牛乳房炎における起因菌の動向とβ―ラクタマーゼ 産生性を組合せた薬剤の選択について

東 北 家 畜 臨 床 研 報Nn12,59∼65(1989) 〈原 著 〉

牛 乳 房 炎 に お け る 起 因 菌 の 動 向 と β一 ラ ク タ マ ー ゼ

産 生 性 を組 合 せ た薬 剤 の選 択 につ い て

板 垣 昌志 ・星 史 雄 ・渡 辺 大 作 ・酒 井 淳 一

漆 山 芳 郎 ・加 藤 敏 英 ・渡 辺 栄 次

山形県農業共済組 合連 合会

中央家畜診療所a)

要 約 牛 乳 房 炎 の 治 療 に お け る 抗 生 物 質(抗 生 剤)選 択 の 一 助 とす る 目的 で 、 昭 和60年9月 ∼62年 9月 ま で に 検 出 さ れ た 起 因 菌 の 同 定 や 薬 剤 感 受 性 検 査 を 実 施 し、 さ ら に 起 因 菌 を ス テ ー ジ 別 に 区 分 し 、 併 せ て β 一 ラ ク タ マ ー ゼ の 産 生 状 況 に つ い て も調 査 し た と こ ろ 、 次 の 成 績 を 得 た 。1)各 起 因 菌 の 検 出 率 は 、230株 中 、 ブ ド ウ球 菌 が52.5%、 レ ン サ 球 菌13・5%、 グ ラ ム 陽 性 桿 菌9.1ｰ/a、 グ ラ ム 陰 性 桿 菌24・3 %、 真 菌2.2%で あ り、 グ ラ ム 陰 性 菌 の 増 加 傾 向 が 認 め ら れ た 。2)起 因 菌 の 薬 剤 感 受 性 検 査 に お い て 、 Sta.epi.,Sta.aure.,グ ラ ム 陽 性 桿 菌 は ペ ニ シ リ ン(PCG)に 高 感 受 性 を 示 し、 グ ラ ム 陰 性 菌 は セ フ ァ ゾ リ ン(CEZ)と セ フ ォ ペ ラ ゾ ン(CPZ)に 高 い 感 受 性 を示 し た 。3)β 一 ラ ク タ マ ー ゼ 産 生 菌 は 、Sta.aure.で は50%、 グ ラ ム 陰 性 菌 で は79.4%で あ り 、 い ず れ も 高 い 割 合 を 示 した 。4)起 因 菌 種 を ス テ ー ジ 別 に 分 け た と こ ろ 、 慢 性 症 例 で は グ ラ ム 陽 性 菌 が82.3%で 最 も 高 く 、 急 性 症 で は グ ラ ム 陽 性 菌 が71・6%、 グ ラ ム 陰 性 菌 が26・5%、 甚 急 性 は グ ラ ム 陰 性 菌80%で あ り、 い ず れ も高 い 割 合 で あ っ た 。 以 上 の 成 績 か ら 、 グ ラ ム 陽 性 菌 が 極 め て 高 率 に み ら れ る 慢 性 症 例 に 対 し て は 、PCGを 第 一 選 択 と し、 急 性 症 に は 抗 菌 ス ペ ク トノレが 広 く 、 グ ラ ム 陽 性 ・陰 性 菌 の ど ち ら に も 有 効 なCEZを 選 択 す る 。 甚 急 性 に 対 して は 、 β 一 ラ ク タ マ ー ゼ に 対 して 比 較 的 安 定 なCEZを 選 択 す れ ば 良 い と 思 わ れ た 。 牛 乳房 炎 の原 因療 法 に関 す る薬 剤 感 受 性 試 験 の 有用 性 の 高 い こ とは 、 これ ま で多 くの研 究 に よ り明 らか に さ れ て い る1,11,13,16)が 、 当該 診 療 所 に お い て.も、最 近 、 あ る程度 の 効 果 が 上 っ て い る 。 しか し、近 年 、 各種 薬 剤 に 耐 性 を示 す 病原 菌 が 多 く認 め られ る よ うに な り、 また グ ラ ム陽性 菌 が減 少 して 陰性 菌 が増 加 傾 向 に あ る こ と も報 告 され て い る14)。 この よ うな状 況 の 中 で は 、従 来 か らの 抗 生物 質 の 応用 法 で は 多種 多 様 な起 因 菌 あ るい は 耐性 菌 に 対 して 、 満足 の い く治 療 効 果 が望 め な い こ とが 少 な く な い 。 本 研 究 は、 過 去2年 の 間 に検 出 され た起 因菌 の動 向 と そ の薬 剤 感 受 性 につ い て検 索 し、併 せ て β一 ラ ク タム剤 の 不活 化 酵 素(β 一 ラ ク タマ ー ゼ)の 産 生 性 を調 査 し、 薬 剤 選 択 の一 助 とす るた め に 若 干 の 検討 を加 え た もの で あ る。 材 料 と 方 法 1.供 試 牛 お よ び 分 房 数 本 試 験 に 供 試 し た 牛 は 、 当 該 家 畜 診 療 所 管 内 に 繋 養 さ れ 、 臨 床 型 乳 房 炎 に 罹 患 し た 乳 牛 で 、都 合213分 房 を 供 試 した 。 2,試 験 期 間 昭 和60年9月 ∼62年9月 。 3.起 因 菌 の 分 離 同 定 乳 汁0.lmlを5%羊 血 液 加 寒 天 平 板 培 地(ニ ッ ス イ)上 に 塗 布 し、37℃ で24時 間 培 養 し た10)。菌 の 同 定 はCown and Steelの 方 法3)に し た が っ た 。 こ の う ち 、Staphy loccus' (Sta.)属 は コ ァ グ ラ ー ゼ 試 験 に よ り、Streptococcus

Itgaki, M * .,Hoshi, H., Watanabe, D., Sakai, J., Urushiyama, M., Katoh, T. and Watanabe, E.( * Chuoh Veterinary Clinic, Yamagata Prefectural Federation of Agricultural Mutual Aid Association)

Trend of kinds of germs, contained the bacteria with ƒÀ-lactamase, causing mastitis in dairy cows and choise of antibiotics.

Tohoku J. Vet. Clin., Na12, 59-65 (1989) a)•§990 ŽRŒ`Œ§ŽRŒ`Žs‹v•Û“c1-7-7

(Str.)属 は ア ピ ス ト レ ッ プ キ ッ ド(ア ピ社)お よ び グ ラ ム 陰 性 菌 は バ イ オ テ ス ト1号 ・2号(栄 研)を 用 い て 同 定 し た 。 4。 薬 剤 感 受 性 試 験 分 離 した 菌 株 の 抗 生 物 質 に 対 す る感 受 性 は 、 感 受 性 デ ィ ス ク用 培 地 一N(ニ ッ ス イ)と 次 の 各 抗 生 物 質 を 含 む デ ィ ス ク(昭 和 デ ィ ス ク)を 供 試 し て 、1濃 度 デ ィ ス ク 法 に よ り実 施 した12)。 ペ ニ シ リ ン(PCG)、 ク ロ キ サ シ リ ン(MCIPC)、 カ ナ マ イ シ ン(KM)、 オ キ シ テ ト ラ サ イ ク リ ン(OTC)、 第1世 代 セ フ ェ ム 系 の セ フ ァ ゾ リ ン(CEZ)、 第3世 代 セ フ ェ ム 系 の セ フ ォペ ラ ゾ ン(CPZ)。 な お 、 最 小 発 育 阻 止 濃 度(MIC)は 、 阻 止 円 の 直 径 か ら 換 算 す る 簡 易 法12)に よ り算 出 し た 。 ま た 、+以 下 を 耐 性 と 判 別 し た 。 5.β 一 ラ ク タ マ ー ゼ の 検 出 分 離 菌 株 か ら の β 一 ラ ク タ マ ー ゼ の 検 出 は 、 ニ トロ セ フ ィ ン デ ィ ス ク 法6)に 準 じ て 実 施 した(図1)。

結

果

1、 起 因 菌 の 種 類 と そ の比 率 試 験 期 間 中 に 全 供 試 牛 か ら 分 離 した 起 因 菌230株 に お け る 菌 種 と そ の 検 出 率 を 図2に 示 し た 。 検 出 率 の 最 も高 い も の は 、ブ ド ウ 球 菌 が9.1%で あ り、 以 下 、 レ ン サ 球 菌 (13・5%)、 グ ラ ム 陽 性 桿 菌(9.1%)、Pseudomonas(7%)、 Serratia(7.0%),Klebsielle(4.8%),E.coli(2.2%) お よ び そ の 他 の グ ラ ム 陰 性 菌(Enterobactor,Proteus, Habnis,な ど)が3.5%と 低 下 し、さ ら に 真 菌 は2.2%で あ っ た 。 これ ら の う ち 、 グ ラ ム 陰 性 菌 は 、56株 で あ り、 全 体 の24,3%で あ っ た 。 2、 起 因 菌 の 薬 剤 感 受 性 分 離 した各 菌 種 の 各 抗 生 物 質(抗 生 剤)に 対 す る感 受 図1.ニ ト ロ セ フ ィ ン デ ィ ス ク 法 図2.起 因 菌 の 検 出 率(S.60.9∼62.9) 表1・PCGの 起 因 菌 別 薬 剤 感 受 性

表2.MCIPCの 起 因 菌 別 薬 剤 感 受 性

表3.KMの 起 因 菌 別 薬 剤 感 受 性

表4.OTCの 起 因 菌 別 薬 剤 感 受 性

表5.CEZの 起 因 菌 別 薬 剤 感 受 性

表6.CPZの 起 因 菌 別 薬 剤 感 受 性 性 を 表1∼ 表6に 示 し た 。 PCG(表1)は 、 ブ ド ウ 球 菌 に は+++以 上 を 示 す も の が 多 く 、 強 い 抗 菌 力 を 示 し た 。 し か し 、 耐 性 は レ ン サ 球 菌 で は37.9%、Sta.aureusで は32.4%に 認 め ら れ 、 か っ グ ラ ム 陽 性 菌 全 体 で は23.6%に 認 め られ た 。 MCIPC(表2)は 、 グ ラ ム 陽 性 菌 全 部 に 耐 性 が 認 め ら れ た 。KM(表3)は 、 グ ラ ム 陽 性 ・陰 性 菌 の い ず れ に も抗 菌 性 を 示 し た が 、 ブ ドウ 球 菌 、 レ ン サ 球 菌 、 グ ラ ム 陽 性 桿 菌 、Klebsiella,Pseudomonas,Serratiaで は 耐 性 を 示 し た 菌 株 も 多 く認 め られ た 。 OTC(表4)に 対 して は 、+++以 上 の 感 受 性 を示 し た 菌 株 数 が 極 め て 少 な く 、 耐 性 を 示 し た も の が 多 く認 め ら れ た が 、 特 に ブ ド ウ球 菌 と グ ラ ム 陰 性 菌 で 顕 著 で あ っ た 。 セ フ ェ ム 系 抗 生 剤 で あ るCEZ(表5)に 対 して は 、 グ ラ ム 陽 性 菌 の 多 く が+++以 上 の 感 受 性 を 示 し、 耐 性 を 示 し た 菌 株 数 は 少 な か っ た 。 ま た 、E.coliやKlebsiellaも 高 い 感 受 性 を 示 し た が 、PseudomonasやSerratiaで は 感 受 性 が 認 め られ な か っ た 。 一 方_{、CPZ(表6)に 対 す る 感 受 性 は 、す べ て の 菌 種 で 認} め ら れ 、耐 性 を示 し た菌 株 数 も少 な く、か っ 、Pseudomonas やSerratiaも ま た 比 較 的 高 い 感 受 性 を 示 し た 。 し か し、 グ ラ ム 陽 性 菌 の 感 受 性 は 、PCGやCEZに 比 較 し て や や 低 い 値 を 示 し た 。 ま た 菌 種 別 に 感 受 性 を 比 較 し た と こ ろ 、Sta.epi.,Sta. aure.お よ び グ ラ ム 陽 性 桿 菌 はPCGに 、Str.sP.はC EZ,E.coli,Klebsiellaお よ び そ の 他 の グ ラ ム 陰 性 桿

表7.菌 種 別 の 薬 剤 感 受 性

図5.β― ラ クタ マ ー ゼ産 生 率 菌 はCEZお よ びCPZ、 さ ら にPseudomonasお よ び SerratiaはKMとCPZに 、 各 々 最 も 高 い 感 受 性 を 示 し た(表7)。 3、 病 徴 別 に 比 較 し た 起 因 菌 の 分 布 本 症 の 病 徴 を 慢 性 、 急 性 お よ び 甚 急 性 の3ス テ ー ジ に 区 分 し 、 各 菌 種 毎 に 各 病 徴 を 呈 す る 分 房 数 を 比 較 した と こ ろ 、 図3に 示 す 成 績 を 得 た 。 そ の 結 果 、 慢 性 病 で は グ ラ ム 陽 性 菌 が82.3%の 分 房 で 認 め られ た の に 対 し て 、 陰 性 菌 は15.9%で あ っ た 。 ま た 急 性 病 で は 、 グ ラ ム 陽 性 菌 は71.6%の 分 房 か ら 、 陰 性 菌 は26.5%の 分 房 か ら検 出 さ れ 、か つ 、こ の ス テ ー ジ で は ほ と ん ど の 菌 種 が 検 出 され た 。 一 方_{、甚 急 性 を 呈 した も の で は 、グ ラ ム 陰 性 菌 が80%で} 認 め られ 、ま た 、こ の 病 徴 はSta.aure.,E.coli,Klebsiella お よ びPseudomonasの 各 感 染 乳 房 で 発 症 が 認 め ら れ た 。 4、 β― ラ ク タ マ ー ゼ の 産 出 状 況 昭 和62年4月 ∼9月 ま で の 間 に 発 生 した 臨 床 型 乳 房 炎 牛 か ら 分 離 し た103株 の 菌 に つ い て 、β― ラ ク タ マ ー ゼ の 産 出 状 況 に つ い て 検 索 し た 成 績 を 図4に 示 した 。 そ の 結 果 、Sta.epi.は37株 分 離 さ れ た が 、 そ の う ち の8株(22 %)に β― ラ ク タ マ ー ゼ が 産 出 され 、ま た 、Sta.aure.で は14株 中7株(50%)、 レ ン サ 球 菌10株 中1株(1%)、 E.coh 4株 中4株(100%) _{、Klebsiella 9株 中7株} 乳 房 炎 の 起 因 菌 の 検 索 が 臨 床 検 査 に 導 入 さ れ て か ら相 当 な 年 月 が 経 過 した が 、 そ の 薬 剤 感 受 性 に は 地 域 差 が 大 き く 、 か つ 同 一 地 域 に お い て も1、2年 の 間 に 変 化 し て し ま う こ と が 少 な く な い 。 本 症 の 規 因 菌 に 関 して 、野 村14)は 、 同 一 地 域 に お け る 1978年 と1985年 の 起 因 菌 を 比 較 し 、 ブ ド ウ球 菌 が72%か ら51%に 、レ ン サ 球 菌 が20%か ら7%に 低 下 し、逆 に 大 腸 菌 な ど の 腸 内 細 菌 群 が3%か ら33%に 急 激 な 増 加 を 示 し て い る こ と を 報 告 し て い る 。 著 者 ら に よ る 今 回 の 調 査 成 績 で も 、 ほ ぼ 類 似 の 傾 向 が み ら れ た 。 す な わ ち 、 検 出 率 の 最 も 高 い 菌 種 は 他 の 報 告9,10,15)と 同 様 にSta.epid-ermidisで あ り、Sta.aureusを 加 え れ ば 、 ブ ド ウ球 菌 と し て52.5%で あ っ た 。 ま たE.coliな ど の グ ラ ム 陰 性 菌 が24.3%と 多 く 、 野 村 の 報 告14)と 類 似 し て い た 。 ま た 、 PseudomonasやSerratiaが 各 々7%と 高 い 出 現 率 を 示 し た が 、Pseudo-monasに つ い て は 、 西 田 ら13)、 中 村 11) 、 吉 田 ら16)が5%以 下 で あ る と報 告 し て い る の で 、 そ れ よ りは や や 高 い 傾 向 で あ っ た 。 薬 剤 感 受 性 で は 、Sta.epi.,Sta.aure.お よ び グ ラ ム 陽 性 桿 菌 がPCGに 、 ま た 、 グ ラ ム 陰 性 菌 がCEZやCP Zに 各 々 高 い 感 受 性 を 示 し た 。 こ の 所 見 は 天 野 ら1)、 吉 田 ら17)お よ びCurtis4)ら の 成 績 と類 似 し て い た が 、 野 外 菌 株 の セ フ ェ ム 系 薬 剤 に 対 す る 感 受 性 に 関 す る 研 究 は 極 め て 少 な い 。 β― ラ ク タ ム 剤 の 応 用 が 主 流 と な っ て い る人 医 界5)で は 、 近 年 、 β― ラ ク タ マ ー ゼ 産 出 菌6,8)が 検 出 され る よ う に な り、 そ の 調 査 結 果 も 公 表 さ れ る よ う に な っ た7)。 今 回 の 調 査 で は 、 β― ラ ク タ マ ー ゼ の 産 出 は 、 グ ラ ム 陽 性 菌 で は69株 中16株 の23%で 、 グ ラ ム 陰 性 菌 で は34株 中 27株(79%)で 認 め ら れ 、 高 い 割 合 で あ っ た 。 こ の よ う な 知 見 か ら、 著 者 ら は 乳 房 炎 へ の 抗 生 剤 の 応 用 に 関 して 、 次 の よ う に 考 え た 。 す な わ ち 、 菌 種 や 薬 剤 感 受 性 が 不 明 な 初 診 時 の 対 応 と し て は 、 起 因 菌 の 地 域 的 な 動 向 と 薬 剤 感 受 性 お よ び β― ラ ク タ マ ー ゼ 産 生 性 等 を 総 合 的 に 判 定 し 、 症 状 別 に 薬 剤 の 選 択 を 実 施 す る 。 例 え ば 、 慢 性 症 に

早 く起 因 菌 とそ の性 状 が推 定 で き、 炎 症 が 組 織 の 深 部 に 進 行 す る前 に 、 β― ラ ク タマ ー ゼ に 対 応 で き る抗 生 剤 を 選 択 す る な ど、 的確 な薬 剤 の選 択 が 可能 で あ る と考 え ら れ る。 今 回 の 調 査 で は、 β― ラ ク タマ ー ゼ産 生 菌 の菌 種 まで は 同 定 で きな か った が 、今 後 に残 され た課 題 と して 、 さ ら に研究 を続 け て い きた い 。 文 献 1) 天 野 靖 永 ・小 林 和 夫 ・吉 田 信 次 ・角 金 俊 一 ・安 孫 子 治 ・高 村 定 男 ・新 田 竹 重(1988)。 甚 急 性 ・急 性 乳 房 炎 の 菌 種 別 薬 剤 感 受 性 と初 診 時 の 臨 床 症 状 に つ い て 、 東 北 家 畜 臨 床 研 報 、No.11:40∼43。 2) 新 井 俊 彦 (1984)。 抗 生 物 質 の 作 用 メ カ ニ ズ ム と耐 性 獲 得,1.β― ラ ク タ ム 剤.検 査 と技 術 、12:691 ∼695。

3) Cowan, P. T.(1974). Cowan and Steel's manual for the identification of medical bacteria. 2 nd ed., Cambridge University Press, London. 4) Curtis, R., Hendy, P. G., Waston, D. J., Arris, A.

M. H., Davis, A. M. and Marshall, M. J. (1977) A cerate containing cephalonium for the prophy-laxis of dry udder infection in dairy cows. Vet. Rec., 100:557•`560. 5) 江 戸 力 雄 (1987)。 化 学 療 法 の 領 域 。3 (7) :106。 6) 五 島 瑳 智 子 ・小 川 正 俊 ・武 藤 弓 子 ・達 彦 二 (1982)。 β― ラ ク タ マ ー ゼ の 産 出 機 序 と証 明 法 。Medical Technology, 10:317∼324｡ 7) 五 島 瑳 智 子 (1983)。 感 染 症 、13 (2) :29。 8) 橋 本 一 ・佐 竹 幸 子 (1987)。 細 菌 感 染 症 化 学 療 法 の 現 状 と 将 来, 7. 抗 菌 剤 は ど の よ う に して 改 良 さ れ て き た か― β― ラ ク タ ム 剤 。 モ ダ ン メ デ ィ ア 、33: 573∼588｡ 9) 五 十 嵐 文 人 ・河 田 忠 一 郎 ・青 木 権 次 郎 ・神 谷 芳 枝 (1973)。 乳 房 炎 発 生 農 家 に 飼 育 さ れ る 泌 乳 牛 の 乳 汁 細 菌 検 査 成 績 。 獣 医 界 、No.104:43∼48。 10) 久 米 常 夫 (1975)。 臨 床 細 菌 検 査 の 基 礎 知 識 一 と く に 易 しい 細 菌 培 養 の 手 技 を 中 心 と し て 、 家 畜 診 療 、 No.139:25∼33｡ 11) 中 村 茂 美 (1977)。 乳 房 炎 由 来 黄 色 ブ ド ウ 球 菌 の 薬 剤 感 受 性 試 験 成 績 、 家 畜 診 療 、No.167:33∼35。 12)日 本 化 学 療 法 学 会MIC測 定 法 改 定 委 員 会 (1974)。 最 小 発 育 阻 止 濃 度 (MIC) 測 定 法 改 訂 に つ い て 。 Chemopherapy、22:1126∼1129｡ 13) 西 田 修 ・井 上 丁 ・高 田 研 作 ・島 本 論 ・河 村 泰 雄 (1976) 。 指 定 農 家 に お け る 乳 汁 検 査 結 果 に つ い て 、 家 畜 診 療 、No.156:27-30。 14) 野 村 武 (1986)。 グ ラ ム 陰 性 菌 に よ る牛 の 甚 急 性 乳 房 炎 の 実 態 と そ の 治 療 。 家 畜 診 療 、No.282:21∼40。 15) 高 橋 啓 ・三 浦 雄 市 ・坂 本 礼 三 ・田 代 恵 広 ・佐 藤 博 (1973)。 乳 房 炎 の 実 態 調 査 と菌 検 索 に つ い て 。 家 畜 診 療 、No.122:23∼28。 16) 吉 田 正 明 ・星 野 邦 夫(1979)。 乳 汁 よ り分 離 し た 乳 房 炎 起 因 菌 の 分 布 と そ の 薬 剤 感 受 性 に つ い て 。 家 畜 診 療 、No.190:12∼18。 17) 吉 田 正 明 ・吉 浦 尚 子 ・谷 千 賀 子 ・近 藤 寧 子(1986)。 SN-403に よ る 乾 乳 期 牛 乳 房 炎 の 治 療 と 予 防 。家 畜 診 療 、No.273:26∼31。 65