YAKUGAKU ZASSHI Advance Publication by J-STAGE DOI: /yakushi Advance Publication June 15, 2016 誌名 :YAKUGAKU ZASSHI 論文種別 :Regular Articl

誌 名 ： YAKUGAKU ZASSHI 論 文 種 別 ： Regular Article

表 題

有 機 酸 お よ び 金 属 塩 を 含 有 し た 高 頻 度 接 触 面 消 毒 用 ア ル コ ー ル 製 剤 MR13B15 の 環 境 用 消 毒 剤 と し て の 有 用 性

Usability of an alcohol disinfectant containing organic acids and metal salt for environmental surfaces.

著 者

奥 西 淳 二^*， 長 原 弘 毅 ， 辻 谷 久 美 子 ， 松 瀬 仁 ， 久 川 和 之 ， 曽 我 学 Junji Okunishi, Hironori Nagahara, Kumiko Tsujitani, Hitoshi Matsuse, Kazuyuki Kugawa, Manabu Soga

所 属 丸 石 製 薬 株 式 会 社 研 究 開 発 本 部

538-0042 大 阪 府 大 阪 市 鶴 見 区 今 津 中 2-2-18

Maruishi Pharmaceutical Co., Ltd., Pharmaceutical Research and Develop Division

2-2-18, Imazunaka, Tsurumi-ku, Osaka 538-0042, Japan

* E-mail: [email protected]

YAKUGAKU ZASSHI Advance Publication by J-STAGE DOI:10.1248/yakushi.16-00002

Advance Publication June 15, 2016

Environmental cleaning and disinfection plays an important role as a part of the standard precautions to prevent healthcare-associated infections, whereas hand hygiene is one of the most important strategies for breaking the chain of transmission. Cleaning and disinfection of high-touch areas in a health-care facility is emphasized. And wiping with an

alcohol-saturated cloth which has features such as low corrosion and a wide range of antimicrobial activity is performed commonly for this purpose.

Although alcohol provides immediate activity against enveloped viruses, its virucidal activity against certain non-enveloped viruses, including norovirus, is insufficient. We created a novel alcohol-based hand rub, MR06B7, which is safe for the skin, and is active against an extended spectrum of microorganisms including non-enveloped viruses. For

environmental surface disinfection, a novel disinfectant MR13B15, which is based on MR06B7, has been developed.

In vitro

antimicrobial activity against a variety of pathogens, material compatibility, and simulated surface disinfection and decontamination efficacy of MR13B15 were investigated.

According to the results, MR13B15 demonstrated potent bactericidal, fungicidal, mycobactericidal, and virucidal activity within a short contact time in addition to superior efficacy against non-enveloped viruses compared to ethanol for disinfection. Moreover, MR13B15 showed better material compatibility. Two simulation tests conducted for evaluating the disinfection and decontamination potency on environmental surfaces against feline calicivirus, a surrogate for norovirus, indicated that MR13B15 had superior efficacy for surface treatment compared to ethanol. These findings suggest that MR13B15, which satisfies most requirements of an environmental surface disinfectant, may contribute to accomplishing advanced standard precautions in preventing infections.

Key words-virucidal activity; environmental surface; alcohol disinfection;

material compatibility

緒 言

近 年 ，国 内 で は 腸 管 出 血 性 大 腸 菌 に よ る 食 中 毒 や 新 型 イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス の パ ン デ ミ ッ ク ， 海 外 で は 中 東 呼 吸 器 症 候 群 や エ ボ ラ ウ イ ル ス 感 染 症 と い っ た 様 々 な 感 染 症 の 流 行 が 発 生 し ，感 染 対 策 は 医 療 現 場 に 加 え て ，交 通 機 関 や 学 校 の よ う な 公 共 施 設 ，高 齢 者 介 護 施 設 ，一 般 家 庭 に お い て も 重 要 視 さ れ て い る ．最 も 基 本 的 な 感 染 対 策 で あ る 手 指 衛 生 は ，厚 生 労 働 省 の「 医 療 機 関 等 に お け る 院 内 感 染 対 策 に つ い て 」・「 高 齢 者 介 護 施 設 に お け る 感 染 対 策 マ ニ ュ ア ル 」・「 保 育 所 に お け る 感 染 症 対 策 ガ イ ド ラ イ ン 」，世 界 保 健 機 構（ WHO，World Health Organization）

の 「 WHO Guidelines on Hand Hygiene in Health Care」， 米 国 疾 病 予 防 管 理 セ ン タ ー （ CDC， Centers for Disease Control and Prevention） の 「 Guideline for Hand Hygiene in Health-Care Settings」な ど で 適 時 の 実 施 が 推 奨 さ れ て い る ^{1 - 6 )}． 手 指 衛 生 に 用 い ら れ る ア ル コ ー ル ベ ー ス の 擦 式 手 指 消 毒 薬 は ，水 道 設 備 が 不 要 で 短 時 間 に 消 毒 で き る こ と に 加 え て ，保 湿 剤 な ど が 配 合 さ れ い る 製 品 は 石 鹸 で の 手 洗 い よ り も 手 荒 れ し に く い こ と ^{5 )}か ら ，頻 回 に 消 毒 を 行 う 必 要 の あ る 医 療 従 事 者 に 汎 用 さ れ て い る ．し か し ，擦 式 手 指 消 毒 薬 の 有 効 成 分 の 1 つ で あ る ア ル コ ー ル は 幅 広 い 微 生 物 に 対 し て 有 効 性 を 示 す も の の ，細 菌 芽 胞 や 一 部 の ノ ン エ ン ベ ロ ー プ ウ イ ル ス に 対 し て は 十 分 な 効 果 が 期 待 で き な い ^{7 )}こ と か ら ，状 況 に 応 じ て 石 鹸 手 洗 い も 併 用 さ れ て い る ．ノ ン エ ン ベ ロ ー プ ウ イ ル ス で 感 染 性 胃 腸 炎 の 原 因 と な る ノ ロ ウ イ ル ス は ， ア ル コ ー ル に よ る 消 毒 効 果 が 直 接 的 に は 確 認 さ れ て お ら ず ， 近 縁 の 代 替 ウ イ ル ス を 使 っ た 報 告 で も 十 分 な 効 果 が 確 保 で き な い 場 合 が あ り ，米 国 CDC は ガ イ ド ラ イ ン で ノ ロ ウ イ ル ス の 感 染 対 策 に は 石 鹸 手 洗 い を 手 指 衛 生 の 第 1 選 択 と し て い る ^{8 )}．こ れ ま で に 我 々 は ，エ タ ノ ー ル を 有 効 成 分 と し て 有 機 酸 ， 金 属 塩 ， 保 湿 剤 な ど を 配 合 し た 処 方 MR06B7 が ， ノ ロ ウ イ ル ス の 代 替 ウ イ ル ス で あ る ネ コ カ リ シ ウ イ ル ス や マ ウ ス ノ ロ ウ イ ル ス ，ロ タ ウ イ ル ス ，ア デ ノ ウ イ ル ス 等 の 各 種 ノ ン エ ン ベ ロ ー プ ウ イ ル ス を 短 時 間 で 不 活 化 で き る こ と を 確 認 し た ．こ れ に 加 え て ，擦 式 手 指 消 毒 薬 と し て の 実 使 用 を 想 定 し た 有 効 性 評 価 お よ び 安 全 性 に 関 す る 評 価 を 行 い 報 告 し た ^{9 , 1 0 )}．現 在 で は こ の 技 術 を 応 用 し た 擦 式 手 指 消 毒 薬 が 医 療 現 場 を 中 心 に 使 用 さ れ て い る ．

患 者 か ら 患 者 ， あ る い は 環 境 か ら 患 者 へ の 病 原 微 生 物 の 伝 播 を 防 ぐ た め に は ， 感 染 経 路 と な る 手 指 の 消 毒 が 最 も 重 要 で あ る ．し か し ，手 指 衛 生 が 必 要 な 機 会 に

実 際 に 行 っ た 割 合 を 示 す 遵 守 率 は ， WHO の ガ イ ド ラ イ ン で 平 均 38.7%^{4 )}， 日 本 国 内 の 多 施 設 共 同 研 究 で は 19%^{1 1 )}に と ど ま っ て い る ．こ の よ う な 中 で 感 染 リ ス ク を 減 ら す た め に は 感 染 経 路 を 遮 断 す る 目 的 で 行 う 手 指 衛 生 の 徹 底 に 加 え て ，感 染 源 に 存 在 す る 病 原 微 生 物 自 体 の 量 を 減 ら す と い っ た 総 合 的 な 対 策 が 必 要 で あ る ．環 境 中 に は 多 様 な 微 生 物 が 存 在 し て い る が ，日 常 的 に 手 が 触 れ な い 床 や 壁 な ど に 付 着 し て い る 微 生 物 が 直 接 的 に 感 染 源 と な る 可 能 性 は 低 い と い わ れ て い る ^5,12-13)． 一 方 ，メ チ シ リ ン 耐 性 黄 色 ブ ド ウ 球 菌（ MRSA）や バ ン コ マ イ シ ン 耐 性 腸 球 菌（ VRE），

ノ ロ ウ イ ル ス や ロ タ ウ イ ル ス と い っ た 病 原 微 生 物 は ，ド ア ノ ブ や 照 明 ス イ ッ チ な ど の 高 頻 度 に 手 が 触 れ る 環 境 表 面 （ 高 頻 度 接 触 面 ）， あ る い は ベ ッ ド レ ー ル や オ ー バ ー テ ー ブ ル と い っ た 患 者 周 辺 環 境 か ら 検 出 さ れ や す く ，環 境 表 面 に 付 着 し た 微 生 物 は 数 日 か ら 数 ヶ 月 間 生 存 し 続 け る こ と か ら ，こ の よ う な 場 所 は 日 常 的 な 清 掃 と 必 要 に 応 じ て 消 毒 す る こ と が 推 奨 さ れ て い る ^1,2,14-16)． 環 境 表 面 を 薬 剤 で 消 毒 す る 場 合 ，ア ル コ ー ル や 次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム ，ペ ル オ キ ソ 一 硫 酸 水 素 カ リ ウ ム ，四 級 ア ン モ ニ ウ ム 塩 ，両 性 界 面 活 性 剤 な ど が 使 用 さ れ て お り ，そ れ ぞ れ の 製 剤 の 適 応 ，消 毒 す る 材 質 や 周 囲 へ の 影 響 ，お よ び 消 毒 し た い 微 生 物 の 薬 剤 感 受 性 な ど を 考 慮 し て 選 択 す る ．特 に ア ル コ ー ル は 高 頻 度 接 触 面 を 中 心 と し た 環 境 消 毒 に 汎 用 さ れ て お り ，公 的 な 通 知 や 種 々 の ガ イ ド ラ イ ン で も 使 用 が 推 奨 さ れ る な ど ， そ の 有 用 性 は 高 く 評 価 さ れ て い る ．今 回 我 々 は ，高 頻 度 接 触 面 を 中 心 と す る 環 境 消 毒 用 の ア ル コ ー ル 製 剤 と し て ，エ タ ノ ー ル ，有 機 酸 ，金 属 塩 お よ び 防 錆 剤 を 配 合 す る こ と で 有 効 性 の 向 上 を 図 っ た MR13B15 を 創 出 し ，

in vitro

有 効 性 評 価 と 実 使 用 を 想 定 し た 各 種 評 価 を 行 っ た の で ， 以 下 に 結 果 を 報 告 す る ．

材 料 1. 試 験 薬 剤

試 験 に は MR13B15（ ウ エ ル セ プ ト 高 頻 度 接 触 面 消 毒 用^® （ エ タ ノ ー ル ・ イ ソ プ ロ パ ノ ー ル・乳 酸・ク エ ン 酸 水 和 物・硫 酸 亜 鉛 水 和 物・エ デ ト 酸 ナ ト リ ウ ム 水 和 物 含 有 ）， 丸 石 製 薬 株 式 会 社 ）， 消 毒 用 エ タ ノ ー ル （ 丸 石 製 薬 株 式 会 社 ）， 0.05%

次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム （ 次 亜 塩 0.05%液 「 ヨ シ ダ 」， 吉 田 製 薬 株 式 会 社 ） お よ び 1%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム （ ミ ル ク ポ ン^®， 丸 石 製 薬 株 式 会 社 ） を 使 用 し た ．

2. 微 生 物

細 菌 は

Enterococcus faecalis

ATCC 29212, Vancomycin-resistant

Enterococcus faecalis

ATCC 51299 (VRE),

Staphylococcus aureus

ATCC 6538, Methicillin-resistant

Staphylococcus aureus

ATCC 33591 (MRSA),

Staphylococcus epidermidis

ATCC 12228,

Achromobacter xylosoxidans

RIMD 0101001,

Acinetobacter baumannii

JCM 6841, Multidrug-resistant

Acinetobacter baumannii

ATCC BAA-1605,

Burkholderia cepacia

NBRC 15124,

Chryseobacterium meningosepticum

NBRC 12535,

Citrobacter freundii

NBRC 12681,

Enterobacter cloacae

IID 977,

Escherichia coli

ATCC 25922,

Klebsiella pneumoniae

NBRC 3512,

Proteus mirabilis

NBRC 3849,

Pseudomonas aeruginosa

ATCC 27853, Multidrug-resistant

Pseudomonas aeruginosa

GTC 2017 (MDRP) ,

Salmonella enterica

subsp.

enterica

NBRC 12529,

Serratia marcescens

ATCC 14756,

Stenotrophomonas maltophilia

NBRC 14161 を 使 用 し た ． 抗 酸 菌 は

Mycobacterium avium

RIMD1312004 並 び に 消 毒 薬 の 評 価 に お い て 結 核 菌 (

Mycobacterium tuberculosis

) の 代 替 菌 ^{1 7 )}に 用 い ら れ る

Mycobacterium terrae

JCM 12143 を 使 用 し ， 真 菌 に は

Aspergillus brasiliensis

ATCC 16404 お よ び

Candida albicans

ATCC 10231 を 使 用 し た ．な お ，ATCC 株 は American Type Culture Collection，NBRC 株 は 独 立 行 政 法 人 製 品 評 価 技 術 基 盤 機 構 ，JCM 株 は 理 化 学 研 究 所 バ イ オ リ ソ ー ス セ ン タ ー ，IID 株 ，GTC 株 お よ び RIMD 株 は 日 本 細 菌 学 会 を 通 じ て 東 京 大 学 医 科 学 研 究 所 ，岐 阜 大 学 医 学 研 究 科 お よ び 大 阪 大 学 微 生 物 病 研 究 所 か ら そ れ ぞ れ 購 入 し た ．

ウ イ ル ス は ノ ン エ ン ベ ロ ー プ ウ イ ル ス と し て Feline calicivirus strain F-9 ATCC VR-782 (FCV), Human adenovirus type 5 ATCC VR-5 (ADV-5), Human adenovirus type 8 ATCC VR-1604 (ADV-8), Human rotavirus ATCC VR-2018(HRV), Murine norovirus FLI virus bank #RVB-651(MNV), Poliovirus type 1 LSc-2ab (PV-1)の 6 株 ， エ ン ベ ロ ー プ ウ イ ル ス と し て Herpes simplex virus type 1 ATCC VR-260 (HSV-1), Influenza A virus H1N1 ATCC VR-1469 (IFV)の 2 株 ， 計 8 株 を 使 用 し ， そ れ ぞ れ FCV は CRFK 細 胞 , Adv-5 お よ び Adv-8 は A549 細 胞 , MNV は RAW264.7 細 胞 , PV-1 は HeLa 細 胞 , HRV は MA104 細 胞 , HSV-1 は Vero 細 胞 , IFV は MDCK 細 胞 で 増 殖 さ せ て 実 験 に 使 用 し た ．

3. 素 材 適 合 性 評 価 用 金 属 ・ プ ラ ス チ ッ ク ・ ゴ ム

素 材 適 合 性 評 価 に は ，消 毒 対 象 と な る 高 頻 度 接 触 面 や 環 境 表 面 で 汎 用 さ れ る 材 質 と し て ， 金 属 5 種 （ ス テ ン レ ス 鋼 SUS304， ス テ ン レ ス 鋼 SUS430， ス テ ン レ ス 鋼 SUS420J2， ア ル ミ ニ ウ ム ， 鉄 ）， プ ラ ス チ ッ ク 11 種 （ ポ リ エ チ レ ン ， ポ リ プ ロ ピ レ ン ，ポ リ カ ー ボ ネ ー ト ，ポ リ ス チ レ ン ，ポ リ ア ミ ド ，ABS，ア ク リ ル 樹 脂 ， 塩 化 ビ ニ ル（ 硬 質 ），フ ェ ノ ー ル 樹 脂 ，ポ リ ア セ タ ー ル ，ポ リ エ ス テ ル ），ゴ ム 6 種（ 天 然 ゴ ム ，シ リ コ ン ゴ ム ，フ ッ 素 ゴ ム ，エ チ レ ン・プ ロ ピ レ ン ゴ ム ，塩 化 ビ ニ ル （ 軟 質 ）， ウ レ タ ン ゴ ム ） の 試 験 片 （ 60 mm×15 mm） を 使 用 し た ．

4. 統 計 学 的 解 析

統 計 学 的 な 解 析 に は 「 WINDOWS 版 SAS 前 臨 床 パ ッ ケ ー ジ ver.5.0」 を 用 い た ．

方 法 1.

In vitro

有 効 性

1.1 細 菌 に 対 す る 殺 菌 評 価

既 報 ^{9 )}に 従 い ，供 試 菌 を ト リ プ チ ケ ー ス ソ イ 寒 天 培 地（ BD）で 37℃ ，20-24 時 間 培 養 し た 後 ， 0.1%ペ プ ト ン 生 理 食 塩 水 に 懸 濁 し て 約 1 × 10⁹ colony forming units(CFU)/mL と な る よ う に 調 整 し た ． こ の 菌 液 10 μ L に 試 験 薬 剤 190 μ L を 混 和 し て 所 定 時 間 作 用 さ せ た 後 ，予 め 試 験 薬 剤 の 中 和 を 確 認 し た 条 件（ 100 倍 希 釈 ） で 殺 菌 反 応 を 停 止 し た ． 次 に ， 反 応 停 止 混 液 の 一 部 (＞ 1×10⁵ CFU 相 当 )を 採 取 し て ト リ プ チ ケ ー ス ソ イ ブ ロ ス（ BD）に 接 種 し ，培 養 後 に 菌 の 増 殖 を 目 視 で 判 定 し た ． な お ， 細 菌 に 対 す る 薬 効 基 準 は 初 発 菌 量 か ら の 対 数 減 少 値 (Log₁₀ Reduction; LR)が 5 以 上 (≧ 99．999％ の 殺 菌 に 相 当 )と な る 最 短 の 時 間 と 設 定 し た ．

1.2 抗 酸 菌 に 対 す る 殺 菌 評 価

M. avium

お よ び

M. terrae

を ミ ド ル ブ ル ッ ク 7H10 寒 天 培 地 （ BD） で 37℃ ， 3 週 間 培 養 し た 後 ， 滅 菌 精 製 水 で 約 5×10⁸ CFU/mL と な る よ う に 調 整 し た ． こ の 菌 液 10 μ L に 試 験 薬 剤 190 μ L を 混 和 し て 所 定 時 間 作 用 さ せ た 後 ， ミ ド ル ブ ル ッ

ク 7H9 液 体 培 地 (BD)で 100 倍 希 釈 し て 殺 菌 反 応 を 停 止 し た ．そ の 後 ，一 部 を 寒 天 培 地 に 接 種 し て 培 養 後 に 菌 数 を 測 定 し た ^{9 )}．試 験 薬 剤 の 代 わ り に 精 製 水 を 用 い た 場 合 の 菌 数 を コ ン ト ロ ー ル と し て ， 対 数 減 少 値 LR = Log_{1 0}(コ ン ト ロ ー ル 菌 量 / 殺 菌 反 応 後 菌 量 )の 計 算 式 に 従 っ て 求 め た ． な お ， 対 数 減 少 値 の 算 出 は 後 述 す る 真 菌 ， ウ イ ル ス に つ い て も 同 様 に 行 っ た ．

1.3 真 菌 に 対 す る 殺 菌 評 価

真 菌 の 殺 菌 性 評 価 は 欧 州 標 準 規 格 EN13624^{1 8 )}に 従 っ て 実 施 し た ．ま ず ，マ ル ト エ キ ス ト ラ ク ト 寒 天 培 地 (BD)で

C. albicans

は 30 ℃ ， 2 日 間 ，

A. brasiliensis

は 30 ℃ ， 7 日 間 培 養 し ， ペ プ ト ン 生 理 食 塩 水 で 約 1×10⁷ CFU/mL と な る よ う に 菌 液 を 調 整 し た ． 菌 液 1 mL に 干 渉 物 質 （ Clean 条 件 の 場 合 は 3 g/L 牛 血 清 ア ル ブ ミ ン (和 光 純 薬 工 業 )， Dirty 条 件 の 場 合 は 30 g/L 牛 血 清 ア ル ブ ミ ン ＋ 30 mL/L 羊 血 球 (日 本 生 物 材 料 セ ン タ ー )） を 1 mL 加 え た 後 ， 試 験 薬 剤 を 8 mL を 加 え て 反 応 さ せ た ．そ の 後 ，所 定 時 間 に 一 部 を 採 取 し て 100 倍 希 釈 す る こ と で 殺 菌 反 応 を 停 止 し た ．こ の 反 応 停 止 混 液 を マ ル ト エ キ ス ト ラ ク ト 寒 天 培 地 で 培 養 し て 菌 数 を 求 め た ．

1.4 ウ イ ル ス に 対 す る 不 活 化 評 価

ウ イ ル ス 不 活 化 の 評 価 は ，ウ イ ル ス 液 と 試 験 薬 剤 を FCV, MNV, HRV で は 1:9^{1 9 )}， そ れ 以 外 の ウ イ ル ス で は 1:19 の 比 率 で 混 和 し て 反 応 ^{9 )}さ せ た ． そ の 後 ， 所 定 の 時 間 に 一 部 を 採 取 し て ，予 め 試 験 薬 剤 の 不 活 化 が 確 認 さ れ た 倍 率 ま で 希 釈 す る こ と で 不 活 化 反 応 を 停 止 さ せ た ．こ の 反 応 停 止 液 を 段 階 希 釈 後 に 宿 主 細 胞 へ 感 染 さ せ ，CO₂イ ン キ ュ ベ ー タ ー で 培 養 後 に 生 じ た 細 胞 変 性 効 果 (CPE)か ら 50%組 織 培 養 感 染 価 (Tissue Culture Infectious Dose(TCID_{5 0}))を 算 出 し て ウ イ ル ス 感 染 力 価 と し た ．

2. 実 使 用 を 想 定 し た 評 価 2.1 素 材 適 合 性 評 価

前 処 理 と し て ，金 属 は 表 面 を 精 製 水 で 洗 浄 後 に 石 油 ベ ン ジ ン (キ シ ダ 化 学 )お よ び エ タ ノ ー ル (99.5v/v%以 上 ，和 光 純 薬 工 業 )で 拭 い た ．プ ラ ス チ ッ ク お よ び ゴ ム

は 精 製 水 で 洗 浄 後 ， 表 面 の 水 分 を 拭 き 取 っ て 乾 燥 さ せ た ． 次 に ， MR13B15， 消 毒 用 エ タ ノ ー ル ，あ る い は 0.05%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム を 入 れ た バ イ ア ル に 各 素 材 の 下 部 約 1/2 を 浸 漬 さ せ ， 25℃ に 保 存 し ， 15 分 お よ び 7 日 間 経 過 し た 時 点 で 素 材 の 外 観 を 目 視 で 観 察 し た ．

2.2 表 面 付 着 ウ イ ル ス の 不 活 化 評 価

環 境 表 面 な ど で 付 着 状 態 に あ る 微 生 物 に 薬 液 を 作 用 さ せ た 場 合 の 有 効 性 を 評 価 す る た め ， 米 国 環 境 保 護 庁 （ EPA, Environmental Protection Agency） が 公 開 し て い る 非 多 孔 質 硬 質 表 面 の 消 毒 効 果 評 価 試 験 ^{2 0 )}に 準 じ て MR13B15，消 毒 用 エ タ ノ ー ル お よ び 0.1%に 調 整 し た 次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム の FCV に 対 す る 効 果 を 調 べ た ．

CRFK 細 胞 で 増 殖 さ せ た FCV の ウ イ ル ス 液 200 μ L を キ ャ リ ア ー（ 10 cm 滅 菌 ガ ラ ス シ ャ ー レ ） の 底 面 に 均 一 に 塗 り 広 げ ， 室 温 に て 30 分 間 乾 燥 さ せ た ． ウ イ ル ス 液 を 付 着 さ せ た キ ャ リ ア ー に 2 mL の 試 験 薬 剤 を 加 え ， 所 定 時 間 接 触 さ せ た 後 に 予 め 確 認 し て お い た 反 応 停 止 条 件 （ 18 mL の 液 体 培 地 添 加 （ 次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム は チ オ 硫 酸 ナ ト リ ウ ム 溶 液 ）） で 不 活 化 反 応 を 停 止 さ せ た ． 次 に セ ル ス ク レ ー パ ー を 用 い て キ ャ リ ア ー 表 面 の ウ イ ル ス を 擦 り 取 り ，回 収 し た 反 応 停 止 液 を 段 階 希 釈 後 に 細 胞 へ 感 染 さ せ た ．こ の 細 胞 を 培 養 し て 生 じ た CPE か ら ウ イ ル ス 感 染 力 価 を TCID_{5 0}と し て 求 め た ．実 験 は 4 回 繰 り 返 し 行 い ，試 験 薬 剤 の 代 わ り に 液 体 培 地 を 用 い て 同 様 に 操 作 し た コ ン ト ロ ー ル 値 と 試 験 薬 剤 作 用 後 の 値 か ら 対 数 減 少 値 を 算 出 す る と 共 に ,Welch の 検 定 で 統 計 学 的 に 解 析 し た ．

2.3 消 毒 薬 を 用 い た 清 拭 に よ る 表 面 付 着 ウ イ ル ス の 減 少 効 果

ア ル コ ー ル 製 剤 を 含 む 消 毒 薬 の 多 く は ，作 業 者 へ の 安 全 確 保 と 薬 液 を 確 実 に 接 触 さ せ る た め ，広 範 囲 の 噴 霧 や 散 布 は 行 わ ず に 薬 液 を 含 浸 さ せ た ガ ー ゼ や 不 織 布 な ど で 清 拭 す る 1 , 6 , 1 2 )． そ こ で ， 拭 き 取 り に よ る 物 理 的 な 除 去 効 果 も 合 わ せ て 評 価 が 可 能 な 米 国 EPA の ウ イ ル ス 不 活 化 評 価 法 ^{2 1 ）}に 準 じ て ，MR13B15，消 毒 用 エ タ ノ ー ル お よ び 0． 1％ 次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム で 拭 き 取 り 操 作 を 行 っ た 場 合 の FCV に 対 す る 効 果 を 調 べ た ．

CRFK 細 胞 で 増 殖 さ せ た FCV の ウ イ ル ス 液 100 μ L を キ ャ リ ア ー （ 10cm 滅 菌 ガ

ラ ス シ ャ ー レ ）の 底 面 中 央 1 イ ン チ 四 方 に 均 一 に 塗 り 広 げ ，表 面 が 乾 燥 す る ま で 1 時 間 前 後 室 温 の 安 全 キ ャ ビ ネ ッ ト 内 で 乾 燥 さ せ た ． な お ， 1 回 の 評 価 に は 1 試 験 薬 剤 あ た り 10 枚 の 汚 染 シ ャ ー レ を 作 製 し た ． ウ イ ル ス 液 が 乾 燥 し た こ と を 確 認 し ， 試 験 薬 剤 10 mL を 含 浸 さ せ た ガ ー ゼ （ 30 cm×30 cm， 白 十 字 株 式 会 社 ） で 汚 染 部 位 を 右 か ら 左 に 3 回 ，上 下 に 往 復 3 回 拭 い た ．そ の 後 ，同 じ ガ ー ゼ を 使 っ て 新 た な 汚 染 シ ャ ー レ の 拭 き 取 り を 行 い ，こ れ を 繰 り 返 し て 1 枚 の ガ ー ゼ で 合 計 10 枚 の 汚 染 シ ャ ー レ を 処 理 し た ．拭 き 取 り 終 わ っ た シ ャ ー レ は 15 秒 間 放 置 し た 後 ， 予 め 確 認 し て お い た 反 応 停 止 条 件 （ 10 mL の 液 体 培 地 添 加 （ 次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム は チ オ 硫 酸 ナ ト リ ウ ム 溶 液 ）） で 反 応 を 停 止 し た ． 以 後 の ウ イ ル ス 回 収 と 感 染 力 価 の 測 定 は 2.2 表 面 付 着 ウ イ ル ス の 不 活 化 評 価 と 同 様 に 行 っ た ．実 験 は 3 回 繰 り 返 し 行 い ，無 処 理 の 汚 染 シ ャ ー レ か ら 回 収 し た ウ イ ル ス 感 染 力 価 を コ ン ト ロ ー ル 値 と し て ，試 験 薬 剤 で 拭 き 取 り 後 の 残 存 ウ イ ル ス 感 染 力 価 か ら 対 数 減 少 値 を 算 出 し た ． そ の 後 , Student の t 検 定 を 用 い て 統 計 学 的 な 解 析 を 行 っ た ．

ま た ，ノ ロ ウ イ ル ス の 感 染 対 策 と し て 医 療 機 関 の 高 頻 度 接 触 面 消 毒 に 消 毒 用 エ タ ノ ー ル を 用 い る 場 合 は ， 清 拭 し て 15 秒 間 程 度 経 過 後 に ふ た た び 清 拭 を 行 う こ と が 望 ま し い ^{6 )}と さ れ て い る こ と か ら ， エ タ ノ ー ル で は 同 一 の 汚 染 シ ャ ー レ を 15 秒 間 の 間 隔 を あ け て 2 回 ず つ 清 拭 し た 後 の 残 存 ウ イ ル ス 量 に つ い て も 予 備 的 に 測 定 し た ．

結 果 1.

in vitro

有 効 性

MR13B15 の 各 種 微 生 物 に 対 す る 薬 効 を 調 べ る た め ，

in vitro

で MRSA, VRE お よ び MDRP を 含 む 細 菌 20 株 ，抗 酸 菌 2 株 ，真 菌 と し て 酵 母 様 真 菌 お よ び 糸 状 菌 各 1 株 ，ウ イ ル ス 8 株 を 用 い た 有 効 性 評 価 を 行 っ た ．そ の 結 果 ，細 菌 に 対 し て は 全 て の 菌 株 で 約 1×10⁵ CFU の 菌 を 15 秒 以 内 に 殺 菌 し た （ Table 1）． ま た ， 抗 酸 菌 で あ る

M. terrae

や 酵 母 様 真 菌 の

C. albicans

に 対 し て も 15 秒 以 内 に LR≧ 4（ 99.99%

以 上 の 殺 菌 に 相 当 ）の 優 れ た 殺 菌 効 果 を 示 し ，糸 状 菌 の

A. brasiliensis

胞 子 に 対 し て は 有 機 物 で あ る ウ シ 血 清 ア ル ブ ミ ン や ヒ ツ ジ 血 球 等 の 存 在 下 で も 30 秒 で LR≧ 2， 60 秒 で ≧ 4 と な り ， い ず れ も 汎 用 消 毒 薬 で あ る 消 毒 用 エ タ ノ ー ル と 同 等 の 有 効 性 を 示 し た （ Table 2 お よ び 3）． ま た ， MR13B15 は エ ン ベ ロ ー プ を 有 す る

HSV や IFV， お よ び ノ ン エ ン ベ ロ ー プ ウ イ ル ス の 一 部 に 対 し て も 消 毒 用 エ タ ノ ー ル と 同 様 に 作 用 後 直 ち に LR ≧ 4 と な り ， 優 れ た ウ イ ル ス 不 活 化 効 果 を 示 し た

（ Table 4）．こ れ に 加 え て MR13B15 で は ，消 毒 用 エ タ ノ ー ル で は 不 活 化 に 時 間 を 要 す る Adv-5 や Adv-8，FCV，PV-1 な ど の ノ ン エ ン ベ ロ ー プ ウ イ ル ス に 対 し て も ， す み や か に LR≧ 4 と な っ た ．

2. 実 使 用 を 想 定 し た 評 価 2.1 素 材 適 合 性 評 価

MR13B15 の 素 材 適 合 性 を 調 べ る た め ， 5 種 類 の 金 属 ， 11 種 類 の プ ラ ス チ ッ ク ， 6 種 類 の ゴ ム の 試 験 片 を 試 験 薬 剤 に 浸 漬 し ， 15 分 後 と 7 日 目 に 外 観 を 観 察 し た ． そ の 結 果 ，金 属 で は 3 種 の ス テ ン レ ス 鋼 お よ び ア ル ミ ニ ウ ム を MR13B15 に 浸 漬 し た こ と に よ る 外 観 の 変 化 は 認 め ら れ ず ，鉄 の み 変 色 が 生 じ た も の の 消 毒 用 エ タ ノ ー ル で も 同 様 の 傾 向 を 示 し て い た (Table 5)．ま た ，0.05%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム で は 鉄 を 15 分 ， ス テ ン レ ス 鋼 SUS420J2 を 7 日 間 浸 漬 さ せ た 場 合 に 変 色 を 認 め ， 金 属 に 対 す る 影 響 は MR13B15 や 消 毒 用 エ タ ノ ー ル よ り も 大 き か っ た ．次 に プ ラ ス チ ッ ク に 対 し て は ， 0.05%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム に 7 日 間 浸 漬 後 の フ ェ ノ ー ル 樹 脂 に 変 色 を 認 め た が ， そ れ 以 外 の 全 て の 組 み 合 わ せ で 変 化 は 認 め ら れ な か っ た ． ゴ ム に 対 し て は 0.05%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム に 7 日 間 浸 漬 さ せ た 場 合 に フ ッ 素 ゴ ム を 除 く 5 種 類 の 試 験 片 で 変 化 を 認 め た ．ま た ，MR13B15 と 消 毒 用 エ タ ノ ー ル は 天 然 ゴ ム と エ チ レ ン・プ ロ ピ レ ン ゴ ム の 2 種 類 の み に 変 化 を 認 め た が ，こ れ ら は 0.05%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム と 比 較 し て 軽 微 で あ っ た ．

2.2 表 面 付 着 ウ イ ル ス の 不 活 化 評 価

キ ャ リ ア ー 表 面 に 付 着 さ せ た FCV に 対 す る MR13B15，消 毒 用 エ タ ノ ー ル お よ び 0.1%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム の 不 活 化 効 果 を 調 べ た 結 果 ，MR13B15 と 0.1%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム は 15 秒 間 の 作 用 で 米 国 EPA が 定 め る 薬 効 基 準（ LR≧ 4）の 不 活 化 効 果 を 示 し た が ，消 毒 用 エ タ ノ ー ル は 30 秒 作 用 さ せ て も LR が 0．94 で あ っ た（ Fig.

1）．

2.3 消 毒 薬 を 用 い た 清 拭 に よ る 表 面 付 着 ウ イ ル ス の 減 少 効 果

MR13B15，消 毒 用 エ タ ノ ー ル あ る い は 0.1%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム を 含 浸 さ せ た 試 験 布 を 用 い て ，FCV で 汚 染 さ せ た キ ャ リ ア ー 表 面 を 拭 き 取 っ た 後 ，各 キ ャ リ ア ー 表 面 に 残 存 す る ウ イ ル ス 量 を 測 定 し た ．そ の 結 果 ，MR13B15 と 0.1%次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム で は LR≧ 4 の ウ イ ル ス 減 少 効 果 を 示 し ，消 毒 用 エ タ ノ ー ル（ LR＝ 2.65）

よ り も 高 い 効 果 を 認 め た ．ま た ，消 毒 用 エ タ ノ ー ル で の 2 回 拭 き を 想 定 し た 評 価 で は LR＝ 3.50 と 1 回 拭 き と 比 較 し て 効 果 の 増 強 を 認 め た （ Fig. 2）．

考 察

感 染 対 策 は 一 般 家 庭 や 教 育 施 設 ，高 齢 者 介 護 施 設 と い っ た 様 々 な 場 所 で 行 わ れ て い る が ,免 疫 疾 患 や 疾 病 治 療 に よ っ て 免 疫 力 が 低 下 し た 易 感 染 性 の 患 者 が 存 在 す る 医 療 現 場 で は 特 に 徹 底 が 求 め ら れ る ．過 去 に は 医 療 関 連 感 染 を 防 ぐ た め に 病 室 や 手 術 室 な ど の 医 療 環 境 を 高 水 準 消 毒 薬 で 噴 霧 消 毒 す る と い っ た こ と が 一 般 的 に 行 わ れ て い た ． し か し ， 医 療 環 境 の 管 理 に 関 し て ， 2003 年 の 「 医 療 施 設 に お け る 環 境 感 染 管 理 の た め の CDC ガ イ ド ラ イ ン 」で も 述 べ ら れ て い る よ う に ，通 常 手 が 触 れ な い 床 や 壁 な ど に 付 着 し て い る 微 生 物 が 直 接 的 に 医 療 関 連 感 染 を 生 じ る と い う 可 能 性 は ほ と ん ど な い こ と か ら ，現 在 は ル ー チ ン で の 病 室 や 手 術 室 の 床 な ど を 対 象 に し た 噴 霧 消 毒 は 行 わ れ な く な っ て い る 5 , 1 2 , 1 3 ）．同 ガ イ ド ラ イ ン で は 通 常 掃 除 を 行 う 床 や 壁 は 常 に 目 で 見 て 清 潔 に 保 つ こ と と し つ つ ，病 原 微 生 物 が 伝 播 す る 原 因 と な る 手 が よ く 触 れ る と こ ろ は あ ま り 触 れ な い と こ ろ よ り も 頻 回 に 清 掃・消 毒 を 行 う と い う 高 頻 度 接 触 面 の 消 毒 の 概 念 も 示 さ れ て い る ^{1 2 )}．更 に ， 2007 年 の 「 隔 離 予 防 策 の た め の CDC ガ イ ド ラ イ ン 」 で は ， 標 準 的 な 感 染 予 防 策 に 環 境 表 面 の 日 常 ケ ア ，洗 浄 ，消 毒 の た め の 手 順 を 作 成 す る こ と が 新 た に 追 加 さ れ ， 医 療 環 境 の 適 切 な 管 理 は 感 染 対 策 に 必 要 で あ る こ と と さ れ て い る ^{2 4 )}．

MRSA 患 者 病 棟 を 有 す る 医 療 施 設 に お い て ， 患 者 周 辺 の 環 境 に 触 れ た 医 療 従 事 者 の 7%の 手 指 に は MRSA が 付 着 し て い る こ と ^{2 5 ）}， 並 び に MRSA 患 者 に 直 接 的 な 接 触 を し て い な い 医 療 従 事 者 で も MRSA 患 者 周 辺 の 表 面 に 触 れ る こ と で 装 着 し て い た 手 袋 の 42%か ら MRSA が 検 出 さ れ る こ と ^{2 6 ）}が 報 告 さ れ て お り ，手 指 の 微 生 物 汚 染 に 環 境 表 面 が 関 与 し て い る こ と が 明 ら か に な っ て い る ．ま た ，バ ン コ マ イ シ ン 耐 性 腸 球 菌 (VRE)を 指 標 と し た 研 究 で は ， 清 掃 が 環 境 か ら の VRE 検 出 率 と 患 者 の VRE 感 染 率 を 有 意 に 減 少 さ せ ら れ る こ と ^{2 7 ）}や ， 消 毒 薬 で の 高 頻 度 接 触 面 の 清 拭

が 消 毒 薬 非 含 有 洗 浄 剤 単 独 よ り も 医 療 関 連 感 染 の 発 生 率 を 改 善 し た こ と^{2 8 ）}か ら ， 高 頻 度 接 触 面 を 中 心 と し た 環 境 表 面 の 消 毒 は 対 象 と な る 微 生 物 に 効 果 の 期 待 で き る 消 毒 薬 を 適 切 に 選 択 し て 清 拭 す る こ と が 望 ま し い と 考 え ら れ る ．

今 回 我 々 が 開 発 し た MR13B15 は ，

in vitro

の 有 効 性 評 価 で 細 菌 お よ び 真 菌 を 即 時 的 に 殺 菌 し ， 感 染 性 胃 腸 炎 の 原 因 と な る ノ ロ ウ イ ル ス の 代 替 ウ イ ル ス 2 種

（ FCV，MNV）を 含 め た 各 種 ウ イ ル ス に 対 し て も 優 れ た 不 活 化 効 果 を 示 し た ．一 方 ， 汎 用 さ れ て い る 消 毒 用 エ タ ノ ー ル は ，細 菌 ，真 菌 に 対 し て MR13B15 と 同 等 の 殺 菌 力 を 示 し た が ，一 部 の ノ ン エ ン ベ ロ ー プ ウ イ ル ス に 対 し て は 短 時 間 で 十 分 な 不 活 化 効 果 が 認 め ら れ な か っ た ．

ま た ，環 境 表 面 へ の 適 用 を 想 定 し て ，MR13B15 が 接 触 す る 可 能 性 の 高 い 材 質 に 対 す る 影 響 ， お よ び 付 着 状 態 の ウ イ ル ス に 対 す る 効 果 に つ い て も 検 討 を 行 っ た ． そ の 結 果 ，汎 用 さ れ て い る 金 属 ，プ ラ ス チ ッ ク お よ び ゴ ム に 対 し て ，大 半 の 素 材 で 影 響 を 認 め な か っ た ．MR13B15 へ の 浸 漬 で 影 響 が 認 め ら れ た 場 合 で も そ の 傾 向 は 消 毒 用 エ タ ノ ー ル と 類 似 し て お り ，腐 食 性 が 問 題 と な る 次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム よ り も 顕 著 に 影 響 は 少 な い こ と か ら ，MR13B15 は 幅 広 い 材 質 の 表 面 に 適 用 で き る も の と 考 え ら れ た ．更 に ，表 面 付 着 ウ イ ル ス へ の 直 接 的 な 不 活 化 評 価 ，お よ び 清 拭 に よ る 表 面 付 着 ウ イ ル ス の 減 少 効 果 の 測 定 の い ず れ に お い て も ，MR13B15 お よ び 次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム は 米 国 EPA が 定 め る 薬 効 基 準（ LR≧ 4）を 満 た し て お り ， 薬 効 基 準 を 満 た さ な か っ た 消 毒 用 エ タ ノ ー ル よ り も 優 れ て い た ．よ っ て ，MR13B15 と 次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム は ，環 境 表 面 の ウ イ ル ス を 消 毒 す る た め に 十 分 な 効 果 を 期 待 で き る も の と 考 え ら れ た ．

以 上 の 結 果 よ り ，今 回 環 境 表 面 の 消 毒 目 的 に 開 発 し た MR13B15 は ，最 も 感 染 の リ ス ク が 高 い と 考 え ら れ る 医 療 現 場 に お い て も ，安 全 で 有 効 な 消 毒 薬 と し て 感 染 対 策 に 貢 献 で き る 製 剤 で あ る と 推 察 さ れ る ．

利 益 相 反 奥 西 淳 二（ 丸 石 製 薬 株 式 会 社 の 社 員 ），長 原 弘 毅（ 丸 石 製 薬 株 式 会 社 の 社 員 ），辻 谷 久 美 子（ 丸 石 製 薬 株 式 会 社 の 社 員 ），松 瀬 仁（ 丸 石 製 薬 株 式 会 社 の 社 員 ）， 久 川 和 之 （ 丸 石 製 薬 株 式 会 社 の 社 員 ）， 曽 我 学 （ 丸 石 製 薬 株 式 会 社 の 社 員 ）

REFERENCES

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<https://www.nih-janis.jp/material/material/mhlw_notice_20110617.pdf

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<http://www.mhlw.go.jp/topics/kaigo/osirase/tp0628-1/>, Ministry of Health, Labour and Welfare, cited 18 April, 2016.

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<http://www.mhlw.go.jp/bunya/kodomo/pdf/hoiku02.pdf>, Ministry of Health, Labour and Welfare, cited 18 April, 2016.

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Table 1. Bactericidal activity of MR13B15 and ethanol in suspension.

MR13B15 Ethanol

Gram positive bacteria

E. faecalis ATCC 29212 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

Vancomycin-resistant E. faecalis ATCC 51299 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

S. aureus ATCC 6538 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

Methicillin-resistant S. aureus ATCC 33591 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

S. epidermidis ATCC 12228 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

Gram negative bacteria

A. xylosoxidans RIMD 0101001 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

A. baumannii JCM 6841 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

Multidrug-resistant A. baumannii ATCC BAA-1605 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

B. cepacia NBRC 15124 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

C. meningosepticum NBRC 12535 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

C. freundii NBRC 12681 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

E. cloacae IID 977 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

E. coli ATCC 25922 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

K. pneumoniae NBRC 3512 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

P. mirabilis NBRC 3849 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

P. aeruginosa ATCC 27853 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

Multidrug-resistant P. aeruginosa GTC 2017 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

S. enterica subsp. enterica NBRC 12529 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

S. marcescens ATCC 14756 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

S. maltophilia NBRC 14161 ≦ 15 sec. ≦ 15 sec.

(Inoculation: >10

⁵

CFU)

Bacterial strain Minimal bactericidal time

Table 2. Fungicidal activity of MR13B15 and ethanol in suspension test.

Log

₁₀

Reduction

^b)

MR13B15 Ethanol

15 sec. 30 sec. 60 sec. 15 sec. 30 sec. 60 sec.

Clean ≧ 4.00 ≧ 4.00 N.T. ≧ 4.00 ≧ 4.00 N.T.

Dirty ≧ 4.00 ≧ 4.00 N.T. ≧ 4.00 ≧ 4.00 N.T.

Clean N.T. 2.67 ≧ 4.00 N.T. 2.89 ≧ 4.00

Dirty N.T. 2.56 ≧ 4.00 N.T. 3.02 ≧ 4.00

a) Clean: 0.3 g/L Bovine serum albumin, Dirty: 3 g/L Bovine serum albumins＋3 mL/L Sheep erythrocytes b) N.T.; Not tested.

Fungal strain Condition

^a)

C. albicans ATCC 10231

A. brasiliensis ATCC 16404

Table 3. Mycobactericidal activity of MR13B15 and ethanol in suspension test.

Log

₁₀

Reduction

^a)

MR13B15 Ethanol

15 sec. 30 sec. 60 sec. 15 sec. 30 sec. 60 sec.

M. avium RIMD1312004 3.18 ≧ 4.00 ≧ 4.00 1.81 ≧ 4.00 ≧ 4.00

M. terrae JCM 12143 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00

Mycobacterial strain

Table 4. Virucidal activity of MR13B15 and ethanol in suspension test.

Log

₁₀

Reduction

^a)

MR13B15 Ethanol

15 sec. 30 sec. 60 sec. 15 sec. 30 sec. 60 sec.

Non-enveloped virus

Adenovirus type 5 3.67 ≧ 4.00 ≧ 4.00 2.17 3.50 ≧ 4.00

Adenovirus type 8 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 0.00 0.17 0.67

Feline calicivirus ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 -0.17 0.50 0.67

Murine norovirus ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00

Poliovirus type 1 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 0.84 0.84 1.17

Rotavirus ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 N.T. N.T. N.T.

Enveloped Virus

Herpes simplex virus type 1 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 Influenza A virus H1N1 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 ≧ 4.00 a) N.T.; Not tested.

Viral strain

Table 5. Material compatibility test of MR13B15, ethanol and sodium hypochlorite(NaClO).

Test solution 15 min 7 days

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change Dark gray and yellow dots

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change Gray and yellow

MR13B15 No change Yellow and red

Ethanol No change Dark yellow and red

NaClO Lackluster, yellow and red dots Gray and yellow

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change Dark yellow and red

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change Whitening

Ethanol No change Whitening

NaClO No change Dark green

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change Lackluster

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change No change

MR13B15 No change Lackluster

Ethanol No change Lackluster and whitening

NaClO No change Lackluster and dark green

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change Lackluster

MR13B15 No change No change

Ethanol No change No change

NaClO No change Lackluster and sticky surface Polystyrene

Polyvinyl chloride (Hard)

Rubber

Natural rubber

Silicone

Fluororubber

Ethylene・

propylene rubber

Polyvinyl chloride (Soft)

Urethane rubber

Plastic

ABS

Acrylate

Phenolic resin

Polyamide

Polyacetal resin

Polycarbonate

Polyester

Polyethylene

Polypropylene Material

Metal

Stainless steel SUS304

Stainless steel SUS420J2

Stainless steel SUS430

Alminium

Iron

Figure 1. Virucidal activity of MR13B15, ethanol for disinfection and sodium hypochlorite(NaClO) against FCV in simulated surface disinfection test.

15 sec. 30 sec.

MR13B15 4.69 5.25 0.515388 0.353553 Ethanol 0.63 0.94 0.322749 0.554339

0.00 2.00 4.00

15 sec. 30 sec.

Log

10

re ducti on

MR13B15 Ethanol

p<0.0001

p<0.0001

US-EPA's criteria

15 sec. 30 sec.

MR13B15 4.4375 5.25 0.239357 0.353553 0.1% NaClO 5.9375 5.9375 0.314576 0.314576

0.00 2.00 4.00 6.00

15 sec. 30 sec.

Log

10

reduction _MR13B15

0.1% NaClO

p=0.0004 p=0.0276

US-EPA's criteria

Figure 2. Virucidal activity of MR13B15, ethanol and sodium hypochlorite(NaClO) against FCV in simulated surface decontamination and disinfection efficacy tests.

Average SD

MR13B15 4.59 0.48

Ethanol 2.65 0.35

Ethanol (twice) 3.50 0.11

Sample Log₁₀ reduction

0.00 2.00 4.00

MR13B15 Ethanol Ethanol (twice)

Lo g

10

re duc ti on

p=0.0047

US-EPA's criteria

Average SD

MR13B15 5.03 0.18

0.1% NaClO 5.51 0.59

Sample Log10 reduction

0.00 2.00 4.00 6.00

MR13B15 0.1% NaClO

Lo g

10

re duc ti on

US-EPA's criteria p=0.4515