理学療 法 学
第33巻 第
7
号355
・
一・
362
頁 〔2006
年 )原
著
温 熱 負
荷方
法
の
違
い
が ラ
ッ
ト
ヒ
ラ
メ
筋
の
廃
用
性 筋 萎 縮
の
進 行 抑 制
に お
よ
ぼ
す 影 響
温
水浴
と
電気熱
プ
レ
ー
ト
の
比 較
*渡
部
由
香
/)吉
川
紗 智
2)片 岡 英 樹
2)片 岡 紀 香
D
坂
本 淳 哉
2〕中
野
治 郎
3)#沖 田
実
4〕要 旨
本研 究
の 凵 的 は,
温水
浴
と電気 熱
プレー
ト に よ る ラ ッ トヒラメ筋の 廃 川 性 筋萎
縮の進行 抑 制 効 果
を 比較
検
討 す ること で あ る。
Wis
吐ar系 雄
ラ ット
22
匹を対
照群
4
匹 と7
日間
の後 肢 懸
垂 (IIS
) により
ヒ ラ メ筋
に廃
川性 筋 萎
縮 を 惹起
さ せ る実 験 群
ユ8
匹
に分 け
,
実 験 群
は さ ら に,
ユ)
HS
の み の群(
HS
群
; n≡
6
),
2
)
HS
の過 程
で下半
身
の 温水 浴
に より温 熱
を負荷 す
る群
(HS
&Heat
−
Bath
群 ; n≡
6
),
3
)
HS
の過 程
で電
気
熱プ レー1・
に よ り温 熱
を負荷 す
る群
(HS
&Heat−Plate
祥 ; ll≡
6
)
に分 け
た。
温 熱 負荷
は麻 酔
下で毎
H
60
分 間 ,7
囗間継 続
して行
い,
両 方 法
とも負 荷 温 度
は42
℃
と し た。
実
験終 「時
の体
重 なら び に体 重 変
化 率 を
比較
す る とHS
&Heat
−
Bath
群
の み顕著
に減
少 し ていた。
そ して,
ヒラ メ筋
の相 対
重 量 比や タ イ プ1
・II
線維
の筋 線 維 直径
はHS
&Ilea
し一
Bath
群
,HS
&Heat−Plate
群 と も にHS
群
より有 意
に高 値
で,
HS
&
Ileat
−Plate
群の タ イ プ1
線 維
の筋 線 維 直 径
はHS
&Heat
−
Bath
群のそ れ より有 意
に高 値
を不 した。
ま た,
熱
ショ ッ ク タン パ ク質
(IISP
)
70
含有 量
はIIS
&Heat−
Bath
群,
HS
&Heat
−
Plate
群 とも
にHS
群
よ り有
意 に
高 値
で,
この2
群 問
には有 意 差 を
認 め な かっ た,
,
以 上の こ と より
,
電 気 熱
プレー
ト
といった 局所 的
な温 熱
負 荷
の方法
でも
,
骨 格 筋
にHSP70
を 誘導 す
ること は 可 能で,
全身
へ の影 響
を考 え
る と温水 浴
よ り も廃
用 性筋
萎
縮の予防 方 法
とし て有
川で は ないか と考 え られ た、
キー
ワー
ド温 熱 負荷 方 法
,
廃
用性 筋 萎
縮,Ileat
shock pr〔〕tein
70
目
的
臨
床
の場
に おい て,
理学 療 法 を展 開 す
る 上で弊 害
と な りやすい もの に廃用 性 筋 萎 縮
があ げ ら れ る、
、
廃 川 性 筋 萎*
E正e〔:ts
〔,f
Dlfferences
ill
Heatmg
MctLlods
こ,n
bihibiting
the Pr⊂〕gression of Disし1se Mus〔
’
Le 、tr⊂〕ph}・
in RaL SoLeus Musclc
−
C〔}1nparison of a W}1rm Watcr Bath aエ1d Electrica]Heating Plとしte1)長崎 北 病 院総 合リ
ハ
ビ リ テー
ショ ン部Yi]ka Watanabe
,
RPT,
N【}rika Karaoka.
RPT:Departlne匸】t ofRehxbilitat
.
ion,
Nagasaki KIT八Hospizai〔現 所属:石1「
1
病 院リハ
ビ リ テー
シnン科 渡 部 由香 ) 2 ) 長崎 記念 病 院リハ ビ リ テー
ショ ン部Sachi Yoshikawa
,
RPT,
Tlidcki Kata〔}ka,
RPT、
Junya
SakamoLo,
RPT :Department of Rehabilitation
,
−
N’
agasaki Memor・
ial HospitaLR、長 崎 大学 大 学 院 医 歯薬 学 総 合研究 科 保健学専攻 (〒852
−
8520 長 rl寄県 長 崎 市 坂 本1−
7−
1〕Jjro Nakano
,
RPT、
PhD:Nagasaki Unii.
erSity Graduate Schoc〕1〔,fBiomedical Sc/iences
,
Course of HeaLth Sciences4〕県 城 大 学リ
ハ
ビ リ テー
ショ ン学 部Minoru 〔>kita
,
RPT,
PhD:FacLdty of Carc and Rehabilitntion,
Seijoh Utiiversity
E
.
mail:1iakali〔Fj(例】agasakL.
u.
ac.
jp
〔受 付H 2006年1月24ト「/受 埋 目 2006年 10 月 14H ) 縮 は
,
長期
臥床
や安 静
,
ギ プ ス固定
などにより筋
の不 活
動
が惹 起
さ れ た結 果
とし
て生
じ るも
のであ
り,
日常 生 活動 作
に も 大きな 影 響
を与 え
る とさ れ ている 1)。
そ して,
理学 療 法 領
域の対 象 疾 患
が高齢
化 している今
日 を考
え る と,
こ の廃 川 性 筋 萎 縮 を
い か に 予防
し てい くか が 重 要 な課
題であ
る、
、
方
,
ラ ッ ト後 肢 骨 格 筋
の廃
用性 筋 萎
縮の 進行
過程
で42
℃の温 水 浴 を 実 施 す
ると
,
筋 線 維 萎
縮の進行
が抑 制
さ れ る と同 時
に,
筋
細 胞内
に 熱シ ョ ッ ク タンパ ク質
(
Heat
shockprotein
;J
/ド,HSP )70
が誘
導
さ れ ること を
我
々が 報 告
し てき
た2’
t)。HSP70
と は,
温熱
な どの ス1
・
レ スを受
けた細
胞で誘導
さ れ るス トレス タン パ ク質
の一
つ で 1’)fi),
タ ンパ ク質
の凝 集
・
変 性 を 防 ぎ,
細 胞
レ ベル で の恒 常 性 を維 持 す
る働
き を有
してい る7)。
加
えて,
HSP70
は分
子シ ャペ ロ ン と して新 生 ポ リペ プ チ ド鎖
の 正しい折 り
畳 みや帥 張
な ど を補
助 し,
タンパ ク質
の合 成
に関与
してい ると
い わ れ ている5)8)、
,
そ して,
廃用性 筋
萎 縮
の進 行
過 程 で 筋 細 胞 内 にIISP70
を 誘導 す
る と,
筋
356
理.
学 療 法 学 第33
巻 第7
号 線 維 萎 縮の原 因となる新
生ポ リペ プチ ド鎖
の伸
張
遅 延9♪ や タンパ ク質 合 成 低
ドIO)が抑 制
され
,
そ
の結 果
と して廃
用性 筋 萎 縮
の進 行 抑 制 効 果
が得
られ
る と考
え ら れてい る2−
4}ll)12)。
し か し な がら,
上記
の よう な
IISP70
の効
果
を 臨床
で 期待
す る と な れ ば,
その誘導 方 法
に検 討
の余
地 を残
して い る。
す
な わち
,
これ ま
で の報 告
で はHSP70
の 誘導
方 法 と し て全 身加 温
2n2)や温 水 浴
3)4)ll) な どの方 法
が採
用 さ れ ている が,実 際
の臨 床場 面 を想 定
す
る と ホッ トパ ッ クの よう
な 局所 的 な 温 熱 負荷 方 法
が実
用 性 が 高い と 思 わ れ る。
この こ とに 関連
して,
伊 藤
ら13} はマ ウ ス頬部
に対
し て42
℃
の 温熱 を局 所 的
に負 荷 す
る と,
咬 筋
にHSP70
の誘 導
を認
め たと報 告
してお り
,
培
養 筋
細 胞 を 直 接 加 温 し たin
vitro 実験
に おい ても
HSP70
の誘 導
,
な ら び に タンパ ク質
合 成の促 進 効 果
が確 認
さ れ てい る14}。
つ まり
,
これ らの報 告
か ら推 察 す
る と,
骨
格 筋
に対 す
る局 所
的 な 温 熱 負 荷 に よっ て もIISP70
を誘
導 す
る こと はロ∫
能
で,
廃 川性 筋萎
縮の進 行抑 制 効
果 が得
ら れ る の で はない か と考
え ら れ る。
し か し,
先 行研 究
に おい て局所 的
な 温熱 負 荷
に よ る 廃 用 性 筋 萎 縮の進
行抑 制
効 果 を検 討
し た報 告
は見 あ
た らず
,
加
え て,
温 熱負荷 方
法
の違
い が廃 用性 筋 萎
縮の進行
抑
制にお よ ぼす 影 響
につ いて は, こ れ まで明
ら かにさ れてい ない。
本研 究
の目的
は,
電 気 熱
プレー
トを 用い た局 所
的 な 温 熱負 荷
によ るラッ トヒラメ筋
の廃用 性 筋 萎
縮の進
行抑 制
効
果を検 討 す
ると とも
に,
温 水 浴
による効 果 との 比 較 を 通 して臨 床 応 用
の ロ∫能 性 を検 討 す
ることであ る。
実 験
1
:温 水浴
,電気 熱 プ
レー
トの実 施
に よ る ラッ ト 下腿
三頭 筋
の筋内
温 度 の変 化
今 回
,
温 熱負
荷の方 法
と して採
用 した温 水 浴
.
冠気 熱
プレー
トの実施
によっ て, ラ ッ ト下腿
三頭 筋
の筋
内 温 度 が どの程 度変 化 す
るのかを把 握 す
る目的
で以ド
の実 験
を 行っ た”
ユ.
対 象
実 験 動 物 に は
7
週 齢のWistar
系 雄
ラッ ト10
匹
(体
重 ;220
±10g
)
を 用い, 温水
浴に て温 熱
を負 荷 す
る群 と電 気 熱
プ レー
トに て 温 熱 を負 荷 す
る群
に無 作 為
に5
匹
ず
つ 振り
分け
た。
図1
温 水 浴に よ る温 熱 負 荷の方 法 温水浴
に よ る温 熱 負 荷は,
図に 示す よ うに,
水 温 を42℃ に設 定し た 自 製の 発砲スチロー
ル製プー
ル 内に ラッ トの下 腹 部か ら 尾方全 体 を 浸漬す る方法で行っ
た.
その際,
後 肢が荷重 し ない よう注 意し た.
MEDICAL
社 )
と その 金属
製 小 型 プロー
ブを 改 良
した竃気 熱
プレー
ト(
幅
:1cm
, 長 さ :2cm
) を組
み合
わ せ た装 置
を用
いて行
っ た(
図2
−
A
)。
具体 的
に は,
ラッ トの腹 腔 内
に ペ ン トバ ル ビ ター
ル ナ ト リ ウ ム (40mg
/kg
)
を投 与
して麻 酔
を 行っ た後
, 下 腿後 面 を剃
毛
し,
ラッ トを腹
臥位
と し た。
そ して,
一
ド腿詫頭筋
の筋
腹 部
の皮 膚 表 面
に奄 気 熱
プレー
ト を密 着
さ せ て張
り付
け,
42
℃の設 定温 度
で60
分 問
,
温 熱
負
荷
を 行っ た。
3.
下 腿三頭 筋
の筋 内温 度
の測 定
ノ∫法
熱 寇 対 温 度 計
(PTC
−301,
UNIQUE
MEDICAL
社
)
のニー
ドル型 温度
セ ンサー
をラッ トの ド腿後
而の ほ ぼ中
央 部 で 脛骨
の後 面
に挿 入
し留 置 し
た。そ
して,
温 熱 負 荷
前
,
負 荷
中60
分 間
,
な ら
び に負 荷 後
60
分 問
の.
.
ド腿
一
三頭 筋の筋 内 温 度 を10
分
問 隔で測定
したtt実 験
2
:温水 浴
,
電 気熱
プレー
トの 実 施 に よ る ラッ ト ヒラメ筋
の廃 用 性 筋 萎 縮
の進 行 抑 制
とHSP70
発 現本
実 験 で は,
後 肢懸 垂 (
Hilldlimb
suspension ;以下
,
HS
)
に よ りラッ トヒ ラメ筋
に廃 用 性 筋 萎縮
を惹 起
さ せ,
その進 行 過 程 に おい て 温水 浴
と電 気 熱
プ レー
ト に よ る温熱 負 荷
を行
っ た。
そ し て,筋 線 維 萎 縮
の進 彳
1
抑 制 効 果
とIISP70
の発 現 状 況 を 比.
較検 討
し た.
2
.
温 熱 負荷
の方 法
ラッ ト の
腹 腔
内にペ ン トバ ル ビ ター
ルナ ト リ ウム(
40mg
/kg
) を投 与
し,
麻 酔
を行
っ た 後, 温水
浴は わ れ わ れの先行 研 究
の方 法
に準
じ て 実施
し た2)。
す
な わち
,水 温
を42
℃に設 定
し た 自製
の発 砲 スチロー
ル 製 プー
ル内
に ラット
のド腹 部
か ら尾 方
全体
を60
分 間
浸漬 す
るこ とで行
っ た(
図
1
)。一
方
,
冠気 熱
プ レー
ト に よ る温 熱
負 荷
は ,熱 痛 覚 閾 値 測 定
装置
(
UDH
−
104
,
UNIQUE
1
.
対 象
と方 法
実 験 動 物
には,
7
週齢
のWistar
系 雄
ラ ッi・
22
匹 を用
い,
これ ら を 無 作為
に対 照 群 (以 ド,C
祥)
4
匹 と7
日問
のHS
に より
ヒ ラ メ筋
に廃
川性 筋萎
縮 を惹 起
さ せ る実
験 群
18
匹
に振 り分
け た。
そ して,
実験 群
は1
)
HS
のみを施 行 す
る群 (
以 ド,
HS
群 ; n=
6
),
2
)
HS
を施 行 す
る過 程
で温 水 浴
により温 熱
を負
荷
す る 群似
下,HS
&Ileat
−
Bath
群
; n=
6
)
,
3
)HS
を 施行
す る 過程
で電 気 熱
温 熱 負 荷 方法の違いが ラッ ト ヒ ラ メ筋の廃 用 性 筋萎 縮の進 行抑 制にお よぼす 影 響 357
図2 電 気 熱プレ
ー
トによ る温 熱 負 荷の方 法A
:電気熱 プ レー
ト装 置本装置は
,
熱 痛 覚 閾値 測 定 装 置 (UDII−
104,
UNIQUE
MEDICAL
社 )と そ の金 属 製小 型 プロ
ー
ブ を 改良
し た電 気 熱プ レー
ト 〔矢頭 )よりな り,
電 気 熟 プレー
ト はラ ッ トト.
腿後
面に密着し て添
t
’
f
で き る よう
凹の形 状となっ て いる.
B
:電 気 熱 プ レー
トに よ る温 熱 負 荷の方法麻 酔 し たラッ ト を 腹臥 位と し
,
下 腿1
頭 筋の筋 腹 部に位 置す
る皮膚
表 面に電 気 熱プ レー
ト〔
矢頭 )を密 着さ せて添 付 した.
そ して,
42
℃の設 定 温 度で発 熱さ せ,
温熱負
荷を行っ た.
表1
体重
,
筋湿
重量,
相
対重 量 比,
筋 線 維 直 径の変 化C
群HS
群IIS
&Heat
−
Bath
群HS &Ileat
−
Plate群 体 重 (9) 実 験 開 始 前実験
終
r
後
体 重 変 化 率 (%)/K 筋 湿’
ヨ:軍 (lng ) 相対 電量 比 (ln9 /9) 筋 線 維 直 径 (μn1) タ イ プ1線維 タ イ プH
線 維 215,
6± ll.
8 204.
3± 11.
8−
52 ± 6.
O lO2.
1± ⊥2.
9 0.
50± 0.
06 47.
3± 8.
938.
7
±7
.
9
222.
5 ±2.
7 211.
7
±6
.
1
−
4.
9± 2.
669,
6
±9
.
8a
O
.
33
±D
.
03
εL35
.
9
±7
.
5a
30
.
0
±6
.
6tt
214
、
0
±11
.
4
185
,
8
±16
.
1n
’
b−
13
.
2
±4
.
5a
’
b79
.
7
±12
.
2a
O
,
43
±0
.
07alL
)38
.
5± 7.
・
ta
・
b35
、
6± 7.
4a’
b2225
± 2.
9 211.
3± 4.
8亀
’
−
49
±4
、
5c 89、
0± 6.
gb O.
42 ± O,
03ご
L「
b 41.
8± 6.
6,
Lb,
c』
35.
9± 5.
6a.
b ・ 、体 皷 化率.
颶
終 了 肋 樋一
嫐 開購 の鯒 ) 。1
。。.
(実 験 開始 時の体 重)各
群の デー
タ は.
平均 値±標 準 偏 差で示 した,
a :C
群 との有意 差(
p <0.
05),
b :HS 祥との有 意 差 (p〈O
.
05
).
意 差 (p<0.
05).
c’
HS
&Heat
.
Balh 群 との有 プレー
ト
により温 熱 を負 荷
す る群
(
以 下,
HS
&Ileat
−
Plate
群
; n=6
)の3
群
に振
り分 け た,
HS
は,
自作
し たジ ャケッ ト をラ ッ トに着用
さ せ,
そ
の背 側 骨 盤 部 を飼 育
ケー
ジ ト部
に 張っ た針
金 に吊す
こと で後 肢 を懸 垂
,
無 荷 重 状 態
と し た。
な お,
HS
後
もラッ ト は前 肢
に て飼 育
ケー
ジ 内 を移 動
で き,
水
と餌
は自 由
に摂 取
でき
る よう
に し た。
ま た,HS
を行 う
と身 体 活 動 量
が 減 少 す
るた
め水
や餌
の摂
取 量 も 減 少 し,
通常 飼 育
に比 べ休 重
の増 加
が 少 ない。
そこ で,
C
群 も実験 群
とでき
る限 り同 様
の飼 育
環 境 と す る た め,
ジャケッ トを着 川 さ
せ,
後 肢 を懸 垂
し ない こと 以外
は すべて実 験 群 と同
じ条 件
で飼 育
した。
な お,HS
&Heat
−
Bath
群
の1
匹 な
ら び にIIS
&
Heat−Plate
群
の2
匹 は,
HS
の環 境
に適 応 す
る こ と が できず極 度
の体 重
減 少や ジャケ ッ ト装 着
に よ る擦 傷
が認
め ら れ た た め 実 験対 象
か ら除 外
し た。温 熱
負 荷
の方 法
は,
実 験
1
と同様
であ り
,
ペ ント
バ ル ビター
ルナ ト リ ウム(
40mg
/kg )
の腹
腔 内 投 厂 ∫に よって
麻 酔 を行
っ たIIS
&Heat−
Bath
群,
IIS
&Heat
−
Platc
群
の各
ラッ トに対
し, そ れ ぞ れ 温水 浴
,
電気 熱
プレー
ト
にて毎
日60
分 間
,
設 定
温度
42
℃
で温熱
を負
荷
し た.
実
験 期
間は7
日 問 で,
この期 間 中 は 麻 酔によ る 成長 不 良
など
の影 響 を考 慮
し てC
祥,HS
群 に も同頻 度
で麻 酔
の みを行
っ た。ま
た,
実
験 開 始 時 と終
了 時
は各
ラ ッ ト の体
重を
測定
し,
体
重 変 化 率 を 求 め た(
表
D
,
,
2.
検索 方法
筋 活
動 が 減 少 し た 状 態 に おい て,
最
も早 く筋 萎 縮
を起
こす
のは体 幹
や 下 肢の抗 重力 筋
であ り
,
安 静 臥 床 を続 け
ると
1
週 間で10
〜
15
%,
3
〜
5
週間
で50
% 程 度 筋 力
が 低 下 す る とい わ れてい る⊥5〕。
そのため,
本 実 験
で は抗
重 力 筋
で あ るヒ ラ メ筋
を検 索 材 料
に用
いた。実
験期
問終
了 後
は,
ペ ン トバ ル ビター
ルナ ト リウ ム358 理
.
学 療i
去t/艶 第33巻 第7号(
40
mg,
’kg
)
の腹 腔 内
投Ei
一
に よっ て各
ラ ッ トを 麻 酔
し,
右 側
ヒラメ筋
を摘 出
し た。
摘
出 し たヒ ラ メ筋
は,電
子±〈秤
にて筋 湿 重
量 を測 定
し,
その後
,
筋
の ほ ぼ 中央 部
で二分 割
し,.
.
一
部
は紅 織 化 学
的検 索
に,
一
部 は生 化 学 的検 索
に供
し たttl
) 糾 織化 学 的 検 索
一
部
の筋 試 料
は,
ト ラガン トゴムに包
埋 し,
液 体 窒 素
で冷 却
したイ
ソペ ン タン液 内
で急 速 凍 結
し た。
そ し て,
凍 結
した 筋 試 料
はク リ オス タッ トを用
い て7
μm厚
の連 続横 断
切片
と し,
ミ オ シ ンATPase
染 色
(
pHlO
.
5
)
を行
い,筋 線 維 を
タイ プ
1
・
II
線 維
に分 別
し た。定 量 解 析
と して,
顕 微 鏡 用
デ ジ タル カメ ラ(
FUJI
FILM
HC
−300Z
)を用
い て ミ オ シ ンATPase
染
色像
をパー
ソナル コンピュー
ター
に取 り込
み,
画 像 解 析
ソ フ トウェ ア (
NIH
Image
Verl
,
62
) を川
いて,
タ イ プ1
・
II
線
維の筋 線 維 直 径 を
1
筋 当
た り200
本
以上計測
し た。
な お,
筋線
維 直径
の計
測 はBrookei6
〕の短径 法
に従
い行
っ た。2)
生化
学 的検 索
一
部の筋 試 料 は,
適
量の ト リス緩 衝 液
(10mM
Tris
,
10mM
Nacl
,0
.
lmM
EDTA
, pH7.
6
) を加 え均 質 化
し,
4
℃
に 設定
し た冷 却 遠 心 分 離 機 を 用
い て遠 心 加 速 度
12
,
000
gで遠 心 分 離 し た後
,
その ト清 を
回収
し,
筋 抽 出
液
と し た。
そ し て,
BCA
Protein
Assay
Kit
(
PIERCE
社 )
を 用い て筋
抽 出液 内
の タンパ ク質 濃 度 を測 定
し た後
,
各 筋 抽
出 液 に2
−
mercaptoethanol含
有 ト リス緩 衝 液
(
10
mMTrjs
,
ユOmM
Nacl
,
O
.
l
mMEDTA
,
15mM
2−
mercaptoethanol,
pH7
.
6
)
を適 量 加 え
タンパ ク質 濃 度
を2
μg
〆μ1
に調 整 し,
こ れ をWestern
blot
法の 試料
とし た。次
に,
試 料
は95
℃で5
分 間 , 熱 処 理 し た後
,12
、
5
%濃 度
のSDS
ポリ ア ク リル ア ミド ゲル に添 加
し,
200V
の定 電
圧で約
60
分間
,
電 気 泳 動 を 行っ た。
その後
は,
40V
の定 電
圧で70
分 問
,
ニ トロセル ロー
ス メ ン ブ レンへ の転 写
を行
い,
マ ウ ス抗HSP70
モ ノクロ ナー
ル抗 体
(
Stressgen
社 )
を 川い た 免 疫 染 色 を 実 施 し,
ECL
syStenl で化 学 発 光
を行
い,
X
線
フ ィ ル ム に 感 光 し, 現 像 した。
定 量 解 析
は,
各 試 料
か ら得
ら れ たHSP70
の バ ン ド像を
コ ン ピュー
ター
に取 り込
み,
画 像 解 析
ソ フ ト ウェ アCNIH
Image
Verl
.
62
)
を 用い,
そ の濃 度
を 測定
し た。
そ して,C
群
の平 均 値
をユ00
% と し,
そ れに対す
る各
群 の相
対値 (
%) を求
めた
。 C20 4T40383634323028 413℃3
.
統計
処 理統
計 処 理 に は,
一・
元 配揖 分 散 分 析
(
以 ド
,
ANOVA
)
を 適 応 し,ANOVA
に て有 意 差 を認
め た場 合
に は,
多
重 比較 検 定
にFisher
のPLSD
法 を 適
用 した。 な お,
す
べ ての統 計壬 法
とも有 意 水 準
は5
% 未 満
とし
た。 。Tk
= =iiliii
!
_ _ _ _ _ _
OlO
20
3040
506070809010011012
〔}分 図3 下 腿 三 頭筋の筋 内温度の変 化な お,
実
験L
実 験
2
と も
に長
1
[1tre大 学 動 物 実 験 委 員 会
に実
験計
画書 を提 出
し承 認 を受 け
た後
,
同 委 員 会
が定
め る動 物
実 験指
針 に某
づ き長崎 大 学 動 物 実 験 施 設
において実
施 し た、
結
果
1
.
下 腿 三 頭筋
の筋 内
温度
の変 化 (
図
3
)
温
熱負
荷 を開
始 す る前
の筋 内温 度
は32〜33
℃であ
っ た。温 水浴
に よ る温 熱
負荷
を開
始 する と,
筋 内温 度
は急
激
に ト昇
し,
60
分 後
で41
,
3
±0,
4
℃
に達
し た 、ま
た,
温
熱 負 荷 終 ∫後
は 急 激に下 降 し,
60
分 後
で28
.
1±1
,
6
℃ とな り
,
温 熱負 荷
を開 始 す
る前
より
も低
値
となっ た。
一
方
,
電 気 熱
プ レー
トに よ る 温熱 負荷
で は,温 水 浴
に 比べ温 度
卜昇
は緩
や かで,
60
分後
で38
.
9
±0
.
4
℃
とな
った
。ま
た,
温 熱 負 荷 終 了 後
は緩
や か にF
降 し,60
分後
で32.
9
±0
.
7
℃ とな り
,
温 熱 負 荷
を開始
す る前
と ほ ぼ 同値
となっ た。
2
.
体 重
の変 化 (
表
1
)実
験 開始 前
の体
重の平 均 値
は,
すべて の群
と も ほ ぼ 同値
で,有 意 差 を認
めな
かっ た。 ま た,
実 験 終 了 後
の体
重な らび に
体 重変 化 率
の平 均 値
は,
IIS
&Heat
−Bath
祥のみ
他
の群
よ り有 意
に低 値
であ
っ た、
3
,
筋 湿 重 量
,
相 対重 量比
の変化 (
表
D
各
群の筋
湿 重量
の平 均
f
直
は,
C
群に比べHS
群,
HS
&Heat−Bath
群
は有 意
に低 値 を示 し
たが
,
C
群
とHS
&Heat
−
Plate
群
の 問 に は有 意差 を認
めな
かっ た, ま た,
筋
湿 重 量 を 実 験 終 了後
の体 重
で除し た相 対
重 量 比で比較
す る と,C
群 に 比べ他
の3
群
は有 意
に低 値 を示 し
た。そ
して
,
HS
群,
HS
&Heat
−Bath
群
,
IIS
&Heat
−
Plate
祥
の3
群で 比 較 す る と,HS
群 に 比べ 且S
&Heat
−
Bath
ew
,
HS
&Heat−Plate
群
は有 意
に高 値 を示
し たが
,
HS
&Heat
−
Bath
群 とIIS
&Heat
−Plate
群
に は有 意 差 を認
めな
温 熱 負 荷 方 法の違いが ラッ ト ヒ ラ メ
筋
の廃 用 性 筋 萎 縮の進 行 抑 制にお よぼす 影 響 359かっ た
。
4
.
筋 線 維 直径
の変化
(
図4
,表
1)
タ
イ
プ1
線 維
の平 均 筋 線 維 直 径
は,C
群 に 比べ他
の3
群
は有 意
に低 値
を 示 し た。
ま た,
HS
群,
HS
&Heat
−
Bath
群
,
HS
&Heat
−
Plate
群
の3
群 を 比較 す
る と,
そ れ
ぞ
れの群 問
に有 意 差 を
認 め,IIS
&Heat
−
Plate
群
,
HS
&
Heat
−
Bath
群,
HS
群の順 に 高 値 を示
し た。
次
に,
各 群
の タイプII
線維
の平 均 筋 線 維 直 径 を比 較
す
る と,
タイ ブ1
線 維
と 同様
,C
群 に 比べ他
の3
群
は有
意
に低 値
で あ り,
こ の3
群間
で はHS
群に比べHS
&Heat
−
Bath
群,HS
&Heat
−
Plate
群
は有 意
に高 値 を
示 した
。ま
た,HS
&Ileat
−
Bath
群 とIIS
&Heat
−
Plate
群
には
有
意 差 を 認 め な かっ た。
5.HSP70
含有
量(
図
5
)
C
群 に 対 す るIIS
群 の相 対 値
は有 意
に低 値
を 示 し た。
ま た,HS
&Heat
−
Bath
群
とHS
&Ileat
−Plate
群
は.
両群
と もHS
群 より有 意
に高 値
を示 し
た が,
この2
群
間 に は 有 意.
差 を 認 め な かっ た。
考
察
実 験1
の結果
よ り,
下腿
三頭 筋
の筋 内
洫渡 は,
温水 浴
で は約
41
℃ま
で上 昇
し た が,
電 気 熱 プ レー
トで は約
39
℃ま
で しか上昇
し な かっ た。
し か し,
実 験
2
の結 果
%60
1
140
120
100
80
60
40
20
G
※ ※C
群
HS
群
HS
&Heat
−
HS
&Heat
−
Ba1h君
羊
Plate
君羊
懣
輪
繰
藩験
戦 騰
亀
韈
轎i毒
縫轡簪
.
図5 11SP70含有 量の変 化平 均値±標準偏 差
,
Weslcrn Blut法で得られたIISP70のバ ンド像を グ ラフ下に示 す
.
※ :pく
0
.
05
.
ー
図4ATPase 染色 像 〔pH
lO
.
5
)A
:C
群,
B
:HS
群,
C
:HS &IIeat−
Bath 群,
D :IIS&Heat
−
Ptare
群.
360 理 学 療 法 学 第33巻 第7号
よ
り
,
HS
&Ileat
−
Bath
群,
HS
&Heat
−
Plate
群
のHSP70
含 有 量
は,
HS
群
より有 意
に高値
で,
この2
群
問 に は有 意差 を認
めな
かっ た。
し た がっ て,
電気
熱 プレー
トは温水 浴
より も
ヒ ラ メ筋
の加
温効
果 は少
ない が,
IISP70
の誘 導
は同 程 度 期 待
でき
る の で は ない か と考
え ら れた
。骨 格 筋
にお
い てHSP70
を誘 導
す る 温 度 につ い て 先行
研究
を 概観 す
る と,
Skidmore
ら17)はラ ッ トを
42
℃
に設 定
し た恒 温 器
に60
分 間留 置 す
る と,
乎 常 時
37
〜
38
℃
であ
る直 腸 温
は41
℃ま
で上昇
し,
ヒ ラ メ筋
に はHSP70
が誘 導
さ れ た と報 告
し て い る。
これ に対 し,
Ostberg
ら18)は恒 温 器 を 用
い て6
時 間
,
マ ウ ス直 腸 温
を39
.
5
〜
40
℃
に維 持 す
る と,
各 種
の内 蔵 器 官
で はHSP70
の誘導
が 認め ら れた が,
骨 格 筋
で は認
め ら れ な かっ た と報 告 し ている。
そ し て,
高温 環 境
におい ては躯
幹
内部
と骨格 筋
の温 度差
は極
めて小 さ
い 19>20)こ と を併
せて考
え る と,
骨 格 筋自体
が40
〜
41
℃付 近 ま
で加 温
さ れ る とHSP70
が誘 導
さ れ るので はな
いか と思
われ
る。加
えて,
HSP70
を誘 導 す
るU
的
で培 養筋 細 胞 を 加 温
し たin
vitro 実 験で も,
負
荷 温 度 は41
℃ 以上 に設 定
さ れ ており
13) 14) 21),
そ れ 以 下の温度
で検 討
し たも
の は見 あ
た ら ない。
た だ,
上 記の報 告
13)14〕17−
21) はす
べ て.
・
同
の み の温 熱 負 荷
に よ る 検 討 で あ る。一
方
,
伊 藤
ら22)は,
マ ウ ス に対
して38
℃,
39
℃
,
40
℃
に 設定
し た ミス トサ ウナに よ る全身加
温 を1
,
2
,
3
週 間,
毎
凵20
分 行 う
と,
下肢 骨 格 筋
のHSP70
含 有 量 は1
週 凵 で は すべ ての 設定
温 度
で変 化 しな
かっ た が,
2
週 目 以降
は すべ ての設定
温度
で増 加
した と報 告
し てい る。
こ の報
告 を参 考
にす
ると
,
繰
り返
し温 熱 負 荷
を行
え ば,
骨 格 筋 が40
〜
41
℃
以 下 に し か加 温
さ れな く
ても
HSP70
を誘 導
す る こ と は 可能
で あ ると思わ れ る。
そし て,
本 実 験
の電 気 熱 プレー
ト に よ る 温熱 負 荷
で は,
下腿
三頭 筋
の筋
内 温 度 は 約39
℃
ま で し か上 昇
しな
かっ たが
,
これ を毎
日60
分 間
,
7
日 間 継 続 し て 行っ た た め ヒラ メ筋
にHSP70
の誘
導
が 認 め ら れ た と 推 測 さ れる。
次 に
,HS
群
の ヒラメ筋
の相 対 重
量 比,
タ イ プ1
・
II
線 維の平 均筋 線 維 直 径
はC
群
の それ に比べ有
意に低 値
を示
し た。
つ ま り,HS
に より
ラ ッ トヒ ラ メ筋
は 微 少 重力 環
境 に 暴露
さ れ,
寡 動 状 態
に陥 り
,
廃 川 性 筋 萎 縮
が惹
起 さ れ た とい え る23 >、
そ して,
HS
&Heat
−
Bath
群 とHS
&Heat
−Plate
群の ヒラメ筋
の相 対
電 量 比 な ら びに タ イ プ1
・
Il
線 維
の平 均筋 線 維 直 径
は,
HS
群
のそ
れに比 べ有
意に高値
を 示 し,
こ の こ と は,
ど ち らの温 熱 負 荷
の方法
でも廃 用 性 筋 萎
縮の進 行 を抑 制 す
る こ とが可 能
であ ること を示 唆
している。
し か し,HS
&Heat−
Bath
群
とIIS
&Heat
−
Plate
群 を 比 較 す る と,
タ イ プH
線 維
の平 均
筋 線 維 直 径
では有 意
差 を認
め な かっ た が, タイプ1
線 維
ではHS
&Heat
−
Plate
群 が有 意
に高値 を示
し た。た
だ,
両群
のIISP70
含 有
量で は 有 意 差 を 認 め な かっ たこ とか ら,
廃 用 性 筋 萎
縮の進行 抑
制効
果 に温 熱 負 荷
の方 法
の違
い が影 響
し た と は考
え に くい。
お そ ら く,
42
℃の温 水
浴 を毎
H
行 う
こ とがラ ッ トに対
し て負 担
が大 き く
,
実 際
に実 験 終 了 後
の体
重 な ら び に体
重 変 化率
の平 均 値
は,
HS
&Heat
−
Bath
群の み他
の群 よ り 有 意 に 低 値 で あっ た こと
から も
こ の こと が推 測
で き る。.・
方
,HS
&Heat
−
Piate
群 は 実 験 期 間 巾
に体
重の変化
は ほ と ん ど 認 め ら れず
,実 験 終 了 時
の体
重 な ら びに体
重 変 化 率 はC
群 やHS
群
と有 意 差 を認
めな
かっ た。 し た がっ て,
電気
熱プ レー
トに よ る温 熱 負 荷
は温 水 浴
より
もラ ッ トへ の負 担
が少
ない と
考
え
られる。ま
た,
IIS
&Heat
−
Bath
群 とHS
&Heat−Plate
群
で実 験 終 了 時
の体 重
を 比較 す
る と,
HS
&Heat
−Plate
群
が有 意
に高 値
で,
筋 線 維 直 径
の結 果 はこの こ とが影
響
してい る の で はな
い か と思 わ れ る。
以 上の こ と か ら
,
電 気 熱 プ
レー
トを用
いた局所 的
な 温 熱負 荷 方 法
でも温 水 浴
と同 様
に骨 格 筋
にHSP70
を誘
導
す
ること や,廃
用性 筋 萎 縮
の進行 抑 制 効 果
が期 待
で き る こ とが 示唆
さ れ た。
そ し て,
局 所 的 な温 熱 負 荷 方 法
は,
身 体
に対 す る負担 も少
なく
,
人 体
に対
してベ ッ ド上で も簡 便
に行
え るこ と か ら, 疾病 を伴 う高 齢 者
や安 静 臥 床
中 のケー
スに対
して も実 施
可能
であ り
,
温 水 浴
より も廃 用
性 筋 萎
縮の予
防方 法 と
し て有 用
で はな
い か と考
え ら れ た。 た だ,
局 所 的
な 温熱 負
荷では,熱
の到 達 深 度
は ラ ット
とヒ トで大 き く異
な ることが推
測 さ れ,
こ の点
につ い て は今 後 検 討
を加
えていく
必要
があ
る,
、
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1997,
pp289−
300
.
20)Aschoff
J
,
Wever
R
:Modcl
experimentson
coullter
−
fi
〔〕wheat exchangeill
an extremity.
Z Gesamte Exp Med]30:385
−
395
,
1958
(hl
Gerl1
.
1al/},
21)Moon
B
.
Duddy
N
,
et α1
.
lStimulation
of glycogen syn−
thesis
by
heat
shockin
L6
sketetal・
1.
nuscle cells :regu ]a−
tory role of site
−
spec 工fic
ph〔)sphury ⊥atioll of glyじogen−
asse・
ciat
.
cd prolein phosphatase 1.
BiochemJ
37工:857
−
866
,
2003
.
22)伊 藤:要子
,
菊地 有 純・
他 :
.
ミ ス トサウナ によ る.
ス1
・
レ ス蛋白 (IISP70)の誘 導
,
囗.
本ハ.
イパー
サー
ミ ア 学 会 誌⊥
9
〔suppl):141,
2003 〔学 会抄 録 ),
23)Alley
KA
,
Th
〔,mpson LV,
et al.
;Influence of simulatedbed
rest andinrermittent
weightbearing
oll single skele・
tal Inusclc
fiber
function
iTl aged rats.
ArchPhys
Med
362
vafi}tfithe
ag33gca7e
<Abstract>
Effects
ofDifferences
in
Heating
Methods
onInhibiting
the
Progression
ofDisuse
Muscle
Atrephy
in
Rat
Soleus
Muscle
-Comparison
of aWarm
Water
Bath
andElectrical
Heating
Plate-Yuka
WATANABE,
RPT,
Norika
KATAOKA,
RPT
Dqpartment
ofRehabilitation,Alagasaki
Kl7LA
Hospital
Sachi
YOSHIKAWA,
RPT,
Hideki
KATAOKA.
RPT,
Junya
SAKAMOTO,
RPT
Dqpartment
ofRehabilitation,
Aldgasahi
A4bmorial
Hbspital
Jiro
NAKANO,
RPT,
PhD
Ndgasaki
University
Graduate
Schoog
ofBiomedicalScienees,
Course
ofHealthScienees
Minoru
OKITA,
RPT,
PhD
fecugty
ofCare
andRehabilitation,
Seijoh
U}ziversity
The
current research soughtto
studythe
effects of a warm waterbath
and electricalheating
ptate
oninhibiting
the progression ofdisuse
muscle atrophy ef the rat soleus muscle.Twenty-two
Wistar
male rats weredivided
into
a controlgroup
of4
rats and atest
group of18
ratsin
whichdisuse
musc]e atrophy wasinduced
in
the
soleus muscle through7
days
ofhindlimb
suspension(HS).
The
test
group
wasfurther
divided
into
])
agroup
that underwentHS
aLone{HS
group;
n=6),
2)
a groupthat
had
its
lower
body
heated
with a warm wat.erbath
in
the course ofIIS
(HS
&
HeatBath
group; n =5),
and3)
a grouphealed
with an electricalheating
platein
the
course ofHS
(HS
&
Heat-Plate
group:
n =4},
Heating
lasted
for
60
minutes aday
under anesthesia and wascontinued
Ior
7
days.
With
beth
methods ofheating,
the
load
temperature was42
℃.
Comparison
of
body
weight atthe
start and upon completion ofthe
experimentindicat.ed
that
the
weightdecreased
markedly onlyfor
theHS
&
Heat-Bath
group,Additionally,
the relative weight ratio ofsoleus muscle and muscle
fiber
diameter
of typeI
andII
fiber
was significantly greaterin
both
theHS
&
Heat-Bath
group
andHS
&
IIeat-Plate
groupthan
rheIIS
group,
and the musctefiber
diameter
oftype
I
fiber
in
the
HS
&
Heat-Plate
group was significantlygreater
than thatin
theHS
&
Heat-Bath
group.In
addition,heat
shock protein(HSP)
70
content was significantlyhigher
in
both
theHS
&
Heat-Bath
group
andHS
&
Heat-Plate
groupthan
the
HS
greup,
but
the
difference
between
these2
groups was not significant,Based
onthese
findings,
evenlocal
heating,
i.e.
withan electrica]