博 士 （ 獣 医 学 ） 磯 田 典 和
学位論文題名
Studies on the pathogenlCityandVaCCinedeVelopmentof H5N1highlypathogenlCaVianinnuenZaViruSStrainS
(H5NI 高病原性鳥インフルエンザウイルスの病原性および ワクチン開発に関する研究）
学位論文内容の要旨
1997年香 港 で 発 生し て以 来、H5N1ウ イルス による 高病原 性鳥イ ンフル エンザ の発生 が続いて い る 。 筆 者 は2004年 、 日 本 で 発 生 し た 高 病 原 性 鳥 イ ン フ ル エ ン ザ の 病 原 ウ イ ル ス で あ る
〜chicken/Yamaguchi/7/2004 (H5N1）（山口 株）お よび、2005年モ ンゴルのErhel湖で 発見され た オ オハ ク チ ョ ウの 斃 死 体 から 分 離 さ れた 高 病 原 性鳥 イ ン フ ルエ ン ザ ウ イル ス 、A/whooper swan/Mongolia/3/2005 (H5N1）（モ ンゴル 株）の鳥 類およ び哺乳 動物に 対する 病原性 を実験 室 内で確認した。
山口 株は調 べた4つ の鳥類 に対し て高い 病原性を示し、全身感染を起こすことが分かった。しか し、マウスに対する病原性は低く、ミニブタには感染しなかった。モンゴル株は、山口株に対する感受 性が低かったが、仔カモおよびマウスに高い病原性を示し、さらにミニブタには感染することが確認さ れた 。これ らの結 果から、山口株は鳥類に対して非常に高い病原性を示すが、哺乳類には病原性が 低いものと考えられる。またモンゴル株は山口株よりも多くの種類の動物に対して病原性を示し、ミニ ブ タ に 感 染 す る こ と か ら 、 公 衆 衛 生 上 非 常 に 重 要 で あ る こ と が 示 唆 さ れ た 。 次にH5ウイル スによ る高病原性鳥インフルエンザに対して有効なワクチンの開発およびその評価 を行 った。 高病原 性鳥イ ンフルエ ンザの 防疫の 基本は 摘発淘 汰であ るが、防圧困難な非常時に備 え、 高力価 のワク チンを 開発およ び備蓄 するこ とが必 要であ る。そ こで筆者はH5N2およびH7N1亜 型の2株の非 病原性 ウイル スからH5N1亜型の 遺伝子 再集合 ウイル スを実験 室内で 作出し 、それを ワク チン株 とした 。ワク チン株を 鶏胚尿 膜腔内に接種して得た尿液のウイルスを不活化し、256〜 512HNO.1ml相 当の油 中水型ワクチンを試製した。ワクチン0.5mlをニワトリ4週齢のニワ卜りの下脚 部筋 肉内に1回注射 し、経 時採血 して血清HI抗体 価を測定 した。 ワクチン接種3週後のニワトりの HI抗体 価は512〜1，024で あり、 接種6週 後にはHI抗体価がピークに達した（1，024〜2，048)。ワ ク チ ン接 種 後7カ 月 後のHI抗 体価 は256〜1，024で あった 。免疫3週後に ワクチ ン株と 抗原性が 類似する山口株または抗原性が異なるモンゴル株で攻撃したところ、いずれの場合もニワトりは臨床 症状を示すことなく14日間耐過した。さらに、免疫後の日数が異なるニワトりに、HPAIウイルス株を 攻撃したところ、ワクチン接種後6日以内のニワトりは攻撃ウイルスにより全て死亡したが、ワクチン接 種8日 目のニ ワ卜り はHI抗体 が検出 されな いにも 関わらず 、HPAIウ イルス の攻撃 に対して 耐過し た。これらの結果から、本ワクチンはアジアで近年流行している高病原性鳥インフルエンザの病原ウ イルスに有効であり、発症防御効果も接種8日目から確認されたことから、緊急用ワクチンとして有用 であることが判った。
― 35ー
学位論文審査の要旨
学位論文題名
Studies on the pathogenlCltyandVaCCinedeVelopmentof H5N1highlypathogenlCaVlaninnuenZaViruSStrainS
(H5Nl 高病原性鳥インフルエンザウイルスの病原性および ワクチン開発に関する研究）
1997年香港で発生して以来、H5Nlウイルスによ る高病原性鳥インフルエンザ(HPAI)の流行 が広 がっ てい る。 著者 は2004年に日本で発生し た高病原性鳥インフルエンザの病因である A/chicken/ Yamaguchi/7/2004 (H5Nl）（山口株）および2005年にモンゴルのErhel湖で発見された オオハクチョウの斃死体から分離されたA/whooper swan/Mongolia/3/2005 (H5Nl）（モンゴル株）
の鳥類および哺乳動物に対する病原性を感染実験により調べた。
山口株はニワトリ、ウズラとカモに対して高い病原性を示し、全身感染を起こすことが分か った。一方、マウスに対する病原性は低く、ミニブタには感染しなかった。モンゴル株は、山 口株に対する感受性が低かったが、幼ガモおよびマウスに高い病原性を示し、さらにミニブタ に感染することが確認された。以上の結果は、公衆衛生の観点から、山口株よルモンゴル株に 注目すべきことを示している。
次 にH5ウイ ルス によ るHPAIに対して有効なワ クチンを開発し、これを評価した。HPAIの 防疫の基本は摘発淘汰であるが、防圧困難な非常時に備え、高力価のワクチンを開発、備蓄し てお く必 要が ある 。そ こで著者はH5N2およびH7Nl亜型の非病原性ウイルスを鶏胚尿膜腔内 に同時接種して、H5Nl亜型の遺伝子再集合ウイル スを作出し、ワクチン製造ウイルス株とし た。ワクチン株を鶏胚尿膜腔内に接種して得た尿液のウイルスを不活化し、256 ‑ 512HA/O.lml 相当の油中水型アジュバントワクチンを試製した。ワクチン0.5 mlを4週齢のニワトりの下脚 部筋 肉内 に1回 注射 し、 経時採血して血清HI抗体価を測定した。ワクチン接 種3週後のニワ トりのHI抗体価は512 ‑1，024であり、接種6週後にはピークに達した（1，024 ‑2，048)。ワクチ ン接種7カ月後のHI抗 体価は256 ‑1。024であった 。免疫3週後にワクチン株と 抗原性が類似 する山口株または抗原性が異なるモンゴル株で攻撃したところ、いずれの場合もニワトりは臨 床症状を示すことなく14日間耐過した。さらに、 免疫後の日数が異なるニワトりをHPAIウイ ルス株で攻撃したところ、ワクチン接種後6日以内のニワトりは全て死亡したが、ワクチン接 種8日目のニワトりはHI抗体が検出されないにも関わらず、HPAIウイルスの攻 撃に対して耐
― 36―
宏 博
司 人
義 孝
礼
田
田
村
田
喜 迫
梅 高
授 授
授 授
教
教 准
教 教
査 査
査 査
主 副
副 副
過した 。これらの結果から、本ワクチンはアジアで近年流行しているHPAIに有効で、緊急用 ワクチ ンとして有用であることが判った。
審査 員一同は、上記博士論文提出者磯田典和氏が博士（獣医学）の学位を授与されるに十分 な資格 を有するものと認めた。
― 37―
