放 線 菌 の産 生 す る抗 イ ンフル エ ンザ物 質 に関 す る研 究
ii G-72物
質 の 試 験 管 内作 用 機 作
宮
川
剛*
TSUYOSHI MIYAKAWA:
STUDIES
ON
THE
STREPTOMYCES
ANTI
BIOTICS
EFFECTIVE
AGAINST
INFLUENZA
VIRUS
ii
ON THE MODE OF ACTION
OF VIROSTATIC
AGENT
"G-72"
(CHARTREUSIN)
〔受 稿 9月7日 1957〕 緒 言 放 線 菌 の産 生 す る抗 イン フ ル エ ンザ ウ イル ス物 質 を 簡 単 に,而 も頻 度 高 く見 出 す とい う目的 の た め に,我 々 は漿 尿 膜 の 小 片 をHanks液 中 に浮 べ た 試 験 管 内 培 養 を第 一 次Screeningと し て使 つ て 見 た1).結 果 とし て或種 の既 知 の抗 生 物 質2)に もウ イル ス増 殖 の抑 制作 用 が 見 出 され た し,又7種 類 の新 しい 物 質 も単 離 され た2)3).然 し夫 等 の 内 マ ウ スに於 け る実 験 的 化 学 療 法 に 至 つ て も,猶 有 効 な る もの はMyxoviromycin1)2)3) 4)の み の 様 に 思 わ れ る.今 放線菌か ら産生 され る抗生 物 質 を溶媒 型 と水 溶 型 に 分 け る な らば, Myxoviro mycinも 亦 前報5)で そ の作 用機 作 を報 じたStrepto-thricin III6)も後 者 に属 す る.今 の 所 試 験管 内実 験 の 範 囲内 で は,果 してMyxoviromycinとStreptothricin IIIとが,同 じ様 な作 用 機 作 を もつ か 否 か は 明 か で な い.但 し前 者 の 方 がin vitroで は 小 量 で ウ イル スの 増 殖 を抑 制 す る し,動 物 体 内 で も前 者 の み が有 効 で あ る とい うPotencyの 差 は 気付 かれ る.次 に 溶媒 型 の物 質 で あ るが,何 れ も可 成 の 毒 性 をマ ウ ス に示 す の で, 動 物 体 内 で イ ン フル エ ン ザ ウ イ ル スに 対 し有 効 と認 め られ た もの は ない.し か し その 内 でG-72はChartreu sin7)類 似 の 物質 で あ るが,可 成 毒性 も低 い し,又T3-Phageに 対 し て も増 殖 阻 害効 果 を示 す.勿 論 濃 度 が 高 い と,宿 主 のE. coli Bに も阻 止 作 用 を 示 す が, phage増 殖 阻害 に必 要 な濃 度 との間 に は可 成 の ず れ が あ る. そ して この物 質 は可 成 の低 濃 度 で イン フル エ ンザ ウ イル スの 増殖 を も阻 害 す る.教 室 の金 子 は8)こ の物 質 のphageに 対 す る作 用 を追 求 中 で あ るの で,対 応 し て 私 は ここ にそ のinfluenza virusに 対 す る作 用機 作 を取 上 げ て 見 た. 材 料 と 方 法 1)ウ イル ス イン フ ルエ ンザAウ イル スPR8株 を使 用 した.分 離 後Ferret 7代,マ ウ ス593代 を経 た後 に発 育 難 卵 漿 尿 腔 にE182-3代 継 代 さ れ た もの を この 実 験 に使 用 した. 実 際 にはBrothで10-4に 稀 釈 した 感 染漿 尿 液 を, 10∼ 11日 発 育 鶏 卵漿 尿腔 に0.2ml接 種 し, 35℃, 48時 間 培 養 し て得 た漿 尿 液 を小 試験 管 に分 注 し, -25℃ に保 存 し て置 き, HA価 及 びTCID50は 使 用 時,各 実 験 毎 に測 定 しな お し た.そ の 値 は 各実 験 毎 に示 し て あ る. 2)組 織 培 養 法 そ の大 要 は既 に前報 で ふ れ た. 25ml入 り 三 角 フ ラ ス コ を使 用 し,そ の 中 に14日 発 育 鶏 卵 漿 尿 膜0.4mgを 入 れhanks液 に浮 游 させ,之 にPR8株 を接 種 し全 量 を 3.0mlと す る. 37℃ の孵 卵 器 で 之 を24時 間 振 盪 培 養 し, 必 要 に応 じて赤 血 球 凝 集価(HA)及 び50%組 織 培 養感 染 量(TCID50)を 測 定 した. 3) 50%組 織 培 養 感 染 量 の 測 定 4本 の 中試 験 管 を一 系 列 と し,之 に1.8mlのHanks 液 を入 れ, 14日 発 育 鶏 卵 漿 尿 膜 約150mgを 浮 游 させ, 被 検 ウ イ ル ス液 の10倍 階 段 稀 釈 を行 い,各 々 の稀 釈液 の0.2mlを 各 系 列毎 に 中試 験 管 に混 和 し, 37℃, 48時 間 振 盪 培 養 を行 い,其 後HA価 の有 無 を判 定, Reed and Meunch法 に よ りTCID50を 算 定 した.4) Hamagglutination titrationの 測 定
Salkのpatten法 に従 つ た.猶 鶏 赤 血 球 の 最 終 濃 度 は0.125%を 使 用 し た. 5)抗 生 物 質 G-72物 質 は本 教 室 金子8)に よつ て分 離 され た結 晶 を 使 用 し た.そ の融 点 は182∼3℃,赤 外線 スペ ク トル及 び紫 外 線 スペ ク トル 等 の物 理 的 恒 数,そ の他 の生 物 学 的.物 理 化 学 的 性 状 よ りほ ぼChartreusin7)と 同一 物 質 と思 われ る. 実 験 成 績 1)フ ラ ス コ毎 の ウ イル ス増 殖 のふ れ 前報5)に 於 て,我 々の 組織 培 養 条 件 に於 て は,対 照 に 高濃 度 の ウ イル ス を接種 した 際 は, Von Magnus現 象 に類 似 の現 象 が認 め られ る事,及 び接 種 ウ イル ス 量 の 少 い 程,抗 ウ イル ス物 質 の 作 用 が著 明 で あ る事 な ど に ふ れ た.そ の後 や や 組 織 培 養 条件 に改 善 を加 えた の で此 処 に触 れ た い.即 ち14日 発 育鶏 卵 漿 尿 膜 よ り400 mgの 細 片 を得 るた め に今 回 は 卵 殻 を稀 沃 丁 及 び70% Alcoholで 消 毒後 気 室 の反 対 側 を ピ ンセ ッ トで穿 孔 し 卵 内 容 を漿尿 膜 と卵 殻 とが剥 離 せ ぬ様 注 意 し な が ら除 去 した 後,内 径1.5cmの 円 型 パ ンチ を使 用 し,卵 殻 つ き の まま漿 尿膜 を 打 抜 い た.こ の 漿 尿 膜 をStrepto-mycin 100γ/ml, Penicillin 100u/ml加Hanks液 中 で洗 い 乍 ら卵 殻 よ り剥離 し,そ の20片 を1組 とし た. こ の漿 尿 膜 の1片 は軽 く水 分 を除 去 し たWet weighも で 平均20mgで あ る.従 つ て漿 尿 膜20片 は0.4gと な る. 猶1個 の卵 よ り取 り得 る漿 尿 膜 片 は15個 乃 至18個 で あ る.こ の膜 を用 い てTCID50 108.93-109.0の漿 尿 液10-4 稀 釈 液 をInoculumと し て培 養 す る と, 24時 間 のHA 価 及 びTCID50はTable 1に 示 す 如 くな り,フ ラス コ 毎 の ウ イル ス増 殖 の振 れ が 比較 的少 い.
Table 1. Extent of the variation in HA and TCID50 titers in tissue culture fluid usising Chorioallantoic mem
brane.
Inoculum sige: 104.93 TCID50 in fiinal con centration
* Titers were estimated after 24 hours in cubation and expressed as negative log
to the base 10. 2)組 織 培養 中 のG-72の 力価 変 動 G-72物 質 は 中性 附近 で は 比 較 的 水 に 難 溶 の 物 質 で, Alkali側 即 ちpH 8.3では5mg/mlま で よ く溶 解 す る. 併 し この 溶液 を再 びpH 7.2に修 正 す れ ば,雲 状 の 沈 澱 物 を生 じ て来 る. pH 7.2に 於 て溶 解 す る最 高 濃 度 の 限 界 は100mcg/ml迄 で あ る.但 し本 物 質 は酸 性 物 質 で Alkali側 に於 て極 め て安 定 で あ るか ら,こ の組 織 培 養 条 件 に於 て も力 価 の変 動 は少 い と予 想 され るが,一 応 実 験 的 に追 求 して み た.実 験 はG-72をHanks液 に て100mcg/mlに 溶 し, 100℃, 5´減 菌 し, 1.8mlを 中試 験管 に分 注 し,そ の3組 を用 意 した.即 ち1組 は G-72とHanks液, 1組 はG-72-Hanks液 に 漿 尿 膜 を 約150mgを 浮 游 させ た もの,第3組 は更 にそ の上 に ウ イル ス を10-4接 種 した もの で, 6時 間, 12時 間, 24時 間 に夫 々 中試 験 管 内 溶液 のG-72の 力 価 をT3-phage現 像 板 で パ ル プ法 を 用 い て測 定 した,結 果 はTable 2 (a)に 示 す. T3-phage現 像 板 に よ る力価 の検 定 は 発 育
Table 2 (a)
Spontaneous
inactivation
of G-72 during the incubation.
* Each figure
indicates
the diameters
of inhibition zones on T3 phag
plate,
being
estimated
in two rectanglar
directions
and expressed
in mm.
+ 100mcg
of G72 was dissolved in one ml of Hank's solution_??_
100mcg
of G72 was dissolved in one ml of Hank's
solution
and suspended
with
a piece of
Table 2 (b)
* G72 was dissolved in Hank's solution in the concentration
of 100mcg/ml
. Each figure indica
tes the titer of G72, the original
solution being taken as 100 unit
+ 100mcg/ml
of G72 was dissolved in Hank's solution and suspended
with a piece of Chorioall
antoic membrane
weighing
400mg
Table 3. Effect of differential concentration of G-72 on the growth of influenza virus.
Inoculum size: 104.93 TCID50 in final concentration
阻 止 像 が 星芒 状 を呈 し,他 の宿 主 菌 を用 い た,抗 生 物 質 の 力 価 検 定 の如 く正 確 には 検 定 出来 な い が,こ の 結 果 か ら見 る と殆 ん ど力 価 の 低 下 を認 め られ ない.又 こ の 物 質 はBacillus subtilisに 対 して も抗 菌 力 を有 す る の で,枯 草 菌 を用 い た現 像 板 に て 力 価検 定 を行 つ た が,力 価 の 著 しい減 弱 は認 め られ ない(Table 2(b)). 3) G-72の 各 種 濃 度 の ウ イ ルス 増 殖 に 及 ぼす 影 響 前 報 に於 ては,抗 生 物 質 の ウ イル ス増 殖 阻 害 の最 小 有 効 濃 度 を定 め るに, 37℃ 21時 間 のHA価 をも つ て し HA価Log 0.6以下 を示 す 抗生 物 質 の最 大 稀 釈 を以 て最 小 有 効 濃 度 とした.前 実 験 のHanks液2mlに 漿 尿 膜 約150mg浮 游 させ た 培 養 条件 で は25mcg/mlが 本 物 質 の最 小 有 効 阻 止 濃度 で あつ た が,今 回 は 三 角 フ ラス コ のHanks液3cc中 に0.4g漿 尿 膜 を浮 游 させ た 培養 条 件 を用 い てHA価 を測 定 し,ウ イル ス増 殖 阻 止最 小 有 効 濃 度 を定 め 更 に 之 にTCID50の 測 定 を併 用 し た.実 験 は25ml入 り三 角 フ ラ ス コにHanks液2.0mlを 入 れ之 に 漿 尿 膜0.4gを 浮 游 させ, G27をHanks液 に て稀 釈 し,最 終濃 度 が50mcg/ml, 25mcg/ml及 び12.5mcg/ mlと な る よ うに0.3ml宛 加 へ て,之 に ウ イル ス最 終 濃 度104.93 TCID50を0.3ml接 種 し,全 量3.0mlと し, 37℃, 24時 間 振 盪 培養 し,各 々のHA価 及 びTCID50を 測 定 し た.そ の 結 果 はTable 3に 示 す.即 ちTCID50 を以 てす る本 物 質 の 最 小 有 効 濃 度 は50mcg/mlと な る.猶 本 物 質 は25mcg/mlよ り12.5mcg/mlと な るに 従 つ て急 に ウ イル ス増殖 阻止 作 用 が 減 ず る.こ の事 は 安 斉 が別 に触 れ る予 定 で あ る9). 4)ウ イル ス 感 染後 時 間 を経 てG-72を 作 用 さ せ た 場 合 の ウ イル ス増 殖 に 及ぼ す 影 響 ウ イル ス感 染 後 組 織 内 に於 て ウ イル ス増 殖 機 構 は連 続 的 に進 行 し て い る.こ の 際, G-72に 感 受 性 の高 い 時 期 が奈 辺 に あ るか を明 か に す るた め に,次 の 様 な実 験 を行 つ た. G-72の 濃 度 は ウ イル ス 阻止 最 小 有 効 濃 度(25mcg/ ml)を 用 い,ウ イル ス はTCID50 108.7のもの を最 終濃 度 TCID50 104.7と な る よ うに接 種 した.即 ちG-72物 質 の 250mcg/mlを 含 むHanks液(pH 7.6)を 調 製 し,振 盪 培 養 中 の ウ イル ス感 染 漿 尿 膜浮 游 液2.7ml(漿 尿膜0.4g を含 む)に, 0時 間, 1時 間, 3時 間, 6時 間 に0.3mlづ つ 添 加 し全 量3.0mlと し,接 種 後37℃, 24時 間 にMedium のHA価 及 びTCID50を 測 定 した.結 果 はTable 4に 示
す.即 ち感 染 後1時 間 に加 えた の で は, 0時 間 に 加 え た の と全 く差 を見 な い が, 3時 間 で は抑 制 は僅 か で24 時 間 でHA価 の産 生 をみ る.従 つ て前 報 のST-III5)に比
Table 4. Sensitivity of viral growth phases to the action of G-72.
* Final concentration
of G-72 substance
was 25mcg/ml
Inoculum size:
104.7 TCID50 in final
concentration
Table 5. Effect of viral inoculum size on the inhibition with G-72 substance.
べ, G-72は ウ イ ル ス の 漿 尿 膜 内 に 於 け る合 成 の,よ り早 い 時 期 を 阻 害 す る も の と 思 わ れ る.
5) G-72物 質 の ウ イ ル ス 増 殖 阻 害 の 程 度 に 及 ぼ す Inoculum sizeの 影 響
今 迄 記 載 し た10-4と い うStandard passage inocu-lum sizeで は 増 殖 阻 害 は 著 明 で あ る が,し か し こ の ウ イ ル ス 阻 害 程 度 がInoculum sizeの 大 小 に よ つ て 如 何 な る差 を生 ず る か を観 察 す る た め に 以 下 の 実 験 を 行 つ た.即 ち漿 尿 膜0.4gr, Hanks液2.0ml(対 照 は 2.3ml)250mcg/ml G-72 Hanks液0.3ml及 びTCID50 108.93の ウ イ ル ス を夫 々 最 終 濃 度10-2, 10-3, 10-4, 10-5 に な る様 に0.3ml接 種 し,全 量 を3.0mlと し, 37℃, 24時 間 振 盪 培 養 後,対 照 と比 較 し ウ イ ル ス 増 殖 阻 害 程 度 を観 察 し た.結 果 はTable 5に 示 す.こ の 結 果 は 先 にST III物質 で 報 告 し た の と殆 ん ど 同 し 結 果 でVirus を 高 濃 度 で 感 染 さ せ た 場 合 は あ ま り有 効 で な い が,低 濃 度 感 染 の 時 ほ ど有 効 と な る*.但 しG-72に 就 て は medium中 のfree virusや, residual virusを 抗 イ
* この 点 に関 し本 研 究室 の 安 斉 の成 績 に よれ ば 接 種 ウ イル ス量 の如 何 に拘 わ らず薬 剤 濃 度 をか えて そ の阻 止 の 百分 率 を取 れ ば そ の 価 は 常 に 一定 で あ る との成 績 を得 て居 る.続 報 に公 表 の予 定.
ン フ ル エ ン ザ(PR8株)家 兎 血 清(H. I. T. 10, 240)120 倍 稀 釈 液 で 除 去 し た 場 合 も,之 を し な か つ た 場 合 と の 間 に 著 しい 差 を認 め得 なか つ た. 6) G-72物 質 に よ る漿 尿 膜 の前 処 置 の ウ イル ス 増 殖 阻 害 に及 ぼ す影 響 G-72物 質 を或 時 間 漿 尿膜 に作 用 させ,そ の後 除 去 し た 際 ウ イル ス増殖 が正 常 漿 尿 膜 と比 べ て どの程 度 差 が ある か を み る為,次 の実 験 を行 つ た. 即 ち, 50mcg/ml,及 び25mcg/ml, G-72-Hanks液 20mlの 入 つ た シャ ー レに 夫 々漿 尿 膜0.4gを 浮 游 させ, 37℃ の 孵 卵 器 に3時 間 静置 し,そ の 後 冷Hanks液 に て3回 洗 い 又Hanks液20mlを 含 む シ ャー レに移 し, 前 回 同様2時 間 放置 し,其 後 又Hanks液 に て3回 洗 い, Hanks液2.3ml入 つ た フ ラ ス コ に 再浮 游 させ, 108.93 TCID50の ウ イ ル ス液0.3mlを 最 終 濃 度10-4に 接 種 し,全 量 を3mlと し, 37℃, 24時 間 振 盪 培 養 し, HA価 及 びTCID50を 測定 し た.結 果 はTable 6に 示
す.即 ち対 照 のHA価 とG-72前 処 置 の夫 との間 に は 可 成 りの 差 が認 め られ た が, TCID50で は そ れ 程 差 は認 め られ ず,対 照 の漿 尿 膜 の夫 に近 い ウ イル ス の増 殖 を 見 る事 が 出 来 た.即 ちTCID50に 関 す る限 りG-72の 組 織 へ の 影 響 は 可逆 性 で あ る. 7) G-72物 質 のPR8株 増 殖 阻 碍 曲線 G-72物 質 の添 加 と同 時 に ウ イル ス を感 染 させ, 37℃, 24時 間経 たmediumのHA価 とTCID50に 就 い て は, 既 に そ の結 果 を示 した が,此 処 では 時 間毎 にMedium 中 の ウ イル ス濃 度 をTCID50で 追 求 し,そ の 増 殖 阻碍 経 過 を対 照 と比 較 し た.既 に 記載 した如 く漿 尿 膜 の大 い さ を一 定 に す れ ば,ウ イ ル ス 増 殖 の フ ラ ス コ 差 は 考 慮 に 入 れ る 必 要 が な い の で,本 実 験 に 於 て は8ケ の フ ラ ス コ を 用 意 し,漿 尿 膜0.4gをHanks液2.0mlに 浮 游 さ せ, 250mcg/ml G-72-Hanks液0.3ml及 び TCID50 108.7の ウ イ ル ス液 を 最 終 濃 度10-4(0.3ml)に 接 種 し,全 量3.0mlと し, 37℃, 24時 間 振 盪 培 養 し, ウ イ ル ス接 種 後1時 間, 3時 間, 6時 間, 9時 間, 12時 間, 15時 間, 18時 間, 24時 間 に 各 々 フ ラ ス コ を 取 出 し,浮 游 液 中 の ウ イ ル ス 濃 度 をTCID50に よ つ て 測 定 し た.結 果 はFig. 1.に 示 す.即 ち 対 照 で は3時 間 迄
Fig. 1. Inhibitory effect of G-72 on the
growth
of PRs uirus.
Inoculum size: 104.7 TCID50 in final concentration
Table 6. Reversibility of the action of G-72 substance on the tissue.
* Control membrane was treated with Hank's solution without G-72 for 5 hrs . before inocula
tion at 37•Ž
+ Test membranes were treated with 50mcg/ml or 25mcg/ml of G-72 dissolved in Hanks'
solution at 37•Ž for 3 hrs, then both membranes were washed 3 times with Hanks' solution, and again treated with Hanks' solution without G-72 at 37•Ž for 2 hrs. before infection.
Finally they were transferred into the fresh medium without G-72, and infected with virus. Inoculum size: 104.93 TCID50 in final concentration
に 浮 游液 中 の ウ イル ス濃 度 は最 低 に達 し,以 後 時 間 の 経 過 と共 に対 数 的 に増 加 を示 す が, G-72添 加 の 場 合 は3時 間 迄 は対 照 と同様 浮 游液 中 の ウ イル ス濃 度 が 低 下 し,以 後 の ウ イル ス増 殖 は 対 照 の そ れ と比 較 して, 遙 か に抑 制 され た.但 し25mcg/ml濃 度 では そ の 抑 制 は不 完 全 で あ る. 考 按 G-72の ウ イル ス増 殖 阻碍 作 用 がPR8株 に対 す る直 接 不 活 化 作 用 で な く,又 吸着 阻 碍 で も ない こ とは既 に前 実 験 で確 認 した.従 つ て 一応G-72の 阻 碍 作 用 は 漿 尿膜 内 の ウ イル ス再 産 生 に 必 要 な る反 応 系 に働 い た 結果 で は な い か と思 わ れ る.次 にG-72を 作 用 させ た 漿 尿膜 の dehydrogenase反 応 は100mcg/mlの 濃 度 を使 用 して も,対 照 との 間 に何 等 の相 違 を見 出 し得 ない.一 方 ウ イル ス増 殖 とい うindicatorを 用 い て,膜 の 前処 置 の 影 響 をみ る と,そ の 障碍 作 用 はHA生 産 に於 て は否 定 出 来 な い が, TCID50で は 著 しい もの で は 無 く,そ の 作 用 は 前報 のST IIIのそ れ に比 す れ ば 著 し く少 い.又 本物 質 は感 染 後1時 間 迄 に 与 え た 際 は, 0時 間 と同 様 阻 碍 を示 す が, 3時 間 以 後 に 与 えた の で は,殆 ん ど阻 碍 作 用 が な い事 は,ウ イ ル スの膜 内合 成 作 用の 比 較 的 早 い 時期 に作 用 す る事 を示 す.之 のStageがMetho-xinin10)の そ れ と同 時 で あ るか否 か は,今 後 研 究 され ね ば な らな い が, ST IIIの作 用 時 期 とは 明 か に 相 違 す る事 は 云 い得 る と思 う.こ の 事 に就 い て は第3報 にふ れ る. 結 論 14日 の 発 育 鶏 卵 漿 尿膜 を用 いた 組 織 培 養 に よ り, G-72の イ ンフ ル エ ン ザA型PR8株 の 増 殖 に 及 ぼ す影 響 を 調 べ 次 の 結 果 を得 た. 1. G-72は ア ル カ リ側 の 溶 液 に 於 て 安 定 な る た め か, こ の 振 盪 培 養 条 件 で は 殆 ん ど力 価 の 減 弱 を み な い. 2. G-72は10-4の ウ イ ル ス感 染 に 対 し て25mcg/ml で,ほ ぼ 完 全 阻 止 を 示 す が, 12.5mcg/mlに な る と 可 成 の 増 殖 を ゆ る す. 3.ウ イ ル ス 感 染 後 或 時 間 経 過 後G-72を 作 用 さ せ る 場 合, 0時 間 と1時 間 と は,ほ ぼ 同 じ く阻 碍 し た が, 3時 間 で は 殆 ん ど抑 制 し 得 な い. 4. Inoculum Sizeの 差 に よ る ウ イ ル ス 増 殖 阻 碍 の 程 度 を 見 る に,高 濃 度 接 種 の 場 合 対 照 と の 間 に は 著 明 な 差 が な い が,低 濃 度 の 場 合 は 対 照 と の 間 の 差 は 著 明 で あ る. 5. G-72に よ る 漿 尿 膜 の 前 処 置 実 験 に 於 て そ の 作 用 は, TCID50に 関 す る 限 り で は 完 全 にreverseさ れ る. 以 上 の 実 験 よ り, C-72は 膜 内 に 於 け る ウ イ ル ス 増 殖 の 比 較 的 早 い 時 期 に 作 用 す る も の と老 え ら れ る. 終 り に 当 り御 指 導 を賜 つ た 恩 師 黒 屋 教 授 に 深 甚 な る感 謝 の 意 を 表 し ま す. 文 献
1) Kuroya, M. et al, Jap. J. Microbiol, 1, 49, 1957. 2) 黒 屋 政 彦, Chemotherapy, 4, 188, 1956. 3) Kuroya, M. et al, Jap, J. Microbiol., 1, 91, 1957. 4) Kuroya, M. et al, Jap. J. Microbiol., 1, 85, 1957. 5) 宮 川 剛,「 ウ イ ル ス 」掲 載 予 定 6) Inoue, M., J. of Antibiotice, (Ser. A)6, 122,
1953. 7) Leach, B. E. et al., J. A. C. S., 75, 4011, 1953. 8) 金 子 保, J. of Antibiotics, A.掲 載 予 定 9) 安 斎 温 「ウ イ ル ス 」 掲 載 予 定
10) Ackermann, W. W. and Massab, H. F., J. Exp. Med., 102, 393, 1955.
