用 して, 型 通 り生 食50mlに て4回 洗 浄 し,有 核 細 胞 を 得 た.May-Giemsa染 色 に て 有 核 細 胞 を分 類 し, 洗 浄 液 あ た りの リン パ 球 数 を 算 出 した.一 方, リ ンパ 球subsetの 分 類 に はFITC標 識 モ ノ ク ロ ナ ー ル 抗 体(Ortho社 製OKT-3, 0KT-4, OKT-8)を 氷 中 に て60分 間 反 応 させ た 後,ス ペ ク トラ ム Ⅲ に て そ れ ぞ れ の 陽 性 率 を測 定 した2). P. acnes刺 激 リン パ 球 幼 若 化 反 応 はBAL液 中 りン パ 球1×105にP. acnesのpyridine extract residue (P. acnes PER)を5.0μg/mlに
な る よ う加 え,6日 間 培 養 後,3H-thymidineを 加 え更 に7時 間培 養 し,リ ン パ 球 に 取 り込 まれ
た3H-thymidineのdpmを 測 定 し た.リ ンパ 球 幼 若 化 率 はP. acnes添 加 培 養 リンパ 球 のdpm
を無 添 加 培 養 リンパ 球 のdpmで 除 してstimula tion indexと して 求 め た8).IL-2産 生 能 の 測 定 は P. acnes PERを 加 え て2日 間 培 養 し,上 清 の IL-2活 性 をCTLL-2細 胞 に よ るbioassayに
て 測 定 し た9).血 清angiotensin converting 665
666 前 田 剛
enzyme (ACE)活 性 の 測 定 は 笠 原 氏 の 変 法 に よ り,リ ゾ チ ー ム 活 性 は 血 清 をMicrococcus lysodeikticusに 反 応 さ せ る 比 濁 法 に て 測 定 し た. Immunosuppressive acidic protein (IAP)は 一 元 免 疫 拡 散 法 に て 測 定 し た.ま た,67Gaシ ン チ グ ラ フ ィ ー は67Gaを 静 注 後,72時 間 後 に ス キ ャ ニ ン グ を 施 行 し,肺 野 へ の 集 積 が 明 ら か な も の を 陽 性 と し,backgroundと 差 が な い も の を 陰 性 と し た.PPD皮 膚 反 応 はPPD 0.1mg/0.1 mlを 前 腕 皮 内 に 注 射 し,48時 間 後 の 紅 斑 の 長 径 が10mm以 上 を 陽 性 と し,10mm末 満 を 陰 性 と し た. 表1 サ ル コ イ ドー シ ス症 患 者 の臨 床 検査 に及 ぼ す 喫 煙 の影 響 ()症 例 数
* Immunosuppressive acidic protein
結 果 1. 喫 煙 の 影 響 全 症 例34例 の 幼 若 化 率 は1.53±0.77(平 均 値 ±標 準 偏 差 値)と 対 照 健 常 者15例 に お け る 0.90±0.39に 比 して 有 意 に 亢 進 が み られ た(p< 0.01).こ の うち 喫 煙 者14例 で は1.53±0.83,非 喫 煙 者20例 で は1.57±0.69と 両 者 間 に 全 く差 は なか っ た.BAL液 中 リンパ 球 数 は 非 喫 煙 者5.1± 4.7×104/ml喫 煙 者4.7±4.5×104/mlと 両 者 間 に 差 は 認 め られ な い もの の,CD4/CD8比 は 非 喫 煙 者 の5.6±3.2に 対 し喫 煙 者 は4.3±2.7と 低 下 が 見 ら れ た.更 に 肺 機 能 の うちDLCOは 非 喫 煙 者99±15に 対 し喫 煙 者79±17と 著 明 な 低 下 が 認 め られ た(p<0.01)(表1).そ こ で 以 下 の 臨 床 成 績 と の 対 比 に お い て は,非 喫 煙 者20例 に お い て 検 討 した. 2. 臨 床 検 査 成 績 との 相 関 胸 部X線 病 型 別 に 検 討 す る とO型2例 の 幼 若 化 率 の 平 均 値 は1.06, Ⅰ型7例1.32, Ⅱ型9 例1.79, Ⅲ 型2例 で は1.95で あ っ た.こ れ を肺 野 病 変 の 有 無 に て 対 比 して み る と,肺 野 病 変 を 有 す る Ⅱ 及 び Ⅲ 型 の11例 で は1.82±0.53で,肺 野 病 変 の 無 いO及 び Ⅰ型9例 の1.26±0.71に 比 して,や や 高 値 で あ っ た(p<0.1). 幼 若 化 率 と血 清 中 酵 素 活 性,IAP量,BAL液 中 リン パ 球 数,肺 機 能 との 相 関 を 検 討 し た(表 2).幼 若 化 率 と有 意 な相 関 が 認 め ら れ た の は, リ ンパ 球 数(p<0.05)で,な か で もCD4+T-cell 数 は,相 関 係 数0.603 (p<0.01)と,よ り良 好 な 正 の相 関 が 認 め られ た(図1).更 にIL-2産 生 と も相 関 係 数0.635 (p<0.05)と 正 の相 関 が 見 られ た(図2).し か しCD8+T-cell数,CD4/ CD8比 とは 相 関 が 認 め られ なか っ た.そ の 他 血 清 ACE,リ ゾ チ ー ム 活 性,IAP量,肺 機 能 との 間 に も相 関 は 見 ら れ な か っ た.PPD皮 膚 反 応 陰 性 10例 の 幼 若 化 率 は1.67±0.57と 陽 性10例 の
1.46±0.75に 比 し て差 は な か っ た.67Gaの 肺 野 へ の 取 り込 み 陽 性5例 で は1.89±0.49で,陰 性 15例 の1.46±0.69に 比 して 平 均 で 高 値 が 認 め ら れ た も の の,有 意 差 は 認 め られ な か っ た.
表2 非 喫 煙 サ ル コイ ドー シス症 患者 にお け る幼 若 化 率 とBAL所 見,血 清 学 的 検査,肺 機 能 との相 関
* Immunosuppresive acidic protein n. s.: not significant 図1 非 喫 煙サ ル コ イ ドー シ ス症 患 者 に おけ る幼 若 化率 とBALF中CD 4陽 性T細 胞数 との 相 関 図2 非 喫 煙 サ ル コ イ ドー シ ス症 患者 に お け るIL-2産 生 と幼 若 化率 との 相 関
BAL液 中 リン パ 球 数,血 清ACE活 性,67Ga シ ン チ グ ラ フ ィ ー の3種 の 検 査 成 績 の うち,異 常 値 を示 した 検 査 項 目数 と幼 若 化 率 の 相 関 を検 討 し た(図3).異 常 値 とは,対 照 健 常 者 の 平 均 値+2標 準 偏 差 値 以 上,す な は ち,BAL液 中 リ ン パ 球 数 は3×104/ml以 上,血 清ACE活 性 は 21.4u以 上,67Gaシ ン チ グ ラ フ ィー 陽 性 を もっ て 判 定 し た.3項 目 と も に 異 常 の 認 め られ た4 例 の 平 均 は2.07±0.37, 2項 目 異 常 の5例 で 1.81±0.56, 1項 目異 常 の6例 で1.62±0.65, 異 常 項 目無 し5例 で は0.85±0.34で あ っ た.即 ち,3項 目 異 常 例 で最 も高 く,項 目数 の 減 少 と 共 に 幼 若 化 率 も低 下 が み られ,3項 目 異 常 例, 2項 目異 常 例 は い ず れ も異 常 項 目 の 無 い 症 例 に 比 し て 有 意 な高 値 が 認 め られ た(p<0.01, p< 0.02).さ ら に 対 照 健 常 者 の そ れ と比 較 す れ ば, 3項 目異 常 例 で はp<0.001, 2項 目異 常 例 及 び 1項 目異 常 例 で は い ず れ もp<0.025と 有 意 な高 値 を示 し た.し か し異 常 項 目の 無 い例 で は 対 照 健 常 者 と全 く差 が な か っ た. 考 案 肺 サ 症 で は 肺 胞 リン パ 球 数 の 増 加 が 著 明 で あ り,な か で もCD4+T-cell,即 ち,helper T-cell
668 前 田 剛 は 活 性 化 さ れ てIL-2やInterferonを 自然 放 出 し て い る1)2)4).そして リンパ 球 の 増 多 は 肺 サ 症 の 活 動 期 に お い て 強 く,寛 解 期 や ス テ ロ イ ドホ ル モ ン の 投 与 に よ り低 下 す る1)2)10).これ らの 事 実 か ら,肺 胞 リ ン パ球 の 増 多 は サ 症 肺 病 巣,即 ち, 胞 隔 炎,類 上 皮 細 胞 肉 芽 腫 の 形 成 に 深 く関 わ っ て い る こ と が 推 察 さ れ て い る1).著者 ら はサ 症 の 肺 胞 リン パ 球 にP. acnesを 添 加 培 養 す る と幼 若 化 反 応 が 亢 進 す る こ と を見 い だ し,こ の 反 応 亢 進 は 他 の 間 質 性 肺 疾 患 に お い て は 認 め ら れ ず11),か つ ま た他 の 細 菌 壁 成 分 に も反 応 しな い こ と12)からサ 症 に特 異 的 な所 見 で あ るこ とを報 告 し て きた.今 回 は従 来 よ りサ 症 に お い て 異 常 が 認 め られ る各 種 の 臨 床 成 績 と リ ンパ 球 幼 若 化 率 と の 関 係 に つ い て検 討 し た. 図3 異 常 検 査 項 目数 別 に み た幼 若 化 率,検 査 項 目;① 血 清ACE②BALF中 リンパ球 数 ③ Gaシ ン チ グ ラフ ィー の 肺 野へ の 集 積 BAL液 中有 核 細 胞 に つ い て検 討 す る場 合,喫 煙 習 慣 の 影 響 が 問 題 と な る.喫 煙 は 健 常 者 に お い てBAL液 中 の 有 核 細 胞,特 に マ ク ロ フ ァ ー ジの 増 加 を示 す こ とは,異 論 の 無 い と こ ろ で あ る.さ らに リ ンパ 球 に お い て も,そ の 絶 対 数 の 増 加 に対 して は 賛 否 両 論 が 見 られ る もの の,CD4/ CD8比 の低 下 を招 来 す る こ とはほ ぼ普 遍 的 な事 実 で あ る13)14).サ症 に お い て は,喫 煙 の 有 無 に 関 わ らず 肺 胞 リン パ 球 数,CD4/CD8比 は 亢 進 が 認 め られ て い る2)15).今回 の 成 績 に お い て は サ 症 非 喫 煙 者 は サ 症 喫 煙 者 に 比 してCD4/CD8比 の 高 値, IL-2産 生 の 亢 進 傾 向 が 見 られ た が,有 意 の 差 で は な か っ た.そ の他,喫 煙 はBAL液 中 リンパ 球
のPHA, Con A刺 激 に よ る幼 若 化 反 応 を抑 制 し16),マ ク ロ フ ァ ー ジ のACE産 生 を 亢 進 させ る17)な ど肺 内 の 免 疫 担 当細 胞 に 多 大 な 影 響 を 与 え る.の み な ら ず 喫 煙 はGalliumの 肺 へ の 取 り 込 み に促 進 的 に 作 用 す る こ と18),血 清ACEの 上 昇 作 用 さ え も あ る と報 告 され て い る19).我 々 の 成 績 に お い て は 血 清 酵 素 活 性 に差 は 認 め られ な か っ た が,肺 機 能 に お い て 喫 煙 者 にDLCOの 明 らか な 低 下 が 認 め られ た.以 上 の 事 実 か ら,肺 胞 リン パ 球 の 機 能 異 常 を論 ず る に 当 た り,喫 煙 の 因子 を無 視 す る こ と は 不 可 能 と考 え,以 後 の 臨 床 成 績 との 対 比 に お い て は,過 去 に も一 度 の 喫 煙 歴 も有 し な い,非 喫 煙 者 に の み 限 定 して 行 っ た. 胸 部X線 像 に て 肺 野 に 異 常 陰 影 の 認 め られ る 症 例 で は 幼 若 化 率 の 亢 進 傾 向 が 見 ら れ た.し か しPPD皮 膚 反 応,Galliumの 肺 野 へ の 取 り込 み の 有 無 に よ る差 は 明 らか で なか っ た.BAL液 中 リン パ 球 数 とは 正 の 相 関 が,更 にCD4+T-cell 数 とは 非 常 に 良 好 な 正 の 相 関 が 見 られ た.し か しCD8+T-cell数 と は 無 相 関 で あ っ た.従 っ て, P. acnesの 刺 激 を受 け 幼 若 化 を来 す の はCD4+ T-cellで あ る こ とが窺 わ れ た.更 に,IL-2産 生 の 亢 進 と も正 の 相 関 が 得 ら れ た こ とか ら,サ 症 肺 病 巣 に 存 在 す る リンパ 球 はP. acnesの 感 作 を受 け て お り,か つ 肺 局 所 に てIL-2を 分 泌 し, 増 殖 が 行 わ れ て い る可 能 性 を示 す もの で あ る. そ の他,サ 症 の 活 動 性 の 指 標 と して 従 来 よ り報 告 さ れ て い る 血 清ACE活 性,リ ゾ チ ー ム 活 性, 及 びIAPと の 相 関 は 認 め られ な か っ た. 幼 若 化 率 は 活 動 期 肺 サ 症 で よ り亢 進 が 認 め ら れ る こ と を報 告 して き た が8),サ 症 の 活 動 性 を論 ず る に あ た り,そ の 指 標 が 常 に 問 題 と さ れ て き た.そ こ で,肺 サ 症 の 活 動 性 の 指 標 と して,比 較 的 普 遍 的 な評 価 を 得 て い る 検 査 成 績 の う ち BAL液 中 リ ン パ 球 数10),血 清ACE活 性20), 67Gaの 肺 野 へ の 集 積21)の3項 目 に つ い て ,異 常 を示 し た 項 目数 別 に 幼 若 化 率 を検 討 し た.即 ち, 3項 目す べ て に 異 常 を示 した 症 例 は い ず れ も 異 常 を 示 さ な か っ た症 例 に 比 し て,活 動 性 の 高 い こ と を よ り客 観 的 に 示 す も の で は な い か と考 え ら れ る.そ の 結 果 は3項 目 異 常 を示 し た4例 は
い ず れ も幼 若 化 率 の 異 常 亢 進 を示 し,O項 目 の 5例 は全 て 正 常 値 で あ っ た.そ して そ の 平 均 値 に お い て も異 常 項 目数 の 多 い順 に 高 値 を示 した. こ の こ とは,肺 胞 リン パ 球 のP. acnes刺 激 に よ る 幼 若 化 率 が 肺 サ 症 の 活 動 性 の よ り客 観 的 な 指 標 と して 評 価 さ れ るべ き もの で あ る と考 え ら れ た. 結 論 サ 症 肺 胞 リン パ 球 にP. acnesを 添 加 培 養 す る と リ ンパ 球 幼 若 化 反 応 の 亢 進 が 認 め られ,こ の 幼 若 化 反 応 の亢 進 はBAL液 中の リ ンパ 球 数, 特 にCD4+T-cell数 の 増 加 と強 い 相 関 が 認 め ら れ,か つ,P. acnes刺 激 に よ るIL-2産 生 能 と も 正 の 相 関 が 認 め られ た.そ して 血 清ACE活 性, BAL液 中 リン パ 球 数,肺Gaシ ン チ グ ラ フ イ ー の3種 類 の検 査 の 内 ,異 常検査 項 目の 多い症 例 ほ ど幼 若 化 反 応 の 亢 進 が 認 め ら れ,異 常 検 査 項 目の 見 られ な い 症 例 は 健 常 者 と差 は 認 め られ な か っ た.即 ち肺 胞 リ ンパ 球 の 幼 若 化 率 の 亢 進 は サ 症 肺 に お け る 活 動 性 を 反 映 し て い る事 が 窺 わ れ た. 稿 を終 え るに あ た り,御 指 導 な らび に御 校 閲 を頂 き ま した恩 師木 村 郁 郎教 授 に深 甚 な る謝 意 を捧 げ ま す と共 に,研 究 に際 して 御指 導 いた だ きま した 医療 技術 短 期 大 学部 中 田安 成教 授 に 深 謝致 し ます.
文
献
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