ラ ッ ト脳 トリプ トフ ァ ン水 酸 化 酵 素 の 活性 化 とダ ン トロ レン
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(2) 534. 岡. 田. 尚. 志. 郎. て,著 者 は,ダ ン トロ レ ンの ラ ッ ト脳TrpOHase. 心 して,粗. に 及 ぼ す 影 響 を検 討 した.. た.こ. シナ プ トソー ム 画 分 を沈 渣 と して 得. れ を 低 張 液 〔10mM. (pH 7.4),. 材料 な らび に方法. 2mM. HEPES. DTT〕. buffer. に 懸 濁 し て,ポ. ロ ン で 破 砕, 39,000xgで40分. リト. 間 遠 心 して,こ. I. 材. 料. の 画 分 に 含 まれ る酵 素 を上 清 に 回 収 し,神 経 終. 1). 試. 薬. 末 由 来 の 酵 素 標 品 と して 使 用 した.. DL‑6‑Methyl‑5,. 6, 7, 8‑tetrahydropterine. Ⅲ. シ 肝 臓catalaseは. れ ぞ れ 購 入 した.ダ. tetrahydrobiopterin(BH4)は 部 第1生. ント. 山之 内製薬 株式会 社. の もの を用 い た. (6 R)‑L‑erythro‑5,. 6, 7, 8‑. 名 古屋 大学 医学. 化 学 教 室 ・永 津 俊 治 教 授 よ り供 与 され. た. 2). 蛍 光的. に 測 定 し た.標 準 的 な 酵 素 反 応 液 は,最 終 容 量. よ りそ. ン ト リウ ム 注射 用(ダ. ロ レ ン ナ ト リ ウ ム 製 剤)は. 方 法 を用 い て,反 応 生 成 物 の. 5‑hydroxytryptophan(5‑HTP)を. べ ー リ ン ガー. マ ンハ イ ム 社, Affi‑gel 202はBio‑Rad社. 性 の測 定. Friedmanら16)の. (McPteH4ま た は6MPH4)と6, 7‑dimethyl ‑5 , 6, 7, 8‑tetrahydropterine(Me2PteH4)は Sigma社,ウ. TrpOHase活. 250μl中 に 以 下 の 成 分(最 終 濃 度)を 含 む.1 20 mM. HEPES. buffer,. tryptophan(L‑Trp); mM. pH 7.4; 0.2mM. 0.4mM McPteH4;. dithiothreitol(DTT);. 1034;. 0.4mg/ml. L 2. 1mM. catalase;お. NSD‑. よび適 当量 の酵. 素 標 品.脱 炭 酸 酵 素 阻 害 剤 のNSD‑1034は,基. 質. お よ び 反 応 生 成 物 の 脱 炭 酸 を抑 え る た め に 用 い 実 験動物. た.反 応 は,酵 素 標 品 と基 質 のL‑Trpを. 実 験 動 物 に は, Sprague‑Dawley系 (150‑200g:以. 下SDラ. 12時 間 毎 の 明 暗 周 期,室. 雄 ラット. 記 反 応 液 に,補. 酵 素(MePteH4)を. ッ ト)を 用 い た,動 物 は,. とに よ り開 始 し た. 37℃,. 温23℃ の 飼 育 室 で,飼. トし, 25ulの60%過. 含 む上. 添 加す るこ. 20分 間 イ ン キ ュ ベ ー. 塩 素 酸 を加 え て 反 応 を 停 止. 料 や 水 を 自由 に摂 取 させ た.. し,氷 中 に 静 置 した.沈. 澱 し た タ ン パ ク質 を,. 3). 遠 心 分 離 で 除 い た 後,上. 清(200μl)を5N塩. 薬 物投 与法 雄SDラ. ッ トに,ダ ン トロ レ ン20mg/kgを 腹 腔. (300μl)に 加 え,励 起 波 長295nm,蛍. 内 投 与 し,. 2時 間 後 に 断 頭 し,す み や か に 全 脳. nmで. 酸. 光 波 長530. 測 定 した.コ ン トロー ル に は,同 一 反 応 組. を 取 り出 し,小 脳 を取 り除 い た脳 組 織 を実 験 に. 成 で, L‑Trpの. 用 い た.コ. 件 で,イ ン キ ュベ ー トし な か っ た 標 準5‑HTP. ン トロ ー ル群 に は,同. 量 の 生 理 食塩. 水 を投 与 した. TrpOHase標. 1). 脳全 体か らの酵素標 品. 品の調 製. 行 っ た.. IV. ラ ッ トの 脳(全 脳 よ り小 脳 を除 い た もの)に,. mM. 用 い た.同 条. を測 定 し て得 た検 量 曲 線 か ら,生 成 物 の 定 量 を. Ⅱ. 4倍 容 の50mM. か わ りにD‑Trpを. Tris‑塩. DTTと2mM. 酸 緩 衝 液(pH. PMSFを. 7.6,. Mc2PteH4‑ア. ガ ロー ス の調 製. 中 田 ら17).18)の 方 法 に従 っ て,ジ 2. 含 む)を 加 え,ポ. ン(Mc2PteH4)を. メチ ルブ テ リ. リガ ン ド と し た ア フ ィ ニ テ ィ. カ ラ ム を調 製 した. Affi‑Gel. 202(6ml)を. グ. リ トロ ン で 破 砕 した.こ の ホ モ ジネ ー トを39,000. ラ ス フ ィ ル ター 上 で 十 分 に 水 洗 し た の ち,ツ. xgで40分. ベ ル ク管 に 移 し,蒸 留 水 に 懸 濁 した .ゲ. 2). 間 遠 心 し て 上 清 を得 た.. 神経 終末 由来 の酵素 標 品. Cotman15)ら. の 方 法 に 準 じ て,シ ナ プ トソー ム. 粗 画 分 を 調 製 し た.. 3匹 の ラ ッ トか ら取 り出 し. た 脳(小 脳 を除 く)に, (2 mMDTTを. 5倍 容 の0.32MSucrose. 含 む)を 加 え,ポ. ジ ナ イザ ー で ホ モ ジ ナ イ ズ した.こ ー トを. , 1,100xgで5分. を 除 き,得. 部 に 十 分 ゆ き わ た る よ うに,窒. ルの 内. 素 ガ ス を約10分. 間 通 気 させ た の ち, 60mgのMe2PteH4を. 加 え,さ. らに,窒 素 ガ ス を通 気 してMe2PteH4を. よ く混 和. し た.混 和 した ゲ ル 懸 濁 液 のpHをNaOHで,. ッター型 ホモ の ホ モ ジネ. 間 遠 心 して 来 破 砕 細 胞. ら れ た 上 清 を17,000xgで10分. ン. 間遠. 5に 調 整 し, 3mlの. 蒸 留 水 に 溶 解 した1gの1. ‑Ethyl‑3(3'‑dimethylaminopropyl)car bodiimideを0.1mlず 反 応 液 のpHを1. つ ゆ っ くり滴 下 して加 え た. NHClで. 再 び5に. 調 整 後,窒.
(3) In. vivoお. よ びIn. vitroに お け る ダ ン ト ロ レ ン の 作 用 機 構. 素 ガ ス を通 気 させ な が ら十 分 に 攪 拌 した.そ. の. 後,遮. 光 密 封 し て, 15時 間 以 上 室 温 で振 盪 させ. た.余. 剰 活 性 基 は,グ. ル コ サ ミン で 遮 断 し た,. VI. タ ンパ ク定 量 タ ン パ ク質 は,. Protein. 調 製 し た ゲ ル は,グ ラ ス フ ィ ル ター 上 で 蒸 留 水,. albuminを. 50mM酢. Ⅶ. mM. 酸 緩 衝 液(pH. Tris‑塩. M. NaClの. 4.0),. 酸 緩 衝 液(pH. 0.5M. NaCl‑50. 8.8),蒸. 順 序 で 十 分 洗 っ た 後,. 留 水, 0.5. 4℃ で 保 存 し. た. TrpOHaseの. 出. 3倍 容 の50rnM. Tris‑塩. DDTと2mM. り出 し た 脳 幹 に,. 酸 緩 衝 液(pH. PMSFを. 7.6,. 2. 含 む)を 加 え,ポ. mean±s.. 2). e.. m.で. 標 本 間 の 検 定 に は, Studentt‑testま t‑testを. 表 し た.. 2. た はAspin‑. 用 い た.. 結. 果. ダ ン トロ レ ン腹 腔 内 投 与 後 の 脳TrpOHase. ヒ トの 悪 性 症 候 群 に 際 し て は,ダ 1mg/kgを. 間 遠 心 し,上 清 を 得 た。. ン トロ レ ン. 静 脈 内投 与 し,症 状 が 続 く限 り,総 投. 与 量 が10mg/kgに. リ トロ ン で破 砕 した.こ の ホモ ジネ ー トを39,000 xgで40分. serum. の変化. 13匹 の ラ ッ トを断 頭 し,取. mM. Rad. bovine. 統 計解析 デ ー タ は,. 1). 抽. よ り,. 標 準 タ ン パ ク 質 と し て 測 定 し た.. 中 田 ら18)19)の方 法 を 参 考 に して,以 下 の操 作 を. 1). Binding法(Bio. Kit)に. 部 分精 製操 作. 行 っ た.. Dye. Assay. We1ch's. V. 535. な る ま で,繰 り返 し投 与 す る こ. とが 試 み ら れ て い る7).こ こ で は,ダ ン トロ レ ン を ラ ッ ト腹 腔 内 に 投 与 し,脳 のTrpOHase活. 性. の 変 化 を調 べ た.通 常 の 臨 床 用 量 で あ る10mg/kg. 硫安 分 画 抽 出 溶 液 に, 50%飽. 和 に な る よ うに 固体 硫 安. 以 下 の 投 与 で は,酵. 素 活 性 の 変 化 を認 め なか っ. を 加 え た. 20分 間 ゆ るや か に 攪 拌 後, 27,000x. た が 。 投 与 量 が20㎎/kg以. gで20分. に 活 性 が 増 加 して い る こ とが わ か っ た(Fig. 1).. 間 遠 心 し,沈 渣 を集 め, 2mM. 含 む5mlの50mM. Tris‑塩. DTTを. 酸 緩 衝 液(pH. に 溶 解 し た.こ の 溶 液 を100,000xgで15分. 7.6). ダ ン トロ レ ンのTrpOHase活. 間遠. 確 認 す る た め に,動. 上 に な る と,約130%. 性 に及ぼす影響 を. 物 数 を ふ や し(N=6),ダ. 心 して 得 られ た 上 清 を ア フ ィ ニ テ ィ カ ラ ム に か け た. 3). ア フ ィニ テ ィ ク ロマ トグ ラ フ ィ ー 1mM. L‑Trp,. Tween. 10%グ. 20, 50μM. catalaseを. リセ ロー ル, 0.06%. EDTA,お. 含 む50mM. よ び0.1mg/ml. Tris‑塩. 酸 緩 衝 液. (pH 7.6)で 平 衡 化 したMe2PteH4‑ア ラ ム(bed た.つ ‑2M. volume. い で, 50mM NaCl‑2mM. catalase(30ml),. Tris‑塩. 酸 緩 衝 液(pH 7.6) DTT‑0 .1mg/ml Tris‑塩. NaCl‑2mM. を溶 出 した.溶. DTT(15ml),. Tween. Fig. 1 リ. 20‑50μMEDTA. 衝 液(pH 出 後,た. 酸緩衝 液. 7.6)‑10%グ. 順 次 洗 浄 し た.そ. NaHCO3‑NaOH緩. buffer(pH. 安 画 分 を流 し. 酸 緩 衝 液(pH. セ ロ ー ル ー0.06% (20ml)で. Tris‑塩. 50mM. (pH 7.6)‑0.5M 50mM. ガ ロー スカ. 1.0ml)に,硫. の 後,. 10.8)に. だ ち に2M. 6.8)を 用 い てpHを7付. 10mM. よ り酵 素 HEPES. 近 に 下 げ た,. 得 られ た 酵 素 活 性 の ピ ー クフ ラ ク シ ョ ン は, 氷 中 に 保 存 し,そ の 日 の う ち に 実 験 に 供 し た.. A dose dependent effect of dantrolene on the tryptophan hydroxylase. The each amount of dantrolene was adminis tered into a rat intraperitoneally 2 hours prior to decapitation, and the brain TrpOHase was prepared as de scribed under the "Materials and Methods". 5-hydroxytryptophan (-5 - HTP), the product of the enzyme, was measured and expressed as a percent age of 5-HTP in the control..
(4) 536. 岡. ン トロ レ ン投 与 群(20mg/kg)と. 田. 尚. コ ン トロ ー ル 群. 志. 郎. 腹 腔 内 へ1日1回,. 14日 間 連 続 投 与 し,最 終 投. (生理 食 塩 水)の 間 で 本 酵 素 活 性 の 比較 を行 った.. 与 後 の 酵 素 活性 の 経 時 的 変 化 を調 べ た と こ ろ,. ダ ン トロ レ ン 投 与 群 の 酵 素 活 性 は, 76.6±0.32. 単 回 投 与 後 の 変 化 と ほ ぼ 同 じ経 過 を た ど っ た. pmol/min/mg. proteinで,コ. 性58.9±1.4pmol/min/mg 約1.3倍 に 増 加 し て い た.こ t‑testで0.1%以. ン トロ ー ル群 の 活. (Table. proteinに. ン トロ レ ン が,脂. 対 し て,. の 増 加 は, Student. 1).こ. の こ とか ら,反 復 投 与 され た ダ 肪 組 織 な どに 再 分 布 し て蓄 積. し,本 酵 素 に持 続 的 に 作 用 を及 ぼ し う る可 能 性. 下 の 危 険 率 で 有 意 で あ る と認 め. ら れ た.. は低 く,大 部 分 の もの は 体 外 へ 排 泄 さ れ て し ま う も の と考 え ら れ た.ヒ. ダ ン トロ レ ン20㎎/㎏ を ラ ッ トの 腹 腔 内 に 投 与 し,脳 のTrpOHase活. 性 の変 化 を経時 的に調べ. 半 減 期 は約6時. トに お い て も血 中 濃 度. 間 で あ り20),蓄積 され る とい う報. 告 は み あ た ら な い.な お,原 因 は不 明 で あ る が,. た. Fig. 2に 示 す よ うに,ダ ン トロ レ ン 投 与15分. ダ ン トロ レ ン を14日 間 連 続 投 与 し た場 合,断. 後 に は,す. 時 の ラ ッ トの体 重(202.8±6.1g)が,コ ー ル 群 の(238 .4±5.8g)に 対 し て,有. 後2時. で に 酵 素 活 性 の 上 昇 が み られ,投. 与. 間 で ピ ー クに 達 し た.し か し, 6時 間 後. に は,コ ン トロ ー ル群 のTrpOHase活. 性 レベ ル. に 復 し て い た.つ ぎ に,ダ ン トロ レ ン20mg/kgを. して い た(Student. ン トロ 意 に減少. t‑test; p<0.01).こ. 減 少 は,ダ ン トロ レ ン20mg/kgを. 頭. の体 重. ラ ッ トの 静 脈 内. に14日 間 連 続 投 与 し た 場 合 に も認 め ら れ て い る21). TrpOHaseの. 脳 内 組 織 分 布 は す で に 調 べ られ. て お り,小 脳 を 除 く各 部 位 に あ る程 度 の 活 性 が 見 い 出 され て い る.最 HTニ. も活 性 が 高 い の は,. 5‑. ュー ロン の総 細 胞 数 の 半 数 が 局 在 す る背 側. 縫 線 核22)23)で,こ れ らニ ュ ー ロ ンの 神 経 終 末 が 分 布 す る頭 頂 葉 で は,そ 1/20で. の活 性 は背側縫 線核 の約. あ っ た。本 実 験 で ラ ッ ト脳 か ら小 脳 を 除. き,大 脳 皮 質(cortex)と,縫. 線 核 を含 む 脳 幹. 部(brain. れ ぞれ の酵素 活. stem)に. 分 け て,そ. 性 を 調 べ た と こ ろ, brain stemの Fig.. 2. Time. course. study. hydroxylase injection enzyme. the. presence. of. and. 200ƒÊM. 6MPH4,. Each. m.. 3. e.. 1 Time. course. tryptophan. enzymatic. tration day ments.. for. activity. of 20mg/kg 14 days.. is the. from. is. rat. the. て も, TrpOHaseの. brain. Table. activity.. the last. intraperitoneally e. m. from. す る 結 果 が 得 られ た.ダ 与 に よ り, cortex,. experiments.. after. mean•}s.. in. L-tryptophan value. お け る活 性 の 約5‑6倍. で(Table. 2),. す で に 報 告 さ れ た本 酵 素 の 組 織 分 布 に よ く一 致. assayed. of the. measured given. intraper. was. 400ƒÊM. study. dantrolene Value. activity. hydroxylase. was. cortexに. dantrolene(20mg/. The. 酵 素 活 性 は,. tryptophan. after of. kg).. mean•}s.. The. the. activity. itoneal. Table. of. 2. Distribution hydroxylase. adminis once 3 experi. a. ン トロ レ ン の 腹 腔 内 投. brain stemの 活 性 は,コ. of. いず れに おい ン トロ ー ル群 の. tryptophan. in the brain.. Rat brain was dissected into the two portion, the brain stem and the cortex. Tryptophan hydroxylase activity of each portion was measured after 2 hrs of dantrolene administra tion into a rat intraperitoneum. For the control, dantrolene was replaced by saline..
(5) In. vivoお. 約1.2倍 に上 昇 し た(Table 布 す るTrpOHaseが,ダ. よ びIn. 2).神. vitroに. お け る ダ ン トロ レ ン の 作 用 機 構. 経 終 末 に分. ン トロ レ ン の 腹 腔 内 投. 与 に よ り影 響 を 受 け る こ と を示 唆 す る上 記 の 結 果 を確 認 す る た め に,ダ 後,方. ユ ベ ー トし,酵 素 添 加 に よ り反 応 を開 始 し た も の をプ レ イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン を しな い 系 と して 扱 っ た.. ン トロ レ ン 腹 腔 内 投 与. 法 の 項 に の べ た よ う に,シ. ナ プ トソー ム. 537. Table. 3で. 示 す よ う に,TrpOHaseを6.0μM. の ダ ン ト ロ レ ン とブ レ イ ン キ ュ ベ ー ト し た 場 合,. 粗 画 分 を 調 製 し,こ の 画分 に含 ま れ る酵 素 活 性 を調 べ た(Fig. 3).ダ. ン トロ レ ン 投 与 群 で は,. 活 性 は, 32.4±5.4pmol/min/mg. proteinで,. コ ン トロ ー ル群 の 活 性 の23.4±0,6pmol/min/ mg. proteinに. 対 して,約1.3倍. に 増 加 して い た.. こ の 増 加 は しか し, Aspin‑Welch's. t‑testに よ り. 有 意 とは 認 め ら れ な か っ た.ホ. モ ジ ネ ー トに 含. ま れ る総 タ ン パ ク質 の 約10%が. シ ナ プ トソ ー ム. 粗 画 分 に 回収 さ れ,標. 品 間 の バ ラ ツ キ は ほ とん. ど み ら れ な か っ た が,酵. 素 の比 活性 にはバ ラツ. キが 認 め られ た.さ らに 比 活 性 が 分 画 後 約1/3.5 に低 下 して い る こ と,こ. の 酵 素 が 失 活 しや す い. 酵 素 で あ る こ と24)を考 え あ わせ る と,粗 シナ プ ト ソ ー ム を分 画 す る操 作 の 過 程 で,酵 素 の 失 活 が お こ り,そ の 程 度 が 調 製 に よ り一 定 で な い ため に,ダ. ン トロ レ ンの 効 果 が 有 意 な も の と して 認. め ら れ なか っ た 可 能 性 が 強 い. 2). 粗TrpOHase標. 品 に 対 す るダ ン トロ レン の. 影響 未 処 置 の ラ ッ ト脳 か ら 方 法 の 項 に 述 べ た よ う に 酵 素 標 品 を調 製 した.こ. の 標APG(1.1mg. Fig. 3. The tryptophan hydroxylase activity of crude synaptosome preparation. Dantrolene or saline was administered into a rat intraperitoneum and a synaptosome fraction was prepared as described under the "Materials and Metheds". C: saline was administered, and D: 20mg/kg dantrolene was adminis tered.. pro. tein.)を含 む 酵 素 反 応 液250μl中 に ダ ン トロ レ ン を 添 加 し,ダ ン トロ レ ンの 濃 度 とTrpOHase活 性 の 関係 を検 討 した.最 終 濃 度5‑25μMの. ダン. トロ レ ン存 在 下 で活 性 の 上 昇 が認 め られ, 6.0μM 存 在 下 で最 大 の 活 性 を示 し た.ダ μM以. ン トロ レ ン30. 上 の 濃 度 で は,活 性 の上 昇 は認 め られ なか. っ た.以 後 の実 験 で は, 6.0μMの. ダ ン トロ レ ン Table. 3. Effects. を 用 い た. ダ ン トロ レ ン がTrpOHaseに し た 場 合,酵. of preincubation. phan hydroxylase. on the trypto. activity.. あ らか じめ 作 用. 素 活 性 の 上 昇 が 顕 著 に な るか ど う. か を 調 べ る た め,ダ. ン トロ レ ン と酵 素 標 品 をプ. レ イ ン キ ュ ベ ー ト し た あ と酵 素 反 応 を 開 始 さ せ る 実 験 を行 っ た.反. 応 液 中 か ら,基 質 のL‑Trp The. ま た はD‑Trpお て, 37℃,5分. よ び補 酵 素 の プ テ リジ ン を除 い 間 イ ン キ ュベ ー トし,基 質 と補. 酵 素 を添 加 して 反 応 を 開 始 し た.反 応 液 中 か ら 酵 素 標 品 だ け 抜 い た も の を37℃ で5分. 間 イ ンキ. enzyme. dantrolene by. adding. control, absence. preparation at. 37•Ž. substrate the. enzyme. of dantrolene.. 3 experiments.. for. was 5 min,. (L-Trp). then. the. and cofactor. preparation Each. preincubated. value. was. reaction. with was. 6uM started. (6MPH4).. For. the. incubated. in. the. is the mean •}s.. e. m. from.
(6) 538. 岡. 田. 尚. 志. プ レ イ ン キ ュベ ー ト しな い場 合 よ り酵 素 活 性 が 86%に. 低 下 して い た.し. か し,ダ. 郎. ダ ン トロ レ ン20mg/kgを. ン トロ レ ン を. ラ ッ ト腹 腔 内 に投 与 し. た 後,脳 幹 か らTrpOHase標. 品 を調 製 し,合 成. 含 ま な い 系 で 酵 素 を37℃ で5分. 間プ レイ ンキュ. 補 酵 素 で あ る6MPH4の. ベ ー トす るだ け で 活 性 が82%に. 低 下 して し る こ. 性 を測 定 した とこ ろ,補 酵 素 に 対 す るKm値. とか ら,こ. こ で み られ た 活 性 低 下 は ダ ン トロ レ. 濃 度 を変 化 させ て 酵 素 活. 122.0±11μMで,ダ. は,. ン トロ レ ン を投 与 して い な. ン との プ レ イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン に よ る もの で は. い コ ン トロ ー ル 群 の ラ ッ トか ら得 ら れ た 酵 素 の. な く,酵 素 の 失 活 に よ る も の で あ る と考 え られ. 同 補 酵 素 に 対 す るKm値183.5±6.5μMに. る. TrpOHaseは,失. て67%に. で, 30℃,. 活 しや す い 不 安 定 な 酵 素. 30分 の プ レ イ ン キ ュベ ー シ ョ ン に よ. って,活 性 が 約50%に で に あ る.今. ダ ン トロ レ ン投 与 群 の 脳 幹TrpOHaseの 素 に 対 す るKm値. ぐに 反 応 を開 始 して も,そ れ ぞ れ 対 応 す る ダ ン. 群 のKm値78.0±9.4μMに. トロ レ ン を添 加 しな い 系 に 比 べ て 酵 素 活 性 が い. 示 し た.こ の 低 下 は, Student. ず れ も,約1.2倍. 下 の 危 険 率 で,有. に 上 昇 し て い た こ と は,ダ ン ト. t‑testで,. られ な か っ た.次 に,補 酵 素6MPH4存. 唆 す る もの で あ る.. 基 質L‑Trpの. 3). 基 質 に 対 す るKm値. 測 定 し た.た の 濃 度,あ. 性 を. びVmax値. は, Lineweaver‑Burkの. Vmax. is. mean•}s.. ed.. In. measured. m.. in from. with to. Kinetic. expressed e.. compared prior. 4. およ. cotrol. preparation vitro:. The in. the. nmol. value. of. crude presence. the. Value In. enzyme.. TrpOHase of. 6,uM. vivo:. and. Dantrolene. D(-); fraction dantrolene. ン トロ レ ン 投 与 群 か ら ン トロ. ン トロ レ ン 存 在 下(6.0μM)と. 非 存 在 下 で,そ. れ ぞ れ 補 酵 素 あ る い は,基. hydroxylase. formed of Km. は,ダ. 4).. 品 を 用 い て,ダ. of the tryptophan. 5-hydroxytryptophan. 3 experiments.. は ダ ン トロ レ ン投 与 群 で も. 未 処 理 の ラ ッ ト脳 か ら得 られ たTrpOHase標. 逆 数プ ロッ. properties. 濃 度 を変 えて 反 応 を行 っ た ところ,. た だ し, Vmax値. トか ち求 め た.. Table. 在 下 で,. 得 ら れ た 酵 素 標 品 で は 上 昇 して お り,コ ー ル群 の1 .2倍 で あ っ た.. る い は 基 質 の 濃 度 を変 え て,酵 素 反. ず. には変化 が み. 非 投 与 群 で も差 が ない こ とが わか った(Table. だ し,以 下 に 述 べ る よ うに 補 酵 素. 応 の初 速 度 に お よぼ す 影 響 を調 べ た.Km値. 1%以. 意 で あ る と認 め ら れ た.い. 性 上 昇 の 程 度 に 影 響 を お よ ぼ す こ と は な い と示. ラ ッ ト脳 の 脳 幹 よ り調 製 し た酵 素 標 品 を 用 い. 投与. 対 して 著 明 な低 下 を. れ の 補 酵 素 を用 い て も, Vmax値. 速 度論 的解析. 同補 酵. は, 29.6±8.2μMで,非. ロ レ ン と酵 素 の プ レ イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ンが,活. て,方 法 の 項 で示 した 条 件 でTrpOHase活. 成補 酵 素. 型 補 酵 素 と考 え られ て い る26)BH,を 用 い た 場 合,. ダント. ロ レ ン と5分 間 前 処 理 して も,前 処 理 な しで す. TrpOHaseの. 比べ. 4).合. の か わ りに,生 体 内 に お い て 機 能 して い る天 然. 低 下 し た とい う報 告25)がす. 回 の 実 験 で, TrpOHaseを. 低 下 して い た(Table. per. Vmax. was. was. prepared. [D(+)]. min. was. (20mg/kg). saline. prepared. per. was. as in. by. D(+);. described, the. protein.. administered. administered,. or. mg. determined. from. absence. rat brain.. Each. Studet's. of. value t•test. *. is. the. was. enzymatic. dantrolene. 2. hrs. administer activity. [D(-)]. the. p<0.01. intraperitoneally dantrolene. then. 質に. was ..
(7) In. 対 す るKm値,. vivoお. Vmax値. 合 成 補 酵 素6MPH,を. vitroに お け る ダ ン ト ロ レ ン の 作 用 機 構. を 求 め た(Table. 4),. 用 い た 場 合,Km値. トロ レン存 在 下 で73%に に 対 して は, 58%に れ の 場 合 も,ダ. よ びIn. 素 通 り画分 を 回 収 後,カ ラ ム を 十 分 に リン ス し,. は ダン. 10mM. 低 下,天 然 の補 酵 素BH4. 低 下 した. Vmax値. 対 す るKm値. NaHCO3‑NaOH緩. 衝 液(pH. 10.8)に. よ. り,酵 素 を溶 出 し た. Fig. 4に,酵 素 の 溶 出 パ タ ー ン お よび 各 々 の フ ラ ク シ ョン に 回 収 さ れ た タ. は いず. ン トロ レ ン に よ り変 化 しな か っ. た.基 質L‑Trpに. 539. ン パ ク質 の 銀 染 色 像 を示 し た.中. は,ダ ン トロ レ. 田 ら は,ア. フ. ィ ニ テ ィ カ ラ ム の 操 作 だ け で,比 活 性 が 約500倍. ン添 加 に よ り影 響 を うけ なか っ た が, Vmax値. に 上 昇 す る と報 告 して い るが19),今 回 溶 出 さ れ た. は,ダ ン トロ レ ン 存 在 下 で は, 1.4倍 に 増 加 して. 酵 素 標 品 は, 20.2nmol/min/mg. い た(Table. 4).. の 比 活 性 を示 し,ア フ ィニ テ ィ カ ラ ム に よ り約. ダ ン トロ レ ンのTrpOHaseに. 及 ぼす 効 果 を更. に詳 細 に 検 討 す る た め に,方 うに,ジ. 130倍 精 製 さ れ た こ とに な る.酵 素 の 回収 率 は,. 法 の項 にのべ た よ. 約10%で. の部 分 精 製 を試 み た.ラ. ッ ト脳TrpOHase. 20‑60μlの. ッ ト脳 か ら得 られ た 粗. 酵素 標 品 で あ る遠 心 上 清 を, 50%硫. Affinity. 安 で 分 画 し,. chromatography. homogenized. and. supernatant was. eluted. activity, was. was with. 10mM. fractions. In was. the. to. shown.. brain. fraction the. む 反 応 液 中 に,ダ ン トロ レ ン を最 終 濃 度0.6, 6,. inset, Gels. 18, 30μMと. tryptophan was. column. buffer. concentration. a. result. were. of. stained. (pH The. with. 10.8). arrow. protein. Brain. 50% of. SDS/polyacrylamide for. な る よ うに 添 加 し,活 性 を測 定 した.. hydroxylase.. treated. (0.72cm•~2.5cm). NaHCO3/NaOH protein. the. rat. soluble. applied. (•›•@•›): started.. of the. 範 囲 で加 え た と こ ろ,活 性 との 間 に. 直 線 関 係 を認 め た.こ の フ ラ ク シ ョ ン40μlを 含. こ の 硫 安 画 分 を ア フ ィニ テ ィ カ ラム に か け た.. 4. あ っ た.酵 素 反 応 液250μl中 に,ア フ ィ. ニ テ ィ カ ラ ム の ピ ー ク フ ラ ク シ ョン(Na3)を. メ チ ル プ テ リ ン を リガ ン ドと し た ア フ. ィ ニ テ ィ カ ラ ム に よ っ て,ラ. Fig.. protein(37℃). from. 13 rats. was. sulfate,. then. the. Me2PteH,-agarose. (•œ•@•œ):. head. silver. The Tryptophan. shows gel. with. stem. ammonium. the. time. electrophoresis staining.. TrpOHase hydroxylase. when of. the the. elution column.
(8) 540. 岡. 田. 尚. 志. 郎. Fig. 5に 示 す よ う に,ア フ ィ ニ テ ィ カ ラム 溶 出 後. れ た.脳. の 酵 素 標 品 で は,ダ. 測 定 して い な い の で 不 明 で あ るが,糧. ン トロ レ ン に よ る 活 性 の 上. 昇 は 認 め られ な か っ た.. の 酵 素 活 性 上 昇 効 果 を示 し た の で,脳 察. 最大. 内へ 移 行. し た ダ ン トロ レ ン の 濃 度 を検 討 す る参 考 に な る ダ ン トロ レ ンは,動 物 実 験 にお いて, Thiopental. もの と考 え ち れ た.. 睡 眠 を用 量 依 存 的 に 延 長 す る こ と27),また,臨 床 ば しば,眠. 酵 素標 品. に ダ ン トロ レ ン を添 加 した 場 合, 6.0μMで. 考. 使 用 上,し. へ移行 した ダンロ レンの組 織 内濃度 は. 気 の よ うな中枢神 経 系由. 来 と考 え られ る副 作 用 が み られ る こ と7)や,ダ ン トロ レ ン を静 脈 内 投 与 して30‑50分. 後 の脳波 が. ダ ン トロ レ ン 投 与 に よ っ て,粗. シ ナ プ トソー. ム 画 分 に 含 まれ る酵 素 活 性 も上 昇 して い た こ と か ら,ダ ン トロ レ ン は, 5‑HTニ に お い て, 5‑HT代. ュー ロン終末. 謝 に 影 響 を及 ぼ す 可 能 性 が. 著 変 し た とす る報 告4)が あ る こ と,ま た,構 造 上,. 示 唆 さ れ た. MeekとNeffは28),. ヒ ダ ン トイ ン誘 導 体 で あ り,脂 溶 性 を有 す る こ. 特 異 的 阻 害 剤 で あ るパ ラ ク ロル フ ェ ニ ル ア ラニ. TrpOHaseの. と7)か ら,脳 へ も移 行 し何 らか の 中枢 神 経 作 用 を. ン を投 与 した ラ ッ トの 脳 幹 か ら脊 髄 に い た る5. 有 す る こ とが 推 定 され て い る.ダ. ‑HTニ. ン トロ レ ン の. 腹 腔 内 投 与 に よ り,脳 のTrpOHaseの. 活 性が上. 昇 して い た こ とか ら,腹 腔 内 に 投 与 され た ダ ン トロ レ ン の 一 部 は,直. 接 脳 内 へ 移 行 し,本 酵 素. ュ ー ロ ン を用 い て. 流 に よ っ て1日5‑7mmの. , TrpOHaseが. 軸索. 速 度 で 細 胞 体 か ら末. 端 へ 輸 送 さ れ る こ と,お よ び 脳 幹 のTrpOHase の半 減 期 が 約2.5日 で あ る こ と を 明 らか に し,こ. に 何 らか の 機 序 で 作 用 を 及 ぼ し た もの と考 え ら. れ らの こ とか ら,神 経 終 末 に お け る5‑HTの. れ た.経. 謝 の 急 性 変 化 は,新 た なTrpOHaseの. 口的 に 投 与 され た ダ ン トロ レ ン は,ヒ. トの 体 内 で は,大. 部 分,小. され て,主. 臓 で 代 謝 さ れ,肝. に,肝. 腸 か ら ゆ っ く り吸 収 臓及 び腸管. 代. 合成およ. び軸 索 輸 送 の 変 化 に 基 づ く よ りは む し ろ, TrpO Hase活. 性 の 調 節 に 基 づ く もの で あ るこ とを示 唆. に 高 濃 度 分 布 す る こ と7)が知 られ て い る.今 回の. し た.従. 実 験 で 腹 腔 内 に ダ ン トロ レ ンが 投 与 され た あ と. 後 に 認 め られ た 神 経 終 末 に 含 まれ る 酵 素 活 性 の. 15分 後 に は す で に脳 のTrpOHaseの. 上 昇 は,細 胞 体 に 存 在 す るTrpOHaseに. して い る こ とか ら(Fig. 2),ダ. 活性 が上昇 ン トロ レ ン は,. 極 め て す み や か に 脳 へ 移 行 し う る こ とが 示 唆 さ. っ て,ダ. ン トロ レ ン を投 与 し て2時. る変 化 と 言 う よ りは む しろ,神 て い るTrpOHaseの. 間. 由来 す. 経 終 末 に分 布 し. 活性 変 化 に よ る もの で あ る. 可 能 性 が 高 い と考 え られ た.ま. た,ダ. ン トロ レ. ン は,培 養 交 感 神 経 節 細 胞 間 に 形 成 さ れ た コ リ ン作 動 性 シナ プ ス 伝 達 に作 用 を 及 ぼ す こ とが 報 告29)さ れ て い る こ とか ら も,ダ ン トロ レ ン が,神 経 終 来 に 取 り込 まれ,酵. 素 活性 に作 用 を及ぼ し. た 可 能 性 が 強 く示 唆 され た. TrpOHaseの. 粗 酵 素 標 品 に ダ ン トロ レ ン を加. え た 場 合 に も濃 度 依 存 的 に 酵 素 活 性 の 上 昇 が み られ た,こ. の 上 昇 の 程 度 は ダ ン トロ レ ン を腹 腔. 内 投 与 した 場 合 に み られ た の と同 様 で, 120‑130 %で. あ っ た. In vitroに お け るTrpOHaseの. 活. 性 化 に つ い て は,こ れ ま で に 多 くの 報 告 が あ る. Fig.. 5. Effect. of. dantrolene. hydroxylase. on. partially. affinity. chromatography.. activity. was. measured. 200ƒÊM. L-tryptophan,. various. amounts. the purified. a. 200ƒÊM of. by. The in. dantrolene.. 界 面 活 性 剤 で あ るSDS30),リ. tryptophan the. enzyme. presence BH4. ン脂質 で あ るボス. フ ァ チ ジ ル セ リ ン31),ポ リア ニ オ ン で あ るヘ パ リ ンや デ キ ス トラ ン32)によ る 活 性 化, Ca2+,依 存 性. of and. の タ ン パ ク質 分 解 酵 素 に よ っ て脳 のTrpOHase が 非 可 逆 的 に 部 分 切 断 を受 け るこ と33)による 活 性.
(9) In. 化,更. vivoお. よ びIn. に,生 理 的 濃 度 のCa2+とATP,. 存 在 下 に, TrpOHaseが. vitroに. お け る ダ ン トロ レ ン の 作 用 機 構. Mg2+の. ダ ン トロ レ ン に 対 す る反 応 性 が 失 わ れ た こ と を. 可 逆 的 に活 性 化 され る34). こ と が知 られ て い る.し か し,こ れ らの 場 合 に は,い ず れ も2‑4倍. の 活 性 上 昇 を認 め て い る.. 活 性 化 に よっ て,酵 素 活 性 の 至 適pHが. 541. アルカ リ. 示 唆 す る. Jequierら36)は,ウ (BSA)が,ラ 液,お. シ 血 清 ア ル ブ ミン. ッ ト脳 幹 のTrpOHaseの. 粗抽出. よ び 引 き続 い て 硫 安 分 画 して 得 た酵 素 の. 活 性 を増 大 させ るが,リ. ン酸 カル シウム ゲルの. 側 に 移 動 す る こ と34)が知 られ て い るこ とか ら,今. 操 作 を経 た 酵 素 を活 性 化 させ る こ と は で き な か. 回 の ダ ン トロ レ ン に よ る活 性 化 に つ い て も,反. っ た こ と を 報 告 し, BSAが. 応 液 のpHの. 質 を 取 り除 い た か,あ. 範 囲 を変 え て検 討 す れ ば,そ の 活 性. 化 の 程 度 が よ り顕 著 に な るか も しれ な い.ダ トロ レ ン に よ る 活 性 化 が,従. ン. 来 報 告 され て い る. 粗 抽 出液 中の阻 害物. る い は,酵. 素 を安 定 化 さ. せ た 可 能 性 を示 唆 し て い る.一 方,ラ. ッ ト脳 幹. の 粗 酵 素 標 品 で み られ た リン 脂 質 に よ る活 性 化. 機 構 と何 らか の 関 係 が あ るか ど うか に つ いて は,. が,高. 更 に検 討 して ゆ き た い と考 え て い る.. れ な か っ た こ と37)から,リ ン脂 質 に よ る 活 性 化 に. とこ ろ で, TrpOHaseの 酵 素BH4に Trp濃. 対 す るKm値. 度 お よ びBH4濃. い た め, TrpOHaseの は,基. 基 質L‑Trpお は,正. よび補. 常 の 脳 内 のL‑. 度 に 比 べ て は るか に 大 き 活 性 は, in vivoに お い て. 質 の 濃 度 お よ び 補 酵 素 の 濃 度 に よ っ て,. は,他. 度 に精 製 した ウ サ ギ後 脳 の 酵 素 で は 見 ら. の 生 体 因 子 の 関 与 す る 間 接 的 な機 構 が 存. 在 す る可 能 性 が 示 唆 さ れ て い る.以 上 の こ と を 考 え る と,一 回 の ア フ ィニ テ ィ ク ロマ トグ ラ フ ィー の 操 作 に よ っ て,か. な りの タ ンパ ク質 が 効. 率 良 く取 り除 か れ た が(Fig. 4),一. 方 でTrpO. 調 節 され て い る85)と考 え られ て い る.こ れ まで に,. Haseが. TrpOHaseの. の に 必 要 な何 らか の 因 子 も 同 時 に 失 わ れ た 可 能. 活 性 化 に お け る 酵 素 反 応 の速 度 論. 的 解 析 に よ っ て, SDS30),ポ. リア ニ オ ン32),お よ. び リン 酸 化 に よ る活 性 化34)の場 合 に は,基 L‑Trpお. よ び合 成 補 酵 素 の6MPH4の. して も親 和 性 が 増 大 す る こ と,ホ. 質の. い ず れに 対 ス フ ァ チ ジル. セ リンに よ る活 性 化31)の場 合 に は,合. 酵素 に. ダ ン トロ レ ンに 反 応 して 活 性 化 を受 け る. 性 が 強 く,さ ら に検 討 を 加 え た い と考 え て い る. ご く最 近 に な っ て,ウ HaseのcDNAが. サ ギ の松 果 体 のTrpO. ク ロー ニ ン グ され,本. 酵素 タ. ンパ ク質 の 全 ア ミ ノ酸 配 列 が 決 定 さ れ た38).これ に よ る と,ア ミ ノ末 端 側 の1/3の. 配 列 は,基 質. 対 す る 親 和 性 だ け が 増 大 す る こ とが,知 ら れ て い. 特 異 性 に 関 与 す る ドメ イ ン で あ り,カ ル ボ キ シ. る.ダ ン トロ レ ン に よ る, TrpOHaseの. 末 端 側 の2/3の. で は補 酵 素(BH4お. よ び6MPH,)に. 活性化 対 す る親和. 配 列 が 酵 素 の活 性 中心 の形 成 に. 関 与 す る とい う もの で あ っ た.本 酵 素 と同 族 の,. 性 の み が 増 大 し,基 質 に 対 す る 親 和 性 に は 変 化. ビ オ プ テ リン を補 酵 素 とす るTyrosine. hydrox. が 認 め ら れ な か っ た.こ. ylase, Phenylalanine. もア ミノ. の補酵 素 に対す る親和. 性 の 変 化 に よ る 活 性 の 調 節 は,す シ ナ プ トソー ム 画 分 のTrpOHase活. でに述べ た粗 性に及ぼす. hydroxylaseと. 酸 配 列 の 上 で 極 め て 高 い 相 同 性 を 示 した.し が っ て,ダ. た. ン トロ レ ン の こ れ ら の 酵 素 に 対 す る. ダ ン トロ レ ンの 効 果 か ら も示 唆 され た よ うに,. 作 用 を調 べ る こ とに よ り,そ の 作 用 機 序 が よ り. 酵 素活性 の 急性 変化 に対応 す る機構 の一つ であ. 明 確 に な る もの と考 え られ た.ダ. る 可 能 性 が 高 い と考 え ら れ た 。 補 酵 素 の う ち脳. 作 用 機 序 に つ い て 分 子 レベ ル で解 明 し て ゆ くこ. 内 に 存 在 す る こ とが 証 明 さ れ て い るBH4を. り もKm値. 用い. と は,悪 性 症 候 群 の 中 枢 神 経 系 に お け る病 態 に. 用 い た場 合 よ. つ い て も,よ. が 低 か っ た こ と,お よ び そ の 値 が 従. と思 わ れ る.. る と,合 成 補 酵 素 で あ る6MPH,を. 来 の 報 告16)に近 似 して い た こ とか ら, BH4が の 補 酵 素 と して, 6MPH,よ. 天然. フ ィニ テ ィ カ ラ ム. で 都 分 精 製 したTrpOHaseに. ダ ン トロ レ ン を作. り一 層 の 理 解 を深 め る こ とに な る. 結. り も高 い親 和 性 を示. す こ と が 明 らか に な っ た.ア. ン トロ レ ン の. 近 年,悪. 語. 性 症 候 群 の 治 療 に 用 い られ る よ うに. な っ た ダ ン トロ レ ン の ラ ッ ト脳 ト リプ トフ ァ ン. 用 させ た と こ ろ,活 性 に 変 化 を認 め な か つ た(Fig.. 水 酸 化 酵 素 に 及 ぼ す 影 響 を検 討 した.ダ. 5).こ. レ ン20mg/kgを. の こ とは,精 製 操 作 の 間 に,こ の 酵 素 の. ン トロ. ラ ッ トの 腹 腔 内 に投 与 し, 2時 間.
(10) 542. 岡. 後,脳. 田. 尚. の ト リプ トフ ァ ン 水 酸 化 酵 素 の 活 性 を 測. 志. 郎. 部 分 精 製 さ れ た ト リプ トフ ァ ン水 酸 化 酵 素 に 対. 定 し た と こ ろ,活 性 は 対 照 群 に 対 して 有 意 に 増. して, 6.0μMの. 加 し,約1.3倍. っ た.. 投 与 後,粗. の 比 活 性 を 示 した.ダ ン トロ レ ン. シ ナ プ トソ ー ム 画 分 を分 離 し,神 経. ダ ン トロ レ ンは 効 果 を 示 さ な か. 以 上 の 結 果 か ら,ダ 後,脳. は り対 照 群 の 約1.3倍 の 比 活 性 を示 し た.ダ ン ト. 活 性 に 影 響 を 及 ぼ し て い る こ と が わ か っ た.ダ. ロ レ ン20mg/kgを1日1回,. ン トロ レ ン の 作 用 機 序 に つ い て 分 子 レベ ル で 解. 2週 間 反 復 投 与 した. へ 移 行 し,ト. ン トロ レ ン は腹 腔 内 投 与. 終 末 に 分 布 す る酵 素 の 活 性 を 調 べ た と こ ろ,や. リプ トフ ァ ン 水 酸 化 酵 素 の. と こ ろ,最 終 投 与 後 の 活 性 の 経 時 的 変 化 は,単. 明 し て ゆ くこ と は,悪 性 症 候 群 の 中枢 神 経 系 に. 回投 与 し た場 合 と同 様 で,最. お け る病 態 に つ い て も,よ. は,コ In. 終 投 与 後6時. 間に. ン トロ ー ル の レ ベ ル に 復 して い た. vitroに お け る ダ ン トロ レ ン の ト リプ トフ. 謝 ア ン水 酸 化 酵 素 に 及 ぼ す 作 用 を調 べ る た め,ラ. ン トロ レ ン を添 加 し 反 応 を行 っ た と こ ろ,. 5‑. りま した庄 盛敏 廉 教 授 に 深謝 す る と ともに,終 始 直. ダ ン トロ レ ン 存 在 下 で 酵 素 活 性 は 上 昇. し, 6.0μMの. 接 の御指 導 と御鞭 撻 をい た だい た筒 井公 子 助 手 に謝 意 を表 し ます.. 存 在 下 で 最 大 の 活 性 を示 し た.ダ. ン トロ レ ン30μM以 られ な か った.酵. 上 の 濃 度 で は,活 性 上 昇 はみ 素 の 速 度 論 的 解 析 か ら,ダ. トロ レ ン に よ っ て,ト の 補 酵 素(BH,お. 辞. 稿 を終 え るに 臨み,懇 切 な る御 指導 と御 校 閲 を賜. ッ ト脳 よ り調 製 した 酵 素 標 品 に 種 々 の 濃 度 の ダ. 25μMの. り一 層 の 理 解 を 深 め. る こ とに な る と悪 わ れ る.. また,本 研究 の 遂行 に あた り,御 助 言 をい た だ い た小 林 清 史助 教授 な らび に盛 政 忠 臣講 師 に心 よ りお. ン. 礼 申 し上 げ ます.. リプ トフ ァ ン水 酸 化 酵 素. よ び6MPH4)に. 対 す る親 和 性. ま た実験 に 御協 力 い ただ い た教 室 員の 皆様 に感 謝. が 増 加 す る こ とが わ か っ た.ジ. メチ ル プ テ リン. します.. を リガ ン ド と し た ア フ ィ ニ テ ィ が ラ ム に よ って. 文. 献. 1) Delay J and Deniker P: Sur quelques erreurs de prescription des medicaments psychiatriques.. Bull. Mem Soc Med Hop (1965) 116, 487-493. 2). 3). 大 塚 宣 夫.古. 賀 良 彦,斎. に つ い て.臨. 床 精 神 医 学(1974). 山 脇 成 人,小. 林 亮 三,北. 朗,村 山 英 一:悪. 山 脇 成 人:悪 1986). 5). 23別 冊(悪. 413‑422,. 仲 地 律 雄,森. 田 恭 平,上. 16,. 脇 雅 之,石. 藤. 斎,三. 田 元 男,山. 田 竪 一,谷. Neurolepticaに. よ るSyndrome. Mafin. 島 良 彦:. 口和 覧,都. 井 正 剛,岡. 本 輝 夫,矢. 野 栄 一,高. 橋克. 生 省 悪 性症 候 群 研 究 班 第 一 次 ア ンケ ー ト調 査 か ら‑.. 性 高 熱 研 究 の 進 歩X),. 枝 正 幸,中. 浦 貞 則:. 961‑973.. 153‑158.. 性 症 候 群 の 病 態 に 関 す る考 察‑dantroleneが. 1(3),. (1987). 田 和 宏,伊 3,. 性 症 候 群 の 全 国 実 態 調 査 に つ い て‑厚. 麻 酔 と 蘇 生(1987) 4). 藤 昌 治,荻. Dantroleneが. 有 効 で あ っ た3症. 例 か ら‑.精. 神 科 治 療 学(. 有 効 で あ っ た 悪 性 症 候 群 の1例.臨. 床 精神 医学. 937‑941.. 6) Morgan K G and Bryant S H: The mecanism of action of dantrolene sodium. J Pharmacol Exp Ther (1977) 201, 138-147. 7) Ward A, Chaffman. M O and Sorkin E M: Dantrolene. A review of its pharmacodynamic. pharmacokinetic properties and therapeutic use in malignant nant syndrome and an update of its use in muscle spasticity. 8) Patti F, Giammona G, Reggio A, Maccagnano Nicoletti F: Effects of dantrolene. hyperthermia, the neuroleptic Drugs (1986) 32, 130-168.. and malig. C, Rampello L, Diorgio R M, Panico A M and. sodium on gabaergic activity. in spinal cord,. corpus striatum,.
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