422
感染症学雑誌 第89巻 第 3 号
MALDI-TOF MS を用いた血液培養陽性ボトルからの 直接同定成績
1）静岡市立清水病院検査技術科，2）同 小児科
池ヶ谷佳寿子
１）土屋 憲
１）明貝 路子
２）（平成 26 年 11 月 13 日受付）
（平成 26 年 12 月 17 日受理）
Key words :Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry（MALDI-TOF MS）, blood culture, direct bacterial identification
序 文
近年，微生物の同定機器としてマトリックス支援 レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計（Matrix Assisted Laser Desorption!Ionization Time of Flight Mass Spectrometer：MALDI-TOF MS）が注目され ている．本装置による微生物の同定は約 105個という 少ない菌量を用い，約 10 分で結果が得られ，その同 定結果は 16S rRNA 遺伝子解析と高い相関性がある といわれている１）．この利点を利用し，血液培養陽性 ボトルからの直接同定を行うことは敗血症患者への早 期治療に貢献することができる極めて有用性の高い手 法である．今回我々は，血液培養陽性ボトルからの直 接同定のための前処理法を独自に考案し，VITEK MS
（シスメックス・ビオメリュー）による血液培養陽性 ボトルからの直接同定菌名とサブカルチャー後に得ら れたコロニーの VITEK MS による同定菌名を比較 し，独自の前処理法による VITEK MS での血液培養 陽性ボトルからの直接同定性能を検証したので報告す る．
対象と方法
対象：2013 年 9 月から 2014 年 9 月までに提出され た血液培養で陽性となった 394 検体のうち，単独菌が 検出された 343 検体を対象とした．なお，VITEK MS のデータベースに含まれない菌種が分離された 1 検体 は対象から除外した．
直接同定方法：1．血液培養陽性ボトルの培養液を チューブに 1mL 採取し，15,000×g・60 秒遠心後上清 を除去し，サブカルチャーおよびグラム染色を行う．2．
1 のチューブに培養液をさらに 1mL 加え，357×g・60
秒遠心する．3．上清を別チューブに移し，15,000×g・
30 秒遠心する．4．上清をデカンテーションし，蒸留 水を 1mL 加えボルテックスで混和後，15,000×g・30 秒遠心する（洗浄）．5．4 を 3 回繰り返す（沈渣の赤 血球による赤みが除去される）．6．最後の洗浄が終了 したら，上清を菌層に近いところまで除去し混和する．
7．1μL をターゲットスライドに載せたのち，FA 試 薬（シスメックス・ビオメリュー）0.5μL を加えよく 混和する．8．乾燥後，マトリックス試薬を 1μL 載せ，
乾燥したら VITEK MS v2.0 で測定する．
同定性能確認方法：サブカルチャーによって得られ たコロニーを VITEK MS で測定し，直接同定の結果 と比較した．
結果および考察
単独菌が検出された 343 検体のうち，直接同定で菌 名が得られたのは 294 検体（85.7％）であった．直接 同定で菌名が得られ，サブカルチャーにて得られたコ ロニーの同定結果と一致したのは 286 検体（97.3％）
であった．菌種・菌グループ別では，Streptococcus属
（n＝26）は 76.9％ で直接同定菌名 が 得 ら れ，95.0％
がコロニー同定と一致した．Enterococcus属（n＝8）
は 100％ で直接同定菌名が得られ，コロニー同定とす べて一致した．Staphylococcus aureus（n＝33）は 93.9％
で直接同定菌名が得られ，96.8％ がコロニー同定と一 致した．coagulase-negative staphylococci（n＝110）
は 80.9％ で直接同定菌名が得られ，93.3％ がコロニー 同定と一致した．腸内細菌科菌種（n＝111）では 99.1％，
Pseudomonas aeruginosa（n＝6）は 100％ で直接同定 菌名が得られ，共にすべてコロニー同定と一致した．
嫌気性菌（n＝19）では 78.9％，その他の菌種（n＝30）
では 50.0％ で直接同定菌名が得られ，共にすべてが 短 報
別刷請求先：（〒424―0911）静岡県静岡市清水区宮加三 1231 静岡市立清水病院検査技術科 池ヶ谷佳寿子
MALDI-TOF MS による血液培養直接同定 423
平成27年 5 月20日
コロニー同定と一致した．
MALDI-TOF MS を用いた細菌同定装置は「VITEK MS」および「MALDI Biotyper」（ブルカー・ダルト ニクス）が上市されている．市販前処理キットを利用 した血液培養陽性ボトルからの直接同定に関する報 告２）３）が散見され，血液培養陽性ボトルの直接同定のた めの前処理法も様々な方法が検討されている４）．当院 の前処理による血液培養陽性ボトルからの直接同定 は，ボトル取り出しから 45 分で同定菌名が得られる．
今回の検討において VITEK MS で血液培養陽性ボト ルからの直接同定で菌名が得られる割合は 85.7％ で あるが，菌名を得ることができればコロニーとの一致 率は 97.3％ と高く，血液培養陽性ボトルの直接同定 で菌名を得ることができれば，早期に適切な抗菌薬投 与が可能になると考える．
利益相反自己申告：申告すべきものなし 文 献
1）Cherkaoui A, Hibbs J, Emonet S, Tangomo M, Girard M, Francois P,et al.：Comparison of Two Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Fligth Mass Spectrometry
Methods with Conventional Phenotypic Identifi- cation for Routine Identification of Bacteria to the Species Level. J Clin Microbiol 2010；48：
1169―75.
2）Buchan BW, Riebe KM, Ledeboer NA：Com- parison of the MALDI Biotyper System Using Sepsityper Specimen Processing to Routine Mi- crobiological Methods for Identification of Bacte- ria from Psitive Blood Culture Bottles. J Clin Mi- crobiol 2011；50：346―2.
3）Chen JHK, Ho PL, Kwan GSW, She KKK, Siu GKH, Cheng VCC,et al.：Direct Bacterial Iden- tification in Positive Blood Cultures by Use of Two Commercial Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spec- trometry Systems. J Clin Microbiol 2013；51：
1733―9.
4）Foster AGW：Rapid Identification of Microbes in Positive Blood Cultures by Use of the Vitek MS Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry System. J Clin Microbiol 2013；51：3717―9.
Direct Identification Results from Positive Blood Culture Bottles Using MALDI-TOF MS Kazuko IKEGAYA１）, Ken TSUCHIYA１）& Michiko MYOKAI２）
１）Department of Clinical Laboratory and２）Department of Pediatrics, Shizuoka City Shimizu Hospital
〔J.J.A. Inf. D. 89：422〜423, 2015〕
