放線菌の抗菌性物質に穿て

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放線菌の抗菌性物質に穿て

第5報Acegm⑪myces gr言se⑪1囎No・l18株及AG翻omyces鰍r魂aVUs      翫43株の産生する抗肺炎菌性物質の抽出に就て

金澤讐科大學日置内科温室（日置教授指導）

今  井  照  英

    S／zbei 7mai

  （昭和23年9月18日受附）

緒  著者達の教室に於て分離せられたActinomy−

ces griseolus耳（）．18株及Actinomyces micro−

flavus 43株の抗肺炎菌性物質産生白虹に遷して

言

は之を本研究の第4報に詳述した．本報に於て は有効物質の抽出法に就て研究を進めた．

 1．No．株の號穂盤物質について

 1．温熱，酸及アルカリ等に勤する抵抗性 抽出操作を確立する上に必要なるを以て抗 菌性物質の温熱及酸，アルカリに封ずる抵

 先づSeitz濾過器を通したNo．18株の

培養濾液 （pH・8・5）を室濃溢に30。C

にその肺炎菌に封ずる効力は共に略itろfo 程度に減退することを認めた．

 衣に加熱試験に於ては，培養濾液（pH・

7・4）を40。Cより 10。C置きに100。C迄 に匠分し，各濫度5分聞の抵抗を無したる

實 験

抗 菌 贋 稀 繹 倍

Table 童

6400

5200

1eoO

800

＿鯉雌一曙電tw pmM・PtmPte一・・PtPti・V醐一

 師ち温度に封して非常に抵抗弱く60。C 5分位で既 に著明に抗菌力を消失することがみられる．併し濾液

的に強く，室温1時間では抗菌力の滅退がみられない・

 2．抽出，a）クロロホルム抽出法 先づエーテル

への蒋溶を試みたが，培養濾液を張酸性よりpH．2，

3，5，7，9と強アルカリ性となすも有効物質のエーテ ルへの移行が認められなかった．外種々なる熔媒にて「

試み漸くクロロホルムに轄溶することに成功すること

宛を用ひ3回抽出を行った麗に依ると，次の如き威績

   pH 3     →・移行を認めない・

   pH 5    →  同 上

   pH 7 pt一 2／3    pH 9一． 81｛」

［ 37 ］

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 部ち抗菌性物質は弱アルカリ性でクロロホルムに略 it完全に移行するのである．

       抽出實験例

培養濾液200cc（1：20・000）

i，H．9に修正if Cl｝1。，。，。，mに儲

1 ． 1

濾液（1：く1000）Chloroform 90cc（1：40・000）

1門門綱鵬法

       ；

       Ca 40mg，飴1伏物質

 本物質の8000萬稀羅液に於てなほよく肺炎菌の護育 を充分に阻止すると云ふことは相當に強力な抗菌製刻 たることを知るに足るものである．

 b）吸着法，本抗菌性物質は又炭末によく吸着され る．培養濾液に三下2％を加へることにより，完全に 吸着され，濾液には抗菌力を全く認めない．この炭末 よりはpH 2の盤酸酸性メタノーール，同酸性アルコー ル，同酸性アセトンで抗菌性物質の溶離をなし得る．

酸性水での溶離は困難である．メタノール，アルコー ルには申性で溶離しないが，アセトンでは申性でも幾 分溶離した．但し到底完全ではない．

 c）組合法，そこで吸着法とクロロホルム法との組 合せ法を行ふと，本物質の抽出法を次の如くなすこと

       抽  出  法          培養濾液        1

       二二2％吸着濾過

       ・

  炭末を盤酸酸性Aceton（pH2）にて溶出

       ，

   Aceton液のpHを6に修正滅墜溜法

       ・

 濃縮せる液を更にアルカリ側（pH 9・0）に修正す

        ChlOroform轄溶

       ，

     Chlo・・form下智溜法（30。C）

        ，   1

 本抽出法に精製實験記録にはi欠の如きものがある．

       實  験  例

培養濾液の300cc（1：40・000）

     1

 炭末5grを加へ振盛し濾過

     1

  1    1

濾液（1：く1000）炭末

       酸性Aceton溶出濾液

 1 炭末

t

Aceton液Ca 80cc

l

減墜溜法（30。C）

t

20cc濃縮液（1・500・000）

1

Chlor◎form凹凹溶

1    ，

      抽出残渣液  12cc Chloroform液

      （1：16．000）        （1：1．000．COO）

      ・↓

     芒硝脱水減歩Chloroformを同法（30。C）

        ↓

       16mg解状物質：（1：1・000・000・000）

 3）抽出物質の性賦

 この抽出物質：は石油エーテルに不溶であるが，クロ ロホルム，アルコール，メタノール，水，エーテル等 の各種溶媒に容易に溶解する．極めて不安定で，その 抗菌力は氷室に放置しても1書夜には既に駈。程度に

 未だ結晶物として之を探り出すご乏には威思しなか

った．

 H No。43株の魏菌軽物質に就て  1）抽出

 種 々検討せる結果本物質の性状も亦前記No．18に 類似ぜる盧があり，從って抽出の方法も亦之に準ずる       ま ことを知った．唯酸，「アルカリ」，に封しNo・18株 の夫は比較的抵抗が強かったのに反し，本：No。43株

pll 9に於て室温2時間後重んどその破壊を見た．

 零本抗菌性物質は炭末によく吸着ぜられるが，酸性 アセトンに若干，酸性メタソール，酸性アルコールに 幾分溶出せられる程度で溶出は比較的困難である．但

ることに依って略e目的を達し得る・此職前記No・18一

濾液の

6．0

7．0

8．0

Ch10rofOrm抽出

抽 出 液

  ノ

残   液 抽 出 液 残   液 抽 出 液 残   液

抗菌便

× 1600

× 200

× 3200

× 100

×． 3200

× 100

 備考 抽出液及残液抗菌償は敦れも原濾液の溶量稀

（ 38 ］

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株有効物質の抽出法と全く軌を一にする，濾液のpH

とクロロホルム抽出との關係に就セは上表の如き實験 記録がある．培養濾液（抗菌便3200倍）回量のクロロ

ホルム1回の振盟にて

       抽出實験例

       ノ

  培養濾液200cc（1・160・000）

1・H8にてChlρ・…rm V・9Pt・es

1 ．．」

残液（1＝5・000）Chloroform 75cc（1：80・000）

       i芒轍欄灘（3・oc）

      16mg （1：60．ooo．oootNvloo．ooo．ooo）

2）抽出物性賦

       N

 本抽出物は爾概ね褐染せる油賦質よりなりてみる

が，抽出濾液の抗菌償頗る高くゲ抽出操作が圓滑に進

但有効物質の抵抗甚だ弱き故精製に多大の困難を感ぜ しめ，目下の研究室の整備賦態では夫以上研究を進め ることが出來ないことを遺憾とする．

H 全物質に無論クロロホルムによく溶解するが，面四 王化炭素，水にむ可成よく溶ける．而うして此溶解分 申に有効物物の全量を藏する．有効分は爾アルコール にも移行する，但石油エーテルには全く移行せず，エ

       考

 由來放線菌に依り産生せられる抗菌物質は Waksmanに從へば次の3種に大別せられると 云はれる． 

 1．水門溶性，アルコPル不溶1生の蛋白性物

質で，Actinomycetin，、革icromorosporin等カミ之 に慨する．

 2．エーテル可溶性，アルコール可溶性の色 素性物質，Actinomycinが之に屡する．

 3．エPtテルには不溶，叉は可溶，水性若し くはアルコール性酸水に可溶，Streptothricin，

Streptdmycin， Proactinomycinが之に平する．

 而うしてStreptomycin， Streptothricinは活性 炭に吸着後，酸性メタソールを以て溶離濃縮 後アセトンに沈澱精製せられてるる．

 然るにNo．18株の抗菌性物質はAetherに 轄溶することなく，叉炭末吸着法にては酸性メ

タノPル，アセトン，アルコPtルに溶離せられ るも，アセトンにて沈澱することなく，此黙で

     L

       結

 1）著者は嚢に報告せる，肺炎菌に齢して特 異的に侵襲性を呈するActinomyces No，18及 Actinomyces micFoflavus No・43産生抗菌物質 の抽出精製を試みた．

 2）前者に關してその精製物質は，肺炎双球 菌第1型菌獲育阻止力10億倍（稀繹法に依る）殺 菌債5憶倍に達した．後者に凹しては同じく野

曝

Actihomycin系のもの， StrePtomycin， St「ePto−

thricin系のもの，その敦れにも性歌を異にして        な

みる．Streptomycin， Streptothricinは水によく

く溶解する黙でも之等物質と趣を異にする．

 No，43株の産生する抗肺炎菌性物質も漸く

「アルカリ側にてクロ・ホルムに韓溶し得る黙

：No，18株のそれとよく類を等しくして居り。

その抽出法は從來の報告に見る〜二の種抗菌性物 質と異なったもみでなければならなV・とV・ふこ とは可成り特異な物質であることを示して居 る．更にNo，18株の抗菌性物質と言ひ， No，

43株のそれといひ，肺炎菌にi封し，實に：数千萬 倍〜十数億に達する超高債の抗菌力を示すこと

はその偉力眞に大なりとなすべきである．

論

育阻止力6千萬倍〜1億倍に達した．

 3）爾物質共培養濾液よりの完全抽出に際し て從來放線菌に於ける抗菌性物質抽出法の潤れ をも之に：適用し難く，猫自の方法が探られなけ ればならなかった．それは培養濾液を「アルカ

リ側に修正し，クロ・ホルムを以て抽出するに

．ある．

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