序 文
C 型インフルエンザ （以下， Inf. C） ウイルスは，
今までの報告から，主として小児期における呼吸 器感染症の原因ウイルスのひとつであり，日常の 診療の中でもしばしば遭遇する感染症であると考 えられているが，通常の方法ではウイルスの分離 率が低く，実際に診断する機会は少ない．今回，
1999
!2000 年の冬季に広島県内の医療機関を受診
し，ウイルス分離をおこなった 638 症例のうち 8 症例から Inf. C ウイルスが分離されたので，これ らの症例につき臨床的検討を行ったものを報告す る．
対象と方法
1．対象
1999 年 11 月から 2000 年 3 月の間に広島 県 内 の医療機関において急性呼吸器感染症を呈した 15 歳以下の患児 638 名から鼻汁または咽頭拭い 液を採取し，ただちに冷凍保存したものを広島県 保健環境センター微生物第二部においてウイルス 分離を実施した．このうち，県立広島病院小児科
1999 ! 2000 年冬季に広島県内で分離された C 型インフルエンザの検討
1）県立広島病院小児科，2）広島県保健環境センター微生物第二部，
3）国立大竹病院小児科，＊現所属：国立病院機構東京医療センター小児科
松原 啓太
1）＊坂野 堯
1）高尾 信一
2）大黒 一成
3）（平成 15 年 12 月 12 日受付）
（平成 16 年 3 月 16 日受理）
原 著
C 型インフルエンザ（以下，Inf. C）ウイルスは，ヒトの気道感染症の原因ウイルスの 1 つであり，小 児期の感染症として世界的にみられると考えられている．しかしながら Inf. C ウイルスは偶然に分離さ れることが多く，その臨床的および疫学的な報告は少ない．
1999 年 11 月から 2000 年 3 月の期間において，県立広島病院小児科に呼吸器感染症で受診した患児の 咽頭拭い液から 4 株の Inf. C ウイルスが分離され，また同期間内に広島県内の他の小児医療施設からも 4 株が分離された．県立広島病院小児科における Inf. C ウイルス感染症例については，1992 年から 2000 年までに同科を受診した A ソ連型，A 香港型および B 型インフルエンザの症例と罹患期間および有熱 期間，最高体温などの臨床症状について比較検討したが，明らかな差異はみられなかった．また全症例 について，患児の住居地を調査するとともに，7 株については抗 hemagglutinin-esterase（HE）糖蛋白に 対するモノクローナル抗体を用いて抗原解析を行った．その結果，分離された Inf. C ウイルスは抗原性の 異なる 2 つのグループに大別され，1999 年から 2000 年の冬季に同一地域においてこの 2 種類の亜型の Inf. C ウイルスが流行していた可能性が示唆された．Inf. C ウイルスについては未解明な部分が多く，今 後も臨床的および疫学的な情報の解析が必要である．
〔感染症誌 78：470〜475，2004〕
要 旨
別刷請求先：（〒152―8902）東京都目黒区東が 丘 2―
5―1
国立病院機構東京医療センター小児科 松原 啓太
influenza C virus, epidemiology, clinical manifestation Key words：
を受診した患児で Inf. C ウイルスが分離された 4 例，および他の医療機関を受診し同様に Inf. C ウ イルスが分離された 4 例の計 8 例を対象とした．
2．ウイルスの分離方法
採取された全ての検体について Madin-Darby canine kidney（MDCK）細胞を用いた分離を行っ た．また一部の検体については発育鶏卵を用いた 方法も併用した．
MDCK 細 胞 に 接 種 し た 場 合，細 胞 変 性 効 果
（CPE）の出現を指標とし，3 代の継代後も CPE が出現しないものを陰性とした．CPE が出現した 場合は培養上清についてインフルエンザウイルス を確認するため，ニワトリ赤血球とモルモット赤 血球の凝集の有無を確認した．
発育鶏卵を使用した場合，検体を 7 日齢卵の漿 尿膜腔内および羊膜腔内に接種し，34℃，72 時間 ふ卵した後，漿尿液と羊水とを別々に採取し，そ れらについてニワトリ赤血球とモルモット赤血球 の凝集の有無を確認した．
3．ウイルスの同定方法
山形大学医学部細菌学教室（現発達生体防御学 講座感染症学分野）の中村喜代人博士より分与さ れた，Inf. C ウイルス（C! Yamagata! 8! 89）株ニワ トリ免疫血清と，0.5％ ニワトリ赤血球を使用し，
マ イ ク ロ タ イ タ ー 法 に よ る 赤 血 球 凝 集 抑 制
（HI）試験により同定した．
4．検討方法
全 8 例について発病時期，在住地域の分布につ いて検討を行い，そのうち 7 例から分離された Inf. C ウイルス株については山形大学医学部細菌 学教室において HE 糖蛋白に対するモノクローナ ル抗体を用いて HI 試験による抗原解析を 行 っ た．2 株について HE 遺伝子の塩基配列を調べ，過 去に報告されている既知の株と併せて，neighbor- joining 法により分子系統樹を作成した．
さらに県立広島病院小児科受診の 4 例に関して は，1991 年から 2000 年の間に同科を受診した A ソ連型インフルエンザ（以下，Inf. AH1）23 例，
A 香 港 型 イ ン フ ル エ ン ザ（以 下，Inf. AH3）84 例，B 型インフルエンザ（以下，Inf. B）55 例と罹 患年齢，有病期間，発熱期間，最高体温，鼻汁，
咳嗽等の臨床症状を比較検討した．
結 果
1999 年 12 月から 2000 年 3 月までの期間に，県 立広島病院小児科を受診しウイルス分離がなされ た症例において，Inf. AH1 ウイルス 5 株，Inf. AH3 ウイルス 5 株，Inf. C ウイルス 4 株が分離された．
同期間内に広島県保健環境センターにて分離され た広島県内のインフルエンザウイルスの分離状況 は Inf. AH1 ウ イ ル ス 181 株，Inf. AH3 ウ イ ル ス 100 株，Inf. B ウイルス 1 株，Inf. C ウイルス 8 株 であった（県立広島病院小児科受診例を含む） ．
Inf. C ウイルス感染症 8 例については男女比は 7：1 で男児が多く，平均罹患年齢は 3.0±2.0 歳 で，全例に 38℃ 以上の発熱を認め，診断別では急 性気管支炎，急性上気道炎が 4 例ずつであった．
急性上気道炎の 1 例は汎血球減少を呈し，骨髄穿 刺にて骨髄低形成を認めたがその後改善した （Ta- ble 1） ．また 8 例の患児のうち 6 例の在住地は広 島県南西部の呉市を中心とした地域に集中してい た（Fig. 1） ．
次に分離された Inf. C ウイルス 7 株の HE 蛋白 に対するモノクローナル抗体を用いた HI 試験に よる抗原解析を行った結果，抗原の共通性から既 知の Inf. C ウイルスのうち 1981 年に山形県で分 離 さ れ た C
!Yamagata
!26
!81 株 に 類 似 し た グ ループ（a 群）4 株と 1976 年に神奈川県で分離さ れた C
!Kanagawa
!1
!76 株に類似したグループ（b 群）3 株に大別された（Table 2）．このうち a 群に 分類された C
!Hiroshima
!247
!2000 株と b 群に分 類された C
!Hiroshima
!246
!2000 株について既知 の Inf. C ウイルス株とあわせて分子系統樹を作成 したところ，2 株は遺伝子学的にも異なる系統に 属していた （Fig. 2） ．これらの 2 つの群は広島県南 西部の限局した地域に混在してみられた．
県立広島病院小児科受診例について他のインフ ルエンザウイルス感染症と臨床症状の比較を行っ た結果，Inf. C ウイルス感染症の例数が少ないた め統計学的な検討はできなかったが，有病期間，
臨床症状については明らかな差はみられなかっ
た．重症度についても今回の我々の検討では，臨
床上の鑑別は困難であった（Table 3） ．
Table 1 Clinical features of eight patients with Inf. C infection during Novenber, 1999 to March, 2000 in Hiroshima Prefecture. All patients were children less than 7 years old
Code name of isolated Inf. C virus Clinical Symptoms
Clinical Diagnosis Date of specimen
collection Age
（year, month）
Patient Sex No.
C/Hiroshima/290/99 fever, rash, hypoplastic bone marrow
URI Dec. 2, 1999
1Y, 5M M
1
C/Hiroshima/252/2000 fever, cough, rhinorrhea
bronchitis Dec. 21, 1999
0Y, 9M M
2
C/Hiroshima/248/2000 fever, cough
bronchitis Jan. 24, 2000
6Y, 11M M
3
C/Hiroshima/249/2000 fever, cough, rhinorrhea
URI Feb. 21, 2000
4Y, 0M M
4
C/Hiroshima/246/2000 fever, rhinorrhea
URI Feb. 23, 2000
1Y, 2M M
5
C/Hiroshima/247/2000 fever, rhinorrhea
URI Feb. 28, 2000
3Y, 1M M
6
C/Hiroshima/251/2000 fever, cough, rhinorrhea
bronchitis Mar. 8, 2000
3Y, 5M M
7
C/Hiroshima/250/2000 fever, cough, rhinorrhea
bronchitis Mar. 28, 2000
3Y, 2M F
8
M；male, F；female, URI；upper respiratory illness
考 察
Inf. C ウイルスは 1947 年に Taylor
1）により，軽 度のかぜ様症状を示す患者から分離され，1950 年に Francis
2）らが，ヒトへの病原性を提唱された ウイルスで，性状が他のインフルエンザウイルス に類似しているため，C 型インフルエンザウイル スと命名された． 本邦では 1966 年に熱海らにより 初めて報告され
3），その後いくつかの臨床的， 疫学 的な報告があるものの，他のインフルエンザウイ ルスと比較して非常に少ない．その理由のひとつ として，Inf. C ウイルスが現在のところインフル エ ン ザ ウ イ ル ス の 分 離 に 一 般 的 に 用 い ら れ る
MDCK 細胞に対し低感受性であるため，その多く が偶然に分離されることが挙げられる．実際，前 にも述べた広島県におけるインフルエンザウイル ス分離数の比較だけでなく，国立感染症研究所が 全国の衛生研究所等で 1993 年から 2002 年の 10 年間に分離されたインフルエンザウイルス集計数 を公表しているが（国立感染症研究所感染症情報 セ ン タ ー ホ ー ム ペ ー ジ http:
!!idsc.nih.go.jp
!index-j.html に て 閲 覧 可 能） ，Inf. AH1 ウ イ ル ス 13,120 例，Inf. AH3 ウイルス 30,705 例，Inf. B ウイ ルス 15,683 例に対し，Inf. C ウイルスは 35 例と圧 倒的に少なかった．Inf. C ウイルスが A 型インフ ルエンザ（以下，Inf. A）および Inf. B ウイルスと 比較して，ウイルスの性状や抗原性に多くの違い がみられ，インフルエンザウイルスとしては独自 性の強いことは今までにも報告されており
4）〜6）， MDCK 細胞に対し低感受性であることに関連し ているのではないかと考えられる．Inf. C ウイル スの分離には発育鶏卵の羊膜腔内接種もしくはヒ ト悪性黒色種由来の HMV-II 細胞を用いた培養が 適していると報告されており
6）7），今回我々が検討 した 8 株についても，発育鶏卵の羊膜腔内接種で は全例が分離されたのに対し，MDCK 細胞からは 5 株の分離のみで，またその CPE の程度も弱かっ た． しかしながら前に挙げた 2 つの分離法は， 様々 な点で通常のサーベイランスとして行うことは困 難である．高尾らが，Zhang ら
8）が報告した Inf. C ウ イ ル ス の HE1 遺 伝 子 領 域 に 設 定 し た プ ラ イ マ ー を 用 い て reverse-transcriptase PCR（RT-
Fig . 1 Geographical distribution of eight patientswith Inf. C infection in Hiroshima Prefecture. The number indicates patient No. in Table 1, 2 and 3.
Table 2 Seven of eight isolated Inf. C viruses were analyzed for antigenic characteristics with a set of monoclonal antibodies（Mabs）against hemagglutinin-esterase glycoproteins
HI titer（HI units/ml）of anti-HE MAbs Group of
antigen Code name of
influenze C virus Patient
No. J14 J9 Q5 U1
1,600 6,400
1,600 64,000
a C/Yamagata/26/81
＜ 1,280
＜ 256,000
b C/Kanagawa/1/76
320 12,800
400 16,000
a C/Hiroshima/290/99
1
1,600 6,400
800 16,000
a C/Hiroshima/248/2000
3
320 3,200
200 16,000
a C/Hiroshima/249/2000
4
3,200 3,200
80 12,800
a C/Hiroshima/247/2000
6
＜ 160
＜ 128,000
b C/Hiroshima/246/2000
5
＜ 320
＜ 256,000
b C/Hiroshima/251/2000
7
＜ 160
＜ 128,000
b C/Hiroshima/250/2000
8
＜；Titer below 20
PCR） を施行したところ，Inf. A や Inf. B ウイルス に従来行われている PCR 法に感度，特異度ともに 匹敵する成績をあげており （論文未発表） ，今後の 応用が期待される．
また Inf. C ウイルスの報告が少ないことに対す るもうひとつの理由として， 特有の症状に乏しく，
臨床的に診断したり，流行を捕らえたりすること が難しいという点が考えられる．1976 年に山形県 下で Homma らが実施した Inf. C ウイルスの抗体 保有率の調査では，生後間もない乳児は母親から
の移行抗体を持つが， 生後 6 カ月頃までに消失し，
その後 1 歳を過ぎると急激に抗体保有率が上昇 し，10 歳までにほぼ 100％ に達し，以後高率のま ま推移することが報告された
9）．1998 年に広島県 内の住民 186 名から採取した血清を用いて，Inf. C ウイルスの抗体保有率を調べた結果も 0〜4 歳を 除いて以後の年齢層では抗体保有率が高く，同様 のパターンを示した
10）．さらに片桐ら
11）は， 国内外 で行われた全ての調査で同様の抗体保有率のパ ターンがみられたとしており，Inf. C ウイルスが，
Fig. 2 Phylogenetic tree of HE gene of influenza C virus in Japan. This tree was con- structed by using neighbor-joining method. Two viruses（C!Hiroshima!247!2000 and C!Hiroshima!246!2000）were classified different gene groups.
Table 3 Comparision of clinical characteristics at influenza A（H1N1）, A（H3N2）, B and C virus infection Clinical Symptoms Maximum body
temperture
（℃）
Duration of fever
（day）
Duration of illness
（day）
Type of
influenza virus admitted to
hospital cough
rhinorrhea
21.7%
73.9%
82.6%
39.2 ± 0.6 4.0 ± 1.4
9.1 ± 2.3 Inf. AH1（n ＝ 23）
48.8%
82.1%
75.0%
39.3 ± 0.6 4.7 ± 1.6
9.8 ± 2.6 Inf. AH3（n ＝ 84）
40.0%
74.5%
63.6%
39.1 ± 0.6 5.0 ± 1.6
9.2 ± 2.7 Inf. B（n ＝ 55）
○
○
○ 39.0
4 12
2 Ing. C
（Patient No.）
○ 40.0
6 9
3
○
○ 40.0
3 5
4
○
○
○ 40.3
4 7
7
Duration of fever；total days of ≧ 37.5℃
!
世界に広く分布し，
"1〜10 歳のあいだに大部 分の小児が初感染を受け，#流行があるが，周期 性はなく，常在性である可能性が高いことを報告 している． また臨床症状について今までの報告
12）13）をまとめてみると，
!不顕性感染はなく，比較的 短期間に再感染が成立する，
"潜伏期間は約 5 日 で， 多くが 38〜40℃ の発熱と同時かやや遅れて鼻 汁過多やくしゃみ，咳嗽を生じる，
#発熱は 2〜3 日で軽快するが，鼻汁過多は 2 週間以上に渡って 遷延する例が多い，
$高熱を認めた小児例でも，
重症度はほとんどなく，いわゆる 鼻かぜ とし て医療機関を受診していない例も相当数あると考 えられる，
%成人では小児と比較してやや重症感 はあるものの約 1 週間で軽快する，など Inf. A や Inf. B ウイルスと比較して症状の経過は長いもの の，軽症であることが特徴とされてきた．しかし ながら，今回の我々の施設での検討（Table 3）で は，比較的長期の発熱及び咳嗽を認めた反面，鼻 汁過多はあまり認めず，入院加療を要する症例も あったことから，臨床上，他のインフルエンザと Inf. C ウイルス感染症を鑑別することは困 難 で あった．さらに Inf. C 感染との関連は明らかでは ないものの，他施設で経過中に汎血球減少と骨髄 低形成を認めた症例もあった．今回の検討は後方 視的のため，重症感の強い症例からより積極的に 検体がサーベイランスに提出されたという診療上 のバイアスがかかっていることは否定できない が，重症度がきわめて低いという従来の通説には 一部再考の余地があるものと考えられる．最近で
は，我々と同様に重症例が思いの外多いことを報 告しているものもあり
14）今後のさらなる検討が必 要である．
次に，Inf. A ウイルスは抗原変異として不連続 変異と連続変異がみられるのに対し，Inf. C ウイ ルスは，Inf. B ウイルスと同様に連続変異しか示 さないこと，また HE 遺伝子の進化速度が，Inf. A ウイルスの HA 遺伝子のそれと比較して約 1
!8 と遅い上に新しい抗原変異株による置換が不完全 なため，常に新旧のウイルスが狭い地域に共存し ていることが指摘されている
4）15）．現在，既知のウ イルス株で作成した分子系統樹（Fig. 2）から，
Inf. C ウイルスは 4 系統に分かれることが確認さ れているが，我々の検討したウイルス株は，その 中の 2 系統にそれぞれ属することが判明した．こ れに対象患児の在住地の地理的分布と発症時期を 併せて考えると，広島県南西部の限局した地域に 2 系統の Inf. C ウイルスが共存していたことが示 唆され， 従来の報告を裏付けるものと考えられた．
最後に Inf. C ウイルスに関しては，近年報告が 集積され，その疫学及び臨床的な状況が徐々に明 らかにされてはいるものの，未だに不明な点は多 い．特に臨床症状やヒト以外の宿主の存在の確認 については今後も引き続き解明が重要であると考 える．
謝辞：稿を終えるにあたり，Inf. C ウイルス株の抗原解 析及び分子系統樹の作成に多大なご尽力をいただいた，山 形大学医学部発達生体防御学講座感染症学分野の松嵜葉 子先生にこの場を借りて深謝させていただきます．
文 献
1）Taylor RM：Studies on survival of influenza vi- rus between epidemics and antigenic variants of the virus. Am J Pub Health 1949；39：171―8.
2）Francis T Jr, Quilligan JJ Jr, Minuse E：Identifi- cation of another epidemic respiratory disease . Science 1950；112：495―7.
3）熱海 明，小野精美，石田名香雄，今野二郎，多 田孝太郎，大谷サチ子：インフルエンザ C ウイル スの分離．日細菌誌 1966；21：147―50.
4）松嵜葉子，中村喜代人：A 型，B 型，C 型インフル エンザウイルスのウイルス学的，疫学的ならびに 臨床的特徴．日臨 1997；55：2515―20.
5）本郷誠治：C 型インフルエンザウイルス．小児診 療 2000；63：2046―50.
6）西村秀一：C 型インフルエンザウイルスの形態形 成．東北のコロニー 1994；29：39―47.
7）Nishimura H, Sugawara K, Kitame F, Nakamura K, Katsushima N, Moriuchi H,et al.：A human melanoma cell line highly susceptible to influenza C virus. J Gen Virol 1989；70：1653―61.
8）Zhang WD, Evans DH：Detection and identifica- tion of human influenza viruses by the polym-
erase chain reaction. J Virol Methods 1991；33：
165―89.
9）Homma M, Ohyama S, Katagiri S：Age distribu- tion of the antibody to type C influenza virus. Mi- crobiol Immunol 1982；26：639―42.
10）高尾信一，島津幸枝，福田伸治，豊田安基江，宮 崎佳都夫：広島県における C 型インフルエンザ．
広島保健環境セ研報 2001；9：43―7.
11）片桐 進：C 型インフルエンザの実態．医のあゆ み 1987；142：517―9.
12）Katagiri S, Ohizumi A, Homma M：An outbreak of type C influenza in a children s home. J Infect Dis 1983；148：51―6.
13）阿部昭子，大山 忍，相川勝悟，片桐 進：幼児 集団の追跡によるウイルス感染症サーベイラン スの試み．臨とウイルス 1989；17：307―13.
14）松嵜葉子，中村喜代人，水田克巳，勝島矩子，坂 本美千代，鈴木 宏：1996 年と 1998 年に山形県 内でとらえられた C 型インフルエンザの流行．臨 とウイルス 2000；28：41―6.
15）中村喜代人，村木 靖，高 鵬：C 型インフルエン ザウイルスの生態．病態生理 1995；14：739―
47.
Influenza C virus Isolated in Hiroshima Prefecture during the 1999
!2000 Winter Season
―A Clinical and Epidemiological Study―
Keita MATSUBARA
1）＊, Takashi SAKANO
1）, Shinichi TAKAO
3）＆ Kazunari DAIKOKU
2）1）Department of Pediatrics, Hiroshima Prefectural Hospital
2）The 2nd Division of Microbiology, Hiroshima Prefectural Institute of Health and Enviroment
3）Department of Pediatrics, National Otake Hospital
＊Present address：Department of Pediatrics, National Tokyo Medical Center
