T-1982の
嫌 気 性 菌 に 対 す る 抗 菌 力
渡 辺邦 友 ・磯 野 美登 利 ・青木
誠
小 林 と よ子 。上 野 一 恵
岐阜大学医学 部附属嫌 気性菌 実験施 設
T-1982の 嫌 気 性 菌 に 対 す る 抗 菌 力 に つ い て 検 討 し,次 の 結 果 を 得 た 。 1)T-1982の 嫌 気 性 菌 に 対 す る 抗 菌 ス ペ ク ト ラ ム は,Cefmetazole,Cefotetanの そ れ と ほ ぼ 一 致 し た 。T-1982のB.fragilisに 対 す る 抗 菌 力 は,Cefmetazole,Cefotetanよ り もや や 優 れ,1.56∼6.25μg/mlのMICを 有 し た 。 嫌 気 性 球 菌 に 対 す る 抗 菌 力 は,Cefazolin, Cefotaxime, Cefope-razoneよ り劣 る もの のCefmetazole,Cefotetanに ほ ぼ 匹 敵 す る 抗 菌 力 を 示 し た 。T-1982のB. thetaiotaomicron, E.lentum, C.difficile, C.ramosmnに 対 す る 抗 菌 力 は 弱 か っ た 。
2) T-1982はB.fragilisの 産 生 す る β-lactamaseに 対 しCefmetazole, Cefotetanと 同 様 非 常 に 安 定 で あ っ た 。 3) T-1982含 有 ブ イ ヨ ン(MIC濃 度)中 でB.fragilisは,ほ ぼ 完 全 に 溶 菌 し て お り,フ ィ ラ メ ソ トは ほ と ん ど認 め ら れ な か っ た 。 4) T-1982含 有 培 地 でB0ｆragilisを 継 代 培 養 す る と,菌 の 耐 性 は 徐 々 に 上 昇 し た 。 5)マ ウ ス にT-1982の2mgを7日 間 皮 下 注 射 す る こ と に よ り,盲 腸 内 のC.difficileの 異 常 増 殖 率 は80%で あ っ た が,菌 数 は 極 め て 少 な か っ た 。
6) T-1982は マ ウ ス 腹 腔 内 に 接 種 さ れ たB.fragiliisに 対 し,in vivoで 強 い 抗 菌 作 用 を 示 し た 。
T-1982は 富 山 化 学 工 業(株)お よ び 科 研 化 学(株)で 共 同 開 発 中 の セ フ ァ マ イ シ ン 系 の 抗 生 物 質 で あ る 。 本 剤 は,好 気 性 グ ラ ム 陽 性 菌,グ ラ ム 陰 性 菌 に 対 し て 広 範 囲 な 抗 菌 ス ペ ク トラ ム を 有 し,特 に 石scherichia coli, Klebstella imeumoniae, Serratia marcescens, Proteus sp, な ど に対 す
る 抗 菌 力 が 強 く,種 々 の 菌 種 の 産 生 す る β-lactamaseに 安 定 で,ま たin vitroで の 抗 菌 力 よ りin vivoで の 抗 菌 力 が 強 い の が 特 徴 で あ る と い う1)。 著 者 ら は,本 剤 の 嫌 気 性 菌 に 対 す る 抗 菌 力 をin vitroお よ びin vivoで 検 討 し た 。 ま た 本 剤 の 嫌 気 性 菌 が 産 生 す る β-lactamaseに 対 す る 安 定 性,マ ウ ス 盲 腸 内 でC.diffi-cileへ の 影 響 な ど に つ い て も 検 討 し た 。 I.材 料 と 方 法 1)供 試 菌 株 抗 菌 ス ペ ク トラ ム お よ び 接 種 菌 量 に よ るMinimum Inhibitory Concentration(MIC)の 変 動 の 検 討 に は, 研 究 室 で 保 有 し て い るATCCのReference strainを 含 む42株 を 用 い た 。 こ れ らはPeptococous asaccharolyti-cus3株,P. niger1株,P.indoltcus 2株,P. saccharo-lyticus 1株,P. premtii 1株,P.magnus 2株,Strepto-coccus intermedius 1株,S. constellaius 1株,Gaffkya anaerobia 1株,Peptostreptococcus micros
2株,Ps.an-aerobius 2株,Bacteroides fragilis 3株,B.vulgatus 1 株,B. thetaiotaomicron 1株,B. disiens 1株,B. mela-ninogenicus subsp. melaninogenicus 2株,B. melanino-genicus subsp. intermedius 1株,B.asaccharolyticus 2 株,Fusobacterium varium 1株,F. mortifermn 2株, F. nucleatum 1株,Vibrio sucotnogenes 1株,yeillonella parvula 2株,Eubacterium limosmn 1株,E. lentum 1 株,Propionibacterimn acnes 1株,Clostridimn ramosum 1株,C.difficile 2株 お よ びC.perfringens 1株 で あ る 。
臨 床 分 離 株 に 対 す るMIC分 布 の 検 討 に は,最 近1年 間 に 各 種 臨 床 材 料 よ り分 離 さ れ た 嫌 気 性 菌106株 を 用 い た 。 こ れ ら は,B.fragilis 26株,P.magnus 21株,P. asaccharolyticus 8株, Peptostreptococcusお よ びStrepto-coccus 17株,V. pamula 14株 お よ びC.difficlle 20株 で あ る 。
In vitroで の 耐 性 上 昇 お よ び 薬 剤 含 有 培 地 で の 形 態 変 化 の 検 討 に は,Cefazolinを 基 質 と し た 場 合 の β-lacta-mase活 性 の 高 いB.fragilis(GAI-0562)と 低 いB.fra-gilis(GAI-0548)の2株 を 用 い た 。
β-Lactamaseに 対 す る 安 定 性 の 検 討 に は,B.fragilis (GAI-0830, GAI-0548, GAI-0556, GAI-0511お よ び GAI-0763)5株 を 用 い た 。
Table 1 Antibacterial
spectra of T-1982, CTT, CMZ, CTX, CPZ and CEZ
106 CFU/ml
Note: P; Peptococcus, S; Streptococcus, G; Gaffkyc, Ps; Peptostreptococcus
B.fragilisを 腹 腔 内 に接 種 され た マ ウス の 腎お よ び肝 臓 内生 菌 数 に 及 ぼ す効 果 の検 討 に は,B.fragilis(GAI-0558)を 用 い た。 2)供 試 薬 剤 力価 の 明 らか なT-1982を 用 い た 。 対 照 薬 剤 と し て は,い ず れ も力価 の 明 らか なCefotetan (CTT), Cefme-tazole (CMZ), Cefoxitin (CFX), Cefotaxime (CTX), Cefoperazone (CPZ), Cefazolin (CEZ)お よ びLata-moxef (LMOX)を 用 い た。 3)MICの 測定 法 寒 天 希釈 法お よ び液 体 希 釈 法 に よ っ て測 定 し た。 寒 天 希釈 法 は,日 本 化 学 療 法 学 会(嫌 気 性 菌 のMIC測 定 小 委 員 会)の 推 奨 す る方 法 に 準 じ て 行 な った2)。す な わ ち 感 受 性 測 定 用 培 地 に は,Brucella寒 天(Difco)に ヒ ツ ジ血 液 を5%の 割 に ヘ ミン ・メ ナ デ ィオ ンを お のお の5 μg/ml,1μg/mlに 添 加 し た培 地,ま た はGAM寒 天 (ニ ッ ス イ)に メ ナデ ィオ ンを1μg/mlに 添 加 し た もの を 用 い た 。 接種 菌 液 は,GAMブ イ ヨ ン(ニ ッス イ)で の24時 間嫌 気 培 養 菌 液 をGAMブ イ ヨ ンで必 要 に応 じ 108CFU/mlあ るい は106CFU/mlの 菌 液 と した 。 薬 剤 含 有 平板 へ の菌 の 接 種 は ミク ロプ ラ ンター(佐 久 間製 作 所)を 用 い て 行 な った 。 液体 希 釈 法は,GAMブ イ ヨソ(ニ ッ スイ)を 用 い て 行 な い,菌 の 接 種 に は パ ス トール ピペ ッ ト(約0.25ml) を用 い た。 判 定 は,37℃ で24時 間 ま た は48時 間 嫌 気 培 養 後 に実施 し た。 C.difficileのMICは,薬 剤 含 有 平 板 を1夜,Anae-robic chalnber内 で(N280%,CO210%,H2 10%)
嫌 気 的 に保 存 し,培 地 を 十 分 還 元 させ た 後,Anaerobic chamber内 で 菌 接 種 を 実 施 し た3)。 4) In vitroで の 耐 性 獲得 0.20μg/mlか ら1,600μg/mlま で の 各種 濃 度 に:T-1982を 含 有 す るGAMブ イ ヨ ンの 一 系 列 に,被 検菌を 接 種 して 嫌 気 培 養 し,24時 間 後,最 大 発 育 許 容濃 度 の菌 液 を 新 しい 一 系 列 に 接 種 し た。 この操 作 を14回 反復 い 被 検 菌 のT-1982に 対 す る耐 性 の上 昇 を 観 察 した。対照 薬 剤 と して,CEZお よびLMOXを 用 い た。 5)B.fragilisの 産 生 す る β-lactamaseに 対 す る安 定 性 T-1982,CPZ,CTX,CEZを 基 質 と して,B.fragilis 由来 の β-lactamaseに 対 す る 安 定 性 を マ ク ロイ オ ドメ トリー に よ り測 定 した 。Anaerobic chamber内 に1夜 放 置 し たGAMブ イ ヨ ンに1/10量 のGAMブ イ ヨンで の1夜 培 養 菌 液 を 加 え,37℃4時 間 静 置 培 養 し た 後, 8,000rpm 10分 間 の 遠心 分離 に よ り菌 体 を 集 め た。0.1
Table 2 Antibacterial
spectra of T-1982, CTT, CMZ, CTX, CPZ and CEZ
106 CFU/ml
Note: B; Bacteroides, F; Fusobacterium, E ; Eubacterium, P; Propionibacterium C; Clostridium, *V; Veillonella, **V; Vibrio
Mリ ン酸 緩 衝 液 で2回 洗 潅 後,適 量 の0.1Mリ ン酸 緩 衝 液 に 浮遊 させ た 。 超 音 波 に よ り 菌 体 を 破 壊 し,12,000 rpm30∼40分 間遠 心 分 離 した上 清 を 酵 素 液 と し た 。 以 下 は,'沢 井 らの 方 法 に従 って 行 な った4)。 6) T-1982含 有 培地 で の 形 態 変化 B.fragilisを 種 々 の 濃 度 のT-1982を 含 むGAMブ イ ヨ ンに接 種,培 養 し,24時 間 嫌 気 培 養 後 のB.fragilis の形 態 を観 察 し た 。 7) T-1982投 与 マ ウス盲 腸 内容 物 中 にお け るC.diffi-cileの 出 現 T-1982の2mgを1日1回,ICR系 雄 マ ウ ス に7日 間皮 下 投 与 し,8日 目 と殺,・盲 腸 内容 物 にお け るC.diffi-cileの 出現 の有 無 を検 討 した 。C.diffiるC.diffi-cileの 分離 ・培 養 法 は青 木 らの 方法 に 従 った5)。 8)B.fragilisを 接 種 され た マ ウ スの 腎 お よ び 肝 臓 内 生 菌 数 に 及 ぼ すT-1982の 効 果 B.fragilis(GAI-0558)のGAMブ イ ヨ ンで の24時 間 培 養 菌 液 を 用 い て,1m1あ た り108CFUを 有 す る 菌 液 を 作 製 し,そ の0.3mlをICR系 マ ウ ス(約20g) の 腹 腔 内 に 接 種 し た 。 菌 接 種 直 後 にT-1982の2mgお よ び0.4mgを1回 マ ウ ス 皮 下 に 投 与 し,24時 間 後 に と 殺,肝 お よ び 腎 中 の 細 菌 数 を 割 面 ス タ ン プ 法 に よ り推 定 し た 。 対 照 薬 剤 と し て,CEZお よ びCMZを 用 い た 。 II.成 績 1)抗 菌 ス ペ ク ト ラ ム Table 1,2に,T-1982の 嫌 気 性 菌 に 対 す る 抗 菌 ス ペ ク トラ ム を,CTT,CMZ,CTX,CPZお よ びCEZの そ れ と比 較 し示 し た 。 グ ラ ム 陽 性 球 菌 で は,P.asaccharolyticus, P.niger, P.indolicus, G. anaerobiaに 対 し てT-1982は す べ て
Table 3 Antibacterial activity of T-1982 against anaerobic bacteria
Note: Sensitivity
test media;
Brucella blood agar
Incubation;
24 hours in an anaerobic cham
-ber
P; Peptococcus, S; Streptococcus
, G; Gaffkya
Ps; Peptostreptococcus
0.025μ9/m1以 下 のMICを 示 し,対 照 と し た5薬 剤 と 同 等 の 優 れ た 抗 菌 力 を 示 し た 。P,saccharolyticus,P.pre-votii,P.magnus,S.intermedius ,S.constellatus,Ps.mi-cros,Ps.anaerobiusに 対 し て は ,0.39∼25μ9/m1のMIC を 示 し,CTX,CPZ,CEZの お の お の0 .05∼1.56μ9/ m1,0.20∼3 .13μg/m1,0.05∼0.78μg/m1よ り劣 り , CTT,CMZの お の お の0.39∼6.25μ9/m1 ,0.39∼3.13 μg/mlよ り もや や 劣 る 抗 菌 力 で あ っ た。 グ ラ ム 陰 性 桿 菌 で は,B.fragilisに 対 しT -1982は 1.56∼3.13μ9/mlのMICを 示 し ,い ず れ の 対 照 薬 剤 よ り強 い 抗 菌 力 を 示 し た 。B.vulgatus,B.disiens,B.me-laninogenicus,B .asaccharolyticusに 対 し て も ,T-1982 は ≦0.025∼1・56μ9/m1のMICを 示 し ,CTXの ≦ 0・025∼0・78μ9/m1に は や や 劣 る も の の ,他 の4剤 と 同 程 度 の 強 い 抗 菌 力 を 示 し た。Fusobacteriumで は,1λTable 4 Antibacterial activity of T-1982 against anaerobic bacteria
Note: Sensitivity
test media ; Brucella blood agar
(Difco), Incubation ; 24 hours in an
anaero-bic chamber
B ; Bacteroides, F ; Fusobacterium
,
**V ; Vibrio
, *V ; Veillonella, E; Eubacterium,
P ; Propionibacterium, C ; Clostridium
mortiferum,F.variumに 対 し6.25∼25μ9/m1のMIC を 示 し,対 照 薬 剤 よ り弱 い 抗 菌 力 で あ っ た が
Table 5 Antimicrobial
activity of T-1982 and other three antimicrobials
against
Bacteroides fragilis (26 strains)
Table 6 Antimicrobial
activity of T-1982 and other three antimicrobials
against
Peptococcus magnus (21 strains)
Table 7 Antimicrobial
activity of T-1982 and other three antimicrobials
against Peptococcus asaccharolyticus (8 strains)
Table 8 Antimicrobial
activity of T-1982 and other three antimicrobials
against Peptostreptococcus sp.*(17
strains)
*Ps . parvulus, Ps. anaerobius, Ps. micros, S. constellatus, S. intermedius, S. morbillorum, Peptostreptococcus sp.
Table 9 Antimicrobial
activity of T-1982 and other three antimicrobials
against Veillonella parvula (14 strains)
Table 10 Antimicrobial
activity of T-1982 and other three antimicrobials
against Clostridium difficile (20 strains)
Fig. 1 Development
of resistance
of Bacteroides
fragilis
(GAI-0562)
to T-1982, LMOX
and CEZ
Fig. 2 Development of resistance
of Bacteroides
fragilis
(GAI-0548)
to T-1982,
LMOX
and CEZ
atumに 対 し て は0.20μg/mlとCTX,CMZの0.10 μg/mlに 匹 敵 し た 。
グ ラ ム 陽 性 桿 菌,グ ラ ム陰 性 球 菌 のE.limosum, P.ac-nes, V.parvula, C.perfringensに 対 し て も,T-1982は ≦0.025∼0.78μg/mlと 強 い 抗 菌 力 を 示 し た 。 し か し,C.difficileに 対 し て は,T-1982は100μg/ ml,C.ramosumに 対 し て も25μg/mlと 弱 い 抗 菌 力 を 示 し た 。 な おB.thetaiotaomicron, E.lentumに 対 す る 抗 菌 力 は,6薬 剤 と も弱 く,お の お の12.5∼50μg/ml, 25∼100μg/mlのMICを 示 す の み で あ っ た 。 2)接 種 菌 量 とMIC
Fig. 3 ƒÀ-Lactamase activity of Bacteroides
fragilis (GAI-0830)
5.30 U/mg of
protein
Hydrolysis of CEZ=100
Fig. 4 ƒÀ-Lactamase activity of Bacteroides
fragilis (GAI-0548)
0.85 U/mg of
protein Hydrolysis of CEZ=100
Table 3,4に 接 種 菌 量 を106 CFU/mlと108 CFU/ mlと し た 場 合 のMICの 変 化 を 検 討 し た0106 CFU/ml
で のMICと108 CFU/mlで のMICはF.mortiferum (GAI-0304), F.nucleatum (GAI-0474), C.perfringens (ATCC-13123), P.niger (ATCC-27731), P.asaccharo-lyticus (WAL-3218), V.parvula (GAI-2642)な ど の 菌 種 で4∼8倍 の 差 が 認 め ら れ た が,他 の 菌 種 で は 同 等 か2倍 程 度 の 差 が 認 め ら れ る の み で あ っ た 。 3)臨 床 分 離 株 に 対 す るMICの 分 布 臨 床 分 離 株 に 対 す るT-1982のMICの 分 布 をCEZ, CFX,CTTを 対 照 薬 剤 と し てTable 5∼10に 示 し た 。 106 CFU/ml接 種 時 で のMIC分 布 を み る と,T-1982 のB.fragilis 26株 に 対 す るMICは,1.56∼6.25μg/ml の 間 に 分 布 し,ピ ー ク は3.13μg/mlに あ り,CTTの1.56 ∼6 .25μg/ml(ピ ー ク 値6.25μg/ml),CFXの3.13∼ 12.5μg/mlよ り優 れ て い た 。CEZのMICは,25μg/ml
Fig. 5 j9-Lactamase activity of Bacteroides
fragilis (GAI-0556)
Fig. 6 P-Lactamase
activity of Bacteroides
fragilis (GAI-0511)
Fig. 7 /9-Lactamase activity of Bacteroides
fragilis (GAI-0763)
Fig. 8 Morphological changes at various con-centration of T-1982, LMOX and CEZ
Medium: GAM broth,37℃,24hr. Fitament:□Spheroplast:■
Agar dilution MIC:↓Broth dilution MIC:↓
Fig. 9 Morphological changes at various con-centration of T-1982, LMOX and CEZ
Medium: GAM broth,37℃,24hr. Filament:□Spheroplast:■
Agar dilution MIC:↓Broth dilution MIC:↓
以 上 に 分 布 し,ピ ー ク 値 は100μ9/m1以 上 で あ った。 一 方,Rmagnusに 対 す るMICは,T-1982で1,56 μ9/m1以 下 に 分 布 し,ピ ー ク は0.78μ9/ml,CEZで は1.56μ9/m1以 下 で ピ ー ク 値0.20μ9/m1,CTTで は 0.78μ9/ml以 下,CFXで は0.39μ9/ml以 下 で あつ た 。Rasaccharolyticusに 対 す るMICは,T-1982で 1.56μ9/m1以 下,CEZ,CTTで α78μ9/m1以 下, CFXで0.20μ9/ml以 下 で あ っ た 。Peptostreptocms お よ びStreptococcusに 対 す るMICは,T-1982で は2 峰 性 の 分 布 を 示 し ・α39μ9/ml以 下 と1.56∼25μ9/ml, CTTとCFXで は6.25μ9/m1以 下,CEZで は1,痴 μ9/ml以 下 で あ っ た 。V.parvulaに 対 す
るMICはT-Fig.10
Appearance
of Clostridium difficile in
caecum contents of mice
administrat-ed various cephem-antibiotics
Medication: dose; 2 mg/day, route; S. C., term; 7 days
*4+: 104 or more/plate, 3+: 104•`103/plate, 2+: 103•`102/plate,
1+: 102•`10•‹/plate,-: no growth 1982で1.56∼25μg/ml,CEZで は3.13μg/ml以 下, CFX,CTTで は6.25μg/m1以 下 で あ っ た 。 ま た,α difficileに 対 す るMICは,T-1982で100μg/ml以 上, CEZで は12。5∼25μg/ml,CFXで は100μg/ml∼100 μg/ml以 上,CTTで は,1株 を 除 い て12.5μg/mlで あ っ た 。 こ れ ら の 菌 種 に 対 す るT-1982の 抗 菌 力 は,い ず れ も対 照 と し たCEZ,CFX,CTTに 劣 る も の で あ っ た 。 4)In vitroで の 耐 性 獲 得 β-Lactamase産 生 性 のB.fragilis(GAI-0562)と 非 産 生 性 のB.fragilis(GAI-0548)を 用 い,T-1982含 有GAMブ イ ヨ ン 中 で14代 継 代 し,in vitroで の 耐 牲 上 昇 を 検 討 し た 。Fig.1∼2に 示 す ご と く,B.fragilis 1(GAI-0562)で は1.56μg/mlか ら12.5μg/mlへ,B. fragilis(GAI-0548)で は0.78μg/mlか ら12.5μg/ml へ と耐 性 が 上 昇 し た 。 5)B.fragiLisの β-lactamaseに 対 す る 安 定 性 T-1982のEfragilis 5株 由 来 の β-lactamaseに 対 す る 安 定 性 は,Fig.3∼7に 示 し た 。 T-1982は,B.fragilすis由 来 の β-lactamaseに 極 め て 安 定 で,CEZに 対 す る 分 解 を100%と し た 場 合 に,T― 1982は0%で あ っ た 。 6)薬 剤 含 有 ブ イヨ ン中 で の 形 態 変 化 β-Lactamase産 生 性 の 弱 いpfragilis(GAI-0548) と,強 いB.fragilis(GAI-0562)を 用 い,MIC附 近 の
Table 11 In vivo activity of T-1892 against
Bacteroides fragilis
(GAI-0558)
B. fragilis; 108 CFU/mouse i. p.
Grade of recovery of B. fragilis;™¿ to
Table 12 In vivo activity of T-1982 against
Bacteroides fragilis
(GAI-0558)
B. fragilis;
108 CFU/mouse
i. p.
Grade of recovery of B. fragilis;
-FFE
to
薬 剤 含 有 ブ イ ヨ ン中 で の 菌 体 の 形 態 変 化 を 見 た 。Fig.8 ∼9に 示 し た ご と く,B.fragilisはCEZを 基 質 と した 場 合 の β-lactamase産 生 性 の強 弱 に か か わ らず,T-1982の 寒 天 希 釈 法 に よ るMIC附 近 で フ ィ ラメ ソ トを形 成 し,ス フ ェ ロ プ ラ ス トを 作 り溶 菌 して い た。 ま た液 体 希 釈 法 に よ るMIC附 近 で は,ほ とん どが 溶 菌 して い る 像 が観 察 され た 。 この 様 相 は,LMOXの 場 合 と よ く似 て い たが,CEZで は,寒 天 希 釈 法 に よ るMIC附 近 で, 著 明 な フ ィ ラメ ン ト形 成 が認 め られ,T-1982の 場 合 と 明 らか に異 な っ た 。 7)T-1982投 与 マ ウ ス盲 腸 内容 物 中 に お け るC.di-fficileの出 現 Fig.10に 示 した ご と く,T-19822mgを1日1回 マ ウ ス皮 下 に7日 間 投 与 し た場 合,投 与 中 止翌 日の マ ウ ス 盲 腸 内 に は,5匹 中4匹(80%)に 内容 物1gあ た り
100個 以 下 の 少数 のCdifficileが 認 め られ た。 対 照 と し たCTTで は,5匹 中0匹,CTXで は,5匹 中5匹(100 %)にC. difficleが 認 め られ た。 8)マ ウス腎 ・肝 臓 内B. fragiLls生 菌 数へ の影 響 マ ウ ス腹 腔 内 に 接 種 され たB.fragilis(GAI-0558) (108CFU/マ ウ ス)の24時 間後 の肝 お よ び腎 内生 菌 数 に 及 ぼ すT-1982の 影 響 を,CMZ,CEZを 比 較 薬 剤 と して 検 討 し た。 Table 11に 示 した ご と く,菌 接 種 後24時 間 の 肝 内 生 菌数 は,CEZ 2mg/マ ウス1回 投 与 群 で 最 も低 く,T-1982 2mg/マ ウス1回 投 与 群 が それ に 次 い だ 。 Table 12に 示 し た ご と く,腎 内 生菌 数 は,T-1982 , CMZ, CEZの そ れ ぞれ1回 投 与 で ほぼ 同等 の 生 菌 数 の 減 少 が み られ た。な お,接 種菌 株 のT-1982, CMZ, CEZ に対 す る106 CFU/ml接 種 で のMICは ,お の お の 3.13,6.25お よ び100μg/ml以 上 で あ っ た 。 III.考 按 T-1982ば,7α 位 に メ トキ シ基 を 有 す る セ フ ァ マイ シ ソ系 の抗 生 物 質 で あ る。 著 者 らは ,T-1982の 嫌 気 性 菌 に対 す るin vitroお よ びin uivoの 抗 菌 力,T-1982
のB. fragilis由 来 の β-lactamaseに 対 す る 安 定 性 , T-1982投 与 マ ウ スの 盲腸 内細 菌 叢 の 変 化(特 にCdi一 fficileの出 現 の 有無)な どに つ い て,同 じ く セ フ ァ マイ シ ン系 のCTT,CMZお よ び セ フ ァ ロスポ リン系 のCPZ , CEZ,CTXな どの比 較 薬 剤 を用 いて 検 討 した。 T-1982は,好 気 性 菌 同 様,嫌 気 性 菌 に対 して も幅広 い抗 菌 スペ ク トラ ムを有 し,CTT,CMZな どの セ フ ァ マ イ シ ン系 薬 剤 とほ ぼ 同等 の 抗 菌 ス ペ ク ト ラ ム で あっ た。 中 で も特 徴 的 な 点 は,B.fragilisに 対 す る抗 菌 力 の 強 さで あ り,T-1982がB.fragilisの 産 生 す る β-la-ctamaseに 極 め て安 定 であ る こ とが そ の原 因の ひ とつ と 考 え られ る。 CMZ, CTTも,B.fragilisの β-lactamaseに 安 定 で あ る こ とか ら6,7)T-1982のCMZ, CTTを しの ぐ抗 菌 力 は,外 膜 透 過 性 の 強 力 さを示 唆 す る で あ ろ う。 CMZ, CTTな どの セ フ ァマ イ シ ソ系の 抗 生 物 質 は, グ ラム陰 性 菌 に 対 す る抗 菌 力 の増 強 に反比 例 し,グ ラ ム 陽 性 菌 に対 す る抗 菌 力が,セ フ ァ ロス ポ リン系(CEZ , CTXな ど)よ り劣 る傾 向 を示 して い る が,T-1982も 同 様 で あ る。 また,嫌 気性 菌 に対 して も一 般 に優 れ た抗 菌 力 を示 す が,嫌 気性 球 菌 に対 す る抗 菌 か は セ ファ マ イ シ ン3剤(CMZ, CTT, T-982)中 最 も弱 く ,C.ramo-sumに 対 す る抗 菌 力 も弱 か った。 また,こ れ まで セ フ ェ ム系 薬 剤 が こ とご と く無 効 で あ るB .thetaiotaomicron, C.difficileに 対 して はT-1982も 弱 い抗 菌 力 しか示 さな か っ た 。 、 T-1982の 嫌 窯 性 菌 に 対 す るMICは,接 種 菌量によ りわ ず か に影 響 を うけ るの み で あ り,殺 菌 力 の強 きをう か が わ せ た 。 ま た,B. fragilisは1 MIC濃 度 にT-1982を 含有す る ブ イ ヨ ン中 で,溶 菌 像 のみ が 観 察 され,フ ィ ラメント 形 成 が 著明 で あ っ たCEZの 場 合 とは 明 らか に異 なウ, 殺 菌 性 の強 さを示 唆 し た。 近 年,化 学 療 法剤 投 与 後 に お こ るC.difficile腸 炎 ・下 痢 症 に つい て の 関心 が 高 ま って い る8)。 著 者 らは,す で にICR系 マ ウス は,健 康 体 で は検 出 不 可 能 な程度 にC. difficileを有 して お り。化 学 療 法 剤 投 与 に よ り異常増殖 す る現 象 を 見 い だ し 解 。 今 日 ま で の 経験 で は,薬 剤2 mg/マ ウス1日1回,4日 ∼7日 投 与 で,投 与 中止時の C.difficileの 出 現 の様 子 を み る と,CTTで 代 表 きれる ご と く,C.difficileが 全 く検 出 され な い 型(CTT型) と,CTXで 代 表 され るCdifficileが100%盲 腸 内容物 1gあ た り14以 上 に検 出 され る型(CTX型)と その中 間 型(CMZな ど)に 分 類 され る こ とが 知 られ て いる, この投 与 後 のC.difficileの 出 現 の 様 子 は,投 与 され る薬 剤 の 抗 菌 スペ ク トラム,抗 菌 力 お よび 吸 収 排 泄 と密接に: 関 連 して い る こ とが 推 測 され るが,T-1982は,中 間型 を 呈 し,投 与 に よ りC.difficileはか な り高 頻 度 に 出現す るが,そ の菌 量 は 少 な い と い う成 績 が得 られ た。CTT, CMZ, T-1982を 投 与 した 時 に生 じる この マウ ス フロー ラへ の 影 響 の差 は,3剤 の抗 菌 力 の差 お よ び 吸収排泄の 相 違 を表 わ して い る と考 え られ る。 T-1982のin vivoで の 抗 菌 力 を 推 定 す る目 的で マウ ス の腹 腔 内 にB. fragilisを 接 種 し ,接 種 直 後 に薬剤を 1回 投 与 し,24時 間 後 の 肝 お よ び腎 内生 菌 数 を対 照毒の そ れ と比 較 す る実験 を 行 な っ た 。T-1982の2mg/マ ウ ス1回 投 与 に よ り,著 明な腎お よび肝 内生菌数の低下を 認 め る こ とが で き た 。 攻 撃 菌 に対 す るMICが100μg/ mlと 高 いCEZでT-1982 ,CMZと 同 等 の成 績 が得ら れ た 。これ は,CEZの マ ウ ス で の血 中 半減 期 は,T-1982, CMZよ り長 く,薬 剤 投 与 が 菌 接 種 直 後1回 で あ り,泌 時 間後 に,と 殺 して い るの で,血 中 濃 度 の持 続 の 影響に よ る もの と思 わ れ る。
文
献
1) 第29回 日 本 化 学 療 法 学 会 西 日 本 支 部 総 会 , 新 薬 シ ン ポ ジ ウ ムI,T-1982抄 録 集, 1981 2) 嫌 気 性 菌MIC測 定 法 検 討 委 員 会: 嫌 気 性 菌 の最 小 発 育 阻 止 濃 度 (MIC) 測 定 法 。Chemotherapy 27 (3):559∼560, 1979 3) 上 野 一 恵,小 林 と よ 子, 渡 辺 邦 友: Clostridiumdi-fricileの 検 査 法 。臨 床 検 査24 (5): 520∼525,19804) 沢 井 哲 夫, 高 橋 郁 子: β-ラ ク タ マ ー ゼ 活 性 測 定 法 と そ の 応 用 。 蛋 白 質 ・核 酸 ・酵 素23 (5): 391∼400, 1978 5) 青 木 誠, 小 林 と よ 子, 渡 辺 邦 友, 上 野 一 恵: マ ウ ス に お け る 各 種 化 学 療 法 剤 投 与 と腸 管 内Clost-ridium difficileの 変 動 に つ い て 。 第11回 嫌 気 性 菌 げ 感 染 症 研 究 会 講 演 記 録, 85∼90, 1980 6) 甲 畑 俊 郎, 江 崎 孝 行, 今 村 博 務, 渡 辺 泉, 他: CS-1170の 嫌 気 性 菌 に 対 す る 抗 菌 力 に つ い て 。Chemo-therapy 26 (S-5): 33∼39, 1979 7) 磯 野 美 登 利, 山 田 規 恵, 渡 辺 邦 友, 上 野 一 恵: YM-09330の 嫌 気 性 菌 に 対 す る 抗 菌 作 用 。Chemo-therapy 30 (S-1): 51∼64, 1982 8) 上 野 一 恵, 渡 辺 邦 友, 小 林 と よ 子: 偽 膜 性 腸 炎 と Clostridium difficile。 モ ダ ン メ デ ィ ア25 (12): 798 ∼810 , 1979
ANTIBACTERIAL
ACTIVITY
OF
T-1982
AGAINST
ANAEROBES
KUNITOMO WATANABE, MIDORIISONO,
MAKOTO AOKI
TOYOKO KOBAYASHI and KAZUE UENO
Institute
of Anaerobic
Bacteriology,
Gifu University,
School of Medicine
The antibacterial activity of T-1982, a new cephamycin antibiotic, was studied. The following results were obtained.
1) The antibacterial spectrum of T-1982 against anaerobes was almost conformable to that of cefmetazole and cefotetan. Its antibacterial activity against B. fragilis was slightly more potent than that of cefmetazole and cefotetan, with the MIC of 1.56 - 6.25ƒÊg/ml. Against anaerobic cocci, T-1982 was less active than cefazolin, cefotaxime and cefoperazone but comparable to cefmetazole and cefotetan . The activity was weak against B. thetaiotaomicron, E. lentum
, C.difficile and C. rarnosum.
2) Like cefmetazole and cefotetan, T-1982 was very stable to ƒÀ-laatamase produced by B . fragilis. 3) In the bouillon containing T-1982 (at the MIC), B . fragilis was almost completely lyzed and filamentation was scarcely observed.
4) In the broth containing T-1,982, resistance of B. fragilis was gradually increased with the passage of culture.
5) Following s.c. administration of T-1982 at a dose of 2 mg for 7 days in mice
, abnormal growth rate of (C. difficile was 80% in the ,cecum, although the number of organisms detected was extremely small .
6) T-1982 exhibited potent in vivo antibacterial activity against B . fragilis intraperitoneally in-oculated in mice.
