序 文
近年，ペニシリンやマクロライド系薬に耐性を 示 す
Streptococcus pneumoniae
が 臨 床 上 問 題 と なっている．また，新たにフルオロキノロン系薬 に耐性を示す株が少数ながら分離され注目されて いる．フルオロキノロン耐性
S. pneumoniae
では，キノ ロン耐性決定領域にアミノ酸変異が集中している ことが知られている1）．その中でも，DNA gyrase の サ ブ ユ ニ ッ ト GyrA 遺 伝 子（gyrA）2）お よ び DNA topoisomerase IV の サ ブ ユ ニ ッ ト ParC 遺 伝子（parC）3）の変異が重要である．今回，我々は levofloxacin（LVFX）に耐性を示 す 2 株について，gyrAおよび
parC
の解析を行っ たので報告する．対象および方法
2001 年 1 月〜2002 年 4 月の間に分離された
S.
pneumoniae
76 株を対象とし，微量液体希釈法にて MIC を測定した．GyrAは Pan ら2）の設計したプ ライマーを，parCは独自に設計したプライマー，PARC1（5 -CTTTGCCAGATATTCGTGATGG- 3 （parCの 86 から 107）），PARC2（5 -GAGGTT
TGGAAAGGCTGCTG-3（parCの 467 から 486）） を用い，denature 94℃ 1 分，annealing 59℃1 分，
extension 72℃1 分半の 30 サイクルの PCR の後，
増幅産物のシークエンスを行った．
結 果
LVFX 耐性株は，16
µ
g!
ml の MIC を示した SP 459 と 32µg!ml の SP506 の 2 株（2.7％）であった．シークエンスの結果，gyrAにおいては SP459 と SP506 の 2 株 と も 81 番 目 で Ser（TCC）−＞Phe
（TTC）変異が認められた．ParC では SP459 にお いては，137 番目で Lys（AAG）−＞Asn（AAT）
変異が，128 番目で Gly（GGC）−＞Gly（GGT）の 核酸変 異 が 認 め ら れ た．ま た，SP506 で は，79 番 目 で Ser（TCT）−＞Phe（TTT）変 異 が，83 番目で Asp（GAT）−＞Gly（GGT）変異が認めら れた（Table 1）．
考 察
S. pneumoniae
ではβ
-ラクタム薬およびマクロ ライド系薬の耐性率が高いのに対して，フルオロ キノロン系薬では耐性は希である．従って，フルオロキノロン耐性機構の解析は，
海外においては Pan らによる報告2）3）が多数認め られるが，国内では現在のところ田場らの報告4）が あるものの，全国的規模の詳細な検討は行われて いないのが現状である．
Levofloxacin 耐性 Streptococcus pneumoniae における DNA Gyrase と Topoisomerase IV の遺伝子解析
愛媛大学医学部附属病院検査部
宮 本 仁 志 村 瀬 光 春
（平成 14 年 6 月 10 日受付）
（平成 14 年 7 月 16 日受理）
〔感染症誌 76：898〜899，2002〕
短 報
別刷請求先：（〒791―0295）愛媛県温泉郡重信町志津川 愛媛大学医学部附属病院検査部
宮本 仁志
Key words：
Streptococcus pneumoniae, levofloxacin,gyrA,parC, drug resistance
898感染症学雑誌 第76巻 第10号
Table 1 Mutations identified in the GyrA and ParC containing QRDRs in levofloxacin-resistant clinical isolates of S. pneumoniae
Amino acid（nucleotide）at the indicated position：
MIC（µg/ml）
Stran GyrAb ParCc
LVFXa
137 128
83 79
81
Lys（AAG）
Gly（GGC）
Asp（GAT）
Ser（TCT）
Ser（TCC）
1 494
Asn（AAT）
Gly（GGT）
―
―d Phe（TTC）
16 459
―
― Gly（GGT）
Phe（TTT）
Phe（TTC）
32 506
aLVFX, levofloxacin
bAmino acid position corresponding to that of S. pneumoniae GyrA（2）.
cAmino acid position corresponding to that of S. pneumoniae PacC（3）.
d―, no difference from levofloxacin-susceptible wild strain 494.
今回，我々は LVFX 耐性株 SP459 と SP506 の 遺伝子解析を行い，
gyrA
では 2 株共に Ser-81−＞Phe 変異を，parCでは SP459 で Lys-137−＞Asn 変異，SP506 では Ser-79−＞Phe 変異および Asp- 83−＞Gly 変異を認めた．これらの変異は，田場や Pan らの報告と異なる組み合わせであった．
今回の 2 症例はいずれも喀痰からの分離例で，
分離される以前に LVFX が治療薬として使用さ れており，LVFX の投与により耐性株へと変化し たのではないかと考えられた．
現在，国内においても，S. pneumoniaeにおける フルオロキノロン耐性株の分離頻度は低いもの の，報告されるようになってきている．耐性機構 は DNA gyrase および DNA topoisomerase IV の 遺伝子変異であることより，治療にフルオロキノ ロンを使用することにより耐性化が助長されるこ とも考えられ，今後の動向が注目される．
文 献
1）Yoshida H, Bogaki M, Nakamura M, Nakamura S ： Quinolone resistance-determining region in the DNA gyrasegyrAgene ofEscherichia coli. An- timicrob Agents Chemother 1990；34：1271―2.
2）Pan XS , Ambler J , Mehtar S , Fisher LM ： In- volvement of topoisomerase IV and DNA gyrase as ciprofloxacin targets in Streptococcus pneumo- niae. Antimicrob Agents Chemother 1996；40：
2321―6.
3）Pan XS, Fisher LM：Cloning and characteriza- tion of theparC andparE genes ofStreptococcus pneumoniae encoding DNA topoisomerase IV ： role in fluoroquinolone resistance . J Bacteriol 1996；178：4060―9.
4）Taba H, Kusano N：Sparfloxacin Resistance in Clinical Isolates ofStreptococcus pneumoniae：In- volvement of Multiple Mutations in gyrA and parC Genes . Antimicrob Agents Chemother 1998；42：2193―6.
Gene Sequencing Analysis of DNA Gyrase and Topoisomerase IV as Levofloxacin Resistance in
Streptococcus pneumoniae.
Hitoshi MIYAMOTO & Mitsuharu MURASE
Department Laboratories, Ehime University Hospital
LVFX 耐性肺炎球菌における遺伝子解析 899
平成14年10月20日
