セルソーターにより分画・分取した胸腺リンパ球の遺伝子発現解析

セルソーターにより分画・分取した胸腺リンパ球の

遺伝子発現解析

著者

伊藤 恒敏

セルソークーにより分画･分取した

胸腺リンパ球の遺伝子発現解析

課題番号13670002

平成13年度∼平成14年度科学研究費補助金(基盤研究(C) (2))研究成果報告書

平成15年5月

研究代表者 伊藤  恒敏

(東北大学大学院医学系研究科)

は し が き

胸腺リンパ球は骨髄由来の造血幹細胞が胸腺に移入し､増殖･分化･成熟するo胸

腺リンパ球分化の最も重要な問題の一つはその｢選択機構｣がいまだに明確になってい

ないことにある｡ T細胞抗原受容体(TCR)の発現と選択機構との関係は時系列的には

どのようになっているのか､ TCRαβとTCR78の分離はいかなる機構で行われるのか､

自己反応性のクローンがどのように排除されるか､適切に分化･成熟するものはどのよ

うにポジティブなシグナルを周囲から受け取るのか､ cmやCD8陽性細胞の振り分け

(cm:CD8-2･. 1)はどのような機構によって行われるのかo

そうした｢選択機構｣を明らかにする目的で､ ｢選択機構｣に直面する｢選択｣直

前の胸腺リンパ球を同定することが､選択機構の解明に向けての重要な｢鍵｣となる｡

この目的を達成する一つの手投として､われわれは､胸腺リンパ球の分化がその大きさ

と表面マーカーの発現によって数種の分化投階に識別できることを利用して､セルソ

タ一により異なる分化段階の胸腺リンパ球を分画･分取し､形態学的に解析を進めてき

た｡

今回はこの長期的なプロジェクトをさらに進めるために､これまで形態的にも同定

できた｢選択｣直前あるいは｢選択｣前後の段階の胸腺リンパ球を分画･分取しそれら

について特異的に発現される遺伝子(再配列活性化遺伝子[RAGl,RAG2] ､プレTCR

-1-遺伝子[pTα] ､ TCR遺伝子[TCRα, TCRβ, TCR†, TCR8] ､ TCR関連表面抗原遺伝子 [cD3] ､およびC-kit,臥-2受容体β鎖遺伝子[m-2Rβ] )の解析を計画した｡また

｢選択｣直前あるいは｢選択｣前後の段階の胸腺リンパ球を分画･分取する過程で､分

画･分取する際に用いられる表面マーカーとその発現を解析するアプリケーションの連

係が必ずしも満足のいくものではない現状に直面し､少なくともアプリケーションを改

善すれば､胸腺リンパ球の分画･分取に当たって大きな展開になるのではないかと考え

るようになった｡

改善されたアプリケーションによる胸腺リンパ球の分画･分取により､これまでは

あまり注目されなかった分化段階の亜群がいくつも同定できた｡それらをT細胞抗原受

容体(TCR)の発現とcD4やCD8の発現を軸に解析を続けているが､きわめて興味深

い分化の経路図が明らかになりつつある｡この検索を行うことにより得られる知見は､

｢選択｣直前あるいは｢選択｣前後の段階の胸腺リンパ球を確実に同定するための重要

な情報となる｡

最後に､本課題遂行のために､日本学術振興会より2年間にわたって貴重な研究補

助を受け､研究が大幅に推進できたことに対し､衷心からの感謝を申し上げます｡

-2-研 究 組 織

研究代表者 伊藤 恒敏  東北大学大学院医学系研究科 医科学専攻細胞生物学講座発生生物学分野 研究分担者  中村 雅典  昭和大学歯学部 口腔解剖学 研究分担者  曽我 浩之  東北大学大学院医学系研究科 医科学専攻細胞生物学講座発生生物学分野 研究分担者  山岸 舞  東北大学大学院医学系研究科 医科学専攻細胞生物学講座発生生物学分野

交付決定額(配分額)

教授

教授

助手

助手

(金額単位:千円)

直接経費 亊I

ｨﾆ

N

合計

平成13年度 ﾃ 0 ﾃ 平成14年度 ﾃC 0 ﾃC 総計 釘ﾃ# 0 釘ﾃ#

一3-研 究 発 表

(1)学会誌等

1. Itoh, T.,Nakamura, M., Yagi, H., Soga, H., Doi, H., Kqja, S., Nanno, M･, Suzuki, R･,

Satomi, S.,and Kasal1ara, S. Establishment of a mouse thymic epithelial cell line,

IT-79MliCand a brief review on cultured thymic epithelialcells. Cell･ Mol･ Biol･ 47: 1-18,

2001.

2･ Toyosaki-Maeda, T･, Takan0, H･, Tomita, T･, Tsuruta, Y･, Maeda-Tanimura, M･,

Shimaoka, Y., Takahashi, T., Itoh, T., Suzuki R.and Ochi, T. Differentiation of

monocytesinto multinucleatedgiant bone-resorbing cells: two-step differentatiationinduced

by nurse-like cells and cytokines･ Aれhritis Res･ 3: 306-310, 2001 ･

3･ Tamura, A･, Soga, H･, Yaguchi, K･, Yamagishi, M･, Toyota, T･, Sato, J･, Oka, Y･, and

ltoh, T･ Heterogeneous distribution of IELand LPL within the distinct reglOnS Ofthe

murine small intestine. Cell Tiss. Res. 2003, In press.

4. Kayaba, 5., Yaguchi, K., Soga, H., Yamagishi, M., Tamura, A., Kasahara, S･, Ohara, S･,

Oka, Y., Toyota, T.,and Itoh, T. DNA fragmentationand detatchment of enterocytes

induced byanti-CD3 mAb-activatedintraepithelial lymphocytes. Ⅰ. ¶le diffTerentiatial

responses in distinct reglOnS. Cell Tiss･ Res･ In submission.

5.. Yaguchi, K., Kayaba, S., Soga, H･, Yamagishi, M･, Tamura, A･, Kasahara, S･, and Itoh,

T. DNAfragmentationand detatchment of enterocytes induced byanti-CD3 mAhactivated

intraepithelial lymphocytes. II. Dissociable mechanisms operatlng in these responses･

Cell Tiss. Res. 也 submission.

(2)口頭発表

1.曽我浩之､中村雅典､八木秀樹､伊藤恒敏 ラット胸腺マクロファージ系細胞:免疫組織学的検索 第25回日本リンパ会総会､浜松(2001.6) 2.曽我浩之､中村雅典､山岸 舞､伊藤恒敏 マウス新生児胸腺のマクロファージ:免疫組織学的検索

ー4-日本解剖学会第47回東北･北海道連合地方会､札幌(2001.9) 解剖学雑誌 77, 416 (2001) 3.山岸 舞､中村雅典､曽我浩之､田村 明､矢口 圭､伊藤恒敏 胸腺上皮細胞が産生する液性因子 日本解剖学会第47回東北･北海道連合地方会､札幌(2001.9) 解剖学雑誌 77, 416 (2001) 4.山岸 舞､中村雅典､曽我浩之､田村 明､矢口 圭､伊藤恒敏 胸腺上皮細胞が産生する液性因子 日本解剖学会第47回東北･北海道連合地方会､札幌(2001.9) 解剖学雑誌 77, 416 (2001) 5.山岸 舞､中村雅典､曽我浩之､田村 明､矢口 圭､伊藤恒敏 マウス胸腺上皮細胞株汀-76MHCのサイトカイン産生能 第31回日本免疫学会学術集会､大阪(2001.ll) 日本免疫学会稔会記録 31, 148 (2001) 6.央口 圭､中村雅典､曽我浩之､山岸 舞､伊藤恒敏 小腸上皮細胞のTNFレセプターmRNAの発現の解析 第31回日本免疫学会学術集会､大阪(2001.ll) 日本免疫学会稔会記録 31, 282 (2001) 7.伊藤恒敏 組織の中で考える:胸腺上皮､胸腺リンパ球 第107回日本解剖学会総会､ ｢リンパ系･免疫系懇話会｣ ､浜松(2002･4) 解剖学雑誌 77, 151 (2002) 8.曽我浩之､徐 玉東､山岸 舞､陳 末､矢口 圭､伊藤恒敏 マウス胸腺の樹状細胞陽性細胞 第107回日本解剖学会稔会､浜松(2002.4) 解剖学雑誌 77, 1513 (2002) 9.山岸 舞､陳 東､曽我浩之､徐 玉東､矢口 圭､伊藤恒敏 胸腺上皮細胞株から産生される液性因子の検索 第107回日本解剖学会絵会､浜松(2002.4) 解剖学雑誌 77, 151 (2002) 1･Ot.陳 東､.山岸 舞､曽我浩之､徐 玉東､矢口 圭､伊藤恒敏 胸腺内部位の異なる微小環境の機能的差異検出の試み 第107回日本解剖学会総会､浜松(2002.4) 解剖学雑誌 77, 151 (2002) ll.伊藤恒敏､曽我浩之､山岸舞 胸腺リンパ球の細胞死: DNA断片化の見られない細胞死 日本電子顕微鏡学会､大阪(2002.5)

-5-12.伊藤恒敏

In the living thymus

瞭爾浜医科大学基礎医学院特別講演会(2002.9)

13.伊藤恒敏

In the living thymus

書林大学自求恩医科大学特別学術講演会(2002.9) 14.山岸 舞､陳 東､曽我浩之､矢口 圭､伊藤恒敏 胸腺上皮細胞から産生される液性因子の検索 第32回日本免疫学会学術集会､東京(2002.ll) 日本免疫学会総会記録 32, 208 (2002) 15.伊藤恒敏 In the living仙ymus 山形艮陵同窓会､山形(2002.ll) 16.伊藤恒敏 Inthe livingthymus一生きている胸腺の中で-山口大学医学部セミナー､宇部(2003.1) 17.伊藤恒敏 In仙e living仙ymus一生きている胸腺の中で-山口大学医学部専門特別講義､宇部(2003.1) 18.伊藤恒敏､山岸舞､曽我浩之 胸腺上皮とTリンパ球分化 第108回日本解剖学会総会､福岡(2003.4) 解剖学雑誌 78, 151 (2003) 19.矢口圭､田村明､曽我浩之､山岸舞､伊藤恒敏 i正しの小腸内分布とその機能 第108回日本解剖学会総会､福岡(2003.4) 解剖学雑誌 78, 151 (2003) 20.山岸舞､曽我浩之､矢口圭､伊藤恒敏 サイトカインが形成する胸腺内微小環境の部位による違い 第108回日本解剖学会総会､福岡(2003.4) 解剖学雑誌 78, 151 (2003) (3)出版物

なし

-6-TOUR ： Tohoku University Repository コメント・シート 本報告書収録の学術雑誌等発表論文は本ファイルに登録しておりません。なお、このうち東北大学 在籍の研究者の論文で、かつ、出版社等から著作権の許諾が得られた論文は、個別にTOUR に登録 しております。 TOUR http://ir.library.tohoku.ac.jp/