3次元マイクロアレイシステムを用いた新たな子宮
体癌マススクリーニング法の開発
著者 八重樫 伸生
3 次元マイクロアレイシステムを用いた新たな子宮体癌
マススクリーニング法の開発
１７３９０４４４平成 17 年度～平成 19 年度科学研究費補助金
（基盤研究（B））研究成果報告書
平成 20 年 3 月
研究代表者 八重樫 伸生
東北大学大学院医学系研究科教授
＜はしがき＞ 子宮体癌は本邦をはじめとする先進諸国で増加傾向にある癌の一つ である。子宮体癌の簡便かつ高精度の診断法の開発は世界的な緊急課 題であるが、いまだに子宮内膜細胞診・組織診を超える診断法やスク リーニング法はない。現行の子宮体癌の細胞診・組織診によるスクリ ーニング法では１回の内膜細胞診のみで癌の確定診断ができず感度や 特異性も不十分である。そこで種々の遺伝子変異を検索することによ って子宮体癌スクリーニングに応用しようとする試みがなされている が、ほとんどすべての癌で同じ変異が起こるという遺伝子変異は子宮 体癌では見つかっておらず、一個あるいは数個の遺伝子変異を検出す る診断法には限界がある。そこで、大規模マイクロアレイの応用によ り遺伝子発現を網羅的に解析してはどうかという考えにいたるが、従 来のマイクロアレイシステムでは感度、再現性、迅速性および簡便性 などの点で臨床応用には大きな障壁となっていた。 本研究では新規マイクロアレイ基板であるフロースルー型多孔質フ ィルター（3 次元構造基板）を採用した DNA マイクロアレイを用いる ことで、精度、感度および迅速性を飛躍的に向上させた、微量検体で も的確な診断を可能とする新たな子宮体癌スクリーニングシステムの 確立を目指した。微量な癌細胞からのRNA 抽出およびその検体におけ る3 次元マイクロアレイの再現性の検討、網羅的ガラスアレイによる 3 次元マイクロアレイ子宮体癌検診に有用な遺伝子の抽出といった一貫 した研究の中から、腫瘍マーカーと成り得るタンパク質を見出した。 また他方でエストロゲン依存性子宮体癌の特性として組織局所でのエ ストロゲン合成を明らかにするなど多面的視点から子宮体癌の特性を 明らかにすることで、子宮体癌の診断において必要な情報の収集に努 めた。 今後、今回得られたデータと臨床病理学的因子等との更なる解析に よって、本ツールは検診のみならず、子宮体癌の様々な臨床診断の場 に有用な情報を提供するツールと成り得る可能性を持つと期待してい る。
研究組織 研究代表者： 八重樫 伸生 （東北大学大学院医学系研究科教授） 研究分担者： 伊 藤 潔 （東北大学大学院医学系研究科准教授） 研究分担者： 林 慎 一 （東北大学医学部教授） 研究分担者： 森 谷 卓 也 （東北大学病院准教授） 研究分担者： 新 倉 仁 （東北大学病院講師） 研究協力者： 永 瀬 智 （東北大学病院講師） 研究協力者： 松 本 光 代 （東北大学医学系研究科研究員） 研究協力者： 田辺 康次郎 （東北大学大学院医学系研究科在籍） 研究協力者： 畠 山 篤 （東北大学医学部在籍） 交付決定額（配分額） （金額単位：円） 直接経費 間接経費 合計 平成 17 年度 6,000,000 0 6,000,000 平成 18 年度 4,400,000 0 4,400,000 平成 19 年度 5,000,000 1,500,000 6,500,000 総計 15,400,000 1,500,000 16,900,000 研究発表 （1） 雑誌論文
Tanabe, K., Matsumoto, M., Ikematsu, S., Nagase, S., Hatakeyama, A., Takano, T., Niikura, H., Ito, K., Kadomatsu, K., Hayashi, S., Yaegashi, N. Midkine and its clinical significance in endometrial cancer. Peer-reviewed journal articles. Cancer Sci. Peer-reviewed journal articles. in press. 2008.
Matsumoto, M., Yamaguchi, Y., Seino, Y., Hatakeyama, A., Takei, H., Niikura, H., Ito, K., Suzuki, T., Sasano, H., Yaegashi, N. and Hayashi, S. Estrogen signaling ability in human endometrial cancer through the cancer-stromal interaction. Peer-reviewed journal articles. Endocrine-Related Cancer. Peer-reviewed journal articles. in press. 2008.
Yoshinaga K, Ito K, Moriya T, Nagase S, Takano T, Niikura H, Yaegashi N, Sato Y. Expression of vasohibin as a novel endothelium-derived angiogenesis inhibitor in endometrial cancer. Peer-reviewed journal articles. Cancer Sci. Peer-reviewed journal articles. in press. 2008.
Tanabe K, Utsunomiya H, Tamura M, Niikura H, Takano T, Yoshinaga K, Nagase S, Suzuki T, Ito K, Matsumoto M, Hayashi S, Yaegashi N.
Expression of retinoic acid receptors in human endometrial carcinoma. Cancer Sci. Peer-reviewed journal articles. 99. 2008. 267-271.
Utsunomiya H, Cheng YH, Lin Z, Reierstad S, Yin P, Attar E, Xue Q, Imir G, Thung S, Trukhacheva E, Suzuki T, Sasano H, Kim JJ, Yaegashi N, Bulun SE. Upstream Stimulatory Factor-2 Regulate Steroidogenic Factor-1 Expression in Endometriosis. Mol Endocrinol. Mol Endocrinol. Peer-reviewed journal articles. in press. 2007.
Ito K, Utsunomiya H, Yaegashi N, Sasano H. Biological roles of estrogen and progesterone in human endometrial carcinoma—new developments in
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Endocr J. Peer-reviewed journal review. 54. 2007. 667-679.
Toyoshima M, Tanaka N, Aoki J, Tanaka Y, Murata K, Kyuuma M,
Kobayashi H, Ishii N, Yaegashi N, Sugamura K. Inhibition of tumor growth and metastasis by depletion of vesicular sorting protein Hrs: its regulatory role on E-cadherin and beta-catenin. Cancer Res. Peer-reviewed journal articles. 67. 2007. 5162-5171.
Niikura H, Okamoto S, Yoshinaga K, Nagase S, Takano T, Ito K, Yaegashi N. Detection of micrometastases in the sentinel lymph nodes of patients with endometrial cancer. Gynecol Oncol. Peer-reviewed journal articles. 105. 2007. 683-686.
Hagiwara Y, Hatori M, Moriya T, Terada Y, Yaegashi N, Ehara S, Kokubun S. Inguinal endometriosis attaching to the round ligament. Australas Radiol. Peer-reviewed journal articles. 51. 2007. 91-94.
Ota K, Ito K, Suzuki T, Saito S, Tamura M, Hayashi S, Okamura K, Sasano H, Yaegashi N. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma and growth inhibition by its ligands in uterine endometrial carcinoma. Clin Cancer Res. Peer-reviewed journal articles. 12. 2006. 4200-4208.
Ozawa Y, Murakami T, Terada Y, Yaegashi N, Okamura K, Kuriyama S, Tsuji I. Management of the pain associated with endometriosis: an update of the painful problems. Tohoku J Exp Med. Peer-reviewed journal articles. 210. 2006. 175-188.
Ozawa Y, Murakami T, Tamura M, Terada Y, Yaegashi N, Okamura K. A selective cyclooxygenase-2 inhibitor suppresses the growth of endometriosis xenografts via antiangiogenic activity in severe combined immunodeficiency mice. Fertil Steril. Peer-reviewed journal articles. 86. 2006. 1146-1151. Saito S, Ito K, Nagase S, Suzuki T, Akahira J, Okamura K, Yaegashi N, Sasano H. Progesterone receptor isoforms as a prognostic marker in human endometrial carcinoma. Cancer Sci. Peer-reviewed journal articles. 97. 2006.1308-1314.
Yamaguchi H, Hishinuma T, Endo N, Tsukamoto H, Kishikawa Y, Sato M, Murai Y, Hiratsuka M, Ito K, Okamura C, Yaegashi N, Suzuki N, Tomioka Y,
Goto J. Genetic variation in ABCB1 influences paclitaxel pharmacokinetics in Japanese patients with ovarian cancer. Int J Gynecol Cancer. Peer-reviewed journal articles. 16. 2006. 979-985.
Sato N, Ito K, Onogawa T, Akahira J, Unno M, Abe T, Niikura H, Yaegashi N. Expression of organic cation transporter SLC22A16 in human endometria. Int J Gynecol Pathol. Peer-reviewed journal articles. 26. 2007. 53-60.
Ito K, Utsunomiya H, Suzuki T, Saitou S, Akahira J, Okamura K, Yaegashi N, Sasano H. 17Beta-hydroxysteroid dehydrogenases in human endometrium and its disorders. Mol Cell Endocrinol. Peer-reviewed journal articles. 248. 2006. 136-140.
Okamura C, Tsubono Y, Ito K, Niikura H, Takano T, Nagase S, Yoshinaga K, Terada Y, Murakami T, Sato S, Aoki D, Jobo T, Okamura K, Yaegashi N. Lactation and risk of endometrial cancer in Japan: a case-control study. Tohoku J Exp Med. Peer-reviewed journal review. 208. 2006. 109-115. Utsunomiya H, Akahira J, Tanno S, Moriya T, Toyoshima M, Niikura H, Ito K,Morimura Y, Watanabe Y, Yaegashi N. Paclitaxel-platinum combination chemotherapy for advanced or recurrent ovarian clear cell adenocarcinoma: a multicenter trial. Int J Gynecol Cancer. Peer-reviewed journal articles. 16. 2006. 52-56.
Ito K, Suzuki T, Akahira J, Sakuma M, Saitou S, Okamoto S, Niikura H, Okamura K, Yaegashi N, Sasano H, Inoue S. 14-3-3sigma in endometrial cancer--a possible prognostic marker in early-stage cancer. Clin Cancer Res. Peer-reviewed journal articles. 11. 2005. 7384-7391.
Sakuma M, Akahira J, Suzuki T, Inoue S, Ito K, Moriya T, Sasano H, Okamura K, Yaegashi N. Expression of estrogen-responsive finger protein
(Efp) is associated with advanced disease in human epithelial ovarian cancer. Gynecol Oncol. Peer-reviewed journal articles. 99. 2005. 664-670.
Saito S, Ito K, Suzuki T, Utsunomiya H, Akahira J, Sugihashi Y, Niikura H, Okamura K, Yaegashi N, Sasano H. Orphan nuclear receptor DAX-1 in human endometrium and its disorders. Cancer Sci. Peer-reviewed journal articles. 96. 2005. 645-652.
Aida T, Takebayashi Y, Shimizu T, Okamura C, Higasimoto M, Kanzaki A, Nakayama K, Terada K, Sugiyama T, Miyazaki K, Ito K, Takenoshita S, Yaegashi N. Expression of copper-transporting P-type adenosine
triphosphatase (ATP7B) as a prognostic factor in human endometrial
carcinoma. Gynecol Oncol. Peer-reviewed journal articles. 97. 2005. 41-45. Katahira A, Niikura H, Kaiho Y, Nakagawa H, Kurokawa K, Arai Y,
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Peer-reviewed journal articles. 98. 2005. 462-466.
Okamoto S, Ito K, Sasano H, Moriya T, Niikura H, Terada Y, Sato S, Okamura K, Yaegashi N. Ber-EP4 and anti-calretinin antibodies: a useful combination for differential diagnosis of various histological types of ovarian cancer cells and mesothelial cells. Tohoku J Exp Med. Peer-reviewed journal articles. 206. 2005. 31-40. 松本光代、畠山篤、坂本宙子、山口ゆり、笹野公伸、八重樫伸生、林 慎一. 3 次元マイクロアレイ－乳癌の診断と治療効果予測への臨床応用 を目指して. 東北大学医学部保健学科紀要. 査読有. 16. 2007. 19-25. 坂本宙子、林 慎一. ３次元マイクロアレイ. 医学のあゆみ. 査読無. 218. 2006. 741-742.
（2） 学会発表 林 慎一、松本光代、坂本宙子、岩瀬弘敬、佐治重衡、戸井雅和、木 山亮一、原田信広、八重樫伸生、笹野公伸、武井寛幸、黒住昌史、山 口ゆり：エストロゲン依存性腫瘍の分子診断法開発．第 2 回東北大学 バイオサイエンスシンポジウム，2005 年 5 月 16 日，仙台． 太田恭子、伊藤 潔、鈴木 貴、齋藤純香、林 慎一、笹野公伸、八 重樫伸生：子宮内膜癌におけるPeroxisome Proliferator-activated Receptor γ についての検討．第 6 回ホルモンと癌研究会，2005 年 7 月 15 日，名 古屋． 山口ゆり、武井寛幸、末益公人、小林康人、黒住昌史、原田信広、松 本光代、清野祐子、林 慎一：乳癌の微小環境によるエストロゲン受 容体の活性化と増殖促進作用．第64 回日本癌学会学術総会，2005 年 9 月，札幌． 松本光代、坂本宙子、山口ゆり、清野祐子、武井寛幸、末益公人、黒 住昌史、笹野公伸、八重樫伸生、林 慎一：3 次元マイクロアレイを用 いた乳癌治療反応性診断システムの開発．第64 回日本癌学会学術総会， 2005 年 9 月 15 日，札幌． 永瀬 智：子宮体癌検診への 3 次元マイクロアレイシステムの応用可 能性．第14 回日本産婦人科がん検診学会，2005 年 11 月 5 日，仙台． 林 慎一、松本光代、山口ゆり、清野祐子、坂本宙子、島田佳弘、鈴 木貴、笹野公伸、伊藤潔、八重樫伸生：乳がん・子宮体癌の克服を目 指して．東北大学イノベーションフェア2006，2006 年 2 月 7 日，東京． 田村充利：Metabolic syndrome の観点からの子宮内膜癌予防・治療の可
能性．シンポジウム 第79 回日本内分泌学会．2006 年 5 月 19 日，神 戸市． 松本光代、山口ゆり、杉橋陽子、鈴木 貴、笹野公伸、伊藤 潔、八 重樫伸生、林 慎一：子宮体癌におけるエストロゲンシグナルを介し た癌微小環境の解析．第 7 回日本がん分子疫学研究会学術集会，2006 年5 月 19 日，広島．
Mitsuyo Matsumoto, Yuri Yamaguchi, Yuko Seino, Hiroyuki Takei, Nobuo Yaegashi, Shin-ichi Hayashi: Visualization and Characterization of Estrogen-Signal Susceptibility in Individual Estrogen-dependent Cancer by Adenovirus-ERE-GFP Assay. 20th IUBMB International Congress of Biochemistry and Molecular Biology and 11th FAOBMB Congress, 2006, 22/June, Kyoto. 松本光代、山口ゆり、杉橋陽子、鈴木 貴、笹野公伸、伊藤 潔、八 重樫伸生、林 慎一：子宮体癌の微小環境におけるエストロゲン受容 体活性化の解析．第7 回ホルモンと癌研究会，2006 年 6 月 30 日，前橋． 山口ゆり、武井寛幸、末益公人、小林康人、黒住昌史、清野祐子、坂 本宙子、松本光代、林 慎一：乳癌の微小環境が制御する増殖促進作 用とエストロゲンシグナル．第7 回ホルモンと癌研究会，2006 年 6 月 30 日，前橋． 松本光代、山口ゆり、鈴木 貴、笹野公伸、伊藤 潔、八重樫伸生、 林 慎一：子宮体癌のエストロゲンシグナルを標的とした治療をめざ して．第 5 回日本婦人科がん分子標的研究会学術集会，2006 年 8 月 6 日，東京． 松本光代、山口ゆり、鈴木 貴、笹野公伸、伊藤 潔、八重樫伸生、 林 慎一：微小環境に依存した子宮体癌のエストロゲン受容体活性化 の解析．第65 回日本癌学会学術総会，2006 年 9 月 29 日，横浜市．
齋藤純香：子宮内膜癌における予後因子としてのPR isoform に関する 検討．第59 回日本産婦人科学会，2007 年 4 月 16 日，京都．
宇都宮裕貴：子宮内膜症におけるsteroidgenic factor-1 (SF-1)過剰発現の メカニズム．第59 回日本産婦人科学会，2007 年 4 月 16 日，京都． 徳永英樹：Clinicopathological significance of circadian rhythm-related gene expression levels in patients with epithelial ovarian cancer．第 59 回日本産婦 人科学会，2007 年 4 月 16 日，京都． 松本光代、伊藤 潔、新倉 仁、笹野公伸、八重樫伸生、林 慎一： 子宮体癌－間質細胞におけるエストロゲンを介した相互作用の解析． 第4 回東北大学バイオサイエンスシンポジウム，2007 年 4 月 16 日，仙 台． 松本光代、山口ゆり、清野裕子、畠山 篤、武井寛幸、新倉 仁、伊 藤 潔、笹野公伸、八重樫伸生、林 慎一：ヒト子宮体癌におけるエ ストロゲン刺激を介した癌ー間質の相互作用の解析．第14 回日本内分 泌学会東北地方会，2007 年 4 月 28 日，仙台． 松本光代、山口ゆり、畠山 篤、清野祐子、鈴木 貴、伊藤 潔、新 倉 仁、笹野公伸、八重樫伸生、林 慎一：子宮体癌におけるエスト ロゲンシグナルを介した癌微小環境の解析．第 8 回ホルモンと癌研究 会，2007 年 7 月 27 日，東京．
Matsumoto, M., Yamaguchi, Y., Seino, Y., Takei, H., Niikura, H., Ito, K., Suzuki, T., Sasano, H., Yaegashi, N., Hayashi, S. : Tumor-stromal Interaction through Estrogen-Signaling Pathway Analyzed by GFP Assay in Human Endometrial Cancer. 第 66 回日本癌学会学術総会，2007 年 10 月 5 日， 横浜市．
Tanabe, K., Matsumoto, M., Akahira, J., Suzuki, T., Kadomatsu, K., Ikematsu, S., Sasano, H., Hayashi S., Yaegashi, N. : Expression of midkine in human endometrium and its disorder. 第 66 回日本癌学会学術総，2007 年 10 月 5 日，横浜市．
Utsunomiya H, Tanabe K, Yoshinaga K, Nagase S, Takano T, Niikura H, Ito K, Yaegashi N:The expression of retinoic acid receptors in human endometrial carcinoma. ESGO 15th 2007, Berlin.
松本光代、山口ゆり、清野祐子、畠山 篤、武井寛幸、新倉 仁、伊 藤 潔、鈴木 貴、笹野公伸、八重樫伸生、林 慎一：ヒト子宮体癌 におけるエストロゲン刺激を介した癌－間質の相互作用の解析．第 15 回日本ステロイドホルモン学会学術集会，2007 年 11 月 24 日，仙台市． 宇都宮裕貴、伊藤 潔、小林里香、高橋尚美、三木康宏、鈴木 貴、 本間誠次郎、林 慎一、笹野公伸、八重樫伸生：子宮内膜癌における エストロゲン合成・代謝酵素の発現～癌細胞のエストロゲン合成に対 する間質細胞の影響．第 15 回日本ステロイドホルモン学会学術集会， 2007 年 11 月 24 日，仙台． 林 慎一：転写因子、RNA 発現から見た核異型．シンポジウム「がん の細胞異型に迫る－核異型に対する科学的アプローチ」第46 回日本臨 床細胞学会，2007 年 11 月，仙台市． 新倉 仁：子宮内膜細胞診擬陽性の原因となる疾患の臨床的取扱い． シンポジウム 第46 回日本臨床細胞学会，2007 年 11 月，仙台市． 伊藤 潔：子宮体癌の早期発見を目指して 診断法の現状と展望．教 育講演 第46 回日本臨床細胞学会，2007 年 11 月，仙台市． 松本光代、山口ゆり、坂本宙子、武井寛幸、新倉 仁、伊藤 潔、鈴 木 貴、笹野公伸、八重樫伸生、林 慎一：エストロゲン依存性癌の
新規診断法開発．第 30 回日本分子生物学会年会、第 80 回日本生化学 会合同大会，2007 年 12 月 15 日，横浜市．
（3） 図書
Hayashi, S., Suzuki, T., Ito, K., Matsumoto, M., Sasano, H., Yaegashi, N. Reproductive Oncology (ed. J. Fujimoto), Research Signpost, India. Biosynthesis and Action of Estrogen in Gynecological Cancers. 2007. pp93-120.
研究成果 研究 1．3 次元マイクロアレイによる診断と治療効果予測への臨床応用 を目指して 微量検体からのRNA 抽出・3 次元マイクロアレイの再現性の検討を 行うため、我々は癌培養細胞の細胞数、1×101～1×105 cells 懸濁液から RNeasy（QIAGEN)を用いて RNA 抽出を行い、各抽出サンプルから MessageAmp aRNA kit（Ambion)を用いて aRNA の合成を行った。以前 の研究ですでにエストロゲン応答遺伝子を搭載した 3 次元マイクロア レイを用いて検体ごとの再現性を検討したところ、3 次元マイクロアレ イを用いる際、aRNA の調整に用いる total RNA 量は 100 ng 以上 1,000 ng 以下であることが望ましく、これは子宮体癌細胞診での細胞採取量か らも十分に3 次元マイクロアレイ解析が許容となる mRNA 量が抽出可 能であることを示唆した。 子宮体癌検診に有用な遺伝子群を抽出するため、我々は正常子宮内膜 および子宮体癌組織、各10 例から microdissection 法によって正常腺管 細胞や癌細胞を分離後、約 2 万遺伝子の DNA マイクロアレイ解析 （Agilent）を行った。子宮体癌はエストロゲン依存性癌といわれてい ることから、エストロゲン応答遺伝子群についても注目し、正常組織 と癌組織における発現パターンについて検索を行った。解析の中で、 我々は正常子宮内膜および子宮体癌を選別するのに有用だと思われる 遺伝子を 27 個にまで絞ること に成功した。 これら 27 遺伝子が子宮体癌 検診 3 次元マイクロアレイチ ップに搭載されるに相応しい 遺 伝 子 群 か 確 か め る た め 、 mRNA 発 現 量 を real-time RT-PCR 法にて調べ、クラスタ ー解析を行った。本解析は子宮 体癌組織の高分化型、低分化型 および正常内膜組織、各 10 検 図 １ ． 子 宮 体 癌 お よ び 正 常 子 宮 内 膜 組 織 を 用 い たreal-time RT-PCR 解析結果のクラスター解析
図 2．非がん者および 子宮体癌患者の細胞診検体 を用いた 3 次元マイクロ アレイの結果のクラスター解析 体を正常と癌の2 群へと分けた（図 1）。そこで我々 は、この27 遺伝子に子宮体癌において重要視され る既知の 10 遺伝子を加えた 37 遺伝子を搭載した 子宮体癌検診用 3 次元マイクロアレイカスタムチ ップ（EM3D)を作製した。 EM3D が子宮体癌組織において解析可能なツー ルか調べるため、癌組織 8 検体、正常組織 4 検体 の EM3D におけるアレイ解析を施行したところ、 EM3D は癌組織と正常組織を異なるクラスターに 分類した。さらに検診への応用の可能性の検討と して、健常者3 例、癌患者 6 例の検診検体の RNA 抽出を試み、EM3D におけるアレイ解析を行った ところ、本解析もまた健常例と癌例を異なるクラ スターへと分類した（図2）。 研究 2．子宮内膜癌におけるミッドカインのマーカーとしての有用性の 検討 正常子宮内膜と子宮体癌の網羅的マイクロアレイの比較解析から、 いくつかの遺伝子が子宮体癌において高発現していることが判明し、 その中で我々は、ミッドカイン（MDK）に注目した。 MDK はヘパリン結合性の分子量 13 kDa のタンパク質でその機能は 細胞増殖促進、抗アポトーシス作用、血管新生等多岐にわたり、生体 では肝細胞、胃および食道などの癌組織やその血清、さらに炎症組織 に高濃度に存在することが知られている。しかし、子宮体癌で検討し た報告は無い。そこで我々は本研究においてMDK の子宮体癌における 遺伝子レベル、タンパク質レベルの発現量の解析を行い、MDK の子宮 体癌における腫瘍マーカーとしての有用性について検討を行った。 real-time RT-PCR および免疫染色法によって子宮体癌組織および正常内 膜組織のMDK の発現を調べたところ、MDK は正常内膜と比較して癌 組織で有意に高発現することが判明した。また、非がん患者と子宮体 癌患者の血清中 MDK 濃度を ELISA 法によって調べたところ、血清中 MDK 濃度もまた、子宮体癌患者において有意に高いことが判明した。
研究 3．エストロゲン依存性癌の新規診断法の開発 子宮体癌はエストロゲン依存性癌といわれながら、同じくエストロ ゲン依存性癌といわれている乳がんと比較してエストロゲン応答遺伝 子の発現パターンも異なり、また培養細胞においてはエストロゲンレ セプター（ER）を保持しながらも、エストロゲン応答因子（ERE）の エストロゲンに対する感受性が低い。そこで我々は ERE－GFP を導入 したアデノウイルス（Ad-ERE-GFP）を用いた活性型 ER 保持細胞の視 覚化を試みた。Ad-ERE-GFP に感染した細胞は活性型 ER 存在化で GFP の発現を誘導する。子宮内膜癌の手術検体に Ad-ERE-GFP を接種した ところ、GFP の発現は ER に依存して増加した。また、接種時における pure anti-estrogen の添加によって GFP の発現は低下した。このことは子 宮体癌がエストロゲン感受性を保持していることを示唆した。 さらに癌組織局所におけるエストロゲン合成を検討するため、 ERE-GFP を安定導入させた細胞（E10）をエストロゲン刺激の有無を 観察するレポーター細胞として用い、子宮体癌手術検体から分離した 間質細胞と共培養したところ、E10 は GFP の発現を増加させた。また 間質細胞のエストロゲン代謝酵素であるアロマターゼの mRNA 量を real-time RT-PCR 法によって調べたところ、発現が認められ、間質細胞 がアロマターゼを介してエストロゲン刺激を癌細胞に与えていること が示唆された。 以上より、スクリーニング次第では子宮体癌患者においても内分療 法の有効な患者が存在する可能性が高いことが示唆され、さらに Ad-ERE-GFP および E10 細胞といったツールはエストロゲン依存性癌 を患う個々の者の薬剤の奏効性予測に使用可能かもしれない。 （考案） 以上、得られた結果をまとめると： １． 子宮体癌と正常内膜をスクリーニング出来得る遺伝子群を載せ たEM3D の作製に成功した。 ２． アレイの結果から導かれたMDK は子宮体癌にとっても腫瘍マー カーとなることが判明した。
３． 子宮体癌はエストロゲン感受性を保持した癌であり、またエスト ロゲンは少なくとも癌組織微小環境中の間質細胞から供給され ていることを見出した。 これらの検討から得られたデータは、臨床病理学的因子との関連性を 解析し、癌悪性度診断、薬剤への感受性予測、再発や転移の予測など を検討することで、EM3D による検診システムの確立のみならず、MDK、 Ad-ERE-GFP および E10 細胞も子宮体癌の様々な臨床現場において有 用な情報を提供しうるツールとなる可能性を持つ。そのためより有用 な情報を得るために、現在も検体数を増やすべく、EM3D の解析を行 っているところである。
TOUR ： Tohoku University Repository コメント・シート 本報告書収録の学術雑誌等発表論文は本ファイルに登録しておりません。なお、このうち東北大学 在籍の研究者の論文で、かつ、出版社等から著作権の許諾が得られた論文は、個別にTOUR に登録 しております。 TOUR http://ir.library.tohoku.ac.jp/
