理学療法学 第21巻第 5 号 308
〜
314 頁 (1994 年)報 告
ラ
ット
膝 蓋
腱切 離
に
よ る
一
関
節筋
と
二
関
節
筋
の
筋線維径
への
影
響
*坂 本 美 喜
* *仲
沢
仁 内
藤
井
克
仁
原
田
孝
昌 之
要旨 膝蓋 腱 切離が一
関節筋と二関節筋の筋線 維の形態 と筋線 維径に与え る影響 を知る目的で ラッ ト大 腿四 頭 筋を組 織 学 的,
組織化 学 的に観 察し た。
腱 切離部は 3週後に肉 芽 組 織か ら瘢 痕組織へ 移行し,
6週 後 に は線維性瘢 痕組織で連続 性は保た れ,
腱の修復は完成した。 構築 的変化と して中心核やOpaque
線 維な ど が大腿 四 頭 筋にみられ た が,
い ずれも正常範囲 内であっ た。一
関節筋の内側広筋と中間広筋に3
週後に強い萎 縮が特に深 層に見ら れ た。 二関節筋の大腿直筋で は, 6
週後に軽度の萎縮が見ら れ た。9
週 後には全ての筋 線 維 径が回 復 し,
対 照 群と差が なくなっ た。 以 上の事 実より腱 切 離の影 響が筋 肉の形 態 的,
機 能 的 特 性に より異なる ことが示 唆された。
キー
ワー
ド ラッ ト膝 蓋 腱 切 離,
大 腿 四頭 筋,
組 織 化 学 的研 究 は じ め に 筋 肉の障害に対 する回復過 程や代 償 機 構を知る ことは,
運 動 療 法 を す すめ る ヒで重 要な課 題の ひとつ であ る。
従 来, 切 腱術に よ る筋の萎 縮に関する研 究は多 数 1−
6) 報告 さ れて い る が,一
関 節筋と 二 関節 筋の 浅層,
深 層 別 に そ の影響を観察し た研究は み あ た ら ない。一
関 節 筋は,一
っ の関 節のみに作 用す る が,i
関節 筋 は 二っ の関節に作 用 する た めに筋 線維径や筋線維タ イ プ の分 布 特 性 も異な るもの と考 え られ る。 今 回 我々 は,
膝蓋腱 切 離に よ っ ておこ る大 腿四頭筋の ’ HistochemicalStudy of the Differential Effect ef Ten
−
otomy of Rat Patellar Tendon on One
−Joint
and Two−
Joint Muscles
’
*
東邦 大 学 医 学 部 附 属 大 森 病 院 整 形 外 科 理 学 療 法 室
(〒 143東京都 大田区大森西6
−
ll−
1)Miki Sakamoto
,
RPT,
HitQshi Nakazawa,
RPTMasayuki Uchi
,
RP’
r.
Katsuhito Fujii,
RPT,
Takashi Harada
,
MDDepartment of Physical Medicine and RehabilitatioI1
,
TQho University School of Medicine
(受付日1993年 12月3日 /受理 凵1994年7月5日) 張力低下が, 二関節筋の大腿直筋と
一
関節筋の内側広筋, 中間広 筋に お け る筋線維の形態と筋線維 径にどのような 影響を与え る か を知る目的で,
組織学 的, 組織化学 的研 究を行っ た。 方 法 1.
材 料 ウィ ス ター
系雌ラッ ト34 匹 (12〜
14週齢,
平均 体 重 285 ± 22 g) を使 用 した。 右側の 膝 蓋 腱 を切 離 (n=
24
)し, 左側の膝蓋腱と大 腿四頭筋を対照 群 と して比 較 検 討 した。 な お正 常ラッ ト の組 織 化 学 的 特 性を知る目 的 で無 処置ラッ ト (n=
10)を あ わ せ て観察し た。
なお,
ラッ トの飼料 (オ リX ンタル 酵母製固形 飼 料 )と水は自 由に与え た。 実験 動 物は,
当大学実 験 動 物セ ン ター
で室 温23℃, 湿度 55% の一
定 環境 下で飼育し た。2 .
方法 ネン ブ ター
ル麻酔 (2.
5 mg / 100 g 体重,
腹 腔 内投 与) 下に て右 側の 膝 蓋 靱 帯の 中央 部 を 横 切 し,
4mm の間 隙を作り, 大腿四頭筋の機能不 全モ デルを作 成 した。
そラ ッ ト膝 蓋腱 切離に よる
一
関節 筋と 二関節筋の筋線維径へ の 影響 309 して, 3
週 (n=6
),
6週 (n=
6 ),
9週 (n・
」6
),
およ び 12週 (n=
6 )後に膝 蓋 腱な ら びに大 腿 直 筋 (RF ),
内 側 広 筋 (VM
), 中間広 筋 (VI )を採取し た。 腱 組 織は,
直ちに 4℃ のFormol−
calcium で 24 時 間 固定 後,
GumSacrose
にて48
時 間洗 滌した 。一
方,
筋 組織は直ちに ド ラ イ ア イス・
アセ トン(
−
60℃) で凍 結固定し,
ク リオス タッ ト で凍 結 切片 (10〜 12
μm 厚) を作 成した。 な お, 膝蓋 腱 切離 後は,
ケー
ジ内で飼育し,
特別な運動負荷は行わ なかっ た。
3 ,
観 察方法 (D
ラ ッ ト後肢の 機能不 全の程 度を,
切 離 後, 1
口,
3日,
正週, 3
週, 6
週,9
週,
12
週 時に ケー
ジ内と 回転車輪上で の走 行 中の跛行の出現頻 度か ら観 察し た。
(
2
)腱組織は,
矢 状面の縦 断切片を作 成し てヘ マ トキ シ リン・
エ オ ジン (HE ) 染 色,
酸フ ォ ス フ ァ ター
ゼ (ACP
)反応を行っ た。
(
3
} 筋 組織は, 各筋の筋 腹 中央 部 全 横 断 切片を作成し, 形 態 学 的観察はHE
染色で,
筋 線 維タイ プ識別はt ルー
チ ンATPase
反応 (pH9、
4
, 埜 中 法 7))に て行 っ た。 な お, 筋線 維の大 きさ は,
短径 法を用い Brooke の方 法 8) に従っ て測 定 し,
各ラ ッ トの浅層,
深 層 か らそれぞ れ 100個の筋 線 維 径を算 出し た。 4.
統 計 処理対照群と切 腱 群にお ける両 者の筋線維 径の差 を二 標 本 t検定
,
な らびに一
元 配 置 分 散 分 析を用い,
危険率 5% 以下を有意 と した。
結
果 1,
ラッ ト後肢の機能不 全 膝 蓋 腱 切離 後,3
日間は,
著しい跛行が見ら れ た。 そ の後徐々 に回復し,
1週 後には,
ケー
ジ内では跛行は見 られ な くなっ た。3
週 後には回 転 車輪 上での走 行で も跛 行は なく, 後肢の機能不 全は完 全に回 復し た。2 .
膝蓋腱部の所見 (1
) 肉 眼 的所見 :対照群で は, 腱は光 沢の ある白色で,
平 均 する と長さ6.
5mm ,
幅 4.
5 mm,
厚 さO.
7 mm で あっ た。 切離後3
週群で は切離し た間 隙は,
肥 厚 した淡 黄褐 色 調の瘢 痕 性の 組 織で埋 ま り連 続 性は保たれて い た。 膝 蓋 骨 は,
約4mm
上方に偏 位し て大腿 骨膝蓋面の中 枢 側に位 置 していた。 切 離 後6
週 群で は,
瘢痕性の腱 様 組 織は平 均で長さ 10mm,
幅 7.
O mm,
厚さ L5 mrn と な り, 腱 切離 部の連 続 性は,
完 成 して いた (図1
)。 な お9
週後と12
週 後 も同 様の所 見が認められ た。 組織学的所見HE
所 見 :対照 群に お け る膝蓋腱 組織の縦 断面は 膠 原 線 維の中に細長い核が整然と 配列して血 管は ほとん どな かっ た。 腱は,
粗な結合織か ら な る腱 周膜と考えら れ る組 織で被わ れて いた。 切離後3
週で は腱切離部の問 隙は連 続 性 を有 し,
肉芽 組 織か ら癜痕 組織に移行して い る線維 芽細胞で被 われ,
線 維 細 胞も多 数 見ら れ た。 ま た 毛 細[虹管の増 生 も多 数 認め ら れ,
線 維の走行は,
様々 な 方向へ 朿走して い た。 6週 後で は,
切 離 部の間 隙は,
瘢 図 1 膝蓋腱の肉 眼 的所見 (矢 印 ) A は対照群,
B は切 離 後6週の膝 蓋腱である.
310 理 学療霊去学 第 21 巻第 5 号 図 2
膝蓋腱組織の
HE
所 見 (矢 状 面) A は対照群,
B は切 離 後6週の ものである.
表1
対 照 群にお け る筋 線 維 径 Type IType
且 大 腿直 筋 浅 層 深 層38.
1
±7.
553
.
7
±2.
9
40.
3±3,
1 内 側広 筋 浅 層 深 層 42,
4
±3.
449
.
9
±2.
7
41.
3
±2.
5
中 間 広 筋 46.
7±4.
143.
8
±4.
5
単位 :μm 痕 性 線維 性 組織で被わ れて連続性 は完 成 して いた (図2
)。9
週 後な らびに12
週 後で は瘢 痕性組織の走行は, 頭 尾 方 向に比 較 的 整 然と配 列 する よ うになっ た。 ま た腱 の肥 厚 も,
3週な らびに, 6
週後の 所見より も少なく, 毛 細 血 管の増 生 も少なくなっ て いた。 瘢 痕 性 組織の中に,
正常な腱組織に近い部 位 も観 察 さ れ た。ACP
反 応:対照群で は,
腱 細胞に一
致 して,
ACP
が弱陽性に認め られた。
切 離 後3
週 群で は,
切 離 部 を修 復しっ っ あ る瘢痕 性組織の線 維芽細胞ま た は線 維 細 胞に強 陽 性に見ら れ,
毛細血管の 周辺に も強陽性に観 察 され た。 6週 後で も3
週群と同様に強陽性に 認 め ら れ た。 9週ならびに 12週 後に は,
毛 細 血 管の周辺の一
部 で 中 等 度に陽 性で あっ た が,
瘢痕性の腱 様組 織のACP
活 性は弱 陽 性と なり,
3週な ら びに6
週後と 比較して,
ACP 活 性は全 休に著しく低 ドし,
腱の修復過程と して 安 定 して きた像と なっ た。 3.
筋 肉の組 織 学 的,
組織化学 的所見 〔1) 正 常 (無 処 置 ) 群 :HE 所 見で は,
筋線維は多角 形で,
大 小 不 同はほとん ど なく,Opaque
線維も認 めら れ な かっ た。
核 は筋 線 維の辺 縁にあり,
中心核は0.
1
% 以下で あっ た。
タ イプ別 筋 線 維の分 布で は,
RF,
VM の 浅層は, タ イ プH
線維のみ で占め られ,
深 層へ 移 行 する ほ ど タ イ プ1
線維が増 加していた。
その割 合は各 筋に一
定し た分 布を示し た。VI
は,
タ イ プ1
線 維が優位で 80% 前 後 を 占め た。RF ,
VM
お よ びVI
を浅層の タ イ プ 皿線 維,
深 層の タイ プ 1 線維,
タイ プ皿線 維に分けて その筋 線 維 径 を 表 1に示 した。 {2)腱 切離 群 : 組織 学的 所 見 :腱 切 離の結 黒 引 き起 こさ れ る筋 線 維の構築 的変化と して,3
週後, 6週後で は,
巾心核,
Opaque 線 維,
筋 線 維 径の大小 不 同が 認 め られた (図 3)が,
いず れ も正 常 範 囲 内であり,
中心核とOpaque
線 維は経 時 的に減 少 する傾 向を示し た (表 2 )。組 織 化 学 的 所 見 :各 筋 線 維 径の経 時 的 変化を 表
3
に示し た。 大腿直筋と内側広筋は,
浅層タ イ プH
線維,
深 層タ イ ブH線 維,
深 層タ イ プ1線維に分けて, 中間広筋は, タ イ プ 1線 維とタ イプll線維に分けて観察し た。 a.
大 腿 直筋,
内 側 広 筋にお ける浅 層 タイ プH
線 維の 経 時 的変 化 :切離後 3週で,一
関 節 筋で ある VM は健 側 と比 較 して有 意に萎 縮 して いた (p〈 0.
05
)。 二関 節 筋で あ るRF は, 3週後, 6週後に萎縮が認め られた例 は半数 (n=3
)で,
その他の3
例に は萎 縮は認め られ な か っ た。 切離 後6 〜9
週に かけてすべて の筋 肉に回復 が み られ,
12週 後ではVM
も 全例が回 復し た。RF
は,
全 経 過 中,一
関 節 筋と比 較 して著しい萎 縮は認め られ な かっ た。b.
大腿直筋 内 側 広 筋に お け る深 層タイプ且線 維の 経 時 的変 化 :切離 後3
週のVM
は, 対照群と比較して 有 意 (p
<e.
OS
)に萎 縮してい た が, 6 〜9
週 に か けて 回 復が見 られ た。12
週後のVM
で は, 健側と比較し て 有 意 (p< O.
05) に肥 大して いた。 二関節筋で あ るRF
は,
全 経 過 中 萎 縮 はなく, 9 〜
12週にかけて肥大し た 例 (n=
=2
) もみ られ た。
c.
大腿直筋,
内 側 広 筋に お け る深 層タイ プ 1線 維の 経時的 変 化:腱 切 離 後3
週で VM の著 しい萎 縮 (p<0.
05
)が見ら れ た。
6週 後に は,
RF も萎 縮 (p< O.
05) を 認 めた が,一
方で VM の筋 線 維 径は回 復 して きた。 9週 後に はいず れの筋 線 維 径 も 回 復 し た。 12週 後のVM
は, 有意 (p< 0,
01)に肥 大 して いた。 d.
中間広筋に お け る経 時 的 変 化 : タ イプ1線 維に,
切離後3
週で著 しい萎 縮 (p<O.
Ol
)が見 られた が, 9
週後に は 回復を示 し た。
タ イ プll
線 維においても,
切離ラッ ト膝 蓋 腱 切離に よ る
一
関節 筋と二関節筋の筋線維径へ の影 響311
A は正 常な筋 線維,
B は筋 線 維の大小 不 同,
図3
C はOpaque線維,
Dは中心核を示す (いずれもHE 染色 ).
表2 膝 蓋 腱 切 離 後に観 察 された構 築 的変 化の経 時 的推移 構築 的変化 筋 名3
週6
週 9週 12週 大 腿 直 筋 3 1 1 G 中 心 核 内 側 広 筋7
4 42
大 腿 直 筋 1 1 0 o Opaque 線 維 内 側 広 筋 0 40
1
20
↓4
4
6
o
大 腿 直 筋 70↑5
10
29
筋線維径の大 小 不 同20
↓3
2
3
0
内 側 広筋 70↑ 02
0 2了
:関節筋で ある大腿直筋と一
関節筋である内側広 筋にお ける 1,
000ma の筋 線 維 を 観 察 した場 合に異 常 所 見の認 めら れ た筋 線 維 数 を示 して い る.
20 ↓ (20μm 以 下 ) を 萎縮 線 維,
70 † (70μm 以上 ) を 肥大 線 維 と した.
後3週で著 し い萎 縮を示し た が は回 復 する傾向が認め られ た。考
察
(pく 0.
01),6
週後に 腱 切 離 後に引 き起こされる筋肉の諸変 化につ いて は,
従 来の 実 験 的研 究で はア キ レ ス腱 切 離に よる腓腹筋,
ヒ ラ メ筋に関 する報 告1−
3’
9−
n)が 中心であっ た。 筋。
腱 切離 後に引 き起こされ る筋 萎 縮につ いて Eccelesi)は,
筋 線 維に有 効な張 力が発 生しな い た めに起こる と述べ てい る。Hnik2
) は筋 萎 縮の メ カ= ズム を末 梢性要 因と して筋収 縮の低 下 と筋の短 縮に よっ て筋 自体の代謝が変化した た めに起こり,
また中枢 性の要 因と して中 枢の知覚 性 刺 激 の作 用によっ て筋 萎 縮が引き起こ さ れ る と推論して い る。一
方,
Award ら3)は,
不動 性の因 子,
解 糖 系 回路の 抑 制,ATP
生 成の欠 如の3
因 子が筋 萎縮の発生に関 与 して い る であろ うと述べ て いる。312 理学療法学 第 21巻第 5 号 表3 腱 切 離 群におけ る筋 線 維 径の経 時 的変 化 (対照 群に対 する比 率1%)
3
週後 6週後9
週 後12
週後 大 腿 直 筋 浅 層Type
H 線維 深層Type
I
線 維 深層 Type 皿線維95.
7
±7,
7
95.
7
±5.
1
10L8
±6.
7
93.
7
±5.
7
87.
7
±4.
5
*97.
0
±5.
1
95,
4
±9 .
7
99.
1
±6 .
7
104,
G
±5.
4
99.
8
±8.
1
100.
8
:ヒ8.
5
105,
2
±11.
0
内 側 広 筋 浅層Type
H
線 維 深層Type
I
線 維 深層 TypeH
線維88.
9
±4.
6
*82.
4
±5.
9
*90.
5±4.
8*95.
2
±8.
8
99.
1
±19.
9
101.
3
±16.
692.
6
±6.
0
103,
2
±9 .
1
105.
5
±10.
1100.
4
±2.
6
HO ,
2
±6.
2
聯109,
9±9.
0
本 中 間 広 筋 Type I 線維 Type 且 線維 77.
2
±4.
4* 串76.
9
±12.
4* * 89.
6±6.
4累93.
1±10.
0102.
9±12.
4 102.
3
±8 .
9
HO.
0±15.
7* 寧106.
7
±17.
1
* pく 0.
05 * * pく0.
01 ところ で,
筋線維タ イ プの分布は,
動物の種類に よっ て著しく異なっ て いる。 ま た, 深度別に タ イ プH
線維の 多い部 位 とタ イ プ1 線維の多く分布する部位に分け ら れ るこ と をAriano ら12)は報告してい る。 我々の,
観 察 し た ラッ トの骨格筋もRF
とVM
で は浅層は タイプH線 維のみ分 布して深部に いくにつ れて タ イ プ1線 維が多 く なっ て いた。 従っ て,
浅 層は,
速い運 動に関 与 するが,
疲 労しやすい筋線 維の成 分を有し,
深 層は,
ゆっ く り し た疲 労 しに くい筋 線 維の構 成を して い るものと推 察され る。
今 回,
我々 が行っ た実 験 結 果で は,
膝 蓋 腱 切 離に よ る筋 萎 縮の程 度や進 行 度は,
大 腿四頭 筋の一
関 節 筋 と二 関 節 筋で それぞれ異なっ て い た。
3週 後で は,一
関節 筋 の VM,
VI
において萎縮を示した。 これは, 切腱術に よ る筋の張 力低 下が一
関 節 筋に強く作用 し た た め と思わ れ る。 ま た,
VM の深 層タ イ プ1
線維とVI
の タ イ プ1
線 維に は, さ ら に強い萎縮を み と め たQ これ ら は,
筋萎縮 が タ イ プ 1 線維に影響を受け や すい とい う水口5)の報告 と同様で あっ たeRF
におい て は, 3
週, 6
週後ともに,
萎縮が見ら れ ない例も あっ た。 これ は,RF
が 二関節筋であ る た め,
股 関 節の 運 動によって も張 力が働きVM
やVI
よりも,
腱 切離の影響が少な か っ た た め と思わ れ た。 切離 後の構 築 的変 化にっ いて,
諸 家の報 告で は異 常 所 見が多数認 め ら れて い る が,
我々の結果では,
構 築 的 異 常が少な かっ
た。 これ は,
膝 蓋 腱 切離 後,
膝 蓋 骨が約4 1nm 中枢へ 移行して大腿骨 膝蓋面に固定さ れて そ の ヒ,
膝 蓋腱切 離部の瘢痕性組 織での修復が, 早期に起こっ
て く る た めに大 腿四頭 筋の 機能不全の程度が軽度であっ た もの と推 察された。腱 切 断 端 部につ い て は
,
Wakimi3 )は,
30 臼後か ら は,
その機能を回復する と して おり,
また,
Knowlton ら14) は,
腱切断 後3
週で機 能 を 有 するようになり,6
週で腱 は治癒する と述べて い る。
我々 の結 果か らも,
6週 後か らほぼ腱の連 続 性は完 成 し,
9週 後に は炎症や組織の修 復過 程で み ら れる ACP 活 性 も低 下した。
従っ て,
ACP 活 性の低 ドよ り腱 組 織の修復が完成し て,
安定し た像と なっ た もの と考え ら れ た。 以 ヒより,6
週後か ら筋が 徐々に回復傾 向 を示すの は, 腱の 治癒に よ り筋 肉の働き が回復 してきたもの と推 測さ れ た。 し か し,
腱の回復の 程 度や,
周 囲の軟部組織との 癒着の程度の差異に よ る と 思われる萎縮や肥大な ど様々 な変化を示し た例も少 数な が ら認め ら れ た。 す な わ ち,
早 期には一
関 節 筋に障 害が 強く見ら れ る が, 経 過と ともに回 復 す ること,
二関 節 筋 には,
早 期よ り肥 大と萎 縮が認め られ腱 切 離 後の 自然の 修復過程は,
個々 の筋肉固 有の機 能 的,
形 態 的特 性によ り影 響が異な ること が知 られた。
また,
理 学 療 法 との関 連 性につ い て は筋 力の回 復 を 目的と した運 動 療 法は,一
関 節 筋には早 期 か ら萎 縮 が 出現 しやすい こ とや,一
関 節 筋と二関 節 筋の機能の違い,
ま た筋 収 縮の特 性の違い な どを 考 慮 して行 うことが 重 要であると考え られた。 本 論 文の要 旨は,
第27,
28回日本理学 療法上学会に て発 表した。
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.
Amer J Physiollユ5 :521
−
525,
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〈Abstract >
Histochem
’
ical
Study
ofthe
Differential
Effect
ofTenotomy
of Rat ?atellar Tendon on
One −
Joint and Two−
Joint MuselesMiki
SAKAMOTO
,
RPT,
HitoshiNAKAZAWA
,
RPT,
MasayukiUCHI ,
RPT ,
Katsuhito
FUJII,
RPT
,
TakashiHARADA
,
MD
DePartment of Physicatルfedicine an 〔
i
R
θha
うilitation
,
Tりん0 翫 勿 ersitySchool
qブ漉 dゼ(7勿θ
The
present study was performedin
order to elucidate thehistochemical
properties ofintact rat quadriceps 皿 uscles and the
differential
effect of tenotomy of the patellar tendon orl one−
joint
muscEes :vastus medialis muscle (VM
),
vastusintermedius
muscle (VI)and a two−lo
三nt muscle :rectusfemoris
muscle 〔RF
).
Thirty
−
four white adult female Wistar strain rats weighing 250−
300 g were used in this study.
The patellar tendon of the right 王1mb wastenotQmized
andthe
contralaterallimb
wasserved as a control
.
At the same time,
histochemical observations were made orl ten normalrat quadriceps muscles
.
VM ,
VI
and RF musclesfrom
six animals each were excised atinter
−
vals of
3,6,9arld
12 weeks after tenotomy.
Fresh frozen seriai cross sections were stained with hematoxylin and eosin (HE
)andATPase
activities were observed.
The
results obtained were asfollows
:(1) The mean dialneter of the type I fibers in the deep portion of the quadriceps Inuscles
was
larger
than thatin
the superficial portionin
the control rats 〔p〈0.
05).
(2) In the cQntrol study
,
a higher proportion of type II且bers was observed in the superfi−
cial portion of
RF
andVM
muscles.
Orl
the otherhand,
ahigher
proportion of type Ifibers
was observed
in
thedeep
portion of the same muscles.
〔3} Three weeks after tenotomy
,
both type I and II fibers of one−joint
muscles,
VM and VI,
314
mpe}kesza!}k
eg21igag5e
sljght}y noticeable. These changes included
the
appearance of central nuclei, epaque fiber(early
necroticfibers)
andhypertrophic
(atrophic)
fibers.
Six
weeks aftertenotomy,
anincrease
in
thediameter
of musclefibers
was seen.In
9th
and12th
weeks after tenotomy there weresome
hypertrophic
fibers
found.
(4)
Three weeks after tenotomy, there was only a slightdecrease
seenin
type IIfiber
di-ameter of RF. However, in the 6th week there was a moderate decrease seen in the typeI
fiber
diameter
in
the
deep
portion of RF,Based on the$e results, itseems likelythat the histochemical propertiesof the intactrat skeletal muscle and the