16102 機 02T 本 社 〒540-8605 大阪市中央区道修町三丁目1番2号 TEL:06-6203-2759（機器システム部） 東 京 本 店 〒103-0023 東京都中央区日本橋本町二丁目4 番1号 TEL:03-3270-8124（機器システム部） 北海道営業所 TEL:011-271-0285 東 北 営 業 所 TEL:022-222-3072 筑 波 営 業 所 TEL:029-858-2278 藤 沢 営 業 所 TEL:0466-29-0351 東 海 営 業 所 TEL:052-772-0788 中 国 営 業 所 TEL:082-285-6381 九 州 営 業 所 TEL:092-622-1005 URL:www.wako-chem.co.jp/me/ お問い合わせ先：www.wako-chem.net/bms/ ※本文に収載しております試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるもので、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとして使用できません。 ※希望納入価格には消費税が含まれておりません。 ※本カタログの内容は予告なしに仕様、デザイン、希望納入価格を変更することがあります。最新情報につきましてはお問い合わせください。 ※本カタログの記載内容は、2016 年1月現在のものです。
微生物細胞壁成分検出用試薬および関連商品
エンドトキシン
ペプチドグリカン・β-グルカン
Endotoxin（LPS）
Factor G
Factor C Factor C
Factor B Factor B Factor G
Proclotting enzyme Clotting enzyme Coagulogen Coagulin Peptide ＋ pNA Peptidyl-pNA (1 → 3)-β-D-Glucan エンドトキシン検出用試薬 ペプチドグリカンおよびβ - グルカン検出用試薬 その他関連試薬 エンドトキシン測定用機器 関連器材 エンドトキシン試験の基本 2〜7 ライセート試薬選択のフローチャート 8〜9 ホームページ「Wako LALシステム」紹介 10 エンドトキシン検出用および関連試薬 ・ エンドトキシン検出用試薬 特異的試薬 リムルス ESの原理 ……… 12 リムルス ES-IIシリーズ ……… 13 PYROSTAR™ ES-Fシリーズ ……… 14〜15 PYROSTAR™ ES-F/Plate ……… 16〜17 リムルス カラー KYシリーズ ……… 18〜19 リムルス ES-Ⅲ ……… 20〜21 リムルス PS シングルテストワコー ……… 22〜23 リムルス ES-IIプラスCSシングルテストワコー ……… 24〜25 非特異的試薬 リムルスJシリーズ ……… 26 リムルス HS-T シングルテストワコー ……… 26 リムルス Fシリーズ ……… 27 Endochrome-KTM ……… 27 ・ ペプチドグリカンおよびβ-グルカン検出用試薬 SLP試薬セット ……… 28〜29 SLP-HSシングル試薬セット ……… 28〜29 ・ その他関連試薬 エンドトキシン検出用抽出液 ……… 30 エンドトキシン試験関連試薬（各種標準品・バッファー）……… 31 エンドトキシンインジケーター ……… 31 LPS（リポポリサッカリド）……… 32 エンドトキシン測定用機器および関連器材 ・ エンドトキシン測定用機器 トキシノメーター®ET-6000 ……… 34〜35 MPRエンドトキシン測定システム……… 36 サーモステーションTS-37S/24……… 37 バイアルチューブミキサー VTM-252……… 37
トキシノメーター ®ET-Mini & リムルスES-ⅡプラスCSシングルテストワコー …… 38
Endosafe®-PTSTM ……… 39 バリデーション・サポート・サービス（トキシノメーター®、MPRエンドトキシン測定システム） 40 バリデーション・サポート・サービス（Endosafe®-PTSTM） ……… 41 ・ 関連器材 バイオクリーンシリーズ ……… 42 アクロディスク・シリンジフィルター ……… 43 アクロディスク・ムスタングE メンブレン ……… 43 セルファイン®ETクリーン……… 44 ・ 主な関連試薬・器材一覧表
C O N T E N T S
エンドトキシンはグラム陰性菌の細胞壁を構成するリポ多糖です。Lipopolysaccharide とも呼ばれ、通称 LPSと呼ばれています。 エンドトキシンは代表的な発熱物質であり、pg (10-12g)やng (10-9g)という微量でも血中に入ることで、発 熱などの種々の生体反応を引き起こします。 特徴としては、高い耐熱性が挙げられます。オートクレープ処理程度では完全に失活することはできません。 完全に失活させるためには250℃以上で30分以上の乾熱滅菌が必要です。グラム陰性菌はどこにでも存在し、 菌が死んでもエンドトキシンは残ります。 エンドトキシンはマクロファージや樹状細胞の TLR4 (Toll-like receptor4) に結合し、NF-kBを介して核に作用 して各種サイトカインを産生します。産生されたサイトカインによって種々の生物活性を示します。 図1に構造の模式図を示します。リピド A部分が生物活性を担う本体であり、こ の部分の分子量は約 2 千です。糖鎖部 分を含んだ全体は通常分子量5千から8 千程度です。ただし、エンドトキシンは 親水性部分（糖鎖）と疎水性部分（リピ ドA）を持つ分子であるため、水溶液中 で会合し、見かけの分子量が数十万〜数 百万のミセル構造をとります。ミセル構 造が変化すると生物活性の強弱も変化 することが報告されています。 図2には大腸菌型とサルモネラ型のリピ ドAの構造を示します。リピドAの基本 構造は菌株が異なっても共通している部 分が多くみられます。
エンドトキシン試験の基本
反応機構
エンドトキシンの生物活性と耐熱性
エンドトキシンの構造
エンドトキシンとは
エンドトキシン測定について
エンドトキシン試験には、カブトガニの血球抽出物から作られるライセート試薬を使います。試料にエンドト キシンが含まれる場合、いずれもセリンプロテアーゼ前駆体である Factor C、Factor B、Proclotting enzyme が順次、増幅活性化されていきます（図1）。最終的に Coagulogen が水解されて Coagulin となり、 不溶性のゲルとなります。試験では、一連の反応によるゲル化、濁度増加、合成基質の切断による黄色発色を 測定し、エンドトキシン量を判定します。 エンドトキシンがライセート試薬中に含まれる因子を増幅活性化し、一連の反応によるゲル化、比濁増加、合 成基質の切断による黄色発色を測定し、エンドトキシン量を判定します。 通常のライセート試薬には、Factor G を介した反応経路もあります。そのためエンドトキシン以外に真菌 の細胞壁に含まれる構成成分 β-グルカンに対する反応も起こります。そこで Factor G を取り除くか、作用 をブロックすれば、エンドトキシンに特異的な試薬を調製できます。 エンドトキシン測定では、求められる測定精度や、試験頻度、検体数などを総合的に考慮して適切な試薬選 択が必要です。 図１ リポ多糖の構造 ※ 高岡 文（2011）防菌防黴 ,39,47-56より引用 図２ リピド Aの構造 大腸菌型リピドA サルモネラリピドA Endotoxin（LPS） Factor C Factor CFactor B Factor B Factor G Factor G
Proclotting enzyme Clotting enzyme
Coagulogen Coagulin ( ゲル化、濁度増加 ) または Peptidyl-pNA Peptide ＋ pNA（黄色発色） 内の各因子は活性型を示す (1 → 3)-β-D-Glucan 合成基質 図1 ライセート試薬の反応機構
試験管中でライセート試薬と検体を混合し、37±1℃で60±2分間、振動を与えないようにブロックヒーター などで加温します。加温終了後ただちに試験管をゆっくりと180°転倒し、変形したり崩れたりしないゲル が形成していれば陽性、形成していなければ陰性と判定します。検体を等倍希釈（通常2倍段階希釈）する ことにより、どの希釈倍数まで陽性判定されるかを調べます。陽性判定された最も大きい希釈倍数（ある いは最小濃度）をエンドポイントと呼びます。 エンドトキシンによるライセート試薬の活性化を発色合成基質が切断されることで検出する方法です。P-ニ トロアニリンの黄色発色を 405 nm付近の吸光度変化で測定するため、検体が 405 nm付近に大きな吸収 を持つと適用できません。 エンドトキシンによるライセート試薬の活性化を、ゲル化に伴う濁度変化で検出する方法です。濁りが大き い検体には適用できません。
ゲル化法
比色法
比濁法
180°
転倒 陽性（＋） 陰性（−） 対応試薬： ES-Ⅱシリーズ、ES-Fシリーズ、 Jシリーズ、Fシリーズ 対応試薬： ES-Ⅱシリーズ、ES-Fシリーズ、ES-F/Plate、Jシリーズ、Fシリーズ、HS-Tシングル 対応試薬： カラー KYシリーズ、Endochrome-KTM 実施する試験目的にあったエンドトキシン標準品をご使用ください。 •医薬品の最終製品検査など、日本薬局方に準拠する試験を行う。 ※ 必ず薬局方エンドトキシン標準品をご使用ください。 •原料検査、工程検査などを行う。 米国で販売する薬剤（FDA 規制）の最終試験を行う。※ Control Standard Endotoxin（CSE）の使用が可能です。
■注射剤 製剤の種類によって、薬局方、生物学的製剤基準（ワクチン、血液製剤などに関して規定）、学会基準（PET 薬 剤：日本核医学会院内製造 PET 薬剤基準）などで規定されています。 （局方では、皮内、皮下および筋肉内投与のみに用いるものは除く） ■医療機器 厚労省通知（薬食機発 0301号第20 号）に別添付された『医療機器の生物学的安全性試験法ガイダンス』 には、医療機器のエンドトキシン管理に関しての記載があります。また、滅菌済み注射針などをはじめとする 多くの医療機器については JIS でエンドトキシン規格が定められています。 ■再生医療製品 厚労省から『ヒト（同種）iPS（様）細胞加工医薬品等の品質および安全性の確保に関する指針』をはじめと した各種指針が出されています。 また、最終製品のみならず、培地、原料に関してもエンドトキシン管理の必要性が認識されています。 ■バイオ医薬品製品 厚労省通知（薬食審査発1214第1号）の「抗体医薬品の品質評価のためのガイダンス」に、抗体医薬品原薬 又は製剤の規格及び試験方法において参照される日本薬局方一般試験法として、エンドトキシン試験法が あげられています。 ■透析用剤 製剤は薬局方で規定されており、調製後の透析液に関しては別に学会基準（透析医学会基準、日本臨床工 学技士会ガイドライン）や ISO で水質基準が定められています。 エンドトキシン試験を行う際に使用する器具はエンドトキシン、β-グルカンフリーのものを使用しなければ なりません。250℃ 以上で30 分以上の乾熱がエンドトキシン不活化には必要ですので、通常は乾熱滅菌し たガラス器具を使用します。微量に溶出する金属イオン（Fe、Al、 Ga、Cr 等）が試験に影響するので、金属製 器具の使用は避けてください。使い捨てのプラスチック器具等は、メーカーによる保証のあるものを除いて、 下記事項を、ガラス製器具と比較・確認してからご使用ください。 ❶エンドトキシンの汚染がない ❷エンドトキシンが吸着しない ❸試験結果に影響する溶出物がない エンドトキシン試験を実施する際には、試料が試験におよぼす影響（反応干渉因子）に注意が必要です。 ❶ライセート試薬に影響するもの •蛋白変性作用のあるもの（酸、アルカリ、尿素、界面活性剤、有機溶剤） •プロテアーゼ、プロテアーゼ阻害剤 •キレート剤（反応に必要な Ca や Mg が捕捉される） •比色法の場合、着色物質（405 nm 付近に大きな吸収を持つ物質） •比濁法の場合、濁り ❷エンドトキシンに影響するもの •金属イオン（Fe、Al、Ga、Cr イオン等。μM 程度でも影響あり） •界面活性剤 試料の影響の有無は、既知量のエンドトキシンを添加した検体を測定し、添加したエンドトキシン量の回収 率を求める試験によって判断します。局方では反応干渉因子試験と呼ばれている試験です。比色法・比濁 法（光学的定量法）では添加したエンドトキシンの回収率が50 〜200% の範囲であれば試料は測定に影 響せず、試料はその濃度でエンドトキシン試験に影響を与えないといえます。試料の影響が見られた場合、 試料を希釈して測定すると影響を軽減することができます。ただし、試料を希釈すると、原液換算（希釈す る前の液）で検出できるエンドトキシンの濃度が高くなってしまいます。希釈可能な倍数（最大有効希釈倍 数）は、検出したいエンドトキシン濃度と用いるライセート試薬の検出感度によって決まります（反応干渉因 子試験や最大有効希釈倍数の詳細は、日本薬局方のエンドトキシン試験法を参照してください）。 一方ゲル化法では、反応干渉因子試験に用いる試料溶液は、用いるライセート試薬が必ず陰性判定である事 が必須です。すなわち、使用するライセート試薬の検出感度以上のエンドトキシンが混入していると、この試 験は実施できません。 エンドトキシンが混入していない試料の入手が困難な場合は、原則としてゲル化法で はなく光学的定量法で対応ください。 また、ライセート試薬を、より感度の低いものに変更することで試験 が可能となる事もあります。 ・エンドトキシン試験の実施方法 ❶ 第16改正日本薬局方 （http://jpdb.nihs.go.jp/jp16） 第16改正日本薬局方第一追補 （http://jpdb.nihs.go.jp/jp16supp1/） ・エンドトキシンの構造や作用機構など全般 ❷ 棚元憲一『エンドトキシンと医薬品の品質管理』
Bull. Natl. Inst. Health Sci., 126, 19-33（2008）
（http://www.nihs.go.jp/library/eikenhoukoku/2008/019-033.pdf） ❸レギュラトリーサイエンス財団HP 技術情報 （http://www.pmrj.jp/hyojun/html/frm071.php） ・厚労省「抗体医薬品の品質評価のためのガイダンス」について （http://www.pref.nara.jp/secure/74563/24166.pdf）
使用器具の影響
適用分野
参考資料
（もっとよく知るために）
試料の影響
リムルス ES-II シングルテスト：295-51301（表示感度 0.015 EU/mL）
PYROSTAR™ ES-F シングルテスト：295-72301( 表示感度 0.015EU/mL）
シングルテスト シングルテスト 比濁法、ゲル化法 エンドトキシン特異的試薬 日本薬局方 FDA 対応 リムルス ES-II テスト：299-51201（表示感度 0.015 EU/mL）
PYROSTAR™ ES-F マルチテストwith CSE：297-75801（表示感度 0.015EU/mL）
マルチテスト
マルチテスト
カブトガニ血球抽出物 ES-II：292-51213（表示感度 0.015 EU/mL）
PYROSTAR™ ES-F マルチテストwithout CSE：291-75701（表示感度0.015EU/mL） リムルスES-II プラス CS シングルテスト：299-77201※3 ※4 リムルスカラー KY テスト：291-53101 シングルテスト マルチテスト 比色法 簡便法 日本薬局方 シングルテスト リムルスカラー KY シングルテスト：291-53601 カブトガニ血球抽出物ES-III：295-51801※1 シングルテスト リムルス PS シングルテスト：299-54501※2 リムルス J シングルテスト：290-22041（表示感度 0.25 EU/mL）
PYROSTAR™ ES-F/Plate with CSE：293-75401
シングルテスト マルチテスト ゲル化法専用 比濁法 エンドトキシン非特異的試薬 エンドトキシン特異的試薬 エンドトキシン非特異的試薬 日本薬局方 FDA 対応 リムルス HS ｰ J シングルテスト：292-22241（表示感度 0.03 EU/mL） リムルス F シングルテスト：297-52601（表示感度 0.25 EU/mL）
PYROSTAR™ ES-F/Plate without CSE：297-75301 リムルスカラー KY テスト：291-53101 シングルテスト マルチテスト FDA 対応 日本薬局方 リムルス HS ｰ F シングルテスト：299-52801（表示感度 0.03 EU/mL） リムルス HS ｰ T シングルテスト：299-53401 ※4 シングルテスト 比濁法、ゲル化法 日本薬局方 リムルス J テスト：290-21941（表示感度 0.25 EU/mL） マルチテスト リムルス HS-J テスト：296-22141（表示感度 0.03 EU/mL） カブトガニ血球抽出物 J：298-22341（表示感度 0.25 EU/mL） カブトガニ血球抽出物 HS-J：294-22441（表示感度 0.03 EU/mL） リムルス HS-F テスト：293-52701（表示感度 0.03 EU/mL） マルチテスト FDA 対応 カブトガニ血球抽出物 F：298-52511（表示感度 0.25 EU/mL） カブトガニ血球抽出物 HS-F：290-52711（表示感度 0.03 EU/mL） Endochrome-K™ 256 test kit：519-87321
Endochrome-K™ 256 test kit：519-87321 マルチテスト マルチテスト 比色法 比色法 比色法 FDA 対応 FDA 対応 Endochrome-K™ 320 tests：513-87341 Endochrome-K™ 320 tests：513-87341 Endochrome-K™ 3200 tests：516-87331 Endochrome-K™ 3200 tests：516-87331
ライセート試薬選択のフローチャート
チューブリーダー法
マイクロプレートリーダー法
P.13 P.14 P.13 P.14 P.13 P.14 P.24 P.18 P.18 P.20 P.22 P.26 P.16 P.26 P.27 P.16 P.18 P.27 P.26 P.26 P.26 P.26 P.26 P.27 P.27 P.27 P.27 P.27 P.27 P.27 P.27 P.27 ※1: 生物学的製剤に適した試薬 ※2: 水に不溶なサンプルに適した比濁法専用試薬 ※3：日本薬局方のエンドトキシン試験法には準拠しておりません ※4: 比濁法専用試薬 ＊本カタログでは、CSE : Control Standard Endotoxinのこと。 シングルテスト 1回の測定分のライセート試薬が反応用試験管にあらかじめ分注されているタイプ マルチテスト ライセート試薬をエンドトキシン試験用水で溶解し、反応用試験管またはプレートに必要量分注し使用するタイプ CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 低CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付エンドトキシン検出用および関連試薬
〈エンドトキシン検出用試薬〉 ・ 特異的試薬 リムルス ES-IIシリーズ PYROSTAR™ ES-Fシリーズ PYROSTAR™ ES-F/Plate リムルス カラー KYシリーズ リムルス ES-Ⅲ リムルス PS シングルテストワコー リムルス ES-IIプラスCSシングルテストワコー ・ 非特異的試薬 リムルス Jシリーズ リムルス HS-Tシングルテストワコー リムルス Fシリーズ Endochrome-K ™ 〈ペプチドグリカンおよびβ-グルカン検出用試薬〉 SLP試薬セット SLP-HSシングル試薬セット 〈その他関連試薬〉 エンドトキシン検出用抽出液 エンドトキシン試験関連試薬（各種標準品、バッファー） エンドトキシンインジケーター LPS（リポポリサッカリド）エンドトキシン Webサイトです。
（エンドトキシン情報を配信しています。）
エンドトキシンについての基礎知識から技術資料、セミナー／講習会開催
の情報まで幅広い内容をご提供致します。
また、LALデータシート等も掲載しています。是非ご活用下さい。
http://www.wako-chem.co.jp/lal/index.html
Wako LAL システム
エンドトキシン検出用試薬 ライセート試薬とエンドトキシンの反応カスケード機構は図1に示すとおりです。反応系に（1→3） -β-D-グルカン*が存在するとファクター Gを活性化し、エンドトキシンがなくてもゲル化する、い わゆる偽陽性反応が起こります。このままではエンドトキシンに特異的とは言えません。当社が開 発したリムルスESは反応系に大過剰の（1→3）-β-D-グルカン（カルボキシメチル化カードラン） を共存させることにより、β-グルカンによるライセート試薬の活性化を阻害し､エンドトキシンを 特異的に検出する方法です。 なぜ大過剰のβ-グルカンがそれ自身の反応を阻害するかについては、図2に示すとおりβ-グルカ ンとライセート試薬の反応領域が狭い濃度範囲であることによります。しかしながら､エンドトキシ ンとリムルスの反応は低濃度から高濃度までの広い領域で反応し、大過剰のβ-グルカンの共存で も阻害されないことがリムルスESに応用されています。（図3） 図 1 リムルステストの反応カスケード ＊：（1→3）-β-D-グルカンはカビ（真菌）やセルロース系のろ過膜から由来します。 図2 CM-カードランとLALの反応性 図3 リムルス HSおよびリムルス ESを用いたエンドトキシン測定に 及ぼすCM-カードランの影響 トキシノメーター®の測定時間を99 分に設定し、 リムルス HSを用いて測定した ○：99 分以内にゲル化判定されなかったもの ●：ゲル化判定されたもの A ：リムルス HSを使用､B：リムルス ESを使用 測定はトキシノメーター®を用いて、測定時間99 分で行った ○：エンドトキシン希釈系列 ▲：1 mg/mLのCM-カードランを含むエンドトキシン希釈系列 ゲ ル化時間 （ mi n
CM-カードラン［log（mg/mL）］ エンドトキシン［EU/mL］ エンドトキシン［EU/mL］
） ゲ ル化時間 （ mi n ） A 0.001 0.01 0.1 1 10 0.001 0.01 0.1 1 10 -8 -7 -6 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 100 50 50 10 5 ゲ ル化時間 （ mi n ） 50 10 5 10 5 B エンドトキシン 凝固酵素前駆体 凝固酵素 （1→3）-β-D-グルカン 活性化 活性化 活性化 ファクター C ファクター C ファクター G ファクターG ファクター B コアギュローゲン コアギュリン ゲル形成 ファクター B
リムルス ES-Ⅱシリーズ
リムルス ES
（エンドトキシン特異的反応試薬）
の原理
CSE（Control Standard Endotoxin）はE.coli UKT-Bの菌体から精製したエンドトキシンの凍結乾燥品で1バ イアル中に500ngのエンドトキシンと添加剤マンニトールとグリシンを含有し、 ロットごとに日本薬局方標準エンドトキシンで検定した参考値（EU/Vial）が記載されています。 比濁法 ゲル化法 エンドトキシン特異的 日本薬局方 コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 295-51301 リムルス ES-II シングルテストワコー 0.015 25回用 35,000 シングルテスト マルチテスト コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 299-51201 リムルス ES-II テストワコー 0.015 （2.0mL 用×3本）60回用 37,000 292-51213 カブトガニ血球抽出物 ES-II凍結乾燥品 0.015 （2.0mL 用×5本）100回用 58,000 CSE付 CSE付 特長 ●検体中の（1→3）-β-D-グルカンの影響を受けることなく､エンドトキシンを特異的に検出可能。 ●日本薬局方収載｢エンドトキシン試験法｣に適合したキットおよび試薬。 ●日本薬局方標準エンドトキシン（JP-RSE）によるゲル化感度検定力価（EU/mL）を表示。 ●強固なゲルが形成されるよう工夫されているため、ゲル化判定が極めて容易。 ●トキシノメーター®による比濁法では、0.0078 〜1EU/mLまで検出可能。 ●測定試料のpHの影響を受けにくいため、安定したエンドトキシン測定が可能。エンドトキシン検出用試薬
ゲル化時 間 （ 分 ） ゲル化時 間 （ 分 ） ゲル化時 間 （ 分 ）エンドトキシン検出用試薬
PYROSTAR ™ ES-F シリーズ
比濁法 ゲル化法 エンドトキシン特異的 FDA 承認 マルチテスト シングルテスト コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円）297-75801 Limulus Amebocyte LysatePYROSTARTM ES-F MULTI TEST
with CSE 0.015
80回用
（2.0mL 用×4本） 50,000
291-75701 Limulus Amebocyte LysatePYROSTARTM ES-F MULTI TEST
without CSE 0.015
100回用
（2.0mL 用×5本） 59,000
コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円）
295-72301 Limulus Amebocyte LysatePYROSTARTM ES-F SINGLE TEST 0.015 25回用 41,000
CSE付 CSE付 特長 ●検体中の（1→3）-β-D-グルカンの影響を受けることなく、エンドトキシンを特異的に検出可能。 ●米国食品医薬品局（FDA）の認可を取得（U.S. License No.1762）。 ●米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬。 ●USP標準エンドトキシン（USP-RSE）によるゲル化感度検定力価（EU/mL）を表示。 ●強固なゲルが形成されるよう工夫されているため、ゲル化判定が極めて容易。 ●トキシノメーター ®による比濁法では0.001 〜 1EU/mLまで検出可能。 ●測定試料のpHの影響を受けにくいため、安定したエンドトキシン測定が可能。 ■ 比濁法における添加エンドトキシンの回収率 ■ 検量線情報 0.9% NaCl 3% NaCl 2.5% ブドウ糖 リンゲル液（原液） 硫酸Mg（50mM） イオタラム酸メグルミン（1.0%） 炭酸水素Na（0.25%） クエン酸Na（0.05%） ヘパリンNa（10U/mL） キシリトール（2.5%） エンドトキシン抽出液（0.1%） ピリドキシン塩酸塩（0.25mg/mL） アスコルビン酸Na（10mg/mL） セフォゾプラン塩酸塩（2.5mg/mL） 0 50 100 150（％） 共存薬剤 共存薬剤 0.9% NaCl 3% NaCl 2.5% ブドウ糖 リンゲル液（原液） 硫酸Mg（50mM） イオタラム酸メグルミン（1.0%） 炭酸水素Na（0.25%） クエン酸Na（0.1%） ヘパリンNa（10U/mL） キシリトール（2.5%） エンドトキシン抽出液（0.1%） ピリドキシン塩酸塩（0.25mg/mL） アスコルビン酸Na（25mg/mL） セフォゾプラン塩酸塩（5mg/mL） 105 88 98 103 100 89 126 93 92 91 90 100 74 85 74 39 80 87 72 69 89 108 97 82 77 104 102 83 0 50 100 150（％） シングルテスト マルチテスト 50 0.001 0.01 0.1 1 100 エンドトキシン濃度（EU/mL） 反応時間 （分） 回 帰 式 : log(Tg) = -0.289200 log(C) +1.13012 相関係数 : -0.9984 0.001000 0.01000 0.1000 1.000 103.8 103.8 103.6 49.2 49.0 48.8 25.2 25.2 25.2 14.0 14.0 14.2 エンドキシン濃度（EU/mL） 反応時間（分） エンドトキシン濃度（EU/mL） ゲル化時間（分） 0.001000 103.8103.8 103.6 0.01000 49.249.0 48.8 0.1000 25.225.2 25.2 1.000 14.014.0 14.2
エンドトキシン検出用試薬
ゲル化時 間 （ 分 ） ※マルチテストは100μLのライセート試薬と100μLのサンプル量を混合して測定するのに対して、シングルテストは 200μLのサンプルで直接ライセート試薬を溶解します。そのため、反応液中でのサンプル濃度には差がでます。 一般的にシングルテストの方がサンプルの影響を受けやすい傾向にあります。エンドトキシン検出用試薬
PYROSTAR ™ ES-F/Plate
エンドトキシン検出用試薬
PYROSTARTM ES-F/Plateは96ウェルマイクロプレート専用の比濁法ライセート試薬です。 吸光プレートリーダーを用いることにより、簡単に短時間で多検体の同時測定が可能です。 定量範囲は0.01〜10EU/mLと幅広く、水の試験はもちろん希釈が必要な各種薬剤の試験にも適用できます。 比濁法 エンドトキシン特異的 FDA 承認 コードNo. 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円）293-75401 Limulus Amebocyte LysatePYROSTARTM ES-F/Plate with CSE 0.01-10 （2.0mL 用×4本）160回用 59,000 297-75301 Limulus Amebocyte LysatePYROSTARTM ES-F/Plate without CSE 0.01-10 （2.0mL 用×5本）200回用 67,000 CSE付 0.9% NaCl 3% NaCl 2.5%ブドウ糖 リンゲル液（原液） 硫酸Mg（50ｍM） イオタラム酸メグルミン（1.0%） 炭酸水素Na（0.25%） クエン酸Na（0.1%） ヘパリンNa（10 U/mL ） キシリトール（2.5%） エンドトキシン抽出液（0.1%） ピリドキシン塩酸塩（0.25 mg/mL） アスコルビン酸Na（25 mg/mL） セフォゾプラン塩酸塩（5 mg/mL） 94 81 105 106 96 87 127 90 96 89 87 103 65 85 0 共存薬剤 50 100 150（%） 0.0100 0.1000 1.0000 10.0000 エンドトキシン濃度（EU/mL） 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 活 性 化 時 間（ 分 ） 回 帰 式 ： log(Ta) = ー0.260424 log(C) +1.10351 相関係数 ： ー0.9943 エンドトキシン濃度（EU/mL） 活性化時間（分） 0.0100 46.046.7 43.3 0.1000 21.221.5 21.2 1. 000 12.012.1 11.9 10.000 7.47.4 7.5 特長 ●検体中の（1→3）-β-D-グルカンの影響を受けず、エンドトキシンを特異的に検出可能。 ●米国食品医薬品局（FDA）の認可を取得（U.S. License No.1762）。 ●米国輸出品目における最終製品試験にも適用可能。 ●1well当たりサンプル量50μLで測定できるため、貴重なサンプルでも少量で測定可能。 ●測定試料のpHの影響を受けにくいため、安定したエンドトキシン測定が可能。 ■ 検量線情報 ■ 比濁法における添加エンドトキシンの回収率 マルチテスト
エンドトキシン検出用試薬
リムルスカラー KY シリーズ
エンドトキシン検出用試薬
エンドトキシンによる本試薬の発色機構は、ライセート中に含まれるセリンプロテアーゼ前駆体が順次活性 化され、最後に凝固酵素が黄色発色合成基質を水解し、発色基（pNA）が遊離して、黄色の発色を呈する原 理に基づいています。（エンドトキシン特異的検出の原理は12ページ参照） ※プレートリーダー法の場合は120 回用（1well当たり50μL） （ 内の各因子は活性型を示す） 発色基 Boc-Thr-Gly-Arg-pNA pNA エンドトキシン リポ多糖 LPS B因子 凝固酵素 C因子 B因子 凝固酵素 前駆体 合成基質発色 C因子 リムルスカラー試薬の発色カスケード機構 トキシノメーター® エンドトキシン濃度（EU/mL） マイクロプレートリーダー エンドトキシン濃度（EU/mL） 活 性 化 時 間（ 分 ） 活 性 化 時 間（ 分 ） 比色法 エンドトキシン特異的 日本薬局方 プレートリーダー法 トキシノメーター法 マルチテスト コードNo. 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 291-53101 リムルスカラー KY テストワコー 0.0005-5 （2.0mL 用×3本）60回用/120回用※ 54,000 CSE付 トキシノメーター法 シングルテスト CSE付 コードNo. 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格(円) 291-53601 リムルスカラー KY シングルテストワコー 0.0002-5 25回用 50,000 特長 ●ライセート試薬と発色合成基質が一体製剤されており、試薬溶解後（シングルテストは試料を混合する だけ）試料と混合するだけで反応を開始させることが可能。 ●溶解後の試薬の安定性にすぐれ、ブランクの反応性が低く抑制。 ●検体中の（1→3）-β-D-グルカンの影響を受けず、エンドトキシンを特異的に検出可能。 ●検量範囲が広く、高濃度から低濃度のサンプルにも使用可能。 ●高感度のため、希釈法により試料中の反応阻害・促進物質の影響を低減。 ●トキシノメーター®／マイクロプレートリーダーによる測定が可能※（シングルテストはトキシノメーターのみ）。 ■ 原理 ■ 検量線情報（マイクロプレートリーダー使用時一例） ■ 比色法における添加エンドトキシンの回収率 リムルスカラーKYテストワコーの測定条件 検体量：50μL 測定波長：405nm-650nm 測光間隔：40秒 測定時間：200分 Onset OD:0.015 反応 時 間 （ 分 ） エンドトキシン濃度（EU/mL） 100.0 10.0 1.0 0.0001 0.001 0.01 0.1 1 10 100 Endochrome-KTMの測定条件 検体量：100μL 測定波長：405nm 測光間隔：40秒 測定時間：200分 Onset OD:0.05～0.20 反応 時 間 （ 分 ） エンドトキシン濃度（EU/mL） 100.0 10.0 1.0 0.0001 0.001 0.01 0.1 1 10 100 Onset OD:0.20 Onset OD:0.05 0.9% NaCl 3% NaCl 2.5%ブドウ糖 リンゲル液（原液） 硫酸Mg（50 mM） イオタラム酸メグルミン（1.0%） 炭酸水素Na（0.25%） クエン酸Na（0.1%） ヘパリンNa（10 U/mL） キシリトール（2.5%） エンドトキシン抽出液（0.1%） 83 100 90 104 79 85 96 110 90 100 123 0 共 存 薬 剤 50 100 150（%） 0.9% NaCl 3% NaCl 2.5%ブドウ糖 リンゲル液（原液） 硫酸Mg（50 mM） イオタラム酸メグルミン（1.0%） 炭酸水素Na（0.25%） クエン酸Na（0.1%） ヘパリンNa（10 U/mL） キシリトール（2.5%） エンドトキシン抽出液（0.1%） 68 33 85 106 44 90 148 108 94 92 114 0 共 存 薬 剤 50 100 150（%） リムルスカラーKYテストワコーの場合 Endochrome-KTMの場合 ※Onset OD: 0.05のデータです。 エンドトキシン濃度（EU/mL） 活性化時間（分） 0.0005 100.786.7 94.0 0.0050 44.744.7 44.3 0.0500 22.021.0 22.3 0.5000 10.310.7 11.1 5.000 5.05.2 5.3エンドトキシン検出用試薬
リムルス ES-Ⅲ
エンドトキシン検出用試薬
平行線定量法とは 一般には、あるサンプルの内在エンドトキシンを定量するには検量線法が用いられています。この方法では、標 準品のエンドトキシンの各濃度に対するゲル化時間をプロットし、用量反応直線（検量線）を作成し、これに希 釈サンプルによるゲル化時間を当てはめ希釈サンプルのエンドトキシン量を求めます。そして求められた希釈 サンプル中のエンドトキシン量に希釈倍率を乗じて、サンプルの内在エンドトキシン定量値としています。 この方法には、エンドトキシン濃度の変化にとも なうゲル化時間の変化はサンプルでも標準品で も同じ割合であり、サンプルをどんな希釈倍数 （ただしエンドトキシンの検出限界内）で定量して も求められるサンプル中のエンドトキシン定量値 は同じになる、という仮定が含まれます。これは すなわち、標準希釈系列の用量反応直線とサン プル中のエンドトキシン濃度による用量反応直 線は平行であるということを暗黙的に認めている ことに相当します。 しかし、生物学的製剤等では反応系によっては、 前述の仮定が正しくないこともあります。2つの 用量反応直線が平行でない場合、測定に用いた サンプルの希釈率によって、製剤の内在エンドト キシン量の計算値が大きく異なってしまうことに なります。平行線定量法は、標準品とサンプルの それぞれの希釈系列による用量反応直線を作成 し、統計的手法を用いて標準品とサンプルの用量 反応直線の平行性を検定することによって、両用 量反応直線が互いに平行である場合に、サンプ ル中の被検物質（エンドトキシン）量を標準品に 対する相対価値として定量する方法です。 ● 10 希釈→ 1/10 濃度とならない場合 例えば、10 倍に薄めたサンプルに標準検量線を適用して、 本当に1/10 の濃度値が導出されるかどうかを確認後、 標準検体に対する相対力価と してサンプル中の被検物質の濃度を求めます。 図 1 検量線法によるエンドトキシンの測定 ● 10 希釈→ 1/10 濃度となる場合 図 2 平行線定量法によるエンドトキシン量の測定 平行 平行でない 比濁法 エンドトキシン特異的 日本薬局方 生物学的製剤基準 マルチテスト コードNo. 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 295-51801 カブトガニ血球抽出物 ES-III凍結乾燥品 0.0156-0.25 （2.0mL 用×5本）100回用 58,000 特長 ●生物学的製剤、特にアルブミン製剤やアルブミンを含有した製剤に最適な試薬。 ●アルブミン含有量6%から測定可能。 ●生物学的製剤基準の「エンドトキシン試験法」で要求される「平行線定量法」に適用可能な試薬。 ●日本薬局方収載「エンドトキシン試験法」に適合したキットおよび試薬。 ●測定試料のpHの影響を受けにくいため、安定したエンドトキシン測定が可能。 専用ソフトウェア「トキシマスター® QC7」または「トキシマスター® QC7 ER/ES」では、生物学的製剤基準のエンドトキシン 試験法に記載された平行線定量法によるデータ処理機能をサポートし、HSAやインターフェロンのほか、様々な生物学的 製剤のエンドトキシン試験に利用できるように設計されています。分散分析の結果と製剤内在エンドトキシンの定量値 および生データを、画面およびプリンタに出力できます。 検体の濃度点数や繰り返し数など、検体設定内容をチェックするテンプレート。 チェック機能で各種試験項目に準拠した試験をサポートします。 測定終了後に、必要な試験結果を表示・プリントアウト。平行線定量法に準拠したレポートを作成できます。 ■ 専用ソフトウェアの設定画面 ■ 測定レポート ゲ ル 化 時 間（ 分 ）エンドトキシン検出用試薬 パイロセップ™（水不溶性担体にスペーサーを介してヒ スチジンを結合させたアフィニティー吸着体で、エンド トキシンを特異的に吸着する）を充てんしたキャピラリ ーカラムに、試料中のエンドトキシンを吸着させます。 試料を洗い流した後、吸着したエンドトキシンをライセ ート試薬と反応させて、試料中のエンドトキシンの定量 を行います。測定はトキシノメーター®で行います。 A．透析液中エンドトキシン測定への応用 市販の腹膜透析液ダイアニールPD4（バクスター社）、人工腎臓用補液サブラッ ドA 及びB（扶桑薬品）各5.0mLにUSP標準エンドトキシンを添加した後、0.1M 酢酸でpHを5付近に調製して検体としました。これらのエンドトキシン濃度を パイロセップ™法で測定し、添加エンドトキシンの回収率を求めました。 パイロセップ™法を使用することにより、透析液中のエンドトキシンが0.1EU/L から検出可能となりました。 エタノール、シリコンオイル、大豆油、オリーブ油、ステアリン酸、卵黄レシチン、オイルアジュバンドのワクチン、 アルブミン製剤、凝固因子製剤（第8因子）、インターフェロン製剤、アンチトロンビンIII製剤、免疫グロブリン製剤、 その他、エタノールに溶解できる試料は測定可能。 B. 脂溶性ビタミン中のエンドトキシン測定の応用 脂溶性ビタミンであるビタミン D、E、K をエタノールで溶解し、USP 標準エンドトキシンを添加した後、パイロセップ™法でエンドトキシ ン濃度を測定、添加したエンドトキシンの回収率を求めました。 パイロセップ™法を用いることにより、これまでリムルス試薬では 測定不可能だった脂溶性ビタミン中のエンドトキシンが測定可能とな りました。 O OH スペーサー アガロース 試料 トキシノメーター ライセート試薬 エンドトキシン 阻害あるいは活性化物質 偽陽性物質 吸着 パイロセップ 分離 ヒスチジン O OH スペーサー アガロース 試料 トキシノメーター ライセート試薬 エンドトキシン 阻害あるいは活性化物質 偽陽性物質 吸着 パイロセップ 分離 ヒスチジン キャピラリー （シリコンチューブ付き） 3方コック アダプター注射器 試料 パイロセップ トキシノメーターで測定する ライセートES試薬 パイロセップ ™ 懸濁液を軽 く振り混ぜながら吸引し、内 容液全量をキャピラリーカラ ムに充てんする。 試料を吸引したキャピラリーカラムに、 LAL 溶解液で溶解したLAL ES 試薬を 吸引する。 LAL ES 試薬をパイロセ ップ ™ ゲルと一緒に、 LAL ES 試薬が入ってい た 試 験 管 にゆっくり 排出する。 パイロセップ ™を充てんしたキャピラリー カラムに、試料を吸引する。 ・エンドトキシンは吸着され、共存物質は パイロセップ ™を素通りして除かれます。 ・試料のpHは3〜7に、イオン強度は0.05 以下になるようにしてください。 ・試料がリムルス反応に阻害などの影響を 与える場合は、洗浄液を通して洗浄します。 表1 パイロセップ ™法における腹膜透析液・補液の エンドトキシン回収率 検体 エンドトキシン エンドトキシン 添加量（EU/L） 回収率（％） ダイアニールPD4 0.1 80 1.0 72 サブラッドA 0.1 144 1.0 102 サブラッドB 0.1 108 1.0 118 表2 パイロセップ™法におけるエタノール溶解脂溶性 ビタミン のエンドトキシン回収率 ビタミン 濃度 エンドトキシン （mg/mL） 回収率（％） D2 10 170 E 10 91 20 83 K 10 99 20 68 （内容） 20mL注射器（針なし）×12本、三方コックR 型×12個、専用アダプター×20 個、目玉クリップ× 12個、FALCON 352058ポリスチレンチューブ（5mL）×25本、FALCON 352057ポリスチレンチ ューブ（14mL）×25本、試験管立て（50穴）×1個、手順書 1部 256 16 4 2 0.1 1 10 EC-6 濃度値（EU/L） 100 1000 ゲル化時 間（分） 測定原理 パイロセップ™の模式図 測定方法 （1）LAL ESシングル試薬：カブトガニ血球抽出物の凍結乾燥品 20バイアル（0.3mL用） （2）パイロセップ™懸濁液（リン酸緩衝液に懸濁） 20バイアル（0.77mL） （3）LAL溶解液 2バイアル（7mL） （4）洗浄液 4バイアル（11mL） （5）検体希釈用緩衝液 4バイアル（10mL） （6）キャピラリー（シリコンチューブ付き） 20本 ・本品には、注射器、3方コック、専用アダプターは入っておりません。 別途、PSアクセサリーキット（294-33311)をお求めください。 ※ホームページ「Wako LALシステム」で操作方法が動画でご覧いただけます。 Wako LALシステム HOME ＞サポートサービス＞使い方紹介ムービー ※エンドトキシンは終濃度が0.05EU/mLとなるように添加 比濁法 エンドトキシン特異的 日本薬局方 シングルテスト アクセサリーキット コードNo. 品名 内容量 希望納入価格（円） 299-54501 リムルスPSシングルテストワコー 20回用 103,000 コードNo. 品名 内容量 希望納入価格（円） 294-33311 PSアクセサリーキット 1セット 20,000
リムルス PSシングルテストワコー
エンドトキシン検出用試薬
特長 ●パイロセップ™に試料中のエンドトキシンを吸着させて濃縮するので、共存物質の影響を受けずに、 微量のエンドトキシンを特異的に測定することが可能。 ●エンドトキシンはエタノール中でもパイロセップ™に吸着するため、通常のリムルステストでは検出不可能 な脂溶性試料でも、エタノールに溶解できればエンドトキシンの測定が可能。（例：脂溶性ビタミン、油脂） ●ライセート試薬は測定に必要な数だけ使用できるので、無駄がありません。 ■ 測定原理 ■ 応用例 ■ その他の応用例 ■ 内容 検量線（検体量：5.0mL）No. 設定濃度値（EU/L） Tg（min.） 平均ゲル化時間（分）
1 1.000 53.0 53.60 53.4 54.4 2 2.000 41.6 41.53 41.2 41.8 3 10.00 26.6 26.07 26.0 25.6 4 100.0 14.6 14.60 14.8 14.4
エンドトキシン検出用試薬
リムルス ES-ⅡプラスCSシングルテストワコー
エンドトキシン検出用試薬
比濁法 エンドトキシン特異的 簡便法 特長 ●保存検量線データ付属。 ● PCとPPCを付属の低含量CSEから１ステップで調製可能。 ●測定試料のpHの影響を受けにくいため、安定したエンドトキシン測定が可能。 ●検体中の(1→3)-β-D-グルカンの影響を受けることなく、エンドトキシンを特異的に検出可能。 ●ライセート試薬としてリムルスES-Ⅱシングルテストワコーを使用した場合に高い相関性。 ＊トキシノメーター ET-Mini、ET-6000、ET-5000で測定が可能。ただし本キットを使用の際は、装置の温度 キャリブレーション（校正）が必要です。1年に1度のStandard OQサービスをおすすめいたします※。 40ページをご参照ください。 シングルテスト 低含量 CSE付 コードNo. 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格(円) 299-77201 リムルス ES-ⅡプラスCSシングルテストワコー 0.01-1 32回用（※） 49,500 ※本キットは日本薬局方のエンドトキシン試験法には準拠しておりません。 （リムルスES-Ⅱシングル試薬 0.2mL 用×32本、低含量 CSE×16 本、検量線データシート１枚） （※）標準プロトコルで使用時は８検体測定分に相当します。 検量線データ QRコードリーダー 検量線データシート PC（陽性コントロール）調製 試薬キットに付属している検量線 データシートの QRコードを QRコ ードリーダーで読み込むことで、標 準液調製と検量線測定が不要にな ります。その為、作業時間の短縮と、 試薬や希釈用試験管など消耗品の 節約になります。 ■保存検量線データの提供 【検量線読み込み（QRコード）】 ※QRコードリーダーが使用できるのは トキシノメーター ET-Mini のみになります。 ※QRコードは（株）デンソーウェーブの 登録商標です。 リムルス ES-II プラス CS シングルテストワコーには、 低含量のCSE（Control Standard Endotoxin)が付属されており、 日本薬局方で定められたエンドトキシン標準品(JP-RSE)を用いて検定した力価を表示しています。 PCおよびPPC は 、CSE の凍結乾燥品を検量線の中点濃度( 0.1EU/mL) になるように溶解して調製します。 CSE をエンドトキシン試験用水で溶解するとPC、試料溶液で直接溶解すると PPC が調製できます。 ※低含量CSE からリムルスES-Ⅱシングル試薬に試料を添加する際は、バイオクリーンチップワコーⓇエクステンドSⅡ （42ページ参照）を使用すると便利です。 ※24〜25ページおよび38ページでは、PC: 陽性コントロール、PPC：陽性製品コントロールのこと。 ■PCとPPCの調製陽性コントロール調製
(PC)
表示力価に従い 0.1EU/ｍLに溶解 CSE入りチューブ陽性製品コントロール調製
(PPC)
表示力価に従い 0.1EU/ｍLに溶解 試料溶液 CSE入りチューブ リムルスES-‐Ⅱ plus CS シングルテストワコー PPC（陽性製品コントロール）調製エンドトキシン検出用試薬
リムルス Jシリーズ
エンドトキシン検出用試薬
比濁法 ゲル化法 日本薬局方 シングルテスト※ 比濁法用 コードNo. 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 299-53401 リムルス HS-T シングルテストワコー 0.002-1 25回用 32,000 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 CSE付 コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 290-21941 リムルス J テストワコー 0.25 （5.2mL 用×1本）50回用 24,000 296-22141 リムルス HS-J テストワコー 0.03 （5.2mL 用×1本）50回用 25,000 298-22341 カブトガニ血球抽出物 J 0.25 （5.2mL 用×1本）50回用 19,000 294-22441 カブトガニ血球抽出物 HS-J 0.03 （5.2mL 用×1本）50回用 20,000 コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 290-22041 リムルス J シングルテストワコー 0.25 25回用 30,000 292-22241 リムルス HS-J シングルテストワコー 0.03 25回用 32,000 マルチテスト シングルテスト※ ゲル化法専用 特長 ● 日本薬局方収載「エンドトキシン試験法」に適合したキットおよび試薬。 ● 日本薬局方標準エンドトキシン（JP-RSE）によるゲル化感度検定力価（EU/mL）を表示。 ● 強固なゲルが形成されるためゲル化転倒法による判定が容易です。 ● （1→3）-β-D-グルカンにも反応。 特長 ● 日本薬局方収載「エンドトキシン試験法」に適合したキットおよび試薬。 ● トキシノメーター®による高感度分析が可能。 ● （1→3）-β-D-グルカンにも反応。リムルスHS-Tシングルテストワコー
Endochrome-K
TM
比濁法 日本薬局方リムルス F シリーズ
比濁法 ゲル化法 FDA 承認 マルチテスト コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 293-52701 リムルス HS-F テストワコー 0.03 （5.2mL 用×1本）50回用 25,000 298-52511 カブトガニ血球抽出物 F 0.25 （5.2mL 用×1本）50回用 19,000 290-52711 カブトガニ血球抽出物 HS-F 0.03 （5.2mL 用×1本）50回用 20,000 CSE付 CSE付 CSE付 コードNo. 品名 表示感度（EU/mL） 内容量 希望納入価格（円） 297-52601 リムルス F シングルテストワコー 0.25 25回用 30,000 299-52801 リムルス HS-F シングルテストワコー 0.03 25回用 32,000 シングルテスト※ ゲル化法専用 特長 ● 米国食品医薬品局（FDA）の認可を取得（U.S. License No.1197）。 ● 米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬。 ● USP標準エンドトキシン（USP-RSE）によるゲル化感度検定力価（EU/mL）を表示。 ● 強固なゲルが形成されるためゲル化転倒法による判定が容易です。 ●（1→3）-β-D-グルカンにも反応。 プレートリーダー法 トキシノメーター法比色法 FDA 承認
チャールス・リバー・ラボラトリーズ
CHARLES RIVER LABORATORIESマルチテスト
CSE付
コードNo. メーカーコード 品名 検量範囲（EU/mL） 内容量 希望納入価格(円)
519-87321 R1708K Endochrome-K ™ 0.005-50 256回用 110,000
(Endochrome- K ™試薬3.2mL 用×8バイアル、コントロールスタンダードエンドトキシン(CSE)×2 バイアル、LAL 溶解液30mL×3本)
513-87341 R1710K Endochrome-K ™ 0.005-50 320 回用 128,000 (Endochrome- K ™試薬3.2mL 用×10バイアル) 516-87331 R17100K Endochrome-K ™ 0.005-50 3200回用 照会 （Endochrome- K ™試薬3.2mL 用×100バイアル） 特長 ● 米国食品医薬品局（FDA）の認可を取得（U.S. License No.1197）。 ● 米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬。 ● ライセート試薬と発色合成基質が一体製剤されており、試薬溶解後、試料と混合するだけで反応を開始させることが可能。 ● トキシノメーター®／マイクロプレートリーダーによる測定が可能。 ● （1→3）-β-D-グルカンにも反応。
ペプチドグリカンおよびβ - グルカン検出用試薬 PGはグラム陽性菌のみならずグラム陰性菌にも存在するため、SLP試薬は、グラム陽性・陰性にかかわらず、広く 一般の細菌に反応します。また、真菌由来のβ-グルカンにも反応することから、SLP試薬は微生物全般に反応す ると考えられます。これらのことにより、エンドトキシン及びβ-グルカンに反応するライセート試薬とSLP試薬の 併用で、検体中の微生物の種類を予測できる可能性が考えられます。 1．ペプチドグリカンの構造活性相関、生合成、代謝、病因的意義の解明 2．水質汚染の指標 3．人工透析液の微生物汚染対策 4．医薬品、生物製剤、遺伝子工学製品などの菌体成分混入の検出 5．昆虫の生体防御反応機構の解明 カイコ（Bombyx mori）の体液中にはフェノール酸化酵素前駆体（ProPO）カスケードと呼ばれる生体 防御機構が存在し、ペプチドグリカン（PG）および（1→3）-β-Dグルカン（β-グルカン）によって反応が 開始され、最終的にフェノール酸化酵素（PO）が活性化されます。POの活性化の機構は、複数のセリンプロテア ーゼの活性化を含むカスケード機構であると推測されておりますが、現在のところ十分には解明されておりませ ん。このカスケード機構は、異物侵入の際に昆虫体内で認められるメラニン形成に重要な役割を果していると考 えられております。 SLP試薬は、カイコの体液を無菌的に採取・調製した、ProPOカスケードの因子をすべて含んだ凍結乾燥品です。 本試薬はPGおよびβ-グルカンによって活性化され、基質剤に含まれるDOPA（L-3,4-ジヒドロキシフェニルアラ ニン）を酸化し、メラニン色素を生成します。PGはほとんどの細菌の細胞壁に、β-グルカンも多くの真菌の細 胞壁に認められる成分であることから、生成したメラニン色素を指標として、各種微生物の検出が可能です。 SLP試薬の活性化機構は図1のように考えられております。す なわち、PGまたはβ-グルカンがそれぞれの認識タンパク （PGRPおよびβGRP）と結合することにより、ProPOカスケー ドの反応が開始され、最終的にPOが活性化されます。活性化 したPOによって基質剤中に含まれるDOPAが酸化され、結 果として黒色のメラニン色素が生じます。カブトガニ血球抽出 物（ライセート試薬）で検出することのできるエンドトキシン はSLPのカスケード機構を活性化しませんが、ライセート試薬 では検出できないPGをSLP 試薬で検出することができます （図1）。 SLP試薬は、各種細菌由来のPGおよびβ-1、3-グルコシド結 合を持つβ-グルカンに強く反応しますが、グラム陰性菌の細 胞壁成分であるリポ多糖（エンドトキシン）にはほとんど反応 しません。 βGRP 未知の因子 PPAE PGRP Pro-PPAE ProPO DOPA ドーパクロム メラニン PO （1→3）-β-D-グルカン ペプチドグリカン
原理
図1 カイコ血液のフェノール酸化酵素前駆体カスケードペプチドグリカンおよび β- グルカン検出用試薬
特長 1．高感度でペプチドグリカンおよびβ-グルカンを測定可能。 2．特別な測定装置を必要としない目視判定法による測定可能。 3．マイクロプレートリーダーや並列型比濁時間分析装置トキシノメーター ®を用いることにより、 精度よく、高感度にペプチドグリカンおよびβ-グルカンの定量が可能。 4．本品は、冷蔵（2〜10℃）で18か月以上安定。 ■ 用途SLP 試薬セット
● SLP試薬セット 1．SLP 試 薬 1バイアル 3mL用 感度：目視判定法（30℃、1時間反応）によるエンドポイント（PG及び β-グルカン）をロットごとに表示。 2．基 質 剤 1バイアル 3mL用 DOPAを含有 3．基質溶解液 1バイアル 4mL用 グッド緩衝液を含有 ● SLP-HSシングル試薬セット 1．SLP-HS（Silkworm Larvae Plasma High Sensitive） 0.2mL用×20バイアル 感度： 10pg/mL（PG） 1pg/mL（カードランアルカリ溶解液） （トキシノメーター®（30℃）で120 分以内に検出） 2．SLP-Diluent 1.0mL用×20バイアル 3．Standard（Digested Peptidoglycan from S. aureus） 0.5mL用×1バイアル 活性化時間 （ 分 ） 活性化時間 （ 分 ） 透過光量比 （ ％ ） 活性化時間（分） ゲル化時間（分） ※1 : （1→3）-β-D-グルカン ※2 : SLP 試薬セット用、Micrococcus luteus 由来のペプチドグリカン 1μg/mLを含有 SLPを用いたPG並びにβ-グルカンの測定法として、トキシノメーター®法、マイクロプレートリーダー法、目視判定 法があります。 トキシノメーター®およびマイクロプレートリーダーでは、活性化に伴って生じる色素量を吸光度変化として捉え、 吸光度があらかじめ設定したしきい値に達するまでの反応時間を活性化時間（Ta、またはOnset Time）とし、Ta を指標にSLP 活性化物質（PGおよびβ-グルカン）を定量します。この原理は、トキシノメーター®を用いてエンド トキシンを測定する場合と同様です（図2）。トキシノメーター®法を用いた測定例を図4に、マイクロプレートリー ダーを用いた原理（図3）と測定例を図5に示します。 目視判定法では、一定時間反応させた後、反応液の色調の変化を観察することにより判定を行ないます。 この方法は、ライセート試薬におけるゲル化転倒法と同様の方法ですが、反応液の色が変化するため判定が容易 であること、振動の影響を受けないこと等で優れています。 図2 測定原理： 測定開始からR（t） がRthになるまでのTaを 測定します。（Th： 判定しきい値） 図 3 測定原理：測定開始から OD ＝ 0.01 に達する時間を測定 図 4 トキシノメーターR法 図5 マイクロプレートリーダー法 関連商品 コードNo. 品名 規格 内容量 希望納入価格（円） 297-51501 SLP試薬セット 微生物検出用 3mL用 55,000 293-58301 SLP-HS シングル試薬セット 微生物検出用 20回用 62,000 コードNo. 品名 規格 内容量 希望納入価格（円） 030-09903 カードラン※1 生化学用 1g 1,800 162-18101 ペプチドグリカン※2 生化学用 2mL用 5,400Silkworm Larvae Plasma 試薬
■ 内容
その他関連試薬
1500
Product A (Pipet)
Water 0.05％ TEA 本品 Solution for Extraction
Water 0.05％ TEA 本品 Solution for Extraction
Water 0.05％ TEA 本品 Solution for Extraction
Water 0.05％ TEA 本品 Solution for Extraction
Endotoxin(mEU/product ) Endotoxin(mEU/product ) Endotoxin(mEU/product ) Endotoxin(mEU/product
) Product C (Pipet) Product D (Serum tube)
Product B (Pipet) 1000 500 50 100 50 0 25 0 50 25 0 0 1．エンドトキシン検出用抽出液の調製 本品1バイアル（10mL）をエンドトキシンフリー水190mLと混合し、20 倍希釈して使用します。 2．使用方法 エンドトキシン検出用抽出液を一定量とり、用具等の検体を浸漬、または検体に添加し軽く攪拌した後、 約1時間室温で放置します。再び軽く攪拌し、抽出されたエンドトキシンを測定します。 1）井上勝二、高岡文、土谷正和、松浦脩二：日本動物実験代替法学会第6回大会要旨集、110（1992） 2）井上勝二、原田和明、土谷正和、松浦脩二：日本防菌防黴学会第21回大会要旨集、44（1994） 医療用具等のエンドトキシン試験に最適。 医療用具等のエンドトキシン試験には従来、水や生理食塩水による抽出法が用いられていますが、これらの 方法では必ずしも有効に抽出されていないことが判ってきました。本品は人血清アルブミン（HSA）を含有し たエンドトキシンフリーの抽出液（20 倍濃縮液）で、水や生理食塩水では抽出できないエンドトキシンも抽 出することが可能です。特に血液やたんぱく質を含有した液体と接触する用具のエンドトキシン試験には、 本品の使用を推奨します。 各種抽出液を用いた市販滅菌済用具のエンドトキシン汚染検出 コードNo. 品名 規格 内容量 希望納入価格（円） 293-51601 エンドトキシン検出用抽出液（20倍濃縮液） エンドトキシン検出用 10mL×4 15,300
エンドトキシン検出用抽出液
■ 使用方法 ■ 参考文献エンドトキシンインジケーター
その他関連試薬
エンドトキシン試験関連試薬
乾熱滅菌バリデーション用試薬エンドトキシンインジケーターは、乾熱滅菌のバリデーションやモニタリン グ用として開発されました。乾熱滅菌工程の有効性は、乾熱滅菌前後のエンドトキシン値を測定することで 確認できます。 各種標準品、バッファー コードNo. 品名 内容量 希望納入価格（円） 638-01021 日本薬局方エンドトキシン標準品 10,000~25,000EU/vial※ 照会 531-13371 USP標準エンドトキシン 10,000EU 照会 293-16541 コントロールスタンダードエンドトキシン（CSE） 500ng 6,200 201-10421 0.1Mトリス-塩酸緩衝液（pH7.3）ライセート試薬溶解用 5mL×10 13,000 ※ロットにより変動 コードNo. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格（円） 517-87121 EVV2K エンドトキシンインジケーター2,000EU 12バイアル 32,000 513-87081 EVV10K エンドトキシンインジケーター10,000EU 12バイアル 32,000 516-87071 EVV100K エンドトキシンインジケーター100,000EU 12バイアル 32,000 513-87101 EVV1M エンドトキシンインジケーター1million EU 1バイアル 8,500 510-87111 EVV2.5M エンドトキシンインジケーター2.5million EU 1バイアル 12,500 510-87091 EVV10M エンドトキシンインジケーター10million EU 1バイアル 12,500チャールス・リバー・ラボラトリーズ
LPS（リポポリサッカリド、 リポポリサッカライド、リポ多糖、内毒素）はグラム陰性菌の外膜に存在している 成分です。様々な生物活性発現や細胞間コミュニケーションに大きな役割を果たしており、近年ではLPSを用 いた自然免疫研究、生体防御機能の研究が盛んに行われています。 フェノール抽出品 超遠心品 コードNo. 品 名 規格 内容量 希望納入価格（円） Campylobacter jejuni 128-05671 Lipopolysaccharide, from C. jejuni Penner O:19 細胞生物学用 5mg 20,000 Escherichia coli 120-05131 Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細胞生物学用 25mg 16,000 127-05141 Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細胞生物学用 25mg 16,000 125-05201 Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細胞生物学用 25mg 16,000 124-05151 Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細胞生物学用 25mg 16,000 Proteus 124-05271 Lipopolysaccharide, from P. vulgaris OX2 細胞生物学用 25mg 17,000 121-05281 Lipopolysaccharide, from P. vulgaris OX19 細胞生物学用 25mg 17,000 128-05291 Lipopolysaccharide, from P. mirabilis OXK 細胞生物学用 25mg 17,000 コードNo. 品 名 規格 内容量 希望納入価格（円） Bordetella pertussis 126-06331 Lipopolysaccharide, from B. pertussis Tohama 細胞生物学用 2mg 35,000 Escherichia coli 121-05161 Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細胞生物学用 5mg 20,000 128-05171 Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細胞生物学用 5mg 21,000 126-05471 Lipopolysaccharide, from E.coli O103 細胞生物学用 5mg 19,000 125-05181 Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細胞生物学用 5mg 19,000 124-06251 Lipopolysaccharide, from E.coli O113 細胞生物学用 5mg 28,000 122-05191 Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細胞生物学用 5mg 19,000 120-06471 Lipopolysaccharide, from E.coli O128 細胞生物学用 5mg 25,000 121-06261 Lipopolysaccharide, from E.coli O150 細胞生物学用 5mg 28,000 129-05461 Lipopolysaccharide, from E.coli O157 細胞生物学用 5mg 21,000 222-01901 Lipopolysaccharide, from E.coli O86a 細胞生物学用 5mg 22,000 Pseudomonas aerug linosa 129-05961 Lipopolysaccharide, from P. aeruginosa PA01 細胞生物学用 5mg 24,000 Salmonella 126-05971 Lipopolysaccharide, from S. typhimurium 細胞生物学用 5mg 23,000 127-06481 Lipopolysaccharide, from S. typhimurium G30/C21 細胞生物学用 2mg 39,000 124-05651 Lipopolysaccharide, from S. minnesota 1114 細胞生物学用 5mg 20,000 121-05661 Lipopolysaccharide, from S. minnesota R595 細胞生物学用 5mg 20,000 特長 ● 精製法により2種類の製品を用意。 フェノール抽出品： Westphal法（フェノール抽出法）による精製品 超遠心品： フェノール抽出品をさらに超遠心で2回精製した製品
LPS（リポポリサッカリド）
エンドトキシン測定用機器および関連器材
〈エンドトキシン測定用機器〉 トキシノメーター®ET-6000 MPRエンドトキシン測定システム サーモステーションTS-37S/24 バイアルチューブミキサー VTM-252 トキシノメーター ® ET-Mini ＆ リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー Endosafe®-PTSTM バリデーション・サポート・サービス （トキシノメーター®、MPRエンドトキシン測定システム） バリデーション・サポート・サービス（Endosafe®-PTSTM ） 〈関連器材〉 バイオクリーンシリーズ アクロディスク・シリンジフィルター アクロディスク・ムスタングE メンブレン セルファイン®ETクリーンその他関連試薬
エンドトキシン測定用機器 電子署名によるログイン機能で、登録ユーザー の み の 利 用に制 限。記 録と署 名をデータ ベース内でリンクさせることで、データの不正 改ざんや偽装を防ぎます。 システム使用やアクセスの許可範囲を複数の 権限グループとして管理。登録ユーザーは、 所属するグループに許可された範囲内で機能 を使用できます。 主要な操作内容は、コンピュータが自動生成 するタイムスタンプ付きで記録。データ変更時 には上書きされずに新たなリビジョンとして 記録登録されます。 電子署名 機能制限 オーディットトレイル（監査証跡） 操作性・拡張性に優れたパソコン制御タイプのトキシノメーター®システムです。検体数に応じモジュールの 増設が可能なため、少検体から多検体まで、幅広い分野のエンドトキシン測定に適用可能です。さらに 37℃ /30℃の温度切り替えにより、(1→3)-β-D-グルカンやペプチドグリカンの試験研究にもご利用いただけます。 エンドトキシン濃度とゲル化時間 Tgとの間には検量関係が得られ、検 体のゲル化時間からエンドトキシン濃度を算出します。 専用ソフトウェア「トキシマスター® QC7」または「トキシマスター® QC7 ER/ES」を 標準装備しています。 ※パソコンは、メーカーや機種等が 実際と異なる場合がございます。 各種試験項目に準拠した処理プロトコル の設定・登録。データ解析やルーチン作業 の省力化をサポートします。 リアルタイムに全ポジションのタイム コースを確 認。試 験 結 果 を 予 測し、 次の工 程 へ の対応を早 めることが できます。 測定終了後に、必要な試験結果を表示・プリ ントアウト。日本薬局方やFDAガイドラインに 準拠したレポートを作成できます。 プロトコル設定 タイムコース 検量線・測定レポート 本装置はエンドトキシンとライセート試薬との反応を430nmに おける透過光量の変化として捉えるものです。透過光量は反応 開始後しばらく一定であり、反応の進行に伴って透過光量は減 少し、反応完了と共に減少変化も止まります。 透過光量l(t)の反応初期の透過光量loに対する割合をR(t)とし、 この透過光量比の変化に対してしきい値Rthを設定し、反応開 始からR(t)がRthになるまでの時間をゲル化時間 Tgあるいは 活性化時間 Taとして読み取るものです。 R(t)=〔l(t)/lo〕×100% ER/ESシステム ER/ES非対応システム オプション 増設用モジュール コードNo. 品名 内容量 希望納入価格（円） 293-33761 トキシノメーター ® ET-6000/J ER/ESセット （内容）・ET-6000/J本体 ・トキシマスター ® QC7 ER/ES（5ライセンス*） ・パソコン（サーバー兼クライアント） ・検証資料 ・IQOQ作業 1式 3,000,000 コードNo. 品名 内容量 希望納入価格（円） 290-33771 トキシノメーター ® ET-6000/J 標準セット （内容） ・ET-6000/J本体 ・トキシマスター ® QC7 ・パソコン 1式 1,800,000 コードNo. 品名 内容量 希望納入価格（円） 290-34371 トキシノメーター ® ET-6000/J ER/ESアップグレードセット （内容） ・トキシマスター ® QC7 ER/ES（5ライセンス*） ・パソコン（サーバー兼クライアント） ・検証資料 ・IQOQ作業 1式 1,650,000 295-33461 トキシノメーター ® ET-6000専用架台 1台 42,000 コードNo. 品名 内容量 希望納入価格（円） 297-33781 トキシノメーター ® ET-6000/J 1台 1,400,000
