動物筋肉組織中の蛋白加水分解酵素について
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(2) 81. 動物 筋 肉組織 中 の蛋 白加 水分 解 酵 素 に つ い て 渡. 辺. 敬. Ontheproteasesbeinginanimalmuscletissue. TakashiWatanabe. 動 物 組 織 中 の蛋白 加 水 分 解 酵 素 は 組 織 の 蚕 白代 謝 に関 係 が あ る とし て,多. く研 究 され て. い るが,筋 肉組 織 中 の蛋 白加 水分 解酵 素 に つ い て は 兎 の横 紋 筋 に つ い て知 られ て い るが1), 昆 虫 に つ い て は殆 ん ど検 討 され て い な い2).こ. こで は 蚕 の筋 肉組 織 の 蛋 白加 水 分 解 作 用 を. 兎 の それ と比 較 しつつ 検 討 した. 実 1)蛋白. 加 水分 解 活性 測 定.主. は,酸 性 側 で はNIloク. ヘ モ グ ロビ ン2.5%溶. びN/10燐. 基本 とした 方 法 で 行 つ た.基 質 と して. 液,ア. 酵 素 溶液1mlを. 加 え,そ. (原 液5倍 稀 釈)1m1を. 塩緩. 酸 塩 緩 衝 液(pH. カ ゼ イン2・5%溶. 液 を用. 混 じ,一 定 温 度 に て5時 間保 温 し,0・4Mト. の濾 液1m1に0.4MNaeCO3溶. 加 え,35℃. びN/10醋酸. ル カ リ側 はN/5燐. 酸 カ リー硼 砂緩 衝 液(pH8.0〜9.2)の. いた.基 質 溶 液1m1と ・ル醋酸2m1を. にAnson法3)を. エ ン酸 ソー ダー塩 酸 緩 衝 液(pH1.o〜3.3)及. 衛 液(pH3.2〜6.2)の 6.8〜8.0)及. 験. に て20分. 液5ml及. リク. びFolin試. 温 め,光 電 比 色 計 に て660mμ. 薬. の フ ィル. ターを 用 い,蒸 溜 水 に対 して比 色 し た 。 呈 色 が 阻 害 され て上 記 の 方法 が 用 い られ ぬ場合 に は ト リク ロル醋酸 に よ る除 蚕 白後 の 濾液 の280mμ. に お け る吸 収 を 光 電 光 度 計 で 測 るか,. 叉 は 前 記 濾 液 の 全 窒 素 と基質 の全 窒 素 との比 で活 性 を 測 つ た.い. つ れ も試 験 値 よ り盲検 値. を減 じ て活 性 値 とした. 2)酵. 素 標 品調 製.成. 熟 した 兎 を 放 血 致 死 せ しめ,脊 部 及 び 前 ・後 肢部 の 横 紋 筋 を と. り,脂 肪 組 織 を 除 い た もの,及 び5令7乃. 至8日. 目 の蚕 の 皮 膚 に 附 着 して い る 筋 肉組 織 か. ら種 々の 腺 や 消 化管 を 除 き,水 洗 し て体 液 を 除 い た もの を 用 い た.抽 出液 と しては,(1) N/10硫. 酸 溶 液,(2)o.2M塩. 化 カ リを 含 むN/5燐. 化 カ リを 含 むN/5燐. 酸 塩 緩 衝 液(pH8。0)を. 酸 塩 緩 衝 液(pH6・9),(3)1M塩. 用 い て,図1の. 如 き抽 出法 に よ り得 た ア ル. ブ ミン及 びグロブリン に つ い て,そ の蛋 白加 水 分 解 活 性 を調 べ た.そ. の結 果,凡 て の ア ル. ブ ミンは全 く活性 を有 せ ず,酸 抽 出 及び ア ル カ リ性 燐 酸 塩 緩 衝 液 抽 出グロブリン 酸 塩 抽 出グロブリン に比 し,は 燐 酸 塩 緩衝 液(pH6.9)抽. る か に 活 性 が 低 い の で,以 下0・2M塩. 出 グ ロブ リン を酵 素 標 品 として 用 い た ・ 結. 1)最. 適 温 度 は35℃. で あつ た.. 果. は 中性 燐. 化 カ リを含 むN/5.
(3) 82. 図1.. 2)pHに. 図2.. よ る変化,図2に. 上記酵素. の蛋 白加 水 分 解 活 性 に対 す るpHの 標 示 した.用 Neurathの. 酵 素標品 に つ い て の 活性 曲線 の 酸 性 側 最 適 域 の 部分 はSnokeand. び8.8附. 害.h記. 一 … 兎標 品. 活 性 はチロシン10‑7g当 量/mlの 吸 光度 を単、 位 と して,保 温 時 間5時 間 に おけ る標品 蛋 白態 窒 素mg当 りの吸 光 度 を もつ て表 した.. 得 た 曲線1)と よ く一一致 す る.兎 酵 素 標 品 はpH3.8及. 品 はpH3.0及 3)阻. 影響 を. いた 緩 衝 液 は 活 性 測定 の項 に. 述 べ た も ので あ る.兎. 一一 一 蚕 標i品. び8.3附. 近 に,蚕 酵 素 標. 近 に それ ぞれ 活 性 の最 適 域 を有 して い る.. 酵 素 の性 質 を知 るた め阻 害 剤 として 青 酸 カ リ及び モ ノ ヨ ー ド醋酸を 用. い て活 性 に対 す る影響 を調 べ た結 果 を表1に 記 した.青. 酸 イオ ンに対 して は 兎酵 素 標 品 の. 活 性 が 減 ず るに 反 して,蚕 酵 素標品 で は そ の 活性 が増 大 す る.モ し ては,双 方 と も阻害 を うけ る. 表1. CN一. cH21Coo'一. 濃 度0.6×10‑49当. 濃 度o.6×10‑39当. 量/m1. 量/ml. ノ ヨ ー ド醋酸 イオ ンに 対.
(4) 83. 考. 察. 兎 酵 素 標 品 の 活 性 と 蚕 酵 素 標 品 の そ れ とを 比 較 す る と,同 りの 活 性 が 蚕 標 品 は 兎 標 品 の 約3倍 か,又. あ り,こ. 一 処 理 後 の 単位 蛋 白態 窒 素 当. の こ とは 組織 蛋 白 中 の 存 在 の濃 度 が 大 で あ る. は 抽 出 さ れ や す い こ とを 示 し て い る と思 わ れ る.. 組 織 内蛋白 加 水 分 解 酵 素 は 普 通,カ dasesを. テ プ シ ン と 呼 ば れ,多. 綜 括 的 に 称 し て い る も の と さ れ て い る.本. く のproteinases及. 報 告 の 場 合 に2つ. びpepti‑. の 標 品 が 共 に2つ. の. 最 適 域 を 有 し てい る こ とは い つ れ の標 品 も数 個 の 蛋 白 加 水分 解 酵 素 の混 合 物 で あ る こ とを 示 し て い る も の と思 わ れ る.Hedin5)は 他 はpH7‑8に. 脾 中 に2つ. 最 適 域 を 有 す る と述 べ て い る.筋. の 酵 素 を 認 め,そ の1つ 肉 の 場 合 に も 酸 性 側,ア. は 約pH4に, ル カ リ側 に 各 々. 1つ の 最 適 域 を 有 し て い る こ とは 組 織 内 蛋 白 加 水 分 解 酵 素 の 類 似 性 を 表 し て い る と考 え ら れ る.兎. 及 び 蚕 標 品 で 各 最 適 域pHが. 異 つ て い る の は,種. 件 に よ る綜 合作 用 の 結 果 の た め で あ るか は 単 シ ア ン イオ ン に 対 す る挙 動 か ら,蚕. 的差 異 に よ るか或 い は種 々の条. 一 酵 素標品 を 分 離 し て い な い の で 不 明 で あ る.. 標 品 はSH基. を 有 す る 酵 素 と考 え ら れ る が,兎. 標 品. の 場 合 の 阻 害 に つ い て の 説 明 は 未 だ 行 い 得 な い.. 〕 要. 約. 兎 及 び 蚕 筋 肉 組 織 を 中 性 緩 衝 液 で 抽 出 し 得 たグロブリン 蚕 標 品 の 場 合 に はpH3.0及. び8.8附. 区 分 に 蛋 白 加 水 分 解 活 性 を 認 め,. 近 に 最 適 域 を 有 し 最 適 温 度 は35℃. ン 及 び モ ノ ヨ ー ド醋酸 に よ る 影 響 か ら,蚕. 標 品 はSH基. で あ つ た.シ. を有 す る蛋 白 加 水分 解 酵 素 を含 む. こ と を 認 め た. 附 記:本. 研 究 に 対 し て 御 教 示 を 戴 い た 渡 辺 忠 雄,林. 文'献 1)J.E.SnokeandII.Neurath:J.Bio1.Chem.,187,127(1950)・ 2)吉. 原 典 了・:九大 農 学 部 学 芸 雑 誌,14,537(1954).. 3)M.L.Anson:J,Gen.Physiol.,22,79(1939). 4)萩. 原:標 準 生 化 学 実 験,p.207(1953).. 5)S.G.Iledin:J.Physio1.,30,155(1904).. ア. 勝 哉 氏 に 謹 ん で 感 謝 致 し ま す..
(5) 84. Summary It was and. found. of silkworm. regions. at pH 3.0 and. 8.3 in the either. use. globulin. of rabbit. fractions buffer. 8.8 in the. had. extracted. had proteolytic. use of silkworm. preparation.. These. muscle. activity preparation. optimum. tissues. ; there and. of rabbit. are. optimum. at pH 3.8 and. temperature. are. 35°C in. preparation.. It was group. that. by neutral. from. concluded effects. that for. silkworm. cyanate. and. preparation monoiodoacetate.. contained. a protease. with. SH.
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