序 文
リムルス反応を用いた血漿中（1→3）-β-D-グル カン（β-グルカン）測定法は，現在，5 種類のキッ トが臨床応用可能であるが，各々に特徴を有し，
測定値に乖離が生ずることも少なくない1）2）．キッ トにより前処理，測定法が異なることに加え，使 用するβ-グルカン標準品が様々であることもこ の原因の 1 つであると思われる．現行のアルカリ 処理―発色合成基質カイネティック法（アルカリ 処理―カイネティック法：生化学工業，東京）で はβ-グルカン標準品としてパキマンが使用され，
希釈加熱―比濁時間分析法（比濁法：和光純薬工 業，大阪）ではカルボキシメチル化カードランが 用いられている．測定法の標準化は測定値乖離の 問題解決につながると考えられる．また，β-グルカ ン測定は深在性真菌症診断を目的とした検査法で あるので，標準品は病原真菌由来のものである方 が望ましい．近年，大野ら3）は，病原真菌となる頻 度の高いCandida albicansからβ-グルカンを精製 し，その構造を明らかにした．（Candida Standard β-glucan：CSBG）．CSBG はβ-1，6 結合した分岐
も含んでいる．しかし，臨床検体中のβ-グルカン にもβ-1，6 結合した分岐が含まれていることを 考慮すると，CSBG はβ-グルカン測定の標準品と して妥当であると考えられる4）．大林ら4）は CSBG を新しい標準品として使用し，β-グルカン測定を 行う基礎的研究成果を報告している．この中でア ルカリ処理―カイネティック法の標準品，および 比濁法の標準品を CSBG により力価検定し，両者 の CSBG 換算値には大きな開きが認められるも のの，平行線定量法による解析では両者とも優れ た平行性が確認されことが示されている．ただし，
この検討は標準品水溶液を用いた両法の性能の評 価であり，この結果をそのまま臨床検体に適応で き る か 否 か は 不 明 で あ る4）．そ こ で，私 た ち は CSBG を標準品として，まずアルカリ処理―カイ ネティック法で臨床検体中のβ-グルカンを測定 し，このβ-グルカン標準品候補を評価した．
材料と方法
2002 年 1 月から 3 月までの 3 カ月間に川崎医 科大学附属病院で深在性真菌症を疑われて，もし くは同症の治療効果判定目的で血漿中β-グルカ ンが測定された患者 232 例（男性 120 例，女性 112 例，平均年齢 62.7±17.0 歳）の血漿 584 検体を材料 とした．β-グルカン測定は，アルカリ処理―カイネ 短 報
アルカリ処理―発色合成基質カイネティック法による血漿中
（1→3） -
β-D-グルカン測定における新しい標準品としての CSBG の評価
1）川崎医科大学呼吸器内科，2）倉敷第一病院呼吸器センター
吉田耕一郎
1）二木 芳人
1）毛利 圭二
1）宮下 修行
1）小橋 吉博
1）岡 三喜男
1）松島 敏春
2）（平成 15 年 10 月 29 日受付）
（平成 16 年 4 月 20 日受理）
〔感染症誌 78：519〜521，2004〕
別刷請求先：（〒701―0192）岡山県倉敷市松島 577 川崎医科大学呼吸器内科 吉田耕一郎
fungal infection, CSBG，（1→3）-β-D-glucan Key words：
519
平成16年 6 月20日
ティック法の添付文書に記載された操作手順に 従って行った．アルカリ処理―カイネティック法 の 検 量 範 囲 は 3.9〜500pg!ml で あ り，500pg!ml を上回るβ-グルカン量の検体は前処理後に蒸留 水で希釈して再測定した．また，参考値として 3.9 pg!ml より低い数値の算出された検体はこの検討 から除外した． カットオフ値は 20pg!ml とした．
この際，標準品として，現行のパキマン 500pg!ml とC. albicansIFO 1,385 株の細胞壁を次亜塩素酸 酸化により部分分解し，細胞壁β-グルカンを可溶 化した3）ものから調製された標準品（CSBG，生化 学工業から提供）689.7pg!ml を使用し，パキマン と CSBG により作成した検量線から各々に算出 されたβ-グルカン値を比較した．
成績と考察
パキマン換算値として 3.9pg!ml 未満の参考値 が算出された検体は 6 検体認められ，これらはこ の検討から除外した．パキマン換算によるβ-グル カン値は 3.9〜2,772.1pg!ml，CSBG 換算によるβ- グルカン値は 7.0〜5,157.1pg!ml の範囲であった．
CSBG 換 算 値!パ キ マ ン 換 算 値 は 最 高 1.91，最 低 1.76，平均 1.82 であり，CSBG 換算値がパキマン換 算値を上回る数値を示したが，Fig. 1 に示したよ うに両者の測定値はよく相関し，相関係数は R2＝
0.9994 であった．
β-グルカン測定法はわが国の深在性真菌症診療 において極めて重要な検査法の 一 つであるが，非 特異反応検出によるキット間の測定値不一致など 未解決の問題点も残されている．β-グルカン測定 の標準化を目指した大林らの基礎検討4）は新たな 問題解決の糸口となる可能性がある．この中で行 われたアルカリ処理―カイネティック法の標準品 であるパキマンの力価検定の結果，パキマン 1pg は CSBG 1.8pg に相当すると報告されている．私 たちの臨床検体における検討でも，両者間には極 めて良好な相関が認められており，CSBG 換算値! パキマン換算値は 1.82 と基礎検討結果に合致す る成績であった．私たちの成績はアルカリ処理―
カイネティック法で，臨床検体においてもβ-グル カン標準品として CSBG が使用可能であること を示す結果である．一方で，β-グルカン測定法の標 準化には標準品の問題以外にも，前処理法や測定 方法，リムルス反応に用いるカブトガニ種，さら に設定されているカットオフ値がキットにより 様々であることなど，未だ多くの問題が山積して いる．今後，β-グルカン標準品の問題については，
さらに臨床検体を蓄積し，他のβ-グルカン測定 キットにおいても CSBG を始めとした同一の標 準品候補を用いた検討を重ねる必要がある．また，
その他の諸問題点についても基礎的あるいは臨床 的検討が行われなければならない．
文 献
1）吉田耕一郎， 二木芳人， 見手倉久治， 中島正光，
川根博司，松島敏春：測定キット間の血中（1→
3）-β-D-グルカン測定値不一致の原因に関する検 討．真菌誌 2002；42：237―42.
2）吉田耕一郎，二木芳人，宮下修行，松島敏春：血 中（1→3）-β-D-グルカン測定法の非特異反応検出 に関する検討．感染症誌 2002；76：754―63.
3）Ohno N, Uchiyama M, Tsuzuki A, Tokunaka K, Miura NM , Adachi Y , et al .： Solubilization of yeast cell-wall（1→3）-β-D-glucan by sodium hypo- chlorite oxidation and dimethyl sulfoxide extrac- tion. Carbohydr Res 1999；316：161―72.
4）大林民典，吉田 稔，山田俊幸，河合 忠，玉熊 正悦，小玉正智，他：エンドトキシンおよびβ- グルカン測定法の標準化に向けたリムルス試薬 の 基 礎 的 性 能 評 価．機 器・試 薬 2002；25：
291―301.
Fig. 1 Good correlation between the plasmaβ-glucan values calculated from Pachyman and CSBG re- spectively was recognized.
吉田耕一郎 他 520
感染症学雑誌 第78巻 第 6 号
Evaluation of a New Standardβ-glucan CSBG in the Measurement ofβ-glucan in Plama by Alkaline Treatment, Chromogenic Automated Kinetic Assay
Koichiro YOSHIDA1）, Yoshihito NIKI1）, Keiji MOHRI1）, Naoyuki MIYASHITA1）, Yoshihiro KOBASHI1）, Mikio OKA1）& Toshiharu MATSUSHIMA2）
1）Division of Respiratory Diseases, Department of Medicine, Kawasaki Medical School
2）Kurashiki Daiichi Hospital
β-グルカン測定における新しい標準品の評価 521
平成16年 6 月20日
