無承認無許可医薬品中の抱水クロラールの分析
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(2) 無承認無許可薬品中の抱水クロラールの分析. 44. 社会的意義：抱水クロラール（CH）は「第15改正日本薬局方」にも収載された催眠鎮静薬であ る。また劇薬、指定医薬品、処方せん医薬品及び習慣性医薬品にも挙げられている（坐剤以外 の外用剤は指定医薬品及び習慣性医薬品から除かれる）。CHは古くから用いられていたが、味 とにおい、胃の刺激による悪心・嘔吐、呼吸器・循環器系に対する抑制作用、連用による耐性 の出現及び製剤化に難点があった。現在では他の薬物の使用へと置き換えられ、使用量は減少 している。 本報は、質量分析計付きガスクロマトグラフィー（以下GC/MS）及び薄層クロマトグラフィ ー（以下TLC）によるCH分析法を検討したものである。この分析法を用いることにより国内で 初めて無承認無許可医薬品中のCHを検出し、市場からの排除につなげた。. 化学生物総合管理 第 6 巻第 1 号 (2010.3) 43-50 頁 連絡先：〒169-0073 新宿区百人町 3-24-1 E-mail: [email protected] 受理日：2010 年 1 月 12 日.
(3) 45. 無承認無許可薬品中の抱水クロラールの分析. １．はじめに 東京都では薬物乱用防止等の目的で平成 8 年度から違法ドラッグの試買調査を実施し、健康 安全研究センターにおいて薬物成分の分析を行っている。一連の分析結果からは、違法ドラッ グの範疇（フェネチルアミン系・トリプタミン系等）には含まれない、他の医薬品成分を検出 する事例が確かめられた。平成 19 年度の調査では、容器包装等に「SPANISH FLY」や「西班 牙蒼蝿」と記載され、性欲促進効果を謳った液体製剤から、抱水クロラール（以下 CH）を検 出した。一方、スパニッシュフライ（学名 Lytta vesicatoria）の体内に含まれるカンタリジン （図 1）は検出されなかった。. O. OH Cl. O. OH Cl Cl. O O. Chloral Hydrate. Cantharidin. 図１. Fig. 抱水クロラール及びカンタリジンの構造 1. Structures of Chloral Hydrate. and Cantharidin CH は、 「第 15 改正日本薬局方」にも収載された催眠鎮静薬である。また劇薬、指定医薬品、 処方せん医薬品及び習慣性医薬品にも挙げられている（坐剤以外の外用剤は指定医薬品及び習 慣性医薬品から除かれる）。CH は古くから用いられていたが、味とにおい、胃の刺激による悪 心・嘔吐、呼吸器・循環器系に対する抑制作用、連用による耐性の出現及び製剤化に難点があ った。現在では他の薬物の使用へと置き換えられ、使用量は減少している。日本薬局方、アメ リカ薬局方及び中華人民共和国葯典では CH 及びその製剤の確認試験は、水酸化ナトリウム試 液によるクロロホルムの生成を用いた反応のみである。そこで著者らは質量分析計付きガスク ロマトグラフィー（以下 GC/MS）及び薄層クロマトグラフィー（以下 TLC）による CH 分析 法を検討したので報告する。. ２．実験方法 2-1. 試料 商品名：西班牙蒼蝿水（中国簡体字）、内容量：約5mL、添付文書に英語と中国語で、「本 品を使うと女性は直ちに発情し、興奮状態が持続し…」や「本品が女性の性欲快感を高め、腎 臓・肝臓の機能を増強し、若さを回復することは実証済みです」と医薬品的効能効果を記載。 2-2. 試薬 抱水クロラール：和光純薬工業（株）製一級 カンタリジン：EMD Biosciences 社製 2,4-ジニトロフェニルヒドラジン・エタノール試液（以下 DNP 試液）：日局一般試験法によ り調製した。 GC/MS 用内標準溶液：1μg/mL 1,2,3-トリクロロプロパン・イソプロピルエーテル溶液（以 化学生物総合管理 第 6 巻第 1 号 (2010.3) 43-50 頁 連絡先：〒169-0073 新宿区百人町 3-24-1 E-mail: [email protected] 受理日：2010 年 1 月 12 日.
(4) 無承認無許可薬品中の抱水クロラールの分析. 46. 下 TCP-IP 溶液） その他の試薬は和光純薬工業（株）製特級を使用した。 2-3. 試験溶液の調製 1) 定性用 試料にジクロロメタンを当容量加え、5 分間振とう後静置しジクロロメタン層を分取して試 験溶液とした。GC/MS 分析には必要に応じてジクロロメタンで希釈し、TLC 分析にはそのま ま使用した。 2) 定量用 試料 100mg を水で適宜希釈した。その 1mL を分取し、TCP-IP 溶液 10mL を加え 5 分間振 とう後静置し、イソプロピルエーテル層を試験溶液とした。 2-4. 分析条件 1) 定性試験 (1) GC/MS（A）装置：6890N＋5973N（Agilent Technologies 社製）、カラム：HP-5MS（Agilent Technologies 社製、膜厚 0.25μm、0.25mm i.d.×30m）、カラム温度：50°C（1 分）→10°C/分 →315°C（5 分）、パージ時間 1 分、溶媒待ち時間 3 分、ガス流量：1mL/分、注入口温度：250°C、 トランスファーライン温度：250°C、イオン化：EI（70eV）、MS 四重極温度：150°C、MS イ オン源温度：230°C、測定モード：SCAN（30～650m/z） 、注入量 1μL（スプリットレス） 。 (2) GC/MS（B）カラム温度：40°C（5分）→2°C/分→70°C（5分）、ガス流量：0.7mL/分、 他の条件はGC/MS（A）に同じ。 (3) TLC 薄層板：Silica Gel 60 F254（MERCK 社製、厚さ 0.25mm、105°C で 1 時間乾燥後使用） 、 展開溶媒：ヘキサン: 酢酸エチル=1:1、試験方法：試験溶液 2μL を塗布し展開した。風乾後、 DNP 試液を噴霧し 105°C で加熱した。Rf 0.4 程度の黄色スポットの有無により測定した。 2) 定量試験 カラム：DB-1MS（Agilent Technologies社製、膜厚0.25μm、0.25mm i.d.×30m）、カラム 温度：35°C（5分）→20°C/分→180°C（0分）、測定モード：SIM（CH：82、111、146、1,2,3-TCP： 75、110（m/z））、注入量1μL（パルスドスプリットレス、パルス圧20psi、パルス時間0.75 分）、他の条件は定性試験GC/MS（A）に同じ。. ３．結果及び考察 3-1. GC/MSによる定性試験 GC/MS 試験溶液の定性分析条件（A）及び（B）のクロマトグラム及びマススペクトルを図 2 に示した。 条件（A）は、主にフェネチルアミン系・トリプタミン系・ピペラジン系違法ドラッグを分析 するための条件である。溶媒待ち時間終了の保持時間3分から6分前後までベースラインが上が った状態の不自然な形状のクロマトグラムを示した。このクロマト部分のマススペクトルをラ イブラリー検索した結果、「Acetaldehyde –trichloro」及び「Chloral Hydrate」が高い一致率 で検索された。CH溶液を分析した結果、同様のクロマトグラム及びマススペクトルが得られた。 なおフェネチルアミン系・トリプタミン系・ピペラジン系違法ドラッグ及び1,4-ブタンジオール は検出されなかった。 条件（B）は、初期温度及び昇温時間を沸点の低い CH に適合させた定性分析用の分析条件 である。保持時間 5.6 分程度に CH のピークが得られた。 製品名に記載されているスパニッシュフライは、古くから性欲促進薬として言い伝えられて 化学生物総合管理 第 6 巻第 1 号 (2010.3) 43-50 頁 連絡先：〒169-0073 新宿区百人町 3-24-1 E-mail: [email protected] 受理日：2010 年 1 月 12 日.
(5) 47. 無承認無許可薬品中の抱水クロラールの分析. いるカンタリスのヨーロッパにおける基源動物である。カンタリスの成分であるカンタリジン は製品中からは検出されなかった。カンタリジンの条件（A）のクロマトグラム及びマススペク トルを図 3 に示した。 ｱﾊﾞﾝﾀﾞﾝｽ TIC: 07yy71080.D 2200000 2100000. Chloral Hydrate. 2000000 1900000 1800000 1700000. Method (A). 1600000 1500000 1400000. Column：HP-5MS（0.25μm，0.25mm i.d.×30m）， Oven Temperature： 50°C（1min）→10°C/min→315°C（5min） Injection: 1μL (splitless) SCAN Mode. 1300000 1200000 1100000 1000000 900000 800000 700000 600000 500000 400000 300000 200000 100000 5.00. 10.00. 15.00. 20.00. 25.00. 30.00. Time--> ｱﾊﾞﾝﾀﾞﾝｽ. (min) TIC: CHLORALSCAN.D. 1300000. Chloral Hydrate. 1200000 1100000. 1000000. Method (B). 900000. Column：HP-5MS（0.25μm，0.25mm i.d.×30m）， Oven Temperature： 40°C（5min）→2°C/min→70°C（5min） Injection: 1μL (splitless) SCAN Mode. 800000 700000 600000 500000 400000 300000 200000 100000. 6.00. 8.00. 10.00. 12.00. 14.00. 16.00. 18.00. Time-->. ｱﾊﾞﾝﾀﾞﾝｽ. (min) Scan 125 (4.382 min): 07yy71080.D (-106) (-) 82. 90000 85000 80000 75000. Chloral Hydrate. 70000 65000 60000 55000 50000. 111. 45000 40000. 47. 35000 30000 25000 20000 15000. 35. 10000. 117. 5000. 146 152. 60 41. 0 30. 40. 70 76. 53 50. 60. 70. 80. 88 90. 123. 95 100. 110. 120. 130. 140. 150. m/z-->. (m/z). 図２. Fig. 試料溶液のクロマトグラム及びマススペクトル 2. Chromatograms and Mass Spectrum of Sample Solution 化学生物総合管理 第 6 巻第 1 号 (2010.3) 43-50 頁 連絡先：〒169-0073 新宿区百人町 3-24-1 E-mail: [email protected] 受理日：2010 年 1 月 12 日.
(6) 48. 無承認無許可薬品中の抱水クロラールの分析. ｱﾊﾞﾝﾀﾞﾝｽ TIC:. 1650000. cant.D. 1600000 1550000 1500000 1450000. Canthalidin. 1400000 1350000 1300000 1250000 1200000 1150000 1100000 1050000. Method (A). 1000000 950000 900000. Column：HP-5MS（0.25μm，0.25mm i.d.×30m）， Oven Temperature： 50°C（1min）→10°C/min→315°C（5min） Injection: 1μL (splitless). 850000 800000 750000 700000 650000 600000 550000 500000 450000 400000 350000 300000 250000 200000 150000 100000 50000 5.00. 10.00. 15.00. 20.00. 25.00. 30.00. Time-->. (min). ｱﾊﾞﾝﾀﾞﾝｽ Scan 812 (14.161 min): cant.D (-787) (-) 96 300000 128. 280000. Canthalidin. 260000 240000 220000 200000 180000 160000 140000 120000 100000 70. 80000 39 60000. 81. 53 40000. 109. 20000 0. 62. 31 30. 40. 50. 60. 70. 80. 140 153 163 181 119 197 207 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210. m/z-->. (m/z). Fig. 3.Fig. カンタリジン標準溶液のクロマトグラム及びマススペクトル 3. Chromatograms and Mass Spectrum of. Standard Solution of Canthalidin 3-2. TLCによる定性試験 各国の薬局方に記載された CH の確認試験は、水酸化ナトリウム試液によるクロロホルムの 生成を用いた反応のみであり、確実な確認は難しい。また特異な UV 吸収スペクトルもないこ とから、TLC 及び発色試薬による定性試験を検討した。 CH はトリクロロアセトアルデヒドの水和物であることから、発色試薬としてアルデヒドと 反応して黄～橙色に呈色する DNP 試液を選択した。 薄層板を展開後、 DNP 試液を噴霧し 105°C で加熱した。試料溶液及び標準溶液ともに Rf 0.4 程度にヒドラゾンの黄色スポットを検出した。 検出限界度は 5μg であった。 3-3. GC/MSによる定量試験 定量用試験溶液のクロマトグラムを図 4 に示した。 GC/MS による CH の分析法は、水道水の水質管理目標設定項目の検査方法を参考に作成した。 標準溶液の検量線は 0.01～1mg/L で良好な直線性が得られた。また、回収率も 90%以上と良好 であり、定量限界は 0.01mg/L であった。 化学生物総合管理 第 6 巻第 1 号 (2010.3) 43-50 頁 連絡先：〒169-0073 新宿区百人町 3-24-1 E-mail: [email protected] 受理日：2010 年 1 月 12 日.
(7) 49. 無承認無許可薬品中の抱水クロラールの分析. 3-4. 試料の定量結果 試料中からは、5.7w/w%の CH を検出した。不眠症に対する医薬品としての適用量（経口） は、通常成人 1 回 0.5～1.0g である 7)。試料 1 瓶あたり約 0.3g 程度であることから、弱い鎮静・ 催眠作用が出現するものと考えられる。. ｱﾊﾞﾝﾀﾞﾝｽ ｲｵﾝ. 18000 16000 14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000 0. 75.00 (74.70 ～ 75.30): CHLORALHIG1.D. 1,2,3-Trichloropropane. 5.00. 6.00. 7.00. 8.00. 9.00. 10.00. 11.00. Time--> ｱﾊﾞﾝﾀﾞﾝｽ. (min) ｲｵﾝ. 5000 4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0. 82.00 (81.70 ～ 82.30): CHLORALHIG1.D. Chloral Hydrate. 5.00. 6.00. 7.00. 8.00. 9.00. 10.00. Time-->. 11.00. (min) Method Column：DB-1MS（0.25μm，0.25mm i.d.×30m）， Oven Temperature： 35°C（5min）→20°C/min→180°C（0min） Purge Time: 1min Flow: 0.7mL/min SIM Mode: Chloral Hydrate: 82, 111, 146 (m/z) 1,2,3-Trichloropropane: 75, 110 (m/z) Injection: 1μL (pulsed splitless). Fig. Chromatograms of1,2,3-トリクロロエタン標準溶液のクロマトグラム Standard Solution of Fig. 4. 4. 抱水クロラール及び Chloral Hydrate and 1,2,3-Trichloropropane. ４．まとめ 無承認無許可医薬品中の CH の分析法を開発した。 定性試験では、CH をジクロロメタンで抽出し、GC/MS 及び TLC により分析した。TLC で は、発色試薬として 2,4-ジニトロフェニルヒドラジンを使用した。 定量試験では、ジイソプロピルエーテルで抽出し、1,2,3-TCP を内標準物質とした GC/MS により分析した。 原材料の表示にスパニッシュフライ使用と記載されている液体製剤から、CH を 5.7w/w%検 出した。 本報文は、東京都健康安全研究センター研究年報第 59 号（2008）に掲載された内容に一部 加筆したものである。. 化学生物総合管理 第 6 巻第 1 号 (2010.3) 43-50 頁 連絡先：〒169-0073 新宿区百人町 3-24-1 E-mail: [email protected] 受理日：2010 年 1 月 12 日.
(8) 無承認無許可薬品中の抱水クロラールの分析. 50. 参考資料： 1. THE UNITED STATES PHARMACOPEIAL CONVENTION編：THE UNITED STATES PHARMACOPEIA 31, THE NATIONAL FORMULARY 26, Volume 2, P1716-1717, 2008, THE UNITED STATES PHARMACOPEIAL CONVENTION. 2. 国家葯典委員会編：中華人民共和国葯典2005年版第二部, P63, 2005, 化学工業出版社. 3. 厚生労働省編：第15改正日本薬局方, P1031, 2006, 厚生労働省. 4. 厚生労働省健康局水道課長通知“水質基準に関する省令の制定および水道法施行規則の一 部改正等並びに水道水水質管理における留意事項について”、平成15年10月10日健水発 第1010001号. 5. 南山堂医学大辞典, 第17版, P363, 1990, 南山堂, 東京. 6. 日本薬局方解説書編集委員会編：第十五改正日本薬局方解説書, PC-4076-4079, 2006, 廣 川書店, 東京. 7. 山本 剛、権代一幸、中村貞夫：第57回全国水道研究発表会講演集, P648.. 化学生物総合管理 第 6 巻第 1 号 (2010.3) 43-50 頁 連絡先：〒169-0073 新宿区百人町 3-24-1 E-mail: [email protected] 受理日：2010 年 1 月 12 日.
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