組織 培養 法 を用 い た肺 癌 の細 胞 生 物 学 並 び に治療 に関 す る研 究 第
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(2) 906. 岸. 本. 信. 康. 図2 図1. SBC‑2株. SBC‑3株 H‑E染. 由 来 患 者 喀 痰 の パ パ ニ コ ロー 染 色. 由来患者 の気管 支鏡 的生検組織 の 色 標 本.×400倍.. 標 本.×1000倍. の ち,RPMI 19日,転. 移 を有 す る 骨 髄 穿 刺 液 を 採 取 し て 初 代. 培 養 を 開 始 し た.COMP療. 法 に よ り部 分 寛 解 が. 得 ら れ た が,そ の 後 増 悪 し,VP‑16,. 洗 浄 し培 養 に 用 い た.. 得 ら れ た 細 胞 を 培 養 液2.5mlに. 浮 遊 さ せ,直 径35. mmの ガ ラ ス 製 ペ ト リデ ィ ッ シュ に 植 え 込 み,37℃, 5%炭. adriamycin. 1640で1回. 酸 ガ ス 培 養 器 に て 静 置 培 養 し た.培. 養液. 併 用 療 法 を施 行 し た が 反 応 を示 さ ず,1982年1. は ス ト レプ トマ イ シ ン100μg/mlと ペ ニ シ リ ンG. 月14日 死 亡 し た.. 100単 位/mlを 含 むRPMI. 4.. SBC‑4株 75歳,男. 部X線. の 由来 した症 例 性.1981年2月. 児 牛 血 清(GIBCO製)を. 高 熱 が 出 現 し た. 胸. 検 査 に て 左 上 葉 に 異 常 影 が 認 め ら れ,気. 管 支 鏡 検 査 に よ り肺 小 細 胞 癌(中 診 断 さ れ た.COMP‑VAN交 が,2コ. 間 細 胞 型)と. 髄 に 転 移 を来. らにaclarubicin,. ACNU併. 用療. 法 を施 行 し た が 無 効 で あ り,1981年12月1日 亡 し た.1981年11月24日,転. 死. 移 を 有 す る骨 髄 穿. SBC‑5株. 65歳,男 た.胸. 部X線. の 由 来 した症 例 性.1982年5月. 2.. 倍 加 時 間. 株 細 胞 を ト リプ シ ン処 理 に て 単 細 胞 に 分 離 し た の ち,ス. トレ プ トマ イ シ ン100μg/mlと ペ ニ シ. リンG100単. 位/mlを 含 むRPMI. 105個/mlに. 検 査 に て 異 常 影 が 認 め ら れ,気. 管. と診 断 さ れ た.1982年7月29日,癌. 性 胸 水 を用. 3.. 死亡 し. 酸 ガ ス 培養 器. 記 試験 管 内に 増 殖 した. 定 し,そ れ を 片 対 数 グ ラ フ にplotし を 描 き,対. 療 法 を 施 行 し た が 無 効 で あ り,8月17日. 5%炭. 腫 瘍 細 胞 を ト リパ ン ブ ル ー 染 色 に て 経 日的 に 算. 間 細 胞 型). い て 初 代 培 養 を 開 始 し た.治 療 と し て はCOMP. 材 料. と 方 法. 初 代 培 養. 肺 小 細 胞 癌 患 者 か ら採 取 し た 癌 性 胸 水 あ る い. コロニ ー 形 成能 二 層軟 寒 天 培 養 法 を用 い て株 細 胞 の コロニ ー. 形 成 を行 っ た.す. じめ0.5%. な わ ち,径35mmの. agar(マ. 牛 血 清+RPMI layerを. プ ラ スチ ッ. #5217)に. あ らか. リ ン コ ロ イ ド製)+15%胎. 1640(総. 量1ml)か. 児. ら な るfeeder. 作 製 し,そ の 上 層 に 細 胞 密 度1×105個/. mlの 株 細 胞 を 含 む0.3%. は 転 移 を 有 す る 骨 髄 穿 刺 液 をFicoll‑Conrayに. 清+RPMI1640細. 重 層 さ せ,比. layerと. 重 遠 沈 法 に よ り赤 血 球 を 除 去 し た. て増 殖 曲線. 数 増 殖 期 の 倍 加 時 間 を 求 め た.. ク ペ ト リデ ィ ッ シ ュ(Lux製,. た.. 児. 胞 数1×. 調 整 した.こ の 単 細 胞 浮 遊 液 を 試 験 管 つ 分 注 し,37℃,. 内 に て 静 置 培 養 し た.上. に 左 胸 部 痛 を 自覚 し. 1640に10%胎. 牛 血 清 を加 え た 培 養 液 に 浮 遊 さ せ,細. 支 鏡 下 の 生 検 に よ り肺 小 細 胞 癌(中. 1.. 加 え た もの を使 用 した.. 瘍 細 胞 の 細 胞 密 度 を 観 察 し つ つ3. ご とに適 量 を更新 した.. に5mlず. 刺 液 を採 取 し て 初 代 培 養 を 開 始 し た. 5.. 〜4日. 替 療 法 を施行 した. ー ス 後 に 脳,肝,骨,骨. し た た め,さ. 培 養 液 は,腫. 1640に20%(v/v)胎. agar+15%胎. 児牛 血. 胞 浮 遊 液1mlを,plating. し て 重 層 さ せ た.37℃,. 5%炭. 酸 ガ ス培.
(3) 肺 小 細 胞癌 細 胞 株 の 樹 立 とそ の生 物 学 的特 徴 養 器 に て2週. 間 静 置 培 養 した の ち,倒. 下 で コ ロ ニ ー 数 を算 定 し た.コ. 立 顕微 鏡. ロニー 形 成率 は. (コ ロ ニー 数/播 種 細 胞 数)×100に 4.. 907. よ って 求 め た.. 株 細 胞 か らの産 生 物 質. 株 細 胞 を 細 胞 密 度5×105個/mlに sue culture flaskを 培 養 器 内 で,培. 5%炭. 酸ガス. 養 液 を更 新 す る こ と な く1週. 静 置 培 養 し た.そ り分 離 し,上. 調 整 し,tis. 用 い て37℃,. の 後,培. 清 中 に含 まれ る各 物質 につ いて 測. 定 し た.測. 定 し た物 質 はadrenocorticotropic. hormone. (ACTH),. antidiuretic. serotonin,. parathyroid. (ADH), (PTH),. calcitonin,. gonadotropin hormone. あ っ た. controlと. melanocyte. (NSE)で. じ ロ ッ トの 培 養 液 の. 養 液 中の 各物 質 につ い ADH, MSH,. serotonin, CEAは. バ イ オ ケ ミ カ ル ・ラ ボ ラ ト リー ズ に,ま はSRLに 5.. 1.. し て,同. HCG,. 北里 たNSE. 初 代 培 養 は1980年1月17日 開 始 した.胸 大 き く,細 有 し,小. 胞 質 に 乏 し く,円. 型 の 核 小 体 が1〜. 形 の 濃 染 す る核 を. 数 個 認 め ら れ た.同. コ 中 で は,大. 多数 の 細 胞 は 浮 遊 増 殖 し,相. 互 に. 1640に. 密 に 結 合 して 細 胞 集 塊 を 形 成 し て い た.株. 細胞. 理 食 塩 水 に て 細 胞 密 度0.1‑ 調 整 し,そ の0.1mlを. の 倍 加 時 間 は53時 間 で あ り,コ. ツベ ル ク リ 植. 2.3%で. そ の1匹. %ホ. 認 め ら れ,78日. 下 腫 瘤,脳,肺,. の 各 組 織 の パ ラ フ ィ ン 切 片 を作 製 し,. ヘ マ トキ シ リ ン,エ. オ ジ ン染 色 に て 腫 瘍 病 変 の. た.こ. ロニ ー 形 成率 は. あ っ た(図3).. 株 細 胞 を ヌー ドマ ウ ス3匹. 部 位 に 腫 瘍 の 形 成 を 確 認 し た の ち 剖 検 し た.10 ル マ リ ン に て 固 定 後,皮. 養 フラス. ー ドマ. ン 針 を用 い て マ ウ ス 背 部 皮 下 に 移 植 し た.移. 肝,腎,脾. 癌 性 胸 水 を用 いて. 水 中 の 癌 細 胞 は リ ン パ 球 よ りや や. 様 に 小 細 胞 癌 の 特 徴 を 有 して い た.培. ウ ス を 用 い た.移 植 す る株 細 胞 はRPMI. 1.0×108個/mlに. SBC‑1株. 細 胞 の パ パ ニ コ ロー 染 色 は 胸 水 中 の 癌 細 胞 と 同. 異 種 移 植. 洗 浄 後,生. 果. 年11月 に は 培 養 継 代 数 は50代 以 上 を数 え た.株. 依 頼 し て 測 定 し た.. 移 植 動 物 と し て はBALB/c‑nu/nuヌ. て1回. 結. antigen. enolase. お,ACTH,. calcitonin,. 株細胞 の増殖 曲線. stimulating. specific. み 同 一 条 件 下 に 置 き,培. PTH,. 図3. chorionic. carcinoembryonic. neuron. て 測 定 し た.な. hormone hormone. human. (HCG),. (MSH),. (CEA),. 間. 養 液上 清 を遠 沈 に よ. に 移 植64日. に 移 植 した と こ ろ,. 目に帽 針 頭 大 の 腫 瘤 形 成 が. 目 に は 腫 瘤 は24×30mm大. の 時 点 で 屠 殺,剖. とな っ. 検 を行 っ た.腫. 瘤の組. 織 像 は 株 由 来 患 者 手 術 切 除 標 本 の 組 織 像 と酷 似. 検 索 を行 っ た.. して お り,小 細 胞 癌 の 特 徴 を有 し て い た.他. 6.. 器 転 移 に つ い て 検 索 し た が,肉. 株 細 胞 の微 細形 態 培 養 細 胞 を 遠 沈 管 に て 集 め,2.5%カ. 緩 衝 グ ル タ ー ル ア ル デ ヒ ドを 用 い4℃ し,1%オ. にて 固定. ス ミ ウ ム 酸 中 で 後 固 定 を行 っ た.上. 昇 ア ル コー ル 系 列 で 脱 水 後,細 シ 樹 脂 で 包 埋 し た.LKB社. ン 酸 鉛 で 二 重 染 色 し た.観 を使 用 し た.. 胞 集塊 をエ ボ キ. 製 ウ ル トラ ミ ク ロ ト. ー ム で 超 薄 切 片 を作 製 し,酢. 鏡H500型. コジル 酸. 酸 ウ ル ニ ル と クエ. 察 に は 日立 電 子 顕 微. 臓. 眼 的 に も組 織 学. 的 に も 転 移 は 認 め られ な か っ た. 株 細 胞 の 産 生 物 質 に つ い て 検 討 し た 結 果(表 1),ACTH. 128pg/ml,. CEA. 1.8ng/mlで. お の お の の コ ン ト ロー ル 値(40pg/ml, 以 下)と. serotonin,. 0.5ng/ml. 比 較 し微 量 な が ら産 生 が 認 め ら れ た.. NSEは43.0ng/mlで ng/ml)に. あ り,. あ り,コ. ン ト ロー ル 値(0. 比 し 明 ら か に 増 加 し て い た.ADH, PTH,. calcitonin,. HCG,. MSHに. つ い て は コ ン トロ ー ル 値 と 比 較 し て ほ と ん ど差.
(4) 908. 岸 表1. 図4. SBC‑2株. 本. 信. 康. 株 細胞培 養液上 清 中の ホル モンお よび腫瘍 マー カー値. の位 相 差 像.×200倍.. 図6. SBC‑2株. を ヌー ドマ ウ ス に移 植 した 後 に形 成. した 腫 瘤 のH‑E染. い た.株. 細 胞 の 倍 加 時 間 は38時 間 で あ り,コ. ニ ー 形 成 率 は1 .3%で ヌー. 色標 本.×400倍.. あ っ た(図3).. ドマ ウ ス へ の 移 植 は3匹. あ っ た.1匹. 中2匹. 目 に は15×14mm大. 剖 検 を 行 っ た.も 植37日. 図5. SBC‑2株. の パ パ ニ コ ロ ー 染 色 標 本.×400倍.. に 増 大 し た た め 屠 殺,. う一 匹 の ヌ ー ドマ ウ ス で は 移. 目に 帽 針 頭 大 の 腫 瘤 を 形 成 し,51日. を 行 っ た.腫. 瘤 の 組織 像 は小 細 胞 癌 の特 徴 的所. 索 し た が,肉. 神 経分 泌顆 粒 は確 認 で きな か っ た.. ら れ な か っ た.. 初 代 培 養 は,1981年7月30日. に転 移 を有 す る 年10月. 継 代 数 は50代 以 上 を 数 え た.培. 養 フ ラ ス コ 中で. は,SBC‑1株 て い た(図4).株 ‑5に. の 時 点 で 屠 殺,剖. には 培養. と 同 様 に 細 胞 集 塊 を 形 成 し浮 遊 し 細 胞 の パ パ ニ コ ロー 染 色 は 図. 示 す ご と く小 細 胞 癌 の 特 徴 的 形 態 を有 して. 検. 臓 器 転 移 に つ い て検. 眼 的 に も組 織 学 的 に も転 移 は 認 め. 株 細 胞 の 産 生 物 質 はACTH. 骨 髄 穿 刺 液 を 用 い て 開 始 し,同. 目に. に 増 大 し,そ. 見 を有 して い た(図6).他. SBC‑2株. 目に. 目 に は8×8mm. は10×8mm大. は な か っ た.ま た,電 子 顕微 鏡 に よ る観 察 では. 2.. に可 能 で. の ヌー ドマ ウ ス で は 移 植23日. 帽 針 頭 大 の 腫 瘤 を形 成 し,37日 大,51日. ロ. citonin 68pg/mlで. 235pg/ml,. あ り(表1),お. ト ロー ル 値(40pg/ml,. 20pg/ml以. cal. の おの の コ ン 下)と. 比較 し. 軽 度 の 産 生 が 認 め ら れ た.NSEは74.0ng/mlで あ り樹 立 し た5株 か し,ADH, CEAに. 中 も っ と も 高 値 で あ っ た.し. serotonin,. PTH,. HCG,. MSH,. つ い て は コ ン トロ ー ル 値 と比 較 して ほ と.
(5) 肺 小 細 胞癌 細 胞株 の樹 立 とその生 物 学 的 特 徴. 図7. SBC‑2株. の透 過 型 電 顕 写 真.SBC‑2株. は,細 胞 質 内に 直 径157nm大 coreの 周 囲 にhaloと. 909. 図9. SBC‑3株. の パ パ ニ コ ロ ー 染 色 標 本.×400倍.. 図10. SBC‑3株 をヌー ドマ ウス に移 植 した後 に 形 成 した腫 瘤 のH‑E染 色 標 本.×400倍.. 細胞. で均 一 なdense. 限 界 膜 を有 す る顆 粒 が. み られ る.. 図8. SBC‑3株. の 位 相 差 像.×200倍. を行 っ た.腫. 瘤 の 組 織像 は燕 麦 細 胞 型小 細 胞 癌. の 特 徴 を 有 して い た(図10).他 ん ど差 は な か っ た.電. 子 顕 微鏡 に よ る観 察 で は. 細 胞 質 内 に 直 径157nm大 の 周 囲 にhaloと. で 均 一 なdense. core. 限 界 膜 を 有 す る神 経 分 泌 顆 粒. 臓 器転 移 につ い. て 検 索 し た が 肉 眼 的 に も組 織 学 的 に も 認 め られ な か っ た. 株 細 胞 の 産 生 物 質 に つ い て 検 討 した 結 果(表. が 認 め ら れ た(図7).. 1),MSH. 3.. コ ン ト ロー ル 値(そ れ ぞ れ1.0pg/ml以. SBC‑3株. 初 代 培 養 は1981年12月19日. に 転 移 を有 す る 骨. 髄 穿 刺 液 を用 い て 開 始 し,1982年2月 継 代 数 は50代 以 上 を数 え た.培. に は培養. 養 フ ラス コ中で. は,細 胞 は フ ラ ス コ底 に 敷 石 状 に 一 層 に 付 着 し, 一 部 の 細 胞 が 浮 遊 し て い た(図8). .株 細 胞 の パ. ml)と. 4.5pg/ml,. 比 較 し た 場 合,軽. が,ACTH, HCG,. NSEは3.2ng/mlで. ADH, CEAは. 度 の産 生 が 認 め られ た. serotonin,. 測 定 した 結 果,ACTHは96.0pg/mlで. し て い た(図9).株. ま たcalcitoninは859pg/mlで. 細 胞 の 倍 加 時 間 は36時 間 で. ヌー ドマ ウ スへ の 移 植 は3匹 移 植9日. あ っ た(図3). 中1匹. pg/ml以. に 可 能 で,. 目 に 帽 針 頭 大 の 腫 瘤 を 形 成 し57日 目 に. は 腫 瘤 は27×32mm大. と な っ た た め,屠. 殺,剖. 検. calcitonin,. 者 血 清 につ いて 各 物 質 を. 値(50pg/ml以. ロ ニ ー 形 成 率 は0.7%で. PTH,. コ ン トロ ー ル 値 と比 較 して ほ と. ん ど 差 は な か っ た.患. パ ニ コ ロー 染 色 で は 小 細 胞 癌 の 特 徴 的 所 見 を 示. あ り,コ. あ り, 下,0ng/. あ り基 準. 下)と 比 較 し て 軽 度 の 増 加 を 示 し, あ り基 準 値(150. 下)と 比 較 し て 著 明 な 増 加 が 認 め られ た. (表2).神. 経 分 泌 顆 粒 は 電 子 顕 微 鏡 に よ る観 察. で は 認 め ら れ な か っ た..
(6) 910. 岸 表2. ND*:. 4.. Not. 本. 信. 康. 株 細 胞が由 来 した患者 血清 中の ホルモ ンお よび腫 瘍 マー カー値. Done. SBC‑4株. な か っ た.. 初 代 培 養 は1981年11月24日. に 転 移 を 有 す る骨. 髄 穿 刺 液 を 用 い て 開 始 し,1982年2月 継 代 数 は50代 以 上 を 数 え た.培. に は 培養. 養 フ ラ ス コ中 で. は,細 胞 は フ ラ ス コ底 に 敷 石 状 に 一 層 に 付 着 し, 一 部 の 細 胞 が 浮 遊 し て い た .株 は50時 間 で あ り,コ っ た(図3).ヌ. 細 胞 の 倍加 時 間. ロ ニ ー 形 成 率 は0.55%で. ー ドマ ウ スへ の 移 植 は3匹. あ に移. 株 細 胞 の 産 生 物 質 に つ い て 検 索 し た 結 果(表 1),ACTH HCG. 147pg/ml,. 39.7. IU/lで. ー ル 値(40pg/ml. あ り,そ. , 20pg/ml以. PTH,. MSH,. か っ た.. 測 定 し た 結 果,い. ml, NSEは9.4ng/mlで れ ぞ れ40pg/ml, して い た が,ADH, HCG,. MSH,. あ り,コ ン トロ ー ル 値(そ 0ng/ml)と. 下). CEAは. コ ン トロ ー ル 産生 は. 者 血 清 につ い て各 物質 を. ず れ も 基 準 値 と比 較 し て 変 化. は な か っ た(表2).電. 子 顕 微 鏡 に よ る検 索 で は. 神 経 分 泌 顆 粒 は 認 め ら れ な か っ た.. 比 較 して 軽 度 増 加. serotonin,. CEAは. れ ぞ れ の コ ン トロ 下,6.6IU/ml以. 値 と 比 較 し て ほ とん ど 差 は な く,NSEの 認 め ら れ な か っ た.患. 149pg/. 81pg/ml,. と 比 較 す る と軽 度 の 増 加 が 認 め られ た.ADH, serotonin,. 植 を試 み た が移 植 細 胞 の 生着 増 殖 は認 め られ な. 株 細 胞 の 産 生 物 質 は(表1),ACTH. calcitonin. PTH,. コ ン トロ ー ル 値 と 比 較 し. て ほ と ん ど差 は な か っ た.患. 考. calcitonin,. 者 血 清 に つ い て各. 察. ヒ ト肺 小 細 胞 癌 の 培 養 細 胞 株 を 樹 立 す る こ と は,細. 胞 の 増 殖 動 態 や 各 種 治 療 に 対 す る感 受 性. 物 質 につ い て測 定 した結 果 は いず れ も基準 値 と. の 差 異 な ど,肺. 比 較 し て 変 化 が な か っ た(表2).電. 究 に 大 き な 意 義 を もつ.1955年,Fischerら1)が. 子顕 微 鏡 に. よ る観 察 で は 神 経 分 泌 顆 粒 は 認 め られ な か っ た. 5.. SBC‑5株 癌 性 胸 水 を用 い て. 開 始 し,同. 年10月 に は 培 養 継 代 数 は50代 以 上 を. 数 え た.培. 養 フ ラ ス コ 中 で は,細. 胞はフラスコ. 底 に 敷 石 状 に 一 層 に 付 着 し,一 部 の 細 胞 が 浮 遊 し て い た.株. り,コ. 細 胞 の 倍 加 時 間 は24時 間 で あ っ た 株 はSBC‑1,. 2,. 4株 と 異 な. ロ ニ ー 形 成 は 認 め ら れ な か っ た.. ヌー ドマ ウ ス へ の 移 植 は3匹 移 植80日. 中1匹. 目 に 腫 瘤 は4×5mm大,87日. 8mm大,100日 屠 殺,剖. 3,. 目 に は12×10mm大. 検 を行 っ た.腫. に 可 能 で, 目 に7×. に 増 大 した の で,. 瘤 の 組織 像 は小 細 胞 癌. の 特 徴 的 所 見 を 示 して い た.他. 臓器転移につい. て 検 索 し た が 肉 眼 的 に も 組 織 学 的 に も認 め ら れ. 療 学 の研. ヒ ト肺 腺 癌 胸 水 か ら 培 養 細 胞 株(MABEN株) を樹 立 し て 以 来,肺. 初 代 培 養 は1982年7月29日. (図3).本. 小 細 胞 癌 の 生 物 学,治. 小 細 胞癌 細 胞 株 樹 立 につ い. て も 多 数 報 告 さ れ て い る が,そ. の生 物 学 的特 性. ま で 詳 細 に 検 索 し た 報 告 は 少 な い2),3),4). 著 者 は,1980年 細 胞 癌 のin 目 的 と し,岡. よ り1982年 に か け て ヒ ト肺 小. vitroに. お け る実 験 モ デ ル の 作 製 を. 山 大 学 第2内. 科 入院 中の 肺 小 細 胞. 癌 患 者 よ り得 ら れ た 材 料 を用 い て 細 胞 培 養 を 試 み,5株. の 細 胞 株(SBC‑1,. の 樹 立 に 成 功 し,さ. 2,. 3,. ら に こ れ ら5株. 性 状 に つ い て 検 討 し た.樹. 立 し た5株. 2,. 4,. 初 代 培 養 に 用 い た 材 料 は,SBC‑1, 胸 水 で あ り,SBC‑2,. 3,. 5). の光顕的. 組 織 亜 型 は 燕 麦 細 胞 型1例(SBC‑3株),中 細 胞 型4例(SBC‑1,. 4,. の生 物 学 的. 間. 5株)で. あ っ た.. 5株 は 癌 性. 4株 は 転 移 陽 性 の 骨.
(7) 肺小 細 胞 癌 細 胞株 の樹 立 とその生 物 学 的 特 徴 髄 穿 刺 液 で あ っ た.SBC‑1〜5株 そ れ ぞ れ53時 間,38時. の倍加 時 間 は. 間,36時. 間,50時. ロ ニ ー 形 成 率 は そ れ ぞ れ2.3%,. 1.3%,. 0.55%,. 0.7%,. 胞 癌 は,固. 0%で. あ っ た.肺. 1例,glucagonは2例,estradiolは12例. であ. っ た と報 告 し て い る.. 間,24. 時 間 で あ り,コ. 911. SBC‑1〜5株. 小細. 型 癌 の 中 で神 経 分 泌 腫 瘍 の 代 表 格 と. は,Carney2),12),. Sorenson3),4). らの 報 告 した 細 胞 株 と 比 較 す る とそ の 増 殖 形 態, 倍 加 時 間,ホ. ル モ ン 産 生 能,NSE産. 生,異. 種移. さ れ て お り5)〜9),種々 の ホ ル モ ン を産 生 す る こ と. 植 性 な ど 生 物 学 的 に よ く似 か よ っ た 特 徴 を も っ. が 知 られ て い るが2),4),10),11),SBC‑1〜5株. て い る.Carneyら12)は,倍. モ ン を産 生 能 を み る と,SBC‑1株. において は. ACTH,. SBC‑2株. に お い て はACTHとcal. citonin,. SBC‑3株. に お い て はMSH,. 株 に お い て はACTH, ACTH,. calcitonin,. ま た,小. SBC‑5に HCGの. のホル. bombesin‑like SBC‑4. お い て は. 産 生 が 認 め ら れ た.. 細 胞癌 の特 徴 的 マー カー の ひ とつ で あ. るNSEに. つ い て は,SBC‑1〜4に. ぞ れ43.0ng/ml, たが,SBC‑5で. 74.0,. お い て それ. 3.2, 9.4と 産 生 が み ら れ. は そ の 産 生 は 認 め られ な か っ た.. 株 細 胞 の ヌ ー ドマ ウ ス 可 移 植 性 は,SBC‑1, 3,. 細 胞 内 のI‑dopa. 2,. 5株 で は 腫 瘤 の 形 成 が 認 め ら れ た が,SBC‑. 加 時 間,増. 殖 形 態,. decarboxylase(DDC),. immunoreactivity(BLI),. neur. on specific enolase(NSE),. brain. creatine. に よっ て小 細 胞 癌. kinase(CK‑BB)量. の 組 織 亜 型 をclassic. SCLCとvariant. 3,. がclassic. 4,. SCLCに,ま. 5がvariant. of. SCLC. に 分 類 す る よ う提 案 し て い る が,そ SBC‑2株. isozyme. れによる と たSBC‑1,. SCLCに. 相 当 す る と考 え. られ る. 現 在,著. 者 ら は,SBC‑1〜5株. を用 い て 肺 小. 細 胞 癌 に 対 す る 代 表 的 な 抗 癌 剤 で あ るadria. 4株 で は ヌ ー ドマ ウ ス へ の 移 植 は で きな か っ た.. mycin,. 株 細 胞 中の 神 経分 泌 顆 粒 存在 の有 無 に つ い て電. 樹 立 し,そ. 子 顕 微 鏡 を 用 い て 検 索 し た結 果,SBC‑2株. 方 策 に つ い て 鋭 意 検 討 中 で あ る13).ま た,本 細 胞. 神 経 分 泌 顆 粒 と 思 わ れ るdense. には. core granuleが. の ヒ ト肺 小 細 胞 癌 株 を樹 立. etoposideに. 対 す る耐 性 株 を. れ ら薬 剤 耐 性 機 序 お よ び 耐 性 解 除 の. 株 を用 い てhuman. み られ た が,そ の 他 の 細 胞 株 に は み られ なか っ た. Carneyら12)は50例. cisplatin,. tumor. よ る新 抗 癌 剤 のphase. clonogenic. II screeningも. assayに 行 わ れ,. さ ら に 本 細 胞 株 よ りモ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 を作 製. し,そ. れ らの 生 物 学 的 性 状 に つ い て 報 告 し て い. し,肺 癌 の 診 断 や 治 療 の 試 み が な さ れ て い る14),15).. る.そ. の 報 告 を み る と,株. 以 上 述 べ て き た よ う に,著. 細 胞 のin. vitroに. お. 者 が 樹 立 し たSBC‑. け る 増 殖 形 態 は50例 中46例 が 細 胞 集 塊 を 形 成 し. 1〜5株. 浮 遊 増 殖,3例. 臨 床 的 研 究 の 貴 重 な材 料 と な っ て お り,今. が 壁 面 付 着 増 殖,1例. 形 態 を示 し て お り,ま 率 は0.1〜30.5%,倍 細 胞 のNSE産. が両者の. た株 細 胞 の コロニ ー 形成 加 時 間 は26〜149時. 間,株. は 肺 小 細 胞 癌 に 関 す る 種 々 の 基 礎 的,. 肺小 細胞 癌 の 研 究 に大 い に貢 献 す る もの と思 わ れ る.. 生 は43株 中42例 に お い て 認 め ら. れ た と報 告 し て い る 。 さ ら に,ヌ. 結 ー ドマ ウ スへ. の 可 移 植 性 は44株 す べ て が 移 植 可 能 で あ り,ま. 後 も. 今 回,著. 論. 者 は1980年. よ り1982年. にか け て ヒ ト. た 株 細 胞 中 の 神 経 分 泌 顆 粒 は 検 討 し た25株 中21. 肺 小 細 胞癌 患 者 の 癌 性 胸水 あ るい は転 移 性 骨 髄. 株(84%)に. 液 よ り5株. お い て 認 め ら れ た と報 告 し て い る.. 神 経 分 泌 顆 粒 に つ い て はSidhuら7)も え て い る が,肺. 小 細 胞 癌 細 胞 株 の30%に. ら れ な か っ た と 報 告 し て い る.肺. 検 討 を加 しか み. 小細胞癌細胞. 2,. 3,. の ヒ ト肺 小 細 胞 癌 細 胞 株(SBC‑1, 4,. 5)を. 樹 立 し た.組. 織 亜 型 は燕 麦. 細 胞 型1例(SBC‑3株),中 間 細 胞 型4例(SBC ‑1 , 2, 4, 5)で あ っ た.培 養 細 胞 の パ パ ニ. 株 の ホ ル モ ン 産 生 能 に つ い て は,Sorensonら4). コ ロ ー 染 色 で は,肺. が12株 の 培 養 液 上 清 中 の ホ ル モ ン 活 性 を 測 定 し. 胞 株 由 来 患 者 の 腫 瘍 細 胞 と よ く類 似 し て い た.. て お り,calcitoninが. SBC‑1〜5株. 増 加 して い た 症 例 は,3. 小 細 胞 癌 の 特 徴 を有 し,細. の 倍 加 時 間,コ. ロ ニ ー 形 成 率,各. 例,ACTHは9例,PTHは3例,luteinizing. 種 ホ ル モ ン 産 生 能,異. hormoneは3例,chorionic. 態 な ど の 生 物 学 的 特 徴 に つ い て 検 討 し た 結 果,. gonadotoropinは. 種 移 植 性,電. 顕 的 特徴 形.
(8) 912. 岸. 本. 信. 康. それ ぞれ の 細 胞株 は おの お の 異 な っ た性 格 を有. 本 論 文 を擱 筆 す るに あ た り,御 懇 篤 な る御 指 導 な らび に 御校 閲 を賜 わ っ た 恩 師 木 村 郁 郎 教 授 に 深 甚 の. して い た. これ ら5株 の ヒ ト肺 小 細 胞癌 細胞 株 は,肺 小. 謝 意 を表 し ます.ま. た終 始 御 懇 篤 な る御 指 導 を賜 わ. っ た 大 熨 泰 亮 助 教 授,平 木 俊 吉 先 生 に 深謝 し ます.. 細 胞 癌 の 生 物 学 的特 異性,薬 剤 耐性,抗 癌 剤 の ス ク リー ニ ン グや モ ノ クロー ナ ル抗 体 を含 む 各. な お 本 論 文 の要 旨は 第25回 日本 肺 癌 学 会 総 会(昭. 種 治療 法 の 臨床 的研 究 にお い て 有 意義 な実 験 系. 和59年,東. 京)に. お い て 発 表 した.. に な る と思 われ る.. 文 1). Frisch an. 2). W,. Carney GD. DN, and. Treat 3). Rep. and. 6). Sorenson. L,. Edelstein. 67,. D, of. small-cell. Hattori. S,. Matsuda. Clinical. and. Clin. EJ:. A. Pathol. Gazdar. AF,. studies. human. epithelium-like. (1955). of. the. 25,. cell. (Maben). derived. from. 1107-1112.. Hansen. M,. biology. of. human. Havemann. TJ,. Noll. K,. Matthews. small. cell. MJ,. lung. Sorenson. cancer.. Cancer. Wurster-Hill. characteristics. D,. of. Curphey. continuous. cell. lines. WW,. from. Cate. small-cell. C. and. Maurer. carcinoma. LH:. of. the. lung.. 906-918. OS,. Brink-Johnsen. carcinoma M,. of. T,. the. Tateishi. morphological. 木 村 佑 介:ヌ. Losli. J M,. GD,. Pettingill. cultures. and. 27-35.. growth 45,. Am. Experimental. Sorenson. (1980). R. lung.. L:. (1983) OS,. Barger. of Broder. Pettengill. Cancer. 5). V,. VidelƒÓv. Isolation. 4). Jentoft. adenocarcinoma. 献. lung.. R,. studies. Cate Cancer. Nishihara. in. CC. relation. to. and. Maurer. (1981). 47,. H. and. its. histogenesis.. LH:. Hormone. production. by. 1289-1296.. Horai. T:. Oat-cell. carcinoma. Cancer. (1972). of. 30,. the. lung.. 1014-1024.. ー ドマ ウス に可 累代 移 植 性 肺 小 細 胞癌 の超 微 形 態 と小 細 胞 癌 の組 織 発 生 に 関 す る考 按.東 京 医. 大 誌 (1977) 35, 97‑114.. 7). Sidhu GS: The ultrastructure. of malignant. epitherial. neoplasms of the lung. Pathol Annu (1982) 17,. 235-266. 8). 下 里 幸 雄:肺. 9). Mooi lung. 癌:そ. WJ,. の 組 織 発 生,分. Dingemans. carcinoma.. KP. and. Usefulness. of. 化,予. van. 後 因 子 に つ い て.日. Zandwijk. electron. N:. 病会誌. Prevalence. microscopy. in. of. lung. (1983). 72,. neuroendocrine. cancer. 29‑57. granules. classification.. in. J Pathol. small. cell. (1986). 149,. 41-47. 10). Becker. KL,. Gazder. continuous Cancer 11). Del with. 12). Carney JD: Cancer. AF,. cultures Lett. Prete. of. (1983) SA,. small. Maurer. cell. DN,. Gazder. AF, and. (1985). small. 45,. DN, cell. Snider. RH,. carcinoma. of. Moore. CF. lung:. and. Silva. induce. and. OL:. Calcitonin. secretion. immunohetorogeneity. by. studies.. 179-185. LH,. carcinoma. Establishment Res. 18,. Carney. Brink-Johnsen of. the. Bepler identification. T. lung. G,. J Guccion of. and. Steroid JG, small. Sorenson Biochem. GD: (1983). Marangos cell. lung. PJ, cancer. 17-ƒÀ-estradior 18, Moody. having. levels. in. patients. 195-196. TW,. Zweig. classic. and. MH. and. variant. Minna features.. 2913-2923.. 13) 木村 郁 郎,大 熨 泰 亮,平 木 俊 吉,宮 本 宏 明:Adriamycin耐. 性 肺 小 細 胞 癌 株 細 胞 の 樹 立 とそ の 性 状.癌. と化. 療 (1987) 14, 830‑836. 14) 中村 邦 彦:肺 癌 関 連 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 の 免疫 組 織 化 学 的解 析.岡 15) 羽 井 佐 茂:モ. ノ ク ロー ナ ル抗 体 に よ る肺 癌 関 連 抗 原 の解 析‑oat. モ ノ ク ロー ナ ル抗 体 の 作 製 とそ の 特 異 性‑.岡. 山 医 誌 (1987) 99, 691‑713. cell肺 小 細 胞 癌 株(SBC‑3)に. 山医 誌 (1989) 101, 965‑966.. 対する.
(9) 肺小 細胞 癌 細 胞株 の樹 立 とその生 物 学 的 特 徴. Studies. on. cell. biology. using Part. and. tissue. 2. Biological. established. chemotherapy culture. cell. cancer. of Internal. University Okayama. (Director:. of five. newly. cell. lines. KISHIMOTO. Department. Okayama. cancer. techniques. lung. Nobuyasu Second. of lung. characteristics. small. 913. Medical. Medicine, School,. 700, Japan Prof.. I. Kimura). Five small cell lung cancer (SCLC) cell lines in culture were established. and designated. as. SBC-1, 2, 3, 4 and 5. SBC-1, 2, 4 and 5 were derived from tumors of intermediate. cell histology,. and SBC-3 was from a tumor of oat cell histology.. a characteris. tic cytomorphology. of SCLC when examined. microscopy. Their biological characteristics otransplantability. All the cell lines represented by papanicolaou. such as doubling time, clonogenic. in nude mice, and capacity of hormone production. each cell line had a distinct biological feature. useful as a tool for cellular pharmacology. staining. and by electron activity, heter. in culture revealed that. The SCLC cell lines reported. of new drugs and drug resistance.. here would be.
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