厚生労働科学研究費補助金（免疫アレルギー疾患等予防･治療研究事業）
研究分担報告書
マウスモデルを使った HLA 不適合移植後の免疫寛容の誘導に関する検討
研究分担者 前田嘉信
研究要旨 同種造血幹細胞移植は、白血病などの悪性疾患に対する根治的治療として確立してい るが、致死的合併症である移植片対宿主病（GVHD）は今日なお克服すべき課題である。GVHD は急性
GVHD
と移植後期に発症する慢性GVHD
に大別される。急性GVHD
の基本的な発症メ カニズムは次第に明らかとなってきているが、慢性GVHD
は病態の解明が遅れている。我々は、マウスモデルを用い、慢性
GVHD
の発症にTh2
細胞だけでなくTh1
細胞とTh17
細胞も関与してい ることを明らかにしてきた。特にIL-17
とIFN-を同時に産生する Th17/Th1
細胞が特異的に出現し ており、Th17細胞の亜型であるalternative Th17
が慢性GVHD
に関与する可能性が示唆された。alternative Th17
およびTh1
細胞の両方を抑制する目的で、IL-12/IL-23 p40
抗体の有効性を検討し た。その結果、p40
抗体を投与した群では、臨床的かつ病理組織学的に慢性GVHD
が有意に軽減され た。IL-17
産生細胞のT-bet
発現を検討した結果、Th17
がalternative
からより免疫抑制性なclassical Th17
にシフトしており、p40 抗体の慢性GVHD
抑制のメカニズムであると考えられた。ヒトに対す るp40
抗体は、Ustekinumab としてクローン病や乾癬に対する臨床試験の結果が報告されており、慢性
GVHD
にも臨床応用できる可能性が示唆された。A . 研 究 目 的
同 種 造 血 幹 細 胞 移 植 は 、 白 血 病 な ど の 悪 性 疾 患 に 対 す る 根 治 的 治 療 と し て 確 立 し て い る が 、 致 死 的 合 併 症 で あ る 移 植 片 対 宿 主 病
（
G V H D
） は 今 日 な お 克 服 す べ き課 題 で あ る 。
G V H D
は 急 性G V H D
と 移 植 後 期 に 発 症 す る 慢 性G V H D
に 大 別 さ れ る 。慢 性G V H D
は 急 性G V H D
と 発 症 時 期 が 異 な る だ け でな く 、 そ の 病 態 も 異 な る と 考 え ら れ て い る 。 我 々 は 、 慢 性
G V H D
の 発 症 にT h 2
細 胞 だ け で な くT h 1
細 胞 とT h 1 7
細 胞 も 関 与 し て い る こ と を 明 ら か に し て き た 。特 にI L - 1 7
とI F N -
を 同 時 に 産 生 す るT h 1 7 / T h 1
細 胞 （a l t e r n a t i v e T h 1 7
） が 特 異 的 に 出 現 し て お り 、T h 1 7
細 胞 の 亜 型で あ る
a l t e r n a t i v e T h 1 7
が 慢 性G V H D
に 関 与 す る 可 能 性 が 示 唆 され た 。
a l t e r n a t i v e T h 1 7
お よ びT h 1
細 胞 の 両 方 を 抑 制 す る 目 的 で 、I L - 1 2 / I L - 2 3 p 4 0
抗 体 の 有 効 性 を 検 討 し た 。B . 研 究 方 法
ド ナ ー に
B 1 0 . D 2
、 ホ ス ト にB A L B / c
を 使 っ た マ ウ ス 慢 性G V H D
モ デ ル を 作 成 し た 。 骨 髄 幹細 胞 （
T
細 胞 除 去 し たB M 8 x 1 0
6） と 脾 臓 か ら 採 取 し たT
細 胞 （2 x 1 0
6） を5 . 8 G y
照 射 し た マ ウ ス に 移 植 。p 4 0
抗 体 は5 0 0
g
をd a y 0
か ら 投 与 し 、 慢 性G V H D
発 症 が 抑 制 さ れ る か を 検 討 し た 。慢 性
G V H D
は 皮 膚 所 見 の 臨 床 的G V H D
ス コ ア 、 病 理 ス コ ア に て 評 価 し 、T h
細 胞 へ の 影 響 は 、 細 胞 内 サ イ ト カ イ ン をF A C
に て 解 析 し た 。本 実 験 計 画 は 岡 山 大 学 実 験 動 物 実 験 委 員 会 に 承 認 済 み で あ る 。 す べ て の 実 験 動 物 は 動 物 愛 護 の 観 点 か ら 、 計 画 的 に で き る だ け 少 な い 個 体 数 で の 実 験 と し た 。
C . 研 究 結 果
p 4 0
抗 体 を 投 与 し た 群 は 、 慢 性G V H D
発 症 が 臨 床 的 ス コ ア 、皮 膚 、唾 液 腺 の 病 理 ス コ ア が 有 意 に 改 善 し た 。
*
*：P<0.05
IgG
p40Ab Clinical Score
ま た 、移 植 後
2 8
日 目 の ド ナ ーT
細 胞 をF A C S
に て 解 析 し た 結 果 、T h 1
細 胞 の 抑 制 と と も にI N F -
/ I L - 1 7
同 時 に 産 生 細 胞 （a l t e r n a t i v e T h 1 7
） が 有 意 に 減 少 し て い た 。 一 方 、I L - 1 7
単 独 陽 性 の 細 胞 は 減 少 し て お ら ず 、R O R
t
も 抑 制 さ れ て い な い が 、T - b e t
の 発 現 が 低 下 し て お り 、a l t e r n a t i v e T h 1 7
細 胞 が 抑 制 さ れ て い る 所 見 を 支 持 す る 結 果 で あ っ た 。以 上 か らp 4 0
抗 体 に よ りI L - 1 2
お よ びI L - 2 3
を 介 し た 経 路を 遮 断 す る こ と に よ り 慢 性
G V H D
が 抑 制 さ れ る こ と が 示 唆 さ れ た 。ま た 、移 植 後1 5
日 目 の 慢 性G V H D
が 発 症 す る 時 期 か ら の 投 与 で も 軽 減 さ せ る こ と が わ か り 治 療 と し て の 有 効 性 が 示 唆 さ れ た 。* IFN-g
+/ IL-17
+(%)
*：P<0.05
IgG p40Ab Syn
D . 考 察
p 4 0
抗 体 に よ りI N F -
/ I L - 1 7
同 時 産 生 細 胞 （a l t e r n a t i v e T h 1 7
） が 有 意 に 減 少 し て お り 、I L - 1 7 単 独 陽 性 のc l a s s i c a l T h 1 7
細 胞 は 減 少 し て い な い こ と か ら 、 全 て のT h 1 7
細 胞 で は な く 、s u b s e t
を 抑 制 す る こ と で 慢 性G V H D
が 制 御 で き る 可 能 性 が 示 唆 さ れ た 。I L - 1 2
お よ びI L - 2 3
を 介 し た 経 路 が 今 後 、 慢 性G V H D
の 治 療 標 的 と な り 得 る こ とが 明 ら か と な っ た 。
E . 結 論
p 4 0
抗 体 に よ りT h 1
お よ びa l t e r n a t i v e T h 1 7
が 抑 制 さ れ 、慢 性G V H D
が 改 善 し た 。 今 後 、 慢 性G V H D
の 治 療 薬 と し て の 効 果 が 期待 さ れ る 。
F . 健 康 危 険 情 報 特 に な し 。
G .研 究 発 表 1 . 論 文 発 表
1 )
S u g i y a m a H , M a e d a Y , N i s h i m o r i H , Y a m a s u j i Y , M a t s u o k a K , F u j i i N , K o n d o E , S h i n a g a w a K , T a n a k a T , T a k e u c h i K , T e s h i m a T , a n d T a n i m o t o M . m T O Ri n h i b i t o r s p e r m i t r e g u l a t o r y T c e l l r e c o n s t i t u t i o n a n d i n h i b i t c h r o n i c G V H D . B i o l B l o o d M a r r o w T r a n s p l a n t. 2 0 1 3 ( i n p r e s s )
2 ) M a e d a Y , P a t h o g e n e s i s o f g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e : i n n a t e
i m m u n i t y a m p l i f y i n g a c u t e a l l o i m m u n e r e s p o n s e s . I n t J H e m a t o l . 2 0 1 3 ; 9 8 ( 3 ) : 2 9 3 - 9 . 3 ) N i s h i m o r i H , M a e d a Y , T a n i m o t o
M . C h r o n i c g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e : d i s e a s e b i o l o g y a n d n o v e l t h e r a p e u t i c s t r a t e g i e s . A c t a M e d O k a y a m a. 2 0 1 3 ; 6 7 ( 1 ) : 1 - 8
4 ) N i s h i m o r i H , M a e d a Y , T e s h i m a T , S u g i y a m a H , K o b a y a s h i K , Y a m a s u j i Y , K a d o h i s a S , U r y u H , T a k e u c h i K , T a n a k a T , Y o s h i n o T , I w a k u r a Y , a n d T a n i m o t o M .
S y n t h e t i c R e t i n o i d A m 8 0 A m e l i o r a t e s C h r o n i c G r a f t - V e r s u s - H o s t D i s e a s e b y
D o w n r e g u l a t i n g T h 1 a n d T h 1 7 B l o o d. 1 1 9 ( 1 ) : 2 8 5 - 9 5 , 2 0 1 2 4 ) T e s h i m a T , M a e d a Y , O z a k i K .
R e g u l a t o r y T c e l l s a n d
I L - 1 7 - p r o d u c i n g c e l l s i n a c u t e g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e .
I m m u n o t h e r a p y. 2 0 1 1 ; 3 ( 7 ) : 8 3 3 - 5 2
2 . 学 会 発 表
1 ) F u j i w a r a H , M a e d a Y , K o b a y a s h i K , N i s h i m o r i H , N i s h i n o h a r a M , O k a m o t o S , M a t s u o k a K , K o n d o E , F u j i i N , S h i n a g a w a K , T a n i m o t o M . P D - 1 p a t h w a y o f d o n o r s a n d r e c i p i e n t s m o d u l a t e c h r o n i c g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e t h r o u g h T h 1 a n d T h 1 7 i n m o u s e m o d e l . 日 本 造 血 幹 細 胞 移 植 学 会 2 0 1 4 3 / 7 - 9 沖 縄 2 ) H F u j i w a r a , K K o b a y a s h i , H
N i s h i m o r i , M N i s h i n o h a r a , S O k a m o t o , K M a t s u o k a , E K o n d o , N F u j i i , K S h i n a g a w a , M
T a n i m o t o a n d Y M a e d a .
C o n t r i b u t i o n o f t h e P D - 1 - P D - L p a t h w a y t o c h r o n i c g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e . ( B M T T a n d e m M e e t i n g s ) 2 0 1 3 2 / 1 5 - 1 8 S a l t L a k e 3 ) H F u j i w a r a , Y M a e d a , K
K o b a y a s h i , H N i s h i m o r i , K M a t u s o k a , M A z u m a , Y H i d e o , L C h e n , a n d M T a n i m o t o . H o s t t i s s u e P D - 1 p a t h w a y c o n t r i b u t e t o m u r i n e c h r o n i c g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e v i a T h 1 + T h 1 7 + c e l l s . A S H 2 0 1 3 1 2 / 6 - 1 0 N e w O r l e a n e s 4 ) N i s h i m o r i H , M a e d a Y , T e s h i m a
T , S u g i y a m a H , K o b a y a s h i K , Y a m a s u j i Y , K a d o h i s a S , U r y u H , T a k e u c h i K , T a n a k a T , Y o s h i n o T , I w a k u r a Y , a n d T a n i m o t o M .
D o n o r T h 1 7 a n d T h 1 c o n t r i b u t e t o c h r o n i c g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e ( B M T T a n d e m M e e t i n g s ) 2 0 1 1 / 2
H .知 的 財 産 権 の 出 願 ・ 登 録 状 況 （ 予 定 を 含 む 。 ）
1 . 特 許 取 得 特 に な し 。 2 . 実 用 新 案 登 録 特 に な し 。 3 . そ の 他 特 に な し
