厚生労働省科学研究委託費（難治性疾患等実用化研究事業
（免疫アレルギー疾患等実用化研究事業 移植医療技術開発研究分野））
委託業務成果報告（業務項目）
マウスモデルを使った HLA 不適合移植後の免疫寛容の誘導に関する検討
担当責任者 前田 嘉信 岡山大学病院 血液・腫瘍内科 講師
研究要旨 悪性疾患に対する根治的治療として同種造血幹細胞移植が行われているが、致死的合 併症である移植片対宿主病（GVHD）は今日なお克服すべき課題である。GVHD は急性
GVHD
と移植後期に発症する慢性GVHD
に大別される。急性GVHD
の基本的な発症メカニズムは次第 に明らかとなってきているが、慢性GVHD
は病態の解明が遅れている。我々は、マウスモデルを 用い、慢性GVHD
の発症時にIL-17
とIFN-を同時に産生する Th17/Th1
細胞が特異的に出現するこ とを明らかにし、Th17
細胞の亜型であるalternative Th17
が慢性GVHD
に関与している可能性が示 唆された。ヒトに対するp40
抗体は、Ustekinumab
としてクローン病や乾癬に対する臨床試験の結 果が報告されているが、alternative Th17
およびTh1
細胞の両方を抑制する目的で、IL-12/IL-23 p40
抗体の有効性を検討した。その結果、p40
抗体を投与した群では、臨床的かつ病理組織学的に慢性GVHD
が有意に軽減された。p40
抗体を投与した群では、IL-17
とIFN-を同時に産生する Th17/Th1
細胞が減少、さらにIL-17
産生細胞におけるT-bet
の発現は低下していたが、ROR-t
の発現はむしろ 増加傾向にあった。p40
抗体は、Th17
がalternative
からより免疫抑制性なclassical Th17
にシフト させることにより慢性GVHD
を軽減させることが示唆された。A . 研 究 目 的
同 種 造 血 幹 細 胞 移 植 は 、 白 血 病 な ど の 悪 性 疾 患 に 対 す る 根 治 的 治 療 と し て 確 立 し て い る が 、 致 死 的 合 併 症 で あ る 移 植 片 対 宿 主 病
（
G V H D
） は 今 日 な お 克 服 す べ き課 題 で あ る 。
G V H D
は 急 性G V H D
と 移 植 後 期 に 発 症 す る 慢 性G V H D
に 大 別 さ れ る 。慢 性G V H D
は 急 性G V H D
と 発 症 時 期 が 異 な る だ け でな く 、 そ の 病 態 も 異 な る と 考 え ら れ て い る 。 我 々 は 、 慢 性
G V H D
の 発 症 にT h 2
細 胞 だ け で な くT h 1
細 胞 とT h 1 7
細 胞 も 関 与 し て い る こ と を 明 ら か に し て き た 。特 にI L - 1 7
とI F N -
を 同 時 に 産 生 す るT h 1 7 / T h 1
細 胞 （a l t e r n a t i v e T h 1 7
） が 特 異 的 に 出 現 し て お り 、T h 1 7
細 胞 の 亜 型 で あ るa l t e r n a t i v e T h 1 7
が 慢 性G V H D
に 関 与 す る 可 能 性 が 示 唆 され た 。
a l t e r n a t i v e T h 1 7
お よ びT h 1
細 胞 の 両 方 を 抑 制 す る 目 的 で 、I L - 1 2 / I L - 2 3 p 4 0
抗 体 の 有 効 性 を 検 討 し た 。 ま た 、 そ の 効 果 の メ カ ニ ズ ム に つ い て も 検 討 し た 。B . 研 究 方 法
ド ナ ー に
B 1 0 . D 2
、 ホ ス ト にB A L B / c
を 使 っ た マ ウ ス 慢 性G V H D
モ デ ル を 作 成 し た 。 骨 髄 幹細 胞 （
T
細 胞 除 去 し たB M 8 x 1 0
6） と 脾 臓 か ら 採 取 し たT
細 胞 （2 x 1 0
6） を5 . 8 G y
照 射 し た マ ウ ス に 移 植 。p 4 0
抗 体 は5 0 0
g
をd a y 0
か ら 投 与 し 、 慢 性G V H D
発 症 が 抑 制 さ れ る か を 検 討 し た 。慢 性
G V H D
は 皮 膚 所 見 の 臨 床 的G V H D
ス コ ア 、 病 理 ス コ ア に て 評価 し 、
T h
細 胞 へ の 影 響 は 、 細 胞 内 サ イ ト カ イ ン 、 お よ びT - b e t
とR O R
t
の 発 現 をF A C S
に て 解 析 し た 。本 実 験 計 画 は 岡 山 大 学 実 験 動 物 実 験 委 員 会 に 承 認 済 み で あ る 。 す べ て の 実 験 動 物 は 動 物 愛 護 の 観 点 か ら 、 計 画 的 に で き る だ け 少 な い 個 体 数 で の 実 験 と し た 。
C . 研 究 結 果
p 4 0
抗 体 を 投 与 し た 群 は 、 慢 性G V H D
発 症 が 臨 床 的 ス コ ア 、皮 膚 、唾 液 腺 の 病 理 ス コ ア が 有 意 に 改 善 し た 。 ま た 、 移 植 後
1 5
日 目 の 慢 性G V H D
が 発 症 す る 時 期 か ら の 投 与で も 軽 減 さ せ る こ と が わ か り 治 療 と し て の 有 効 性 が 示 唆 さ れ た 。
Days after BMT
Skin Score
0 1 2 3 4
0 10 20 30 40
**
Anti-p40 mAb Allo+Rat IgG
Allo+Anti-p40 Syn
移 植 後
2 8
日 目 の ド ナ ーT
細 胞 をF A C S
に て 解 析 し た 結 果 、T h 1
細胞 の 抑 制 と と も に
I N F -
/ I L - 1 7
同 時 に 産 生 細 胞 （a l t e r n a t i v e T h 1 7
） が 有 意 に 減 少 し て い た 。 一 方 、I L - 1 7
単 独 陽 性 の 細 胞 は 減 少 し て お ら ず 、R O R
t
も 抑 制 さ れ て い な か っ た 。 一 方 、T - b e t
の 発 現 は 低下 、 皮 膚 浸 潤 し て い る ド ナ ー 細 胞 も
I F N -
の 産 生 が 低 下 し て お り 、a l t e r n a t i v e T h 1 7
細 胞 が 抑 制 さ れ て い る 所 見 を 支 持 す る 結 果 で あ っ た 。以 上 か らp 4 0
抗 体 に よ りI L - 1 2
お よ びI L - 2 3
を 介 し た 経 路 を 遮 断 す る こ と に よ り 慢 性G V H D
が 抑 制 さ れ る こ と が 示 唆 さ れ た 。D . 考 察
p 4 0
抗 体 に よ りI N F -
/ I L - 1 7
同 時 産 生 細 胞 （a l t e r n a t i v e T h 1 7
） が 有 意 に 減 少 し て お り 、I L - 1 7 単 独 陽 性 のc l a s s i c a l T h 1 7
細 胞 は 減 少 し て い な い こ と か ら 、 全 て のT h 1 7
細 胞 で は な く 、s u b s e t
を 抑 制 す る こ と で 慢 性G V H D
が 制 御 で き る 可 能 性 が 示 唆 さ れ た 。I L - 1 2
お よ びI L - 2 3
を 介 し た 経 路 が 今 後 、 慢 性G V H D
の 治 療 標 的 と な り 得 る こ とが 明 ら か と な っ た 。
*
0 0.5 1 1.5 2 2.5
CD4
+IL-17
+T-bet
+(% )
Syn IgG Anti-p40
E . 結 論
p 4 0
抗 体 に よ りT h 1
お よ びa l t e r n a t i v e T h 1 7
が 抑 制 さ れ 、慢 性G V H D
が 改 善 し た 。 今 後 、 慢 性G V H D
の 治 療 薬 と し て の 効 果 が 期待 さ れ る 。
F . 健 康 危 険 情 報
特 に な し 。
G .研 究 発 表 1 . 論 文 発 表
1 )
O k a m o t o S , F u j i w a r a H ,N i s h i m o r i H , M a t s u o k a K , F u j i i N , K o n d o E , T a n a k a T ,
Y o s h i m u r a A , T a n i m o t o M , M a e d a Y . A n t i - I L - 1 2 / 2 3 p 4 0 a n t i b o d y a t t e n u a t e s e x p e r i m e n t a l c h r o n i c g r a f t v e r s u s h o s t d i s e a s e v i a s u p p r e s s i o n o f I F N -γ / I L- 1 7 - p r o d u c i n g c e l l s . J I m m u n o l. 2 0 1 5 i n p r e s
s
2 ) S u g i y a m a H , M a e d a Y , N i s h i m o r i H , Y a m a s u j i Y , M a t s u o k a K , F u j i i N , K o n d o E , S h i n a g a w a K , T a n a k a T , T a k e u c h i K , T e s h i m a T , a n d T a n i m o t o M . m T O R
i n h i b i t o r s p e r m i t r e g u l a t o r y T c e l l r e c o n s t i t u t i o n a n d i n h i b i t c h r o n i c G V H D . B i o l B l o o d M a r r o w T r a n s p l a n t.
2 0 1 4 ; 2 0 ( 2 ) : 1 8 3 - 9 1 .
3 ) M a e d a Y , P a t h o g e n e s i s o f g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e : i n n a t e
i m m u n i t y a m p l i f y i n g a c u t e a l l o i m m u n e r e s p o n s e s . I n t J H e m a t o l . 2 0 1 3 ; 9 8 ( 3 ) : 2 9 3 - 9 .
4 ) N i s h i m o r i H , M a e d a Y , T a n i m o t o M . C h r o n i c g r a f t - v e r s u s - h o s t
d i s e a s e : d i s e a s e b i o l o g y a n d n o v e l t h e r a p e u t i c s t r a t e g i e s . A c t a M e d O k a y a m a. 2 0 1 3 ; 6 7 ( 1 ) : 1 - 8
5 ) N i s h i m o r i H , M a e d a Y , T e s h i m a T , S u g i y a m a H , K o b a y a s h i K , Y a m a s u j i Y , K a d o h i s a S , U r y u H , T a k e u c h i K , T a n a k a T , Y o s h i n o T , I w a k u r a Y , a n d T a n i m o t o M .
S y n t h e t i c R e t i n o i d A m 8 0 A m e l i o r a t e s C h r o n i c G r a f t - V e r s u s - H o s t D i s e a s e b y
D o w n r e g u l a t i n g T h 1 a n d T h 1 7 B l o o d. 1 1 9 ( 1 ) : 2 8 5 - 9 5 , 2 0 1 2
2 . 学 会 発 表
1 ) T a i g a K u r o i , S a c h i y o O k a m o t o , K y o s u k e S a e k i , Y u j i n K o b a y a s h i , H i s a k a z u N i s h i m o r i , H i d e a k i F u j i w a r a , K e n - i c h i M a t s u o k a , N o b u h a r u F u j i i , E i s e i K o n d o , M i t s u n e T a n i m o t o , Y o s h i n o b u M a e d a A n t i - I L - 1 2 / 2 3 p 4 0 A n t i b o d y A t t e n u a t e s C h r o n i c G r a f t V e r s u s H o s t D i s e a s e V i a S u p p r e s s i o n o f I F N -γ / I L- 1 7 - P r o d u c i n g C e l l s A m e r i c a n S o c i e t y o f H e m a t o l o g y 5 6 t h A n n u a l M e e t i n g , S a n F r a n c i s c o D e c e m b e r 5 , 2 0 1 4
2 ) F u j i w a r a H , M a e d a Y , K o b a y a s h i K , N i s h i m o r i H , N i s h i n o h a r a M , O k a m o t o S , M a t s u o k a K , K o n d o E , F u j i i N , S h i n a g a w a K , T a n i m o t o M . P D - 1 p a t h w a y o f d o n o r s a n d
r e c i p i e n t s m o d u l a t e c h r o n i c g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e t h r o u g h T h 1 a n d T h 1 7 i n m o u s e m o d e l . 日 本 造 血 幹 細 胞 移 植 学 会 2 0 1 4 3 / 7 - 9 沖 縄 3 ) H F u j i w a r a , K K o b a y a s h i , H
N i s h i m o r i , M N i s h i n o h a r a , S O k a m o t o , K M a t s u o k a , E K o n d o , N F u j i i , K S h i n a g a w a , M
T a n i m o t o a n d Y M a e d a .
C o n t r i b u t i o n o f t h e P D - 1 - P D - L p a t h w a y t o c h r o n i c g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e . ( B M T T a n d e m M e e t i n g s ) 2 0 1 3 2 / 1 5 - 1 8 S a l t L a k e 4 ) H F u j i w a r a , Y M a e d a , K
K o b a y a s h i , H N i s h i m o r i , K
M a t u s o k a , M A z u m a , Y H i d e o , L C h e n , a n d M T a n i m o t o . H o s t t i s s u e P D - 1 p a t h w a y c o n t r i b u t e t o m u r i n e c h r o n i c g r a f t - v e r s u s - h o s t d i s e a s e v i a T h 1 + T h 1 7 + c e l l s . A S H 2 0 1 3 1 2 / 6 - 1 0 N e w O r l e a n e s
H .知 的 財 産 権 の 出 願 ・ 登 録 状 況 （ 予 定 を 含 む 。 ）
1 . 特 許 取 得 特 に な し 。 2 . 実 用 新 案 登 録 特 に な し 。 3 . そ の 他 特 に な し
