IRUCAA@TDC : 【研究成果報告】 コア研究部門

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Title

【研究成果報告】 コア研究部門

Journal

歯科学報, 119(4): 285-300

URL

http://hdl.handle.net/10130/4966

Right

① 生体医工学研究部門 主任 松永 智 １．研究の概要 生体医工学研究部門では，新しい術前・術中診査 手法や，硬組織疾患に対する最先端技術の臨床応用 を実現するための基礎的研究を行っており，①材料 工学的手法を用いた骨の質的研究，②最先端機器・ テクニックの開発，精度検証，③医用材料研究につ いて研究を重ねている。 ①材料工学的手法を用いた骨の質的研究 骨質とは，骨の微小構造や幾何学的形状，骨基 質，石灰化度，骨代謝回転，微小骨折を指し，骨強 度を左右する重要な因子である。生体アパタイト結 晶配向性解析，コラーゲン線維の走行，骨細胞動態 の検索など，様々な骨の質的因子について検索を進 めている。 ②最先端機器・テクニックの開発，精度検証 ３D プリンタ，光学スキャナを用いたデジタル ファブリケーション，三次元有限要素法を用いた力 学解析，最先端の工学的手法を用いた新しい診査手 法を用いて，独自技術の開発および精度検証を行っ ている。 ③医用材料研究 材料工学と医歯薬学のコラボレーションによる， 骨量や骨質を改善するバイオマテリアル開発を行 う。共同研究を行っている大学および企業との間で 産学連携を進めており，まったく新しい歯科用材料 開発および新材料を用いた製品開発に着手してい る。 ２．取組状況 ①材料工学的手法を用いた骨の質的解析 献体から採取した顎骨および実験動物の顎骨／大 腿骨／脛骨を用いて，骨の質的因子を定量評価する 研究を行っている。昨年度より導入されたエックス 線回折装置による，生体アパタイト結晶の配向性の 定量評価に加え，今年度から新しく導入された多光 子励起位相差顕微鏡を内包する共焦点レーザー顕微 鏡によって，局所の荷重環境と結晶配向の関連性に ついても踏み込んで研究することが可能となった。 特に東京大学の疋田温彦准教授との共同研究から始 まった，多光子励起位相差顕微鏡を用いた SHG イ メージングによるコラーゲン線維の走行異方性につ いての研究は，本学の設備で進めることができるよ うになったことで効率が飛躍的に上がり，ナノス ケールのコラーゲン線維について厚径，走行角度な どを精細に解析することが可能となった。従来の組 織学的な検索に加えて，これら新技術，新手法を積 極的に応用して，歯や歯科インプラント周囲顎骨の 構造特性について検索を進めている。 ②最先端機器・テクニックの開発，精度検証 ２０１４年に導入された３D プリンタのモデル造形は ２２０例を超え，口腔外科，補綴，矯正分野など多岐 にわたり使用され，術前・術中診断や新手法開発に 積極的に用いられており，同時に精度検証が行われ て安全性を担保する試みが行われている。さらに本 年度は，ローランドとの共同研究の一環として，薬 事法によって口腔内への使用が一部認可された材料 を用いる新しい３D プリンタが導入され，すでに一 部臨床応用に向けた研究成果を得るに至っている。 また，慶應義塾大学の高野直樹教授との共同研究で は，EOSINT M２８０をはじめとする金属３D プリン タの精度検証が進められており，クラスプや金属床 への応用するための基礎的研究を行っている。 ③医用材料研究 口腔内や顎顔面に直接応用できる三次元造形物に 関する研究をスタートしており，各社とのコラボ レーションが模索されている。 ３．成果 ①材料工学的手法を用いた骨の質的解析 本年度は，ヒトの有歯・無歯顎骨およびビーグル 犬／ヒトのインプラント周囲顎骨，さらにはカピバ ラをはじめとする種々の動物における骨質解析を行 い，特異的なナノ・ミクロ・マクロ構造特性と力学 環境についての考察を行った。生体アパタイト結晶 の配向性が圧縮応力に，コラーゲン線維の走行異方 性が引張応力に抵抗しており，骨強度に大きく貢献 していることから，骨質を考慮する重要性は非常に 高い。研究成果は，歯科基礎医学会，日本口腔イン

コア研究部門

プラント学会をはじめとする学会発表と，アクセプ ト済みを含む複数の論文投稿という成果が得られて いる。特に荷重環境と骨の質的因子との関連につい ては関心が高く，現在，三次元有限要素法を用いた 力学解析結果などと併せて，きわめて局所的なメカ ニカルストレスと骨造成，骨吸収の関連とそのメカ ニズムについての更なる研究を進めている。 ②最先端機器・テクニックの開発，精度検証 全国でも先駆けて開始されたトランスレーショナ ルリサーチは，基礎研究分野はもとより口腔外科， 補綴分野を中心に多くの学会にて発表するに至り， いくつかの臨床論文を発表するに至った。若手の基 礎系・臨床系研究者が活発な意見を出し合い，東京 歯科大学独自のオペ法考案や手術補助器具の開発が 行われており，他大学や企業とのディスカッション も盛んに行われている。加えて，各分野で最先端機 器の精度検証を行っており，客観的な研究データを 収集して学術的な報告を行った。また，デジタル機 器を用いた教育研究も行われており，Holoeyes と の共同研究の中で行った幾つかの発表により，三次 元的構造の理解に，VR，MR 技術が非常に有効で あることが認知されてきたと考えている。 ③医用材料研究 世界に先駆けて歯科用３D プリンタ用インク開発 を 行 い 薬 事 法 の 認 可 を 受 け て い る ロ ー ラ ン ド （DGSHAPE）との共同研究では，東京歯科大学独自 の口腔外科手術用の補助器具の試作から，臨床応用 に向けた取り組みを進めている段階である。また歯 科用新素材開発は，大阪大学とともに産学連携を着 実に進めており，３年後の成果発表を目指して現在 基礎研究を進めている段階である。 【関連業績】 雑誌論文

１．Sugahara K, Katsumi Y, Koyachi M, Koyama Y, Matsunaga S, Odaka K, Abe, Takano M, Katakura A : Novel condylar repositioning method for ３D-printed models. Maxillofac Plast Reconstr Surg, ２０１８．（doi：１０．１１８６/s ４０９０２−０１８−０１４３−７）

２．Furukawa T, Matsunaga S, Morioka T, Nakano T, Abe S, Yoshinari M, Yajima Y : Study on bone quality in the human mandible

­Alignment of biological apatite crystallites­ J Biomed Mater Res B Appl. Biomater, １０７： ８３８−８４６，２０１９．

３．Hirouchi H, Shimoo Y, Matsunaga S, Yamamoto M, Kitamura K, Odaka K, Kore-sawa K, YanagiKore-sawa N, Sakiyama K, Takayama T, Hayashi K, Chang W J, Abe S : Morpho-logical study on the fibula in japanese : Basic anatomical study for Maxillofacial reconstruc-tion. J Hard Tissue Biol, ２７⑷：２８７−２９４， ２０１８． ４．高野直樹，瀧澤英男，伊藤幸太，小髙研人， 松永 智，阿部伸一：３D プリンティング技術 により積層造形されたアルミ合金ラティス構造 の 圧 縮 特 性 に 関 す る 研 究．材 料，６８：３５１− ３５７，２０１９．

５．Tasaka A, Matsunaga S, Odaka K, Ishizaki K, Ueda T, Abe S, Yoshinari M, Yamashita S, Sakurai K : Accuracy and retention of den-ture base fabricated by heat curing and addi-tive manufacturing. J Prosthodont Res, ６３：８５ −８９，２０１９．

６．Mitomo K, Matsunaga S, Kitamura K, Naka-mura T, Saito A, Komori T, Muramatsu T, Yamaguchi A : Sphenoid bone hypoplasia is a skeletal phenotype of cleidocranial dysplasia in a mouse model and patients. Bone, １２０： １７６−１８６，２０１９． 図書 １．松永 智，阿部伸一，橋本正次，井出吉信 口腔解剖学 第２版（分担執筆） p．５−１７，p．１８−３０，p．９４−１２０，p．２０２−２０７ 医歯薬出版，東京，２０１８． 学会発表 １．冨田尚充，永倉遼太郎，山本将仁，松永 智， 四ツ谷 護，大平真理子，菅野亜紀，大久保真 衣，佐藤正樹，比嘉一成，阿部伸一 筋の骨への付着部形成過程における Sox‐９の 局在に関する免疫組織化学的検索 第３０５回東京歯科大学学会・例会プログラム： １６，２０１８． 第３０５回東京歯科大学学会例会 東京 東京歯科大学口腔科学研究センターワークショップ ２８６

２．小髙研人，是澤和人，松永 智，阿部伸一 インプラント周囲骨における骨質特性の分析 第３０５回東京歯科大学学会・例会プログラム： ２８，２０１８． 第３０５回東京歯科大学学会例会 千代田区 ３．松永 智，笠原典夫，北村 啓，阿部伸一 新生児および成獣におけるカピバラの骨構造特 性 第６０回歯科基礎医学会学術大会プログラム： ３７５，２０１８． 第６０回歯科基礎医学会学術大会 福岡市 ４．是澤和人，松永 智，奥寺 元，鈴木正史， 吉成正雄，矢島安朝，阿部伸一 埋入後インプラント体周囲に新生されたオステ オン様構造の動向 日 口 腔 イ ン プ ラ ン ト 誌，３１（特 別 号）：５０， ２０１８． 第４８回公益社団法人 日本口腔インプラント学 会学術大会 大阪市 ５．古川丈博，松永 智，中島孝輔，森岡俊行， 中野貴由，阿部伸一，吉成正雄，矢島安朝 ヒト無歯下顎骨前歯部皮質骨における生体アパ タイト結晶配向性 日 口 腔 イ ン プ ラ ン ト 誌，３１（特 別 号）：５０， ２０１８． 第４８回公益社団法人 日本口腔インプラント学 会学術大会 大阪市 ６．本間慎也，高梨琢也，松永 智，阿部伸一， 高野直樹，矢島安朝 口腔インプラント学卒前教育の現状 日 口 腔 イ ン プ ラ ン ト 誌，３１（特 別 号）：６０， ２０１８． 第４８回公益社団法人 日本口腔インプラント学 会学術大会 大阪市 ７．小川雄大，廣内英智，山本将仁，松永 智， 阿部伸一 顎顔面再建手術後の歯科インプラント埋入を想 定した日本人腓骨の解剖学的研究 日 口 腔 イ ン プ ラ ン ト 誌，３１（特 別 号）：６１， ２０１８． 第４８回公益社団法人 日本口腔インプラント学 会学術大会 大阪市 ８．松永 智，是澤和人，奥寺 元，鈴木正史， 吉成正雄，矢島安朝，阿部伸一 歯科インプラント周囲に新生された顎骨のミク ロ／ナノ構造特性 日 口 腔 イ ン プ ラ ン ト 誌，３１（特 別 号）：６２， ２０１８． 第４８回公益社団法人 日本口腔インプラント学 会学術大会 大阪市 ９．橋本千明，北村 啓，橋本圭史，廣内英智， 山本将仁，松永 智，山本 仁，阿部伸一 マウス喉頭軟骨の発生：Sox９発現局在からの 理解 第３０６回東京歯科大学学会・総会プログラム： １２，２０１８． 第３０６回東京歯科大学学会総会 東京 １０．髙橋有希，棚瀬稔貴，松永 智，阿部伸一， 新谷誠康，笠原正貴 高用量のアデノ随伴ウィルスベクターは低ホス ファターゼ症の大腿骨伸長不全を改善する 第３０６回東京歯科大学学会・総会プログラム： １５，２０１８． 第３０６回東京歯科大学学会総会 東京 １１．三友啓介，松永 智，北村 啓，中村 貴， 齋藤暁子，東 俊文，阿部伸一，末石研二，山 口 朗，村松 敬 鎖骨頭蓋異形成症における蝶形骨形成障害の病 態解明 第３０６回東京歯科大学学会・総会プログラム： １９，２０１８． 第３０６回東京歯科大学学会総会 東京 １２．高野直樹，瀧澤英男，小髙研人，松永 智， 阿部伸一 金属３D 積層造形によるラティス構造体の品質 保証への CAE の貢献（Contribution of CAE to Quality Assurance of Additively Manufac-tured Lattice Structure About the Use of the JSME Specification Template File）

日本機械学会 第３１回計算力学講演会（CMD ２０１８）講演論文集：０１１，２０１８． 第３１回計算力学講演会（CMD２０１８），徳島市 １３．野瀬達人，高野直樹，村田知優，小髙研人， 松永 智，阿部伸一 歯科学報 Vol．１１９，No．４（２０１９） ２８７

チタン合金製歯科補綴物の３D 積層造形のため の CAE 技 術 の 開 発（Development of CAE technology for ３D printing of titanium alloy dental prosthesis）

日本機械学会 第３１回計算力学講演会（CMD ２０１８）講演論文集：０１５，２０１８．

第３１回計算力学講演会（CMD２０１８） 徳島市 １４．Fu Y, Ito K, Takano N, Odaka K, Matsunaga

S.

SHG image-based ３D finite element analysis of peri-implant mandibular bone considering collagen fiber.

第３１回バイオエンジニアリング講演会 講演論 文集：１E２１，２０１８．

日本機械学会 第３１回バイオエンジニアリング 講演会 郡山市

１５．Odaka K, Matsunaga S, Yamamoto M, Koyachi M, Sugahara K, Katakura A, Abe S. Application of novel techniques to transfer the positon designed at virtual operation by assembling additive manufactured devices in Le Fort I osteotomy.

２４th Congress of the European Association for Cranio Maxillo Facial Surgery 抄録集： ２０１８．

２４th Congress of the European Association for Cranio Maxillo Facial Surgery，ドイツ・ ミュンヘン

１６．Koyachi M, Sugahara K, Odaka K, Matsu-naga S, Abe S, Katakura A.

Technical report of Le Fort I osteotomy using MicrosoftⓇ

HoloLens and ３D devices． ２４th Congress of the European Association

for Cranio Maxillo Facial Surgery 抄録集： ２０１８．

２４th Congress of the European Association for Cranio Maxillo Facial Surgery ドイツ・ ミュンヘン

１７．Sugahara K, Odaka K, Matsunaga S, Matsu-zaka K, Abe S, Katakura A.

Histopathological Verification of Fluorescence Images of The Oral Mucosa．

２４th Congress of the European Association for Cranio Maxillo Facial Surgery 抄録集： ２０１８．

２４th Congress of the European Association for Cranio Maxillo Facial Surgery ドイツ・ ミュンヘン

１８．Koyachi M, Sugahara K, Shin M, Koyama Y, Takagi R, Kasahara K, Odaka K, Matsunaga S, Abe S, Katakura A.

Technical report of Le Fort I osteotomy using MicrosoftⓇ

HoloLens and ３D devices． The ５７th Congress of Korean Association of Maxillofacial Plastic and Reconstructive Sur-geons：２０１８，韓国． １９．小谷地雅秀，菅原圭亮，辛 麻由，布施 俊， 小山 侑，笠原清弘，片倉 朗 MicrosoftⓇ HoloLens を用いて VR 手術支援を 行った上顎良性腫瘍切除術 第７２回口腔科学会学術集会抄録集：２０１８． 第７２回口腔科学会学術集会 名古屋市 ２０．小谷地雅秀，菅原圭亮，辛 麻由，小山 侑， 笠原清弘，片倉 朗 MicrosoftⓇ HoloLens とカッティングガイド・ ジグデバイスを用いた Le FortⅠ骨切り術 第２８回日本顎変形症学会抄録集：２０１８． 第２８回日本顎変形症学会 大阪市 ② 分子病態解析研究部門 主任 石井武展 １．研究の概要 頭蓋顎顔面に変形をきたす遺伝性疾患は，頭蓋顎 顔面の健常者と異なる成長様式を示し頭蓋顎顔面領 域の醜形を惹起する。また，頭蓋顎顔面形態の異常 は，脳神経や気道など生命維持に必要な器官への影 響が強く治療が難しい。その中でも，Apert 症候群 は，線維芽細胞成長因子受容体（以後 FGFR２）の変 異が報告されており，Ig Ⅱドメインの変異 Ser２５２ Trp が２／３，Ig Ⅲドメインの変異 Pro２５３Arg が１／３ に認められる。これらは Gain of function の病態を 東京歯科大学口腔科学研究センターワークショップ ２８８

示す。 FGFR２は特に骨や軟骨形成に関与していること が示されており FGFR２が上記の部位で点変異する と通常では結合しない FGF が FGFR２に結合する ことにより，細胞内にシグナルを入れることが判明 している。臨床所見として，１５万人に１人の割合で 出生し，早期頭蓋の癒合，口蓋裂，癒合指，気道閉 塞，ファロー四徴症および精神遅滞を伴い，生後１ 歳から１０回以上もの外科的な処置が必要な重篤な難 病である。Apert 症候群の臨床上の問題点として， 生命予後を脅かすような外科的な治療が主となって おり非侵襲的な治療が不可避である。本邦では国の 指定難病とされており文部科学省と厚生労働省より 速やかな疾患発症機序の解明，創薬研究および治療 法の開発が推進されている疾患の一つである。 近年，マウスモデルの作製による本疾患の病態解 明が報告されているが，ヒト由来の疾患モデルは未 だ作製されておらず，本疾患の病態は不明な部分が 多い。そこで，当院矯正歯科に来院している Apert 症候群の患者の口腔粘膜上皮または血中リンパ球よ り，疾患特異的 iPS 細胞の樹立を行い，この細胞か ら骨あるいは軟骨への分化異常機序の解明，および 正常 FGFR２を導入した iPS 細胞による正常骨分化 誘導を確認することにより Apert 症候群の発症機 序の解明を行う。 ２．取組状況 本研究を開始するにあたり本年度はヒトゲノムお よび人体より採取したサンプルを用いた前向き研究 として本学倫理委員会へ申請を行い承認番号７５１を もって承認後実験を開始した。 本学矯正歯科に来院された Apert 症候群患者へ 本研究の説明を行い同意を得た上で採取した頰粘膜 から線維芽細胞を分離後，ゲノム DNA を抽出し FGFR２遺伝子変異をサンガー法により正常ヒト遺 伝子と Apert 症候群との間における遺伝子変異の 同定を試みた。その結果，従来より報告が挙げられ ている Ser２５２Trp（６０％＜），Pro２５３Arg（３０％＜）の 変異のうち Ser２５２Trp にヘテロ変異を同定した。 つまり，本症例は Apert 症候群であることが確定 した。 その後，計画通り患者由来線維芽細胞へ SeVdp （KOSM３０２L）ベクターを感染させ，iPS 細胞の樹立 を試みた。樹立後の iPS 細胞について未分化マー カ ー（OCT３／４，SOX２，KLF４，c-MYC，NANOG， REX１）の発現と胚様体形成後の三胚葉分化マー カ ー（AFP，T，MAP２，hSOX，FOXA２，PAX６） の発現を RT-PCR で確認した。現在，iPS 細胞が万 能性を有するか否かを Scid マウスへ移植しテ ラ トーマ形成の有無により確認中である。 現在 FGFR２の変異部位を正常化した iPS 細胞と 変異をホモに持つ iPS 細胞を Crisper-cas system を 用いて作成している。当初オフターゲット効果を低 減する目的でダブルニッキング法を用いエレクトロ ポレーションにより導入した，６０コロニーを回収し シークエンスを確認したが目的の遺伝子の導入が確 認できなかった。そこでシングルニッキング法に変 更し再びエレクトロポレーションを行い５０コロニー を回収，確認したが導入が認められなかった。そこ で gRNA の設定部位の変更を行うことを検討して いる。現在は Nips-B２（HPS０２２３）をコントロール として用いて Apert 症候群の iPS 細胞を骨芽細胞 分化誘導し表現型を確認している。また，Nips-B２ （HPS０２２３）をコントロールとして用いて Apert 症 候群の iPS 細胞に対して軟骨分化誘導を行い軟骨細 胞の浮遊培養によるパーティクル作製まで完了し た。これらの細胞を用いて，Apert 症候群の FGFR ２変異による FGFs の非特異的結合実験を行い， FGF ファミリーのうちどの FGF が Apert 症候群 において最もシグナルを入れるかを Pull down as-say などにより確認予定である。加えて，FDFR２ 下流のシグナルについて検討を行い，どの部分で抑 制すれば正常に近づけることができるか新規創薬の 点からも検討を行う予定である。遺伝子編集した iPS 細胞が樹立でき次第それぞれを PLOS ONE． ２０１４ ９（６）：e９９５３４の方法に従って骨芽細胞分化 誘導および iPS 研究所の妻木らが開発した軟骨分化 法（Stem cell reports vol ４２０１５，doi：１０．１０１６/j． stemcr．２０１５．０１．０１６）を 用 い て 軟 骨 細 胞 に 分 化 さ せ，疾患 iPS 細胞と正常化 iPS 細胞の反応の違いに ついて機能解析を行うことで明確にしていく予定で ある。 ３．成果 ⑴ FGFR２遺伝子変異をサンガー法により正常ヒ ト遺伝子と Apert 症候群との間における遺伝子 歯科学報 Vol．１１９，No．４（２０１９） ２８９

変異の同定を試みた。その結果，従来より報告が 挙げられている Ser２５２Trp（６０％＜），Pro２５３Arg （３０％＜）の変異のうち Ser２５２Trp にヘテロ変異 を同定した。つまり，本症例は Apert 症候群で あることが確定した。 ⑵ 患者由来線維芽細胞へ SeVdp（KOSM３０２L）ベ クターを感染させ，iPS 細胞の樹立を試みた。樹 立後の iPS 細胞について未分化マーカー（OCT３／ ４，SOX２，KLF４，c-MYC，NANOG，REX１）の 発 現 と 胚 様 体 形 成 後 の 三 胚 葉 分 化 マ ー カ ー （AFP，T，MAP２，hSOX，FOXA２，PAX６）の 発現を RT-PCR で確認することができた。 ⑶ Nips-B２（HPS０２２３）をコントロールとして用い て Apert 症候群の iPS 細胞を骨芽細胞分化誘導 した結果，コントロールに対して Apert 症候群 の骨芽細胞では石灰化が亢進することが認められ た。今後は，この骨芽細胞を用いて FGF ファミ リーの非特異的結合を証明予定である。 ⑷ Nips-B２（HPS０２２３）をコントロールとして用い て Apert 症候群の iPS 細胞を軟骨細胞分化誘導 を行い，浮遊培養にてパーティクルの作製まで完 了した。今後は，組織切片作成による評価，マイ クロアレイによる網羅的遺伝子解析，遺伝子オン トロジーエンリッチメント解析による分子機能解 析やシグナル伝達について検討を行う。 ⑸ 遺伝子編集細胞を用いて，Apert 症候群の新規 治療法の検索のためキナーゼインヒビターライブ ラリーを用いた検索を行う予定である。 【関連業績】 学会発表

１．Ishii T et, al.

Establishment of Apert syndrome disease-specific iPS cells.

The ２０１８ IADR/PER General Session & Exhi-bition London, England

③ 口腔分子シグナル制御研究部門 主任 菊池有一郎 Ⅰ．硬組織形成細胞のシグナル制御と硬組織形成細 胞−三叉神経節ニューロンの機能連関 研究担当者：澁川義幸（生理学講座），木村麻記（生 理学講座），佐藤正樹（生物学教室）， 東川明日香（生理学講座），小島佑貴（生 理学講座） １．研究概要 様々な外的刺激により硬組織が形成されることが 知られている。しかしながら，それら外的刺激の受 容機構や硬組織形成を担う細胞群に生じる細胞シグ ナルは不明である。本研究は外的刺激に伴う硬組織 形成メカニズムを解明するため，硬組織形成を担う 細 胞 群 の，１）機 械 感 受 性 陽 イ オ ン チ ャ ネ ル （MSCs）と電位依存性チャネルの細胞生理機能の検 討，２）外的環境を監視する細胞膜センサータンパ ク質に作用し石灰化を促進する候補因子のスクリー ニング，を行った。 ２．取組状況 １）ヒト由来セメント芽細胞における検討 Whole-cell patch-clamp 法を用いて，電位依存性 イオンチャネルの発現を検討した。 ２）マウス骨芽細胞様細胞における検討 細胞内遊離 Ca２＋ 濃度（［Ca２＋ ］i）測定を行い，低 浸透圧溶液による膜伸展刺激時とガラスマイクロピ ペットによる直接機械刺激時の［Ca２＋ ］i変化を記録 した。 ３）象牙芽細胞における検討 ① ヒト象牙芽細胞において Ca２＋ 排出系である Ca２＋ -ATPase（PMCA）の発現を real-time RT-PCR 法で検討した後，PMCA と Na＋ -Ca２＋ 交換体（NCX） の石灰化への関与を alizarin red 染色，von Kossa 染色により検討した。

② 高 pH 環境で石灰化が促進されることから， ラ ッ ト 象 牙 芽 細 胞 の ア ル カ リ 刺 激 感 受 性 を， ［Ca２＋

］i測定，whole-cell patch-clamp 法，alizarin red 染色，von Kossa 染色により検討した。

③ 象牙芽細胞の機械感受性チャネル活性化によ り放出された ATP やグルタミン酸は自己分泌性・

東京歯科大学口腔科学研究センターワークショップ ２９０

傍分泌性に周囲の象牙芽細胞に作用し細胞内 Ca２＋ ストアから Ca２＋ 放出を誘発する。そこで，ラット 象牙芽細胞におけるこれら受容体 活 性 化 に 続 く store operated Ca２ entry（SOCE）を［Ca２＋ ］i測定に より検討した。 ④ Cyclic AMP（cAMP）は象牙芽細胞の Ca２＋ シ グナルを調節する可能性があることから，ヒト象牙 芽細胞における細胞内 cAMP レベルと［Ca２＋ ］iの 同時測定を行い cAMP-Ca２＋ シグナル機能連関を検 討した。 ４）三叉神経節ニューロンにおける検討 硬組織形成細胞と三叉神経節ニューロンとの機能 連関を明らかにするため，ラット三叉神経節ニュー ロンにおいて whole-cell patch-clamp 法による機械 刺激受容機構と P２X７受容体−パネキシンチャネ ルカップリングの検討を行った。 ３．成果 １）ヒト由来セメント芽細胞において，電位依存性 K＋ チャネルと電位依存性 Cl− チャネルの発現を明ら かにした。 ２）マウス骨芽細胞様細胞に，低浸透圧刺激を加え ると［Ca２＋_］ iが増加した。機械刺激を与えると Gd３＋ 感受性の［Ca２＋ ］i増加を誘発した。この結果から骨 芽細胞における機械刺激受容機構には Gd３＋ 感受性 機械感受性イオンチャネルが関与していることが示 唆された。 ３）① 象牙芽細胞に PMCA１，３，４が発現す ることを明らかにした。PMCA または NCX の非選 択的抑制薬の投与で石灰化が抑制されたことから， PMCA と NCX による細胞外への Ca２＋ 排出が石灰 化に関与することが示された。 ② 象牙芽細胞への高 pH 刺激は TRPA１チャネ ル活性化による細胞外からの Ca２＋ 流入とストアか らの Ca２＋ 放出を誘発すること，細胞外 pH が高い ほど象牙芽細胞の Ca２＋ 感受性が高くなることが示 された。加えて，TRPA１チャネルが石灰化に関与 することが示された。これらの結果から高 pH 環境 における象牙質形成促進は象牙芽細胞が高 pH 刺激 を受容することで駆動されることが示唆された。 ③ 象 牙 芽 細 胞 の Ca２＋ ス ト ア 内 の Ca２＋ 枯 渇 は Ca２＋ _{release activated Ca}２＋_{チャネルを介した高 pH} 感受性を示す SOCE を活性化することが示された。 ④ 象牙芽細胞の Gs タンパク質共役型受容体が 活性化されると，アデニル酸シクラーゼが活性化し 細胞内 cAMP レベルが増加することが示された。 アデニル酸シクラーゼと Gs タンパク質共役型受容 体の活性化は細胞外からの Ca２＋ 流入を誘発するこ とが示された。 ４）三叉神経節ニューロンに Gd３＋_{感受性機械感受} 性イオンチャネルが発現した。その活性化，不活性 化過程は極めて速いことを明らかにした。三叉神経 節ニューロンにおいて，P２X７受容体の活性化は pannexin‐１チャネルを活性化することで ATP の 細胞外放出に関与すること，放出された ATP は自 己分泌性に作用し P２X７受容体活性を増強するこ とが示唆された。

Ⅱ．Treponema denticola の DNA binding protein 様遺伝子の機能解析について 研究担当者：北村友里恵（歯周病学講座・微生物学 講座） １．研究の概要 T. denticolaの dentilisin 欠損株を作製し，遺伝子 発現プロファイルの検討を行うと，dentilisin 欠損株 において特定の DNA binding protein 様遺伝子の 著しい発現上昇が起こることを予備研究によって確 認した。そこで本研究では，これが dentilisin を中 心とした病原因子の発現調節機構に果たす役割を明 らかにすることを目的とした。本研究の意義は，T. denticolaの病原因子の発現調節機構解明から，新た な歯周病予防・治療法の開発に貢献しうる点である。 ２．取組状況

DNA binding protein 様遺伝子の欠損株の作製に 成功した。表現型の解析として増殖能，タンパク質 分解酵素活性について野生株との比較を行った。現 在，マイクロアレイ解析にて網羅的に遺伝子発現を 分析している。 ３．成果 欠損株の増殖は，野生株と比較して定常期で野生 株より増加していた。また，欠損株は野生株と比較 し，キモトリプシン様プロテアーゼ（dentilisin）の 活性が有意に低下していた。ゆえに，DNA binding protein は dentilisin をはじめとする増殖に関与する 因子の調節に関わっている可能性がある。 歯科学報 Vol．１１９，No．４（２０１９） ２９１

Ⅲ．Treponema denticola TDE_０３４４の機能解析 研究担当者：山下慶子（歯周病学講座・微生物学講座） １．研究の概要 遺伝子の転写調節は，細菌のストレス応答におい て重要な役割を果たしている。細菌の転写調節因子 の 一 つ に DNA 結 合 タ ン パ ク が あ る。TDE_０３４４ は，アミノ酸配列レベルで DNA 結合モチーフを持 つ遺伝子である。TDE_０３４４は，T. denticola の主要 な病原因子をコードする遺伝子 msp の欠損株にお いて，転写量が有意に上昇していた。そこで本研究 では，TDE_０３４４の機能を明らかにし，病原因子発 現との関連を評価することを目的とした。本研究の 意義は，T. denticola の病原因子発現のコントロー ル機構にどの様に TDE_０３４４が関わるかを明らかに することによって，新たな治療標的分子の同定など 歯周病治療の発展に貢献が期待できる点である。 ２．取組状況 T. denticola TDE_０３４４欠損株の作出に成功した。 表現型の解析として増殖，運動能について野生株と の比較を行った。さらにマイクロアレイ解析，定量的 リアルタイム PCR にて遺伝子の発現解析を行った。 ３．成果 欠損株の増殖は野生株と差がなかった。欠損株の 運動能は保たれていたが，運動のパターンが変化し ていた。遺伝子発現解析の結果，msp の転写量に有 意な差はなかったが，本菌の鞭毛の構成・回転に関 わる遺伝子群 fliG-fliJ の転写量が有意に増加してい た。よって，TDE_０３４４は fliG-fliJ の転写調節を介 して本菌の鞭毛機能に何らかの影響を与えているこ とが示唆された。

Ⅳ．Treponema denticola に対する Porphyromonas gingivalis Hgp４４の付着の特性

研究担当者：吉川幸輝（歯周病学講座・微生物学講座）

１．研究の概要

主要な歯周病原細菌である P. gingivalis および T.

denticolaは，慢性歯周炎において高頻度に検出され る菌群‘red complex’に分類される。P. gingivalis は T. denticola などの細菌と付着し，共凝集するこ とにより，その病原性を発現する。P. gingivalis が 産生するシステインプロテアーゼであるジンジパイ ンの一部の RgpA は，プロテアーゼドメインおよ び赤血球凝集／付着ドメインによって構成されてい る。我々の研究グループでは，この赤血球凝集／付 着ドメインの一部である Hgp４４が T. denticola との 共凝集において重要な付着因子であることを報告し てきた。本研究の目的は，P. gingivalis Hgp４４の T. denticolaとの付着に主に関与する特定領域を解明す ることである。P. gingivalis Hgp４４の付着に関わる 領域を詳細に解析することで，将来的には，歯周病 原細菌間の付着，共凝集を阻害することによる，安 全で効果的な歯周病の標的治療や予防に応用できる と考える。 ２．取組状況 これまで合計７個の P. gingivalis Hgp４４リコンビ ナントタンパク質（r-Hgp４４）の発現誘導を行ってき た。これらを用いて，ELISA による各 r-Hgp４４の T. denticola への付着の検討を行った。また，coag-gregation assay により r-Hgp４４が P. gingivalis と T.

denticolaの共凝集を阻害するかを評価した。さら に，共焦点レーザー顕微鏡（CLSM）と走査型電子顕 微鏡（SEM）による，r-Hgp４４のバイオフィルム形成 阻害の解析を行った。 ３．成果 ELISA による各 r-Hgp４４の T. denticola への付着 の検討を行うと，アミノ酸配列の１９９‐３１６間の r-Hgp ４４（r-Hgp４４１９９−３１６）は付着に関わることが解明され た。また，coaggregation assay の結果，r-Hgp４４１９９−３１６ は，P. gingivalis と T. denticola の 共 凝 集 を 阻 害 し た。さらに，CLSM と SEM による解析の結果，r-Hgp４４１９９−３１６はバイオフィルム形成を阻害した。以上 の結果より，P. gingivalis Hgp４４において T. denticola との付着に関わる主たるドメインは，アミノ酸配列 の１９９‐３１６間に存在することが示唆された。 Ⅴ．Porphyromonas gingivalis ECF シグマ因子の

環境ストレス感知と情報伝達機構の解明 研究担当者：菊池有一郎（微生物学講座） １．研究の概要 細菌の ECF シグマ因子は，菌体外の生活環境変 化に応答し，菌体の環境ストレスからの回避に働く ことが知られていることより，歯周病原性細菌

Por-phyromonas gingivalisに 存 在 す る ECF シ グ マ 因 子 も，細胞内外のシグナル伝達において重要な役割を 担っていることが予測された。そこで，P. gingivalis は６種の ECF シグマ因子（PGN_０２７４，PGN_０３１９，

東京歯科大学口腔科学研究センターワークショップ ２９２

PGN_０４５０，PGN_０９７０，PGN_１１０８，PGN_１７４０）を 保有しているが，ATCC ３３２７７株を親株としたそれ ぞれの ECF シグマ因子の遺伝子挿入変異株の性状 解析を行い，その機能の解明を試みた。

２．取組状況

P. gingivalis ATCC ３３２７７株を親株とし，各 ECF シグマ因子遺伝子内にエリスロマイシン耐性遺伝子 カセットが挿入された変異株を作製した。親株と ECF シグマ因子変異株の病原性に関わる表現型を 比較検討することにより，ECF シグマ因子の役割 解明を試みた。 ３．成果 ジンジパイン活性試験の結果，野生株と比較し PGN_０２７４変異株は，Rgp，Kgp ともに活性の顕著 な減少を認めた。さらに PGN_０２７４変異株は赤血球 凝集活性試験にて凝集能を認めず，これらの現象は PGN_０２７４欠失によるジンジパインの膜外輸送の停 止が原因と考えられる。また，PGN_０３１９は P. gin-givalisの増殖における鉄取り込み機構に関与する HmuYR および転写因子 CdhR タンパクの遺伝子発 現制御に関与することも明らかとなった。さらに， 野生株と比較し，PGN_０２７４と PGN_１７４０変異株で 顕著なバイオフィルム形成能の増加を認めた。P. gingivalisATCC ３３２７７株はバイオフィルム形成に おいて，ECF シグマ因子 PGN_１７４０が，PGN_０４９１ タンパクの転写調節を行っていることを明らかにし た。テトラサイクリン，オフロキサシンに対する感 受性に顕著な変化は認められなかったものの，アン ピシリンに対する感受性は PGN_０２７４変異株で増 加，PGN_０４５０，PGN_１７４０変 異 株 で 低 下 し た。以 上の結果より，P. gingivalis が病原性を発現する際 ECF シグマ因子は，重要な役割を果たすことが示 唆された。 【関連業績】 雑誌論文

１．Kadowaki T, Yukitake H, Naito M, Sato K, Kikuchi Y, Kondo Y, Shoji M, Nakayama K : A two-component system regulates gene ex-pression of the type IX secretion component proteins via an ECF sigma factor. Scientific Report, ６：２３２８８，２０１６．

２．Kimura M, Sase T, Higashikawa A, Sato M,

Sato T, Tazaki M, Shibukawa Y : High pH-sensitive TRPA1 activation in odontoblasts regulates mineralization. J Dent Res, ９５：１０５７ −１０６４，２０１６．doi：１０．１１７７/００２２０３４５１６６４４７０２ ３．Nishiyama A, Sato M, Kimura, M, Katakura

A, Tazaki M, Shibukawa Y : Intercellular sig-nal communication among odontoblasts and trigeminal ganglion neurons via glutamate. Cell Calcium, ６０：３４１−３５５，２０１６． doi ： １０．１０１６/j.ceca．２０１６．０７．００３

４．Ota K, Kikuchi Y, Imamura K, Kita D, Yoshikawa K, Saito A, Ishihara K : SigCH, an extracytoplasmic function sigma factor of

Por-phyromonas gingivalis regulates the expression of cdhR and hmuYR. Anaerobe, ４３：８２−９０， ２０１７．

５．Fujise K, Kikuchi Y, Kokubu E, Okamoto-Shibayama K, Ishihara K : Effect of extracyto-plasmic function sigma factors on autoaggre-gation, hemagglutination, and cell surface properties of Porphyromonas gingivalis. PLOS ONE, １２：e０１８５０２７，２０１７．doi：１０． １３７１/jour-nal．pone．０１８５０２７

６．Shiozaki Y, Sato M, Kimura M, Sato T, Tazaki M, Shibukawa Y : Ionotropic P2X ATP receptor channels mediate purinergic signaling in mouse odontoblasts. Front Physiol, ８ ： Article ３，２０１７． doi ： １０．３３８９ / fphys. ２０１７．００００３

７．Satou R, Sato M, Kimura M, Ishizuka Y, Tazaki M, Sugihara N, Shibukawa Y : Tempo-ral expression pattern of clock genes and aquaporin ５/anoctamin １ in rat submandi-bular gland cells. Front Physiol, ８：Article ３２０，２０１７．doi：１０．３３８９/fphys．２０１７．００３２０ ８．Kojima Y, Kimura M, Higashikawa A, Kono

K, Ando M, Tazaki M, Shibukawa Y : Potas-sium currents activated by depolarization in odontoblasts. Front Physiol, ８：Article １０７８， ２０１７．doi：１０．３３８９/fphys．２０１７．０１０７８

９．Yoshikawa K, Kikuchi Y, Kokubu E, Ima-mura K, Saito A, Ishihara K : Identification of

a specific domain of Porphyromonas gingivalis Hgp４４ responsible for adhesion to Treponema

denticola. Pathog Dis, ７６⑸：２０１８．

１０．Kikuchi Y, Kimizuka R, Kato T, Okuda K, Kokubu E, Ishihara K : Treponema denticola in-duces epithelial barrier dysfunction in polar-ized epithelial cells. Bull Tokyo Dent Coll，５９ ⑷：２６５−２７５，２０１８

１１．Sato M, Ogura K, Kimura M, Nishi K, Ando M, Tazaki M, Shibukawa Y : Activation of mechanosensitve TRP/Piezo channels in odon-toblasts generates action potentials in co-cultured IB４-negative medium-sized trigemi-nal ganglion neurons. J Endod, ４４：９８４−９９１， ２０１８．doi：１０．１０１６/j.joen．２０１８．０２．０２０． １２．Kimura M, Nishi K, Higashikawa A, Ohyama

S, Sakurai K, Tazaki M, Shibukawa Y : High pH-sensitive store-operated Ca２＋

entry medi-ated by Ca２＋

release-activated Ca２＋

channels in rat odontoblasts. Front Physiol，９：４４３， ２０１８．doi：１０．３３８９/fphys．２０１８．００４４３． １３．Terashima R, Kimura M, Higashikawa A,

Ko-jima Y, Ichinohe T, Tazaki M, Shibukawa Y : Intracellular Ca２＋

mobilization pathway via bradykinin B１ receptor activation in rat trigeminal ganglion neurons. J Physiol Sci,（in press）.doi：１０．１００７/s１２５７６−０１８−０６３５−３ １４．Muramatsu T, Kashiwagi S, Ishizuka H,

Mat-suura Y, Furusawa M, Kimura M, Shibukawa Y : Alkaline extracellular conditions promote the proliferation and mineralization of a hu-man cementoblast cell line. Int Endod J,（in press）.doi：１０．１１１１/iej．１３０４４ 総説・解説 １．澁川義幸，木村麻記，佐藤正樹，小島佑貴， 東川明日香，古屋 忠，佐瀬俊之，田 雅和 「神経を抜く」という表現は正しい？ 口腔の 生理から考える臨床像⒂ 日本歯科評論，７６⑶：１４５−１５１，２０１６． ２．澁川義幸，佐藤正樹，木村麻記，小島佑貴， 東川明日香，田 雅和 歯科臨床を理解するための「味覚」の基礎知識 口腔の生理から考える臨床像⒆ 日本歯科評論，７６⑺：１４９−１５６，２０１６． ３．澁川義幸 臨床口腔生理学：食べる，噛む，飲みこむ，味 わう，感じる，唾液がでる事の歯科医療におけ る重要性 口腔の生理から考える臨床像⒇ 日本歯科評論，７６⑻：１４１−１４７，２０１６． ４．菊池有一郎 ECF シグマ因子を介する P. gingivalis の歯周病 原性制御機構 細胞，４９⑾：５５５−５５８，２０１７． ５．澁川義幸，木村麻記，東川明日香，小倉一 宏，望月 浩 幸，河 野 恭 介，安 藤 正 之，西 孝 一，櫻井 薫 「美味しく食べる」をサポートする味覚の科学 第一回：機能解剖学的視点から見た味覚 日本歯科評論，７８⑺：１４９−１５３，２０１８． ６．澁川義幸，木村麻記，東川明日香，大山定 男，大房 航 「美味しく食べる」をサポートする味覚の科学 第二回：私たちの体を守り維持する味覚の機能 日本歯科評論，７８⑻：１５３−１５７，２０１８． 図書

１．Sato M, Furuya Y, Kimura M, Kojima Y, Tazaki M, Sato T, Shibukawa Y.

Intercellular odontoblast communication via ATP mediated by pannexin‐１ channel and phospholipase C-coupled receptor activation． In：Dental and periodontal tissues formation and regeneration：current approaches and fu-ture challenges Edited by：Orsini, G., Arana-Chavez, V.E., Mitsiadis T.

Frontiers Media. Lausanne, Switzerland, ２０１６． doi：１０．３３８９/９７８−２−８８９１９−９８４−６ ２．澁川義幸，田 雅和（共著） 象牙質・歯髄複合体の痛みと神経原性炎症メカ ニズム −歯の痛みを理解するための臨床口腔生理学． 抜髄 Initial Treatment 治癒に導くための歯髄 への臨床アプローチ，東京 木 ノ 本 喜 史 編 ２０１６，pp．４５−６０，ヒ ョ ー ロ ン・パブリッシャーズ， 東京歯科大学口腔科学研究センターワークショップ ２９４

３．澁川義幸（共著） 唾液・唾液腺（執筆協力） 日本唾液腺学会編，２０１６，金原出版 学会発表 １．東川明日香，小島佑貴，木村麻記，佐藤正 樹，小倉一宏，望月浩幸，河野恭佑，澁川義 幸，田 雅和 メルケル細胞と三叉神経節ニューロンにおける DIDS 感受性細胞間コミュニケーション 第３０１回東京歯科大学学会，平成２８年６月４日 東京 ２．佐藤涼一，石塚洋一，佐藤正樹，木村麻記， 澁川義幸，田 雅和，杉原直樹 ラット概日リズム行動解析および顎下腺時計遺 伝子発現解析 第３０１回東京歯科大学学会，平成２８年６月４日 東京 ３．木村麻記，佐藤正樹，篠 宏美，小 野 寺 晶 子，東川明日香，小島佑貴，塩崎雄大，佐藤涼 一，重藤玲子，隝田みゆき，小倉一宏，望月浩 幸，河野恭佑，澁川義幸，田 雅和 象牙芽細胞におけるアルカリ感受性 TRPA１ チャネル活性化は石灰化を促進する 第３０１回東京歯科大学学会，平成２８年６月４日 東京 ４．佐藤正樹，木村麻記，小島佑貴，東川明日 香，隝田みゆき，塩崎雄大，佐藤涼一，重藤玲 子，小倉一宏，望月浩幸，河野恭佑，澁川義 幸，田 雅和 象牙芽細胞機械刺激は三叉神経節ニューロンに 活動電位を発生させる 第３０１回東京歯科大学学会，平成２８年６月４日 東京

５．Kimura M, Shibukawa Y, Sato M, Kojima Y, Higashikawa A, Kouno K, Shimada M, Mochi-zuki H, Ogura K, Tazaki M.

High pH-sensitive TRPA１ channel activation in odontoblasts regulates dentin mineraliza-tion and calcificamineraliza-tion．

１２th International Confference on Tooth Mor-phogenesis and Differentiation June １３−１８， ２０１６，Porvoo，Finland

６．Kojima Y, Higashikawa A, Kimura M, Sato M, Mochizuki H, Ogura K, Shibukawa Y, Tazaki M.

A voltage-dependent K＋

current showing acti-vation and inactiacti-vation kinetics in rat Odon-toblasts．

１２th International Confference on Tooth Mor-phogenesis and Differentiation

June １３−１８，２０１６，Porvoo，Finland

７．Kimura M, Sato M, Kojima Y, Higashikawa A, Shimada M, Shiozaki Y, Satou R, Shigefuji R, Ogura K, Mochizuki H, Kouno K, Shibukawa Y, Tazaki M.

High pH-sensitive TRPA１ channel activation acts as a key Ca２＋

signaling that regulates dentin mineralization by odontoblasts． International Association of Dental Research （IADR）Pulp Biology and Regeneration Group （PBRG）Symposium ２０１６, June ２６−２８，２０１６，

Nagoya，Japan

８．Kimura M, Higashikawa A, Sato M, Kojima Y, Shimada M, Shiozaki Y, Satou R, Shigefuji R, Ogura K, Mochizuki H, Kouno K, Shibukawa Y, Tazaki M.

Store-operated Ca２＋

entry in rat odontoblasts. International Association of Dental Research （IADR）Pulp Biology and Regeneration Group （PBRG）Symposium ２０１６，June ２６−２８，２０１６，

Nagoya，Japan

９．Shibukawa Y, Sato M, Kimura M, Sobhan U, Kojima Y, Higashikawa A, Shiozaki Y, Satou R, Shigefuji R, Shimada M, Ogura K, Mochi-zuki H, Kouno K, Tazaki M.

Odontoblasts as sensory receptors：Transient receptor potential channels, pannexin‐１ and ionotropic ATP receptors, mediate intracellu-lar odontoblast-trigeminal ganglion neuron sig-nal transduction．

International Association of Dental Research （IADR）Pulp Biology and Regeneration Group （PBRG）Symposium ２０１６，June ２６−２８，２０１６，

Nagoya，Japan

１０．Shiozaki Y, Sato M, Kimura M, Shibukawa Y, Tazaki M.

Functional expression of P２X receptor sub-types in odontoblasts．

International Association of Dental Research （IADR）Pulp Biology and Regeneration Group （PBRG）Symposium ２０１６，June ２６−２８，２０１６，

Nagoya，Japan

１１．Sato M, Kimura M, Kojima Y, Higashikawa A, Shiozaki Y, Satou R, Shigefuji R, Shimada M, Ogura K, Mochizuki H, Kouno K, Tazaki M, Shibukawa Y.

ATP released from odontoblasts by mecha-nosensitive TRP and piezo channel activations generates P２X３-mediated action potentials in trigeminal ganglion neurons．

International Association of Dental Research （IADR）Pulp Biology and Regeneration Group （PBRG）Symposium ２０１６，June ２６−２８，２０１６，

Nagoya，Japan

１２．Kojima Y, Higashikawa A, Kimura M, Sato M, Shiozaki Y, Satou R, Shigefuji R, Shimada M, Ogura K, Mochizuki H, Kouno K, Shibukawa Y, Tazaki M.

Biophysical properties of a Voltage-dependent K＋_{current in odontoblasts．}

International Association of Dental Research （IADR）Pulp Biology and Regeneration Group （PBRG）Symposium ２０１６，June ２６−２８，２０１６， Nagoya，Japan １３．佐藤正樹，木村麻記，小島佑貴，東川明日 香，隝田みゆき，小倉一宏，望月浩幸，河野恭 佑，澁川義幸，田 雅和 ラット TG ニューロンにおける象牙芽細胞機械 刺激誘発性活動電位記録 第５８回歯科基礎医学会学術大会，平成２８年８月 ２４日−２６日 札幌市 １４．木村麻記，佐藤正樹，小島佑貴，東川明日 香，隝田みゆき，小倉一宏，望月浩幸，河野恭 佑，田 雅和，澁川義幸 象 牙 芽 細 胞 に お け る ア ル カ リ 感 受 性 store-operated Ca entry（SOCE） 第５８回歯科基礎医学会学術大会，平成２８年８月 ２４日−２６日 札幌市 １５．隝田みゆき，木村麻記，佐藤正樹，東川明日 香，小島佑貴，田 雅和，澁川義幸 Guaiacol は三叉神経節ニューロンに作用し鎮痛 効果を発揮する 第５８回歯科基礎医学会学術大会，平成２８年８月 ２４日−２６日 札幌市 １６．田中亜生，澁川義幸，石川 昂，田 雅和， 山本 仁，新谷誠康 象牙芽細胞の感覚受容機能発現に関する発生学 的研究−第一報− 第５８回歯科基礎医学会学術大会，平成２８年８月 ２４日−２６日 札幌市 １７．菊池有一郎，国分栄仁，柴山和子，大原直 也，中山浩次，石原和幸

Porphyromonas gingivalis ECF シグマ因子変異 株における菌体表層性状の解析

Journal of Oral Biosciences Supplement, ５４２， ２０１６．

第５８回歯科基礎医学会学術大会・総会，平成２８ 年８月２４−２６日 札幌市

１８．Yoshikawa K, Ota K, Imamura K, Kita D, Yamashita K, Ishihara K, Saito A.

Elucidation of the adhesion domain of

Porphy-romonas gingivalis Hgp４４ for Treponema

Denti-cola.

American Academy of Periodontology １０２nd Annual Meeting, September １３，２０１６ Sandi-ego，USA １９．浅野一磨，佐藤正樹，木村麻記，河野恭佑， 澁川義幸，田 雅和 象牙芽細胞における機械刺激感受性 TRPV４ チャネルと piezo‐１チャネルの機能的発現 第３０２回東京歯科大学学会，平成２８年１０月１５日 東京 ２０．浅野一磨，佐藤正樹，木村麻記，小島佑貴， 東川明日香，塩崎雄大，佐藤涼一，重藤玲子， 澁川義幸，田 雅和 培養象牙芽細胞を用いた機械刺激受容に関する 研究 第２３回日本歯科医学会総会，平成２８年１０月２２− 東京歯科大学口腔科学研究センターワークショップ ２９６

２３日 福岡市 ２１．松浦信孝，木村麻記，佐藤正樹，小島佑貴， 東川明日香，塩崎雄大，佐藤涼一，重藤玲子， 田 雅和，澁川義幸 象牙芽細胞における NK２受容体の発現の検索 第２３回日本歯科医学会総会，平成２８年１０月２２− ２３日 福岡市 ２２．大房 航，山田好秋，平木圭佑，佐藤正樹， 木村麻記，澁川義幸，田 雅和 内舌筋活動記録の試み −磁石を利用した電極 を用いて 第１０回 三叉神経領域の感覚−統合機能研究 会，平成２８年１１月２６−２７日 佐久市 ２３．木村麻記，佐藤正樹，篠 宏美，小 野 寺 晶 子，東川明日香，小島佑貴，塩崎雄大，佐藤涼 一，重藤玲子，隝田みゆき，小倉一宏，望月浩 幸，河野恭佑，澁川義幸，田 雅和 象牙芽細胞に発現する TRPA１チャネルはア ルカリ感受性を示し石灰化を促進する 第１０回 三叉神経領域の感覚−統合機能研究 会，平成２８年１１月２６−２７日 佐久市 ２４．佐藤正樹，倉澤 馨，岡林 堅，木村麻記， 小島佑貴，東川明日香，河野恭佑，澁川義幸， 田 雅和 象牙芽細胞の低 pH 感受性カルシウム動員 第１０回 三叉神経領域の感覚−統合機能研究 会，平成２８年１１月２６−２７日 佐久市

２５．Hashimoto S, Murakami M, Narita T, Sato M, Shibukawa Y.

Visualization of microcirculation and paracel-lular pathway in the perfused submandibular gland．

４th International Symposium on Salivaru glands in Honour of Niels Stensen，

Nov３０‐Dec２，２０１６ Okazaki，Aichi，Japan ２６．Murakami M, Wei1 F, Narita T, Hashimoto

S, Shibukawa Y, Sato M, Steward M.

Microcirculation and paracellular fluid secre-tion in the perfused submandibular gland of rat．

４th International Symposium on Salivaru glands in Honour of Niels Stensen，

Nov３０‐Dec２，２０１６，Okazaki，Aichi，Japan ２７．菊池有一郎，太田功貴，柴山和子，国分栄 仁，齋藤 淳，石原和幸 Porphyromonas gingivalisの鉄獲得機構における ECF シグマ因子 PGN_０３１９の役割 第９０回日本細菌学会総会，平成２９年３月１９−２０ 日 仙台

２８．Yoshikawa K, Ota K, Imamura K, Kita D, Yamashita K, Kitamura Y, Saito A, Ishihara K. Characteriation of adhesion of Porphyromonas

gingivalisHgp４４ to Treponema denticola． ９５th General Session of the IADR, March ２３， ２０１７ San Francisco，USA

２９．Murakami M, Narita T, Hashimoto S, Shibukawa Y, Sato M.

Paracellular fluid secretion and microcircula-tion in the perfused submandibular gland． 第９４回 日 本 生 理 学 会，平 成２９年３月２８−３０日 浜松市

３０．Kimura M, Sato M, Kojima Y, Higashikawa A, Shiozaki Y, Satou Y, Shigefuji R, Shimada M, Kuroda H, Ogura K, Mochizuki H, Kouno K, Shibukawa Y, Tazaki M.

Alkali-and ADP-sensitive store-operated Ca２＋ entry（SOCE）mediated by Ca２＋

release-activated Ca２＋_{（CRAC）channels in rat odontoblasts．} 第９４回 日 本 生 理 学 会，平 成２９年３月２８−３０日 浜松市 ３１．井上博之，黒田英孝，一岡理華，木村麻記， 佐藤正樹，澁川義幸，田 雅和，一戸達也 ラット三叉神経節細胞における P２X７受容体 の機能検索 第３０３回東京歯科大学学会・例会，平成２９年６ 月３日 東京 ３２．吉川幸輝，喜田大智，今村健太郎，青木栄 人，勢島 典，齋藤 淳

Treponema denticolaに 対 す る Porphyromonas

gingivalisHgp４４の付着ドメインの解明 会員外共同研究者：東京歯科大学微生物学講座 石原和幸 日本歯科保存学会２０１７年度春季学術大会（第１４６ 回），平成２９年６月９日 青森市 歯科学報 Vol．１１９，No．４（２０１９） ２９７

３３．隝田みゆき，木村麻記，佐藤正樹，東川明日 香，小島佑貴，田 雅和，澁川義幸 三叉神経節ニューロンに対するグアヤコールの 鎮痛作用 第５９回歯科基礎医学会学術大会，平成２９年９月 １６−１８日 塩尻市 ３４．井上博之，黒田英孝，小島佑貴，重藤玲子， 東川明日香，石川 昂，木村麻記，佐藤正樹， 澁川義幸，田 雅和，一戸達也 ラット三叉神経節細胞における P２X７受容体 の発現検索 Oral Biosci，（Supplement）：３０７，２０１７． 第５９回歯科基礎医学会学術大会，平成２９年９月 １６−１８日 塩尻市 ３５．小島佑貴，東川明日香，大山定男，河野恭 佑，安藤 正 之，西 孝 一，黒 田 英 孝，木 村 麻 記，澁川義幸，田 雅和 ラット三叉神経節グリア細胞の遅延整流型 K＋ 電流 第５９回歯科基礎医学会学術大会，平成２９年９月 １６−１８日 塩尻市 ３６．東川明日香，小島佑貴，寺島−重藤玲子，井 上博之，河野恭佑，安藤正之，黒田英孝，木村 麻記，澁川義幸，田 雅和 メルケル細胞−神経細胞間コミュニケーション （Neural communication between Merkel cells

and neurons） 第５９回歯科基礎医学会学術大会，平成２９年９月 １６−１８日 塩尻市 ３７．寺島−重藤玲子，東川明日香，小島佑貴，井 上博之，川口 綾，黒田英孝，木村麻記，澁川 義幸，田 雅和，一戸達也 ラット三叉神経節ニューロンにおけるブラジキ ニン B１受容体を介した Ca２＋動態の検索 第５９回歯科基礎医学会学術大会，平成２９年９月 １６−１８日 塩尻市 ３８．木村麻記，小島佑貴，東川明日香，大山定 男，隝田みゆき，安藤正之，河野恭祐，田 雅 和，澁川義幸 象牙芽細胞における高pH感受性 store-operated Ca２＋_{entry（SOCE）} 第５９回歯科基礎医学会学術大会，平成２９年９月 １６−１８日 塩尻市 ３９．喜田大智，菊池有一郎，国分栄仁，山下慶子， 北村友里恵，今村健太郎，齋藤 淳，石原和幸

Treponema denticolaに 対 す る Porphyromonas

gingivalisHgp４４の付着の特性

第３０４回東京歯科大学学会（総会），平成２９年１０ 月２１日 東京

４０．喜田大智，今村健太郎，勢島 典，齋藤 淳

Treponema denticolaに 対 す る Porphyromonas

gingivalisHgp４４の付着の特性 会員外共同研究者：東京歯科大学微生物学講座 石原和幸，菊池有一郎，国分栄仁 日本歯科保存学会２０１７年度秋季学術大会（第１４７ 回），平成２９年１０月２７日 盛岡市 ４１．大山定男，木村麻記，人見涼露，田 雅和， 小野堅太郎，澁川義幸 象牙質痛は象牙芽細胞と歯髄ニューロンの神経 性伝達で生じる 第１１回三叉神経領域の感覚−運動統合機構研究 会，平成２９年１２月２−３日 吹田市 ４２．井上博之，黒田英孝，石川 昂，木村麻記， 澁川義幸，田 雅和，一戸達也 ラット三叉神経節細胞における P２X７受容体の 電気生理学特性 第１１回三叉神経領域の感覚−運動統合機構研究 会，平成２９年１２月２−３日 吹田市

４３．Kimura M, Higashikawa A, Kojima Y, Terashima-Shigefuji R, Inoue H, Nagai S, Ka-mata S, Shimada M, Kuroda H, Ogura K, Mo-chizuki H, Kouno K, Ando M, Shibukawa Y, Tazaki M.

Odontoblasts express plasma membrane Ca２＋ -ATPase １ and ４．

第９５回日本生理学会大会，平成３０年３月２８−３０ 日 高松市

４４．Inoue H, Kuroda H, Ishikawa N, Kimura M, Shibukawa Y, Tazaki M, Ichinohe T.

Comparison of electrophysiological properties of P２X７ receptors between neurons and glial cells in rat trigeminal ganglion．

第９５回日本生理学会大会，平成３０年３月２８−３０ 日 高松市

東京歯科大学口腔科学研究センターワークショップ ２９８

４５．鎌田聡仁，東川明日香，木村麻記，澁川義 幸，山下秀一郎 ヒト由来セメント芽細胞の電位依存性イオン チャネル発現 第３０５回東京歯科大学学会例会，平成３０年６月 ２日 東京 ４６．吉川幸輝，喜田大智，菊池有一郎，国分栄 仁，山下慶子，北村友里恵，深澤俊也，今村健 太郎，石原和幸，齋藤 淳

Treponema denticolaに 対 す る Porphyromonas

gingivalisHgp４４の付着ドメインの検討 歯科学報：１１８，２５１，２０１８． 第３０５回東京歯科大学学会・例会，平成３０年６ 月２日 東京 ４７．山下慶子，吉川幸輝，喜田大智，今村健太 郎，勢島 典，齋藤 淳

Treponema denticolaに お け る DNA binding protein 様遺伝子の機能解析

会員外共同研究者：東京歯科大学微生物学講座 石原和幸，菊池有一郎

日本歯科保存学会２０１８年度春季学術大会（第１４８ 回），平成３０年６月１４−１５日 横浜市

４８．Yamashita K, Kitamura Y, Kikuchi Y, Ishi-hara K, Saito A.

An investigation of the role of a gene encod-ing a DNA bindencod-ing protein in Treponema

denti-cola．

EuroPerio９, June ２１th‐２３th ２０１８ Amster-dam，Nederland ４９．西 孝一，望月浩幸，木村麻記，東 川 明 日 香，大山定男，大房 航，隝田みゆき，安藤正 之，河野恭佑，櫻井 薫，澁川義幸 象牙質形成の神経性制御：象牙芽細胞における store-operated Ca２＋ entry（SOCE） 第１７回釧路ニューロサイエンスワークショッ プ，平成３０年６月２９日 釧路市

５０．Satou R, Kimura M, Ishizuka Y, Suzuki S, Shibukawa S, Sugihara N.

Light Conditions Affect Rhythmic Expression of Ano１ in Submandibular Glands．

９６th General Session & Exhibition of the IADR, IADR PAN EUROPEAN REGIONAL

CONGRESS，July ２５−２８，２０１８，London，UK ５１．Kimura M, Higashikawa A, Ohyama S, Mo-chizuki H, Kouno K, Ando M, Tazaki M, Shibukawa Y.

Activation of Gs-protecoupled receptors in-creases intracellular cAMP level in Odon-toblasts．

９６th General Session & Exhibition of the IADR, IADR PAN EUROPEAN REGIONAL CONGRESS，July ２５−２８，２０１８ London，UK ５２．Yoshikawa, D Kita, Kokubu E, Kikuchi Y, Imamura K, Yamashita K, Kitamura Y, Fuka-sawa T, Saito A, Ishihara K.

Investigation of adhesion of Porphyromonas

gingivalisHgp４４ to Treponema denticola． ９６th General Session of the IADR, July ２７， ２０１８ London，England ５３．木村麻記，東川明日香，大山定男，大房 航， 隝田みゆき，黒田英孝，望月浩幸，安藤正之， 河野恭佑，澁川義幸 象牙芽細胞において Gs タンパク質共役型受容 体活性化は細胞内 cAMP レベルを増加する 第６０回歯科基礎医学会学術大会，平成３０年９月 ５−７日 福岡市 ５４．永井佐代子，東川明日香，大山定男，大房 航，望月浩幸，安藤正之，河野恭祐，木村麻 記，澁川義幸，片倉 朗 骨芽細胞の機械感受性イオンチャネル発現 第６０回歯科基礎医学会学術大会，平成３０年９月 ５−７日 福岡市 ５５．鎌田聡仁，東川明日香，木村麻記，井上博 之，大山定男，大房 航，澁川義幸，山下秀一郎 ヒト由来セメント芽細胞の電位依存性イオン チャネル発現 第６０回歯科基礎医学会学術大会，平成３０年９月 ５−７日 福岡市 ５６．井上博之，黒田英孝，大山定男，大房 航， 永井佐代子，鎌田聡仁，東川明日香，木村麻 記，澁川義幸，一戸達也 三叉神経節ニューロンにおける P２X７受容体 −パネキシンチャネルカップリング 第６０回歯科基礎医学会学術大会，平成３０年９月 歯科学報 Vol．１１９，No．４（２０１９） ２９９

５−７日 福岡市 ５７．東川明日香，木村麻記，隝田みゆき，大房 航，大山定男，安藤正之，河野恭佑，望月浩 幸，澁川義幸 新生仔ラット三叉神経節細胞における機械刺激 受容 第６０回歯科基礎医学会学術大会，平成３０年９月 ５−７日 福岡市 ５８．大山定男，人見涼露，東川明日香，大房 航， 望月浩幸，安藤正之，河野恭佑，黒田英孝，木 村麻記，小野堅太郎，澁川義幸 象牙質痛は象牙芽細胞と歯髄ニューロンの神経 性伝達で生じる 第６０回歯科基礎医学会学術大会，平成３０年９月 ５−７日 福岡市 ５９．佐藤涼一，木村麻記，石塚洋一，鈴木誠太 郎，澁川義幸，杉原直樹 光刺激がラット顎下腺末梢時計と Aqp５およ び Ano１発現リズムに与える影響 第３０６回東京歯科大学学会例会，平成３０年１０月 ２０−２１日 東京 ６０．山下慶子，北村友里恵，国分栄仁，菊池有一 郎，齋藤 淳，石原和幸

DNA binding protein 様遺伝子は Treponema

denticola鞭毛のスイッチングに関与する 第３０６回東京歯科大学学会・例会，平成３０年１０ 月２０日 東京

６１．Yamashita K, Kitamura Y, Kikuchi Y, Ishi-hara K, Saito A.

Investigating the functional role of a gene en-coding a DNA binding protein in Treponema

Denticola．

The American Academy of Periodontology ２０１８ Annual Meeting, October ２７th-３０th ２０１８，Vancouver，Canada

６２．Kitamura Y, Yamashita K, Kikuchi Y, Fuka-sawa T, Ishihara K, Saito A.

Characterization of A Novel DNA Binding Protein of Treponema denticola．

The ６６th Annual Meeting of Japanese Asso-ciation for Dental Research, November １７th-２３ th ２０１８，Sapporo，Japan プロシーディングス １．山口 朗，東 俊文，石原和幸，片倉 朗， 後藤多津子，齋藤 淳，澁川義幸，新谷誠康， 松永 智，村松 敬，吉成正雄 顎骨疾患プロジェクトの現状と今後の展望 平成２８年度 東京歯科大学口腔科学研究セン ターワークショップ，平成２９年２月２１日 東京 ２．澁川義幸，木村麻記，小島佑貴，東川明日 香，田崎雅和，黒田英孝，重藤玲子，佐藤正樹 ニューロンネットワークによる神経原性炎症機 構の解明：ニューロン軸索反射モデルを用いた 機能解析 平成２９年度 東京歯科大学口腔科学研究セン ターワークショップ，平成３０年２月２７日 東京 招待講演 １．澁川義幸 象牙質／歯髄複合体に生じる歯痛の分子細胞基 盤：最新の知見から ２０１７年度 日本歯内療法学会 研修会，平成２９ 年３月１９日 千葉市 ２．澁川義幸 なぜ歯が痛くなるのか −痛みのメカニズム 健康は口から歯から嚥下から，特定非営利活動 法人 日本歯科保存学会 無料公開講座 平成２９年１０月２８日 東京 ３．Shibukawa Y．

Odontoblast Hydrodynamic Receptor Theory ９６th General Session & Exhibition of the

IADR, IADR PAN EUROPEAN REGIONAL CONGRESS，July ２５−２８，２０１８ London，UK ４．澁川義幸 象牙質における温度−機械刺激変換：象牙質／ 歯髄複合体に生じる歯痛の分子細胞メカニズム 新学術領域研究共催シンポジウム：温度生物学 が織りなす生理機能 第６０回歯科基礎医学会学術大会，平成３０年９月 ５−７日 福岡市 ５．澁川義幸 口腔機能に対する唾液の重要性 シンポジウム１：消化吸収の生理 第４９回日本消化吸収学会総会，平成３０年１１月１７ 日 千葉市 東京歯科大学口腔科学研究センターワークショップ ３００