研究用 RNAscope / BaseScope ~ 超高感度 in situ ハイブリダイゼーションシステム ~ RNAscope Multiplex Fluorescent Assay: Three-plex detection of glutaminergic neurons, Vglut1

(1)

～超高感度 in situ ハイブリダイゼーションシステム～

研究用

RNAscope

®

/ BaseScope™

RNAscope®_{Multiplex Fluorescent Assay: Three-plex detection of glutaminergic neurons, Vglut1 (Red), Vglut2 (Green), and GABAergic neurons Vgat (white) expression in FFPE mouse brain.}

E12/13 E13/15 E14/15 dapB

(2)

RNAscope® / BaseScope

TM

超高感度

in situ

ハイブリダイゼーションシステム

◎

◎ ZZ-paired◎probe◎を用いる、超高感度◎RNA◎検出システム

◎

◎ 独自の増感ステップを採用した、目的別の 2 つのプラットフォームをご用意

◎

◎ シンプルなワークフローでアッセイ時間を軽減（8 時間◎+◎α）

RNAscope®

サンプルタイプに応じた「色素 / 蛍光」検出の選択

・mRNA や lncRNA など

長鎖 RNA

(150 nt ≤ )

_が対象

　＊ ZZ-pair 数は標的によって変わります。

BaseScope

TM

変異やスプライスバリアントといった特殊解析への応用

・Small RNA や splicing valiant など

短鎖 RNA

(50-300 nt)

が対象

　＊注意 : 成熟 miRNA は対象外です。

ターゲットRNA特異的オリゴプローブターゲットRNA1 ターゲットRNA2 FFPE組織、凍結組織、培養細胞、PBMCなど 1 分子の RNA を輝点もしくはドットとして検出

20Z

Z

...20ZZ ZZ Z_Z ZZ ZZ ZZ AAAA Amplification Target-specific binding E13/15

E12/13 E14/15 dapB

MET∆14 (H596)

MET WT (A549)

E12 E13 E14 E15

E12 E13 E15

E12/13 E12/13 E13/15 E14/15 MET∆14 MET WT

1 Z

_{Target-specific binding}Amplification

Z

Exon12 Exon13 Exon14 Exon15 Exon12 Exon13 Exon15

RNA variant 1 RNA variant 2

(3)

◎█

コア技術となる “ZZ” プローブとは　 - RNAscope® -

　※ BaseScope

TM

_{は多少異なります}

◎█

超高感度テクノロジーの基本原理　 - RNAscope® -　

※ BaseScope

TM

_{は増感ステップが異なります}

1,000 nt の target RNA 1 分子に対して、

8,000 倍

の感度を得ることができます

(20preAMP x 20AMP x 20Enzyme/Fluorophore = 8,000)

Lower region:

~18-25-base sequence Upper region:

14-base tail sequence Preampliﬁer 結合配列:_{28-base region}

ターゲット特異的相補配列 ~ 50-base region

標的RNAへの相補的結合

標的 RNA にタンデムに

ハイブリダイゼーションするように設計

（標的の長さが 1,000 nt の場合、平均 20 組） Spacer

...20

Z

_Z

Z

_Z

Z

AAAA

◎ Z 型オリゴは 1,000 nt の target RNA で平均 20 組が連続するように設計される。

◎ AMP は preAMP 1 分子あたり 20 分子結合する。

◎ 酵素又は蛍光標識プローブは AMP 1 分子あたり 20 分子結合する。

Foci の形成

蛍光

色素

Punctate dots の形成

標的 RNA に対する Z 型オリゴなどの核酸プローブの

連続したハイブリダイズに伴うラベルプローブの局所集積

(4)

RNAscope® の主な特徴／アプリケーション

◎█

汎用的な DIG-ISH 手法よりも超高感度な検出システム

汎用手法として使用される DIG-ISH で

は検出することが不可能な標的であって

も、RNAscope® であれば検出すること

が可能です。

◎█

特異性に優れた、ロバストネスの高いシステム

CA9 mRNA は低酸素環境下で発現量が

大幅に変動する分子として知られています。

RNAscope® は高い特異性と定量性を併

せ持つ技術であり、標的 RNA の発現量変

化を S/N 比良く検出することができます。

◎█

マルチプレックスも可能、豊富な論文実績

RNAscope® を使用した累計論文報告数が

800 報

を

超えました。（2017 年 5 月時点）

◎█

RNAscope® 染色例

RNAscope®

CA9 (mRNA) / DAPI

DIG-ISH

CA9 (mRNA) / DAPI

Cells: HeLa (normoxic condition) Microscope: BZ-9000 Generation II (Keyence) Objective lens: CFI Plan Apo l 100x oil lens

RNAscope® (BROWN) での CA9 (mRNA) の検出通常酸素分圧低酸素分圧

Cells: HeLa

Microscope: BZ-9000 Generation II (Keyence) Objective lens: CFI Plan Apo l 40x lens

最大で 4 色まで実施可能です 4 15 62 157 366 670 804 0 100 200 300 400 500 600 700 800 2011 2012 2013 2014 2015 2016 until May 2017 # of P ub lic at io ns > 800 publications since 2011 0 50 100 150 200 250 300 Other Immunotherapy non-coding RNA Inflammation Develop Biology HPV Stem Cells Infectious Neuroscience Cancer # of Publications Publications by Research Area 2011-2017

対物レンズ 4x 対物レンズ 40x

明視野

FFPEサンプルでの色素・蛍光検出

※

暗視野（Cy3 ﬁlter）

Probe

RNAscope®_{Positive Control Probe_Hs-PPIB} 試薬

RNAscope®_{2.0 HD Reagent Kit (RED)} Tissue

Human rectum adenocarcinoma grade II

* 60x Objective lens (magnified image) MALAT1 (ncRNA)

RNAscope

®

RNAscope

®

＋

ICC

SC35 (Protein) (Nuclear speckle) Merge (w/o DAPI) DAPI (counterstain) Merge (w/ DAPI)

RNA とタンパクの同時染色

※

(5)

BaseScope

TM

_{の主な特徴／アプリケーション}

◎█

BaseScope

TM

_染色例

スプライスバリアント検出 (Exon-Junction analysis)

A549 (MET WT)、H596 (MET Δ14) 細胞を

FFPE 処理し、MET のエクソンジャンクション

ごとに設計したプローブを用い BaseScope

TM

アッセイを実施しました。MET Δ14 変異を持

つ H596 細胞が E13/E15 プローブで特異的に

染色されました。

検出困難な標的の解析 (Cytokine analysis)

ヒト精巣がんおよび膀胱がんの FFPE サンプ

ル中の IFN-γ mRNA を BaseScope

TM

_にて検

出しました。

ケースにもよりますが、BaseScope

TM

_は断

片化の亢進した RNA やサイトカインのような

短寿命 RNA の検出に効果的であり、様々な臨

床症例への応用が期待されます。

E13/15

E12/13 E14/15 dapB

MET∆14 (H596)

MET WT (A549)

E12 E13 E14 E15

E12 E13 E15

E12/13 E12/13 E13/15 E14/15 MET∆14 MET WT

BaseScope™ アッセイを用いた METΔ14 RNA の検出

精巣がん膀胱がん

BaseScopeTM 3 ZZ

BaseScope™ アッセイでの組織中のサイトカイン (IFN-γ mRNA) 検出

Short

Target

snRNA/snoRNA Me Me Ψ

BaseScope

(Chromagenic Red) tRNA Ψ Me ・

1-6 ZZ probes

(50-300 nt) ・相同性の高い分子の検出（識別）・低発現分子 / 分解しやすい短寿命分子の検出・T cell のレパトア解析（TCR の CDR 解析）

・Small RNA (snRNA, snoRNA, tRNA, pre-miRNA, etc.) の検出

Exon

Junction

Point

Mutation

EGFR (Wild-type) EGFR L858R (Mutant) ・

1 ZZ probe

(≤ 50 nt) ・オルタナティブスプライシングに伴う isoform/variant の解析 (exon skipping/inclusion) ・Knock-in/Knock-out の成否確認・

1 ZZ probe

(≤ 50 nt)

・Point mutation や small insertion/deletion (indel) 解析・エディティング (gene editing) の解析 / 評価

・高度な類似配列の識別検出 / 特異的検出

Exon12 Exon13 Exon14 Exon15 Exon12 Exon13 Exon15

RNA variant 1 RNA variant 2 BaseScopeTM _probe WT probe L858R probe ＊ご注意 : Point mutation 解析は、実施に際して一部制限を伴うケースもありますので、詳細についてはお問い合わせください。

短い RNA に !! ( 成熟 miRNA を除く )

スプライシングバリアントの解析に !!

Point mutation に !!

(6)

RNAscope® と BaseScope

TM

_の比較表

RNAscope®

BaseScope

TM

ZZ プローブの数平均 20 ZZ プローブ（最小 6 ZZ プローブ） 1 − 6 ZZ プローブシグナル増幅方法 2.5 version 新しいシグナル増幅方法＊

ターゲット遺伝子 • mRNA > 300 bases _{• lncRNA > 300 bases} RNA 50 − 300 bases _{エキソンジャンクション・ショートターゲット}

アプリケーション mRNA または lncRNA Splice variant, circular RNA, highlyhomologous sequence, CDR sequence for T cell clone (TCR), snoRNA, pre-miRNA 同時検出可能な遺伝子数最大 3 重染色まで可能単染色のみ検出発色または蛍光発色 Fast RED （蛍光観察も可）自動染色マニュアルまたはオートメーションマニュアルのみサンプルタイプ • FFPE 切片 (TMAs) • 固定凍結組織・新鮮凍結組織 • 培養細胞・PBMC • FFPE 切片 (TMAs) • 新鮮凍結組織 • 培養細胞前処理キット RNAscope® pretreatment（共通試薬）

検出キット RNAscope® kit BaseScopeTM_kit

プローブ RNAscope® probe BaseScopeTM_probe

＊注意点 : 増感システムが異なるため、RNAscope® と BaseScopeTM_{の間に互換性はありません。}

専用のハイブリオーブンについて　－ HybEZ

TM

_{II Hybridization System －}

RNAscope® / BaseScope

TM

_{のアッセイに最適化されたハイブリオーブン本体}

（ワーク保障あり）と、システム性を高めたスライドホルダーや洗浄トレイの一式

のセット品になります。

Code No. 製品名価格（税別）寸法 ( 幅 x 奥行き x 高さ ) , 重量 321710 HybEZTM_{II Hybridization System With EZ-Batch}TM_{Slide System} _¥563,000 _{28 x 40 x 21 cm , 9.5kg}

構成品特徴

・HybEZTM_{II Oven}

・Humidity Control Tray ・Humidifying Paper (2 sheets) ・EZ-BatchTM_{Slide Holder}

・EZ-BatchTM_{Wash Tray}

• トレイが挿入しやすい • より軽く、コンパクト

• 汎用性 ( ベイキング機能や異なる温度プログラムも設定可能 ) • EZ-BatchTM_{Slide System が付属品としてセット}

デモ機（旧オーブン）の貸出も

受け付けていますので、

お気軽にお問い合わせください

HybEZTM_{II Hybridization System}

Humidity Control Tray ( 湿潤箱 )

EZ-BatchTM

Wash Tray EZ-Batch TM Slide Holder

・最大２０枚のスライドを同時　に洗浄可能

・スライドホルダーはそのまま　Humidity Control Tray に　挿入しインキュベーション可能

使用例 Humidifying Paper

( ろ紙 ) オーブン本体

(7)

RNAscope® / BaseScope

TM

_{に必要な試薬・機器類}

※他にも必要な材料（試薬・機器など）がございます。ユーザーマニュアルをご確認ください。

　ユーザーマニュアルは ACD 社の Web サイトよりダウンロードいただくか、MBL へお問い合わせください。

◎█

プローブの種類（コントロール / ターゲット / カスタム）、チャネル、価格など

※ 1

　　RNAscope®

Code No. 製品名 / 分類チャネル※ 2 _{Species / Target} _包装 _{価格（税別）}

ACD Cat No. RNAscope® _{ネガティブコントロール} _{( 目的に応じて選択 )}C1 ～ C4 枯草菌 DapB 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000 ～

ACD Cat No. RNAscope® _{ポジティブコントロール} _{( 目的に応じて選択 )}C1 ～ C4 _{コピー数をご確認ください}検出対象とする種別や 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000 ～

ACD Cat No. _{（カタログ品）}RNAscope® Target Probe ACD 社の Web サイトで最新情報をご確認ください_{（https://acdbio.com/）} 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥113,000 ～

該当なし RNAscope® _{カスタムプローブ} ACD 社のカタログがない場合、オーダーメードにて_{デザイン / 合成することが可能です（お問い合わせ）} 1 VIAL _{[for 20 slides]} お問い合わせ

　　BaseScope

TM

Code No. 製品名 / 分類チャネル※ 2 _{Species / Target} _包装 _{価格（税別）}

ACD Cat No. BaseScope_{ネガティブコントロール}TM C1 枯草菌 DapB 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥23,000 ～

ACD Cat No. BaseScope_{ポジティブコントロール}TM C1 検出対象とする種別やコピー数、_{ZZ の数などをご確認ください} 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥23,000 ～

ACD Cat No. _{（カタログ品）}BaseScopeTM Target Probe C1 ・ACD 社の Web サイト・MBL の Web サイト＊詳細はお問い合わせください

1 VIAL

[for 20 slides] ¥150,000 ～

該当なし BaseScope_{カスタムプローブ}TM C1 ＊お問い合わせください 1 VIAL _{[for 20 slides]} お問い合わせ

※ 1　RNAscope® と BaseScope

TM

_{のシステムは異なるため、プローブの互換性はありません。}

※ 2　C1プローブは RTU (Ready-To-Use) になります。

　　　C2、C3、C4 プローブは 50 倍濃縮品のため、使用前に希釈が必要です。

推奨品がございます

① 専用プローブ

価格目安ターゲット： 113,000円（税別）～各コントロール：19,000円（税別）～価格目安 RNAscope®： 200,000円（税別）～ BaseScopeTM_{： 225,000円}_（税別）価格目安システム一式： 563,000円（税別）価格目安

ImmEdge™ Hydrophobic Barrier Pen： 8,000円（税別）

③ パップペン

④ 専用のハイブリオーブン

対象サンプル FFPE組織、凍結組織、培養細胞、PBMCなど

② 検出キット

RNAscope® 検出キット　　　　BaseScopeTM_{検出キット}

コントロール

ターゲット

ZZ-pair を形成する特殊プローブ温度管理に優れた推奨品になります RNAscope® / BaseScopeTM _{ワーク保障} (写真は “ACD HybEZTM_{II Hybridization System”)}

(8)

マニュアルアッセイキットラインナップ

RNAscope®

BaseScopeTM

2.5 HD Brown 2.5 HD Red Duplex Multiplex Multiplex V2

アッセイタイプ _{( 単色 )}発色 ( 単色 ) 発色 * 蛍光観察も可発色 ( ２重染色 ) * 蛍光観察も可蛍光 ( 最大３重染色 ) ( 最大４重染色 )蛍光発色 ( 単色 ) * 蛍光観察も可

検出系 DAB - HRP Fast Red - ALP _{Fast Red}Green - HRP _{- ALP} Alexa 488 Atto 550 Atto 647

FITC, Cy3, Cy5 （C4：Texas Red）

*Opal 色素の選択も可

Fast Red - ALP

使用する顕微鏡明視野 _（蛍光）明視野 _（蛍光）明視野蛍光蛍光 _（蛍光）明視野同時検出可能数 1 1 2 3 4 1 プローブチャネル C1 プローブ C1 プローブ _プローブC1, C2 C1, C2, C3 _プローブ C1, C2, C3, C4 _プローブ C1 プローブ適応サンプルパラフィン切片＋＋＋ー＋＋凍結組織＋＋＋＋＋＋ PBMC / CTC ＋＋＋＋ーー培養細胞＋＋＋＋＋＋定量ソフトウェア SpotStudioTM ＋＋ーーー＋フルキット販売価格（税別）（プローブは含みません） ¥200,000 ¥200,000 ¥300,000 ¥288,000 ¥333,000 ¥225,000

「対象サンプル」 × 「検出システム（色素 / 蛍光）」 × 「同時検出する標的数」などの目的に応じてお選びください。

他の必要な材料（試薬・機器など）についてはお問い合わせください

＊ご提供価格や最新の情報など、テクニカルな部分のサポートも含めて専任担当者が丁寧に対応させていただきますので、

まずはお気軽にお問い合わせください。

デモトレーニングアッセイや出張サービスも可能です

＊ ACD 社のフィールドアプリケーションサイエンティストと連携したサポート体制も充実しております。

デモトレーニングアッセイや出張サービスなどのご要望も承りますので、ご検討の際には是非ともご相談ください。

MBL ライフサイエンスサイトでの紹介も随時更新しております

◆ RNAscope® 紹介ページ　

　

http://ruo.mbl.co.jp/bio/product/epigenetics/pickup/rnascope.html

◆ BaseScope

TM

_{紹介ページ}

　

http://ruo.mbl.co.jp/bio/product/epigenetics/pickup/basescope.html

MBL RNAscope

検索

MBL BaseScope

検索

(9)

RNAscope® マニュアルアッセイ試薬リスト

コントロールプローブ

Code No. 製品名用途アッセイタイプ種別包装価格（税別）

310043 RNAscope® Negative Control Probe- DapB ネガティブ _{コントロール} 1-plex, etc. - 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000 310451 RNAscope® Positive Control Probe- Hs-POLR2A

ポジティブコントロール

1-plex, etc. Human 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000 313901 RNAscope® Positive Control Probe- Hs-PPIB 1-plex, etc. Human 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000 312471 RNAscope® Positive Control Probe- Mm-Polr2a 1-plex, etc. Mouse 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000 313911 RNAscope® Positive Control Probe- Mm-Ppib 1-plex, etc. Mouse 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000 312481 RNAscope® Positive Control Probe- Rn-Polr2a 1-plex, etc. Rat 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000 313921 RNAscope® Positive Control Probe- Rn-Ppib 1-plex, etc. Rat 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000 320751 RNAscope® 2-plex Negative Control Probe ネガティブ _{コントロール} 2-plex - 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥38,000 321641 RNAscope® 2.5 Duplex Positive Control Probe(Hs) _{PPIB-C1/POLR2A-C2} _{ポジティブ}

コントロール

2-plex Human 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥38,000 321651 RNAscope® 2.5 Duplex Positive Control Probe(Mm) _{Ppib-C1/Polr2a-C2} 2-plex Mouse 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥38,000 320871 RNAscope® 3-plex Negative Control Probe ネガティブ _{コントロール} 3-plex - 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥50,000 320861 RNAscope® 3-plex Positive Control Probe- Hs

3-plex Human 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥50,000 320881 RNAscope® 3-plex Positive Control Probe- Mm 3-plex Mouse 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥50,000 320891 RNAscope® 3-plex Positive Control Probe- Rn 3-plex Rat 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥50,000 300041 RNAscope® Probe Diluent プローブ希釈液 - - 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥19,000

ターゲットプローブ（カタログ掲載）

Code No. 製品名アッセイタイプ種別包装価格（税別）

○○○○○○ （ACD Cat No.）

RNAscope® Target Probe

ACD 社のカタログ掲載名※ any any 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥113,000 ～

※各種プローブ名称、カタログ番号は ACD Web サイトにてご確認ください。（ https://acdbio.com/ ）

ターゲットプローブ（カタログ未掲載/カスタム）

Code No. 製品名アッセイタイプ種別包装価格（税別）

お問い合わせ価格やご注文方法など、お気軽にお問い合わせください any any 1 VIAL _{[for 20 slides]} お問い合わせ

検出キット

Code No. 製品名検出色調アッセイタイプ包装価格（税別）

322300 RNAscope® 2.5 HD Reagent Kit-BROWN 色素 Brown 1-plex 1 KIT _{[for 20 slides]} ¥200,000 322350 RNAscope® 2.5 HD Reagent Kit-RED 色素（蛍光） Red 1-plex 1 KIT _{[for 20 slides]} ¥200,000 322430 RNAscope® 2.5 HD Duplex Reagent Kit 色素（蛍光） Green (C1)/Red (C2) 2-plex 1 KIT _{[for 20 slides]} ¥300,000 320850 RNAscope® Fluorescent Multiplex Reagent Kit 蛍光 Green/Orange/Far Red Multiplex 1 KIT _{[for 20 slides]} ¥288,000 323100 RNAscope® Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2※ _蛍光 _{Green/Orange/Red} _Multiplex 1 KIT

[for 20 slides] ¥333,000 ※　実施の際には別途 PerkinElmer 社の TSA based fluorophore が必要になりますので、ご注意ください。

上記製品群については、構成品の部分購入も可能です。

補助試薬

Code No. 製品名包装価格（税別）

323120 RNAscope® 4-Plex Ancillary Kit for Multiplex Fluorescent Kit v2※ 1 KIT

[for 20 slides] ¥25,000 ※　Code No. 323100 にて 4-plex を実施する際の補助試薬となります。

(10)

RNAscope® マニュアルアッセイ試薬リスト

キット構成品

AMP 類のセット

322310 RNAscope® 2.5 HD Detection Reagents-BROWN 色素 Brown 1-plex 1 KIT [20 slides] ¥150,000 322360 RNAscope® 2.5 HD Detection Reagents-RED 色素（蛍光） Red 1-plex 1 KIT [20 slides] ¥150,000 322500 RNAscope® 2.5 HD Duplex Detection Reagents 色素（蛍光） Green (C1)/Red (C2) 2-plex 1 KIT [20 slides] ¥250,000 320851 RNAscope® Fluorescent Multiplex Detection Reagents 蛍光 Green/Orange/Far Red Multiplex 1 KIT [20 slides] ¥250,000 323110 RNAscope® Multiplex Fluorescent Detection Kit v2 蛍光 Green/Orange/Red Multiplex 1 KIT [20 slides] ¥300,000

Code No. 製品名構成品包装価格（税別）

ユニバーサルキット（前処理試薬のセット）

322380 Universal Pretreatment Reagents

・Hydrogen peroxide (2 bottles) ・Target retrieval (4 bottles) ・Protease Plus (2 bottles) ・Protease III (2 bottles) ・Protease IV (2 bottles)

12 bottles ¥63,000

前処理試薬

322381 RNAscope® H2O2 and Protease Reagents

・Hydrogen peroxide (2 bottles) ・Protease Plus (2 bottles) ・Protease III (2 bottles) ・Protease IV (2 bottles)

8 bottles ¥25,000

322330 RNAscope® H2O2 and Protease Plus Reagents ・Hydrogen peroxide (2 bottles) _{・Protease Plus Reagent (1 bottle)} 3 bottles ¥30,000 322340 RNAscope® Protease III and Protease IV Reagents ・Protease III (1 vial) _{・Protease IV (2 vials)} 3 bottles ¥25,000 322000 RNAscope® Target Retrieval Reagents ・Target Retrieval reagent (4 bottles) 4 bottles _{(70mL each)} ¥19,000

洗浄試薬

310091 RNAscope® Wash Buffer Reagents ・50X Wash Buffer (4 bottles) 4 bottles _{(60mL each)} ¥25,000

ハイブリオーブンシステム

321710 ACD HybEZ_{ACD EZ-Batch}TM II Hybridization System (110v) With TM_{Slide System}

・HybEZTM_{II Oven}

・Humidity Control Tray ・Humidifying Paper (2 sheets) ・EZ-BatchTM_{Slide Holder}

・EZ-BatchTM_{Wash Tray}

1 system ¥563,000

ハイブリオーブンシステム構成品

310012 ACD HybEZTM_{Humidity Control Tray} _{1 式} _¥50,000

310015 ACD HybEZTM_{Humidifying Paper (15 sheets)} _{15 per pack} _¥11,000

310007 ACD EZ-BatchTM_{Slide System} ・EZ-BatchTM Slide Holder

・EZ-BatchTM_{Wash Tray} 1 式 ¥50,000

310017 ACD EZ-BatchTM_{Slide Holder} _{1 個} _¥44,000

310019 ACD EZ-BatchTM_{Wash Tray} _{1 個} _¥13,000

パップペン

310018 ImmEdge™ Hydrophobic Barrier Pen 1 本 ¥8,000

イントロパック

（検出キット、コントロールスライド、パップペン、コントロールプローブなどを含むスターターキット）

322370 RNAscope® Intro Pack 2.5 HD Reagent Kit Brown- Hs 色素 Brown 1-plex 1 KIT [20 slides] ¥277,000 322371 RNAscope® Intro Pack 2.5 HD Reagent Kit Brown- Mm 色素 Brown 1-plex 1 KIT [20 slides] ¥277,000 322435 RNAscope® Intro Pack 2.5 HD Duplex Reagent Kit- Hs 色素（蛍光） Green (C1)/Red (C2) 2-plex 1 KIT [20 slides] ¥438,000 322436 RNAscope® Intro Pack 2.5 HD Duplex Reagent Kit- Mm 色素（蛍光） Green (C1)/Red (C2) 2-plex 1 KIT [20 slides] ¥438,000

コントロールスライド

310045 RNAscope® Control Slide-Human HeLa Cell Pellet FFPE - HeLa Cell Pellet 4 slides per pack ¥32,000 310023 RNAscope® Control Slide-Mouse 3T3 Cell Pellet FFPE - NIH/3T3 Cell Pellet 4 slides per pack ¥32,000

画像解析システム

300060 RNAscope® Spot Studio v1.0 Software (3000 ROIs) 3000 ROI/pack ¥3,750,000 300062 RNAscope® Spot Studio v1.0 Software (150 ROIs) 150 ROI/pack ¥375,000 300063 RNAscope® Spot Studio v1.0 Software (Trial Pack- 15 ROIs) 15 ROI/pack ¥75,000

(11)

BaseScope

TM

_{マニュアルアッセイ試薬リスト}

検出キット

322900 BaseScope™ Reagent Kit- RED 色素（蛍光） Red BaseScopeTM_(1-plex) 1 KIT

[20 slides] ¥225,000

キット構成品

（AMP類のセット）

322910 BaseScope™ Detection Reagents- RED 色素（蛍光） Red BaseScopeTM_(1-plex) 1 KIT

[20 slides] ¥175,000

イントロパック

（検出キット、コントロールスライド、パップペン、コントロールプローブなどを含むスターターキット）

Code No. 製品名検出色調アッセイタイプ種別包装価格（税別） 322970 BaseScope™ Intro Pack- Reagent Kit- Red-Hs 色素（蛍光） Red BaseScopeTM_(1-plex) _Human 1 PACK

[20 slides] ¥325,000

322971 BaseScope™ Intro Pack- Reagent Kit- Red-Mm 色素（蛍光） Red BaseScopeTM_(1-plex) _Mouse 1 PACK

[20 slides] ¥325,000

コントロールプローブパック

Code No. 製品名構成品アッセイタイプ種別包装価格（税別）

322975 BaseScope™ Control Probe Pack-Hu 4 probes: PPIB probes 3zz, PPIB 1zz,

DapB 3zz , DapB 1zz BaseScope

TM_(1-plex) _Human 1 PACK

[for 20 slides] ¥90,000

322976 BaseScope™ Control Probe Pack-Mm 4 probes: Ppib probes 3zz, Ppib 1zz,

DapB 3zz , DapB 1zz BaseScope

TM_(1-plex) _Mouse 1 PACK

[for 20 slides] ¥90,000

コントロールプローブ

701011 BaseScope™ Negative Control Probe DapB-3ZZ _{ネガティブ} コントロール

BaseScopeTM_(1-plex) _- 1 VIAL

[for 20 slides] ¥23,000

701021 BaseScope™ Negative Control Probe DapB-1ZZ BaseScopeTM_(1-plex) _- 1 VIAL

[for 20 slides] ¥23,000

701031 BaseScope™ Positive Control Probe Hs-PPIB-3ZZ

BaseScopeTM_(1-plex) _Human 1 VIAL

[for 20 slides] ¥23,000

701041 BaseScope™ Positive Control Probe Hs-PPIB-1ZZ BaseScopeTM_(1-plex) _Human 1 VIAL

[for 20 slides] ¥23,000

701071 BaseScope™ Positive Control Probe Mm-Ppib-3ZZ BaseScopeTM _(1-plex) _Mouse 1 VIAL

[for 20 slides] ¥23,000

701081 BaseScope™ Positive Control Probe Mm-Ppib-1ZZ BaseScopeTM_(1-plex) _Mouse 1 VIAL

[for 20 slides] ¥23,000

701091 BaseScope™ Positive Control Probe Mm-Polr2a-3ZZ BaseScopeTM_(1-plex) _Mouse 1 VIAL

[for 20 slides] ¥23,000

701101 BaseScope™ Positive Control Probe Mm-Polr2a-1ZZ BaseScopeTM_(1-plex) _Mouse 1 VIAL

[for 20 slides] ¥23,000

ターゲットプローブ（カタログ掲載）

○○○○○○

（ACD Cat No.） BaseScope

TM_{Target Probe}

ACD 社のカタログ掲載名※ Catalog target BaseScopeTM (1-plex) any 1 VIAL _{[for 20 slides]} ¥150,000

※各種プローブ名称、カタログ番号は ACD Web サイトにてご確認ください。（ https://acdbio.com/ ）

カスタムプローブ（カタログ未掲載/カスタム）

お問い合わせ価格やご注文方法など、 _{お気軽にお問い合わせください} Original target BaseScopeTM _(1-plex) _any 1 VIAL

(12)

※ RNAscope® 、BaseScopeTM_{はAdvanced Cell Diagnostics, Inc. の商標です。}

149107-17071004N

〒460-0008 名古屋市中区栄四丁目5番3号 KDX名古屋栄ビル10階 TEL :（052）238-1904　FAX :（052）238-1441

研究用 RNAscope / BaseScope ~ 超高感度 in situ ハイブリダイゼーションシステム ~ RNAscope Multiplex Fluorescent Assay: Three-plex detection of glutaminergic neurons, Vglut1

～ 超高感度 in situ ハイブリダイゼーションシステム ～

研究用

RNAscope

®

/ BaseScope™

RNAscope® / BaseScope

超高感度

in situ

ハイブリダイゼーションシステム

◎

◎ ZZ-paired◎probe◎を用いる、超高感度◎RNA◎検出システム

◎

◎ 独自の増感ステップを採用した、目的別の 2 つのプラットフォームをご用意

◎

◎ シンプルなワークフローでアッセイ時間を軽減（8 時間◎+◎α）

RNAscope®

サンプルタイプに応じた「色素 / 蛍光」検出の選択

・mRNA や lncRNA など

長鎖 RNA

(150 nt ≤ )

が対象

＊ ZZ-pair 数 は標的によって変わります。

BaseScope

変異やスプライスバリアントといった特殊解析への応用

・Small RNA や splicing valiant など

短鎖 RNA

(50-300 nt)

が対象

＊注意 : 成熟 miRNA は対象外です。

20Z

Z

1 Z

Z

◎█

コア技術となる “ZZ” プローブとは - RNAscope® -

※ BaseScope

は多少異なります

◎█

超高感度テクノロジーの基本原理 - RNAscope® -

※ BaseScope

は増感ステップが異なります

1,000 nt の target RNA 1 分子に対して、

8,000 倍

の感度を得ることができます

(20preAMP x 20AMP x 20Enzyme/Fluorophore = 8,000)

標的RNAへの相補的結合

標的 RNA にタンデムに

ハイブリダイゼーションするように設計

...20

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

AAAA

◎ Z 型オリゴは 1,000 nt の target RNA で平均 20 組が連続するように設計される。

◎ AMP は preAMP 1 分子あたり 20 分子結合する。

◎ 酵素又は蛍光標識プローブは AMP 1 分子あたり 20 分子結合する。

Foci の形成

蛍光

色素

Punctate dots の形成

標的 RNA に対する Z 型オリゴ などの 核酸プローブの

連続したハイブリダイズに伴う ラベルプローブ の局所集積

RNAscope® の主な特徴／アプリケーション

◎█

汎用的な DIG-ISH 手法よりも超高感度な検出システム

汎用手法として使用される DIG-ISH で

は検出することが不可能な標的であって

も、RNAscope® であれば検出すること

が可能です。

◎█

～超高感度 in situ ハイブリダイゼーションシステム～

_が対象

　＊ ZZ-pair 数は標的によって変わります。

　＊注意 : 成熟 miRNA は対象外です。

コア技術となる “ZZ” プローブとは　 - RNAscope® -

　※ BaseScope

_{は多少異なります}

超高感度テクノロジーの基本原理　 - RNAscope® -　

_{は増感ステップが異なります}

_Z

_Z

標的 RNA に対する Z 型オリゴなどの核酸プローブの

連続したハイブリダイズに伴うラベルプローブの局所集積

_{の主な特徴／アプリケーション}

_染色例

_にて検

_は断

_の比較表

専用のハイブリオーブンについて　－ HybEZ

_{II Hybridization System －}

_{のアッセイに最適化されたハイブリオーブン本体}