兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター研究報告第 8 号 2017 兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター研究報告第 8 号 2017 [ ノート ] 兵庫県における 2015/16 シーズンのインフルエンザウイルスの性状解析 * 押部智宏荻美貴髙井伝仕近平雅嗣望月利洋 Chara

(1)

兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター研究報告第 8 号 2017

［ノート］

兵庫県における 2015/16 シーズンのインフルエンザウイルスの性状解析

押部智宏

＊

_{荻美貴}

_{髙井伝仕}

_{近平雅嗣}

_{望月利洋}

Characteristic Analysis of the Seasonal Influenza Viruses in Hyogo

Prefecture

,

Japan

,

during the 2015/16 Season

Tomohiro O

SHIBE＊

, Miki O

_GI

, Denshi T

_AKAI

, Masatsugu C

_HIKAHIRA

and Toshihiro M

OCHIZUKI

Infectious Disease Research Division

,

Public Health Science Research Center

,

Hyogo Prefectural

Institute of Public Health and Consumer Sciences 2-1-29

,

Arata-cho

,

Hyogo-ku

,

Kobe 652-0032

,

Japan

In Hyogo prefecture

,

Japan

,

influenza activity during the 2015/16 influenza season was the second largest in the past 5 seasons. Influenza A(H1N1)pdm09 and B (Yamagata lineages) viruses predominated, followed by influenza B (Victoria lineages) and A(H3N2) viruses.

The HA genes of A(H1N1)pdm09 viruses fell into the genetic subgroups 6B.1 (76%) and 6B.2 (24%). The HA genes of A(H3N2) viruses fell into the phylogenetic clade 3C.2a1. The HA gene sequences of B (Victoria lineage) viruses belonged to genetic group 1A, the B/Brisbane/60/2008 genetic group. The HA genes of B (Yamagata lineage) viruses fell within the genetic clade 3 including B/Phuket/3073/2013 (2015/16 season vaccine strain).

Ⅰ はじめに

インフルエンザウイルスはこれまでA～C 型の 3 つの型に分類されたが，_{2011 年に呼吸器疾患の豚から C 型} 様のウイルスが分離され1)_，これが_{D 型として新たに加} わる見込みとなっている．このうち毎年冬季に流行し，ヒトに急性の発熱や上気道炎等を引き起こす季節性のインフルエンザウイルスはA 型及び B 型で，抗原性の違いにより，A 型は 2009 年にパンデミックを引き起こしたA(H1N1)pdm09 と A 香港型 (以下 A(H3N2)型)，B 型はYamagata 系統及び Victoria 系統の 4 つのタイプに分類される．これらのウイルスは宿主の免疫から逃れ感染症部＊別刷請求先：〒652-0032 神戸市兵庫区荒田町 2-1-29 兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター感染症部押部智宏るために抗原性を少しずつ変化させながら毎年流行を繰り返しており，次季のワクチン株を選定するには，流行するウイルスのタイプや性状変化を把握することが重要である．当所では，感染症発生動向調査事業の一環としてインフルエンザウイルスのサーベイランスを実施しており，県内のインフルエンザ様疾患患者の検体からウイルス分離，同定，遺伝子解析等の性状解析を行っている．本稿では_{2015/16 シーズンの調査結果について報告する．}

Ⅱ 材料と方法

1．検体 2015/16 シーズン (2015 年第 36 週 (8 月 31 日～9 月 6 日) から 2016 年第 35 週 (8 月 29 日～9 月 4 日)) に県内の指定提出機関_{(21 か所) で採取された221 検体及び} 小学校等での集団感染の疑い事例で健康福祉事務所が採原微生物検出情報（IASR），33, 8-9 (2012) 14) 笠原ひとみ，上田ひろみ，宮坂たつ子，藤田暁，小野諭子，松本清美，倉石雅彰，宮川公子：プール水が原因と推定された腸管出血性大腸菌 O26 集団感染事例．病原微生物検出情報（IASR），34, 132-133 (2013) 15) 中村寛海，梅田薫，山本香織，長谷篤，平井有紀，小笠原準，入谷展弘，西小孝之，西村真衣，小山浩嗣，西康之，西村直己，中野有一：腸管凝集付着性大腸菌耐熱性毒素遺伝子（astA）保有大腸菌 O166:H15 が原因と考えられた社員食堂における食中毒事例について．病原微生物検出情報（IASR）， 36, 89-90 (2015) 16) 緒方喜久代，成松浩志，鷲見悦子，内山静夫：既知の病原因子を保有しない大腸菌O6:H10（astA 保有）が検出された下痢症集団発生事例．病原微生物検出情報 (IASR)，25, 101-102 (2003) 17) Leung, P. H. M., Peiris, J. S. M., Ng, W. W. S., Robins-Browne, R. M., Bettelheim, K. A. and Yam, W. C.: A newly discovered verotoxin variant VT2g, produced by bovine verocytotoxigenic Escherichia coli. Appl. Environ. Microbiol., 69, 7549-7553 (2003)

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19) 山口友美，木村葉子，矢崎知子，後藤郁男，畠山敬，沖村容子：基質特異性拡張型β-ラクタマーゼを産生する腸管出血性大腸菌 O15 の遺伝子解析．宮城県保健環境センター年報，第_{30 号，27-30 (2012)} 20) Nyholm, O., Heinikainen, S., Pelkonen, S.,

Hallanvuo, S., Haukka, K. and Siitonen, A.: Hybrids of Shigatoxigenic and enterotoxigenic

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（平成_{29 年 2 月 28 日受理）}

(2)

2．インフルエンザウイルスの遺伝学的同定検査 A(H1N1)pdm09，A(H3N2) 型及び B 型ウイルスの同定は，国立感染症研究所が示したReal-Time RT-PCR 法あるいはRT-PCR 法により行った2)_． 3．インフルエンザウイルスの分離ウイルス分離は，既報に基づき3)_{，咽頭ぬぐい液を} MDCK細胞に接種し，トリプシン存在下で5％CO2，33℃， 7日間培養した．細胞変性効果 (CPE) がみられた培養上清は，0.75％モルモット赤血球あるいは0.5%ニワトリ赤血球を用いて赤血球凝集 (HA) 試験を行った4),5)_． 4．インフルエンザウイルス株の同定 A(H1N1)pdm09，A(H3N2)型及び B 型の同定は，赤血球凝集抑制 (HI) 試験法を用いた4),5)_{．標準抗血清は国} 立感染症研究所より分与された免疫ウサギ抗血清 A/California/07/2009 (H1N1)pdm09，A/Switzerland /9715293/2012 (H3N2)，B/Texas/2/2013 (Victoria 系統) 及び免疫フェレット抗血清 B/Phuket/3073/2013 (Yamagata 系統) を使用した． 5．Real-Time RT-PCR法による抗インフルエンザ薬剤耐性株の検出国立感染症研究所が示した _{Real-Time RT-PCR 法} (Allelic discrimination 法) により，オセルタミビル耐性の指標となるNA タンパクの275 番目のアミノ酸のヒスチジンからチロシンへの置換 (H275Y) を検出した2)_． 6．インフルエンザウイルスの遺伝子解析 RT-PCR 法で増幅した HA 遺伝子の HA1 領域をダイレクトシークエンス法で塩基配列を決定し， Neighbor-Joining 法により系統樹解析を行った．代表株の選定やクレード，サブクレードの名称等の分類は，The Crick Worldwide Influenza Centre (WIC) または国立感染症研究所の報告に基づいた6),7)_{．また，ワクチン株や代表株}

の _{HA 遺伝子の塩基配列は，GISAID (The Global} Initiative on Sharing All Influenza Data) のデータ (EpiFluTM_{) を使用し，Fig.4～7 では，引用した株名の横} に EpiFluTM _の_{Isolate ID を示した．}

Ⅲ 結果及び考察

1．県内のインフルエンザの流行状況 2012/13シーズンから本シーズンまでの感染症発生動向調査における定点あたりの週別インフルエンザ様疾患患者報告数をFig.1 に示した．週別定点あたりの患者数は，全国の調査と同じく2016 年第 1 週 (1 月 4 日～10 日) に流行開始の指標となる 1.0 人を超え7)_，_{2014/15 シーズンよりも 4 週遅い流行入} りとなった8)_{．その後急速に増加し全国よりも}_{1 週早い} 2016 年第 5 週 (2 月 1 日～7 日) に警報水準とされる定点あたり30 人を超えた7)_．第_{6 週 (2 月 8 日～14 日) に} は39.8 人となりピークを迎え，第 7 週 (2 月 15 日～21 日) は 38.1 人と一旦減少した後，第 8 週 (2 月 22 日～ 28 日) に再び増加に転じて第 9 週 (2 月 29 日～3 月 6 日) に 41.2 人と本シーズンの最高値となった．その後，急速に減少して第11 週 (3 月 14 日～20 日) は 21.3 人と警報水準を下回った．警報水準の持続期間は第5 週から第10 週までの 6 週間であり過去 5 シーズンで最長であった. その後は徐々に減少して第17 週 (4 月 25 日～5 月 1 日) まで患者数 1.0 人以上が持続した．本シーズンの流行期間は_{17 週間で，過去 5 シーズンの中で最短であっ} た．この期間の定点あたり累積患者数は311 人と過去 5 シーズンで2011/12 シーズンの 350 人に次いで2 番目に多かった． 2．県内のインフルエンザウイルス分離・検出状況本シーズンのインフルエンザウイルスの分離・検出状況をFig.2，3に示した. 検査した233検体のうち229件 (98 %) からインフルエンザウイルスが検出された．内訳は，A型が108 件 (47％) ，B型が121件 (53％) で，B型が多く検出された．全国的には A型が56％，B型が44％でA型が多く検出され，県内の結果と異なっていた7)_．検出された亜型 (系統) は，A(H1N1)pdm09 が 79 件

Fig.1 Weekly cases of Influenza-like illness per sentinel clinic from 2012/13 season to 2015/16 season in Hyogo prefecture，Japan.

(3)

兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター研究報告第 8 号 2017 (34%)，B 型 (Yamagata 系統) が 78 件 (34%) ，B 型 (Victoria 系統) が 43 件 (19%)， A(H3N2)型が 29 件 (13％) であり，例年より B 型 (Yamagata 系統) の検出割合が高かった．各亜型の出現状況を過去のデータと比較すると，_{A 型} では2012/13 シーズンは A(H3N2)型9)_，_{2013/14 シーズ} ンはA(H1N1)pdm09 10)_，_{2014/15 シーズンは A(H3N2)} 型が主体となっていた8)_{．本シーズンは}_A(H1N1)pdm09 の_{2 シーズンぶりの流行となった．} 一方，B 型の Yamagata 系統と Victoria 系統を比較すると，2012/13 シーズンは Victoria 系統が 55％を占め 9)_，_{2013/14シーズンはYamagata系統が67％}10)_，_2014/15 シーズンはYamagata 系統が 91％を占めた8)_{．本シーズ} ンはYamagata 系統が 64％と 3 シーズン連続して Yamagata 系統が多い結果となった．一方，全国の調査は_{Yamagata 系統が 56％であり}7)_{，県内の検出割合の方} が高く，本県のB 型の流行パターンは全国と異なる傾向が確認された． 3．週別のインフルエンザウイルスの分離・検出状況本シーズンの調査が開始された第36 週から流行開始の第1 週までの検出状況では，第 46 週 (11 月 9 日～15 日) に本シーズン初めて A(H3N2)型が検出され，その後も散発的に検出され_{A(H3N2)型が計 6 件となった．B 型} は第52 週に Victoria 系統が 2 件検出された．流行開始の第1 週から警報水準に達するまでの第 4 週は， A 型が 37 件，B 型が 10 件の計 47 件が検出され，内訳は_{A(H1N1)pdm09 が 32 件， B 型 (Yamagata 系} 統) が 7 件，A(H3N2)型が 5 件，B 型 (Victoria 系統) が 3 件と，4 種類のウイルスが検出された．その後の第5 週から第 10 週まで警報水準が持続したピーク期には，A 型が 51 件，B 型が 64 件と B 型の検出数が逆転した．この内訳はB 型 (Yamagata 系統) が 41 件， A(H1N1)pdm09 が 39 件，B 型 (Victoria 系統) が 23 件，A(H3N2)型が 12 件で，流行初期と同様に 4 種類のウイルスが検出された．第11週から第17週までの流行後期には，A型が9件， B 型が 40 件の 49 件が検出された．内訳は B 型 (Yamagata 系統) が 28 件， B 型 (Victoria 系統) が 12 件，_{A(H1N1)pdm09 が 6 件，A(H3N2)型が 3 件で，こ} の時期にも4 種類のウイルスが検出された．流行が終息した第18 週 (5 月 2 日～8 日) から調査終

Fig.2 Proportion of isolation/detection of influenza virus during 2015/16 season in Hyogo prefecture, Japan

Fig.3 Weekly isolation/detection of influenza virus during 2015/16 season in Hyogo prefecture, Japan

(4)

A/Hyogo/1123/2016 FEB

A/Hyogo/1098/2016 FEB

A/Hyogo/1197/2016 FEB

A/Hyogo/2005/2016 JAN

A/Hyogo/1134/2016 FEB

A/Slovenia/2903/2015(EPI ISL 206099)

A/Hyogo/1066/2016 JAN

A/Hyogo/1130/2016 FEB

A/Hyogo/1129/2016 FEB

A/Hyogo/1111/2016 FEB

A/Hyogo/3003/2016 MAR

A/Hyogo/3002/2016 APR

A/Hyogo/1166/2016 MAR

A/Hyogo/1108/2016 FEB

A/Hyogo/1201/2016 MAR

A/Hyogo/1180/2016 FEB

A/Hyogo/1170/2014

A/Hyogo/1218/2014

A/Hyogo/3174/2015

A/Hyogo/1179/2014

A/YAMAGATA/88/2014(EPI ISL 157413)

A/Hyogo/1251/2014

A/Hyogo/1264/2014

A/YAMAGUCHI/43/2013(EPI ISL 153044)

A/Hyogo/1050/2016 JAN

A/Hyogo/1052/2016 JAN

A/Hyogo/1193/2016 MAR

A/England/377/2015(EPI ISL 212237)

A/Hyogo/1084/2016 JAN

A/Hyogo/1077/2016 JAN

A/Louisiana/10/2013(EPI ISL 150298)

A/Hyogo/1215/2014

A/KOCHI/2/2014(EPI ISL 156436)

A/YAMAGUCHI/2/2014(EPI ISL 159034)

A/South Africa/3626/2013(EPI ISL 153195)

A/Hyogo/1086/2013

A/Hyogo/1116/2014

A/TOKYO/32434/2013(EPI ISL 154460)

A/Hyogo/1190/2014 @

A/HIROSHIMA/57/2014 @ (EPI ISL 160499)

A/Louisiana/06/2013(EPI ISL 149354)

A/Sichuan-Wuhou/SWL2259/2013@ (EPI ISL 153293)

A/HOKKAIDO/2/2014@ (EPI ISL 156432)

A/Ghana/DARI-0095/2014(EPI ISL 166053)

A/Dakar/02/2014(EPI ISL 165501)

A/St. Petersburg/27/2011(EPI ISL 90760)

A/Norway/2552/2012(EPI ISL 134125)

A/Czech Republic/32/2011(EPI ISL 90718)

A/Christchurch/16/2010(EPI ISL 79722)

A/Hong Kong/3934/2011(EPI ISL 93746)

A/California/07/2009(EPI ISL 115928)

0.002

6B

4

8

2

( 15/16 season vaccine strain)

3 6C

6A

K163Q

A256T

D97N

S185T

K283E

V234I

○ 2014/15season

● _{2015/16 season}

Hyogo strains

6B.2

6B.1

S84N

S162N

I216T

V152T

V173I

(5)

A/Hyogo/1091/2016 FEB

A/Hyogo/1179/2016 FEB

A/Hyogo/1045/2015 DEC

A/Hyogo/1132/2016 MAR

A/Hyogo/1220/2016 MAR

A/Hyogo/2004/2015 DEC

A/Hyogo/1173/2016 FEB

A/Hyogo/1114/2016 FEB

A/Hyogo/1070/2016 JAN

A/Hyogo/1069/2016 JAN

A/Hyogo/3154/2015

A/Hyogo/3123/2015

A/Hyogo/3231/2015

A/Hyogo/3201/2015

A/Hyogo/3211/2015

A/Hyogo/3229/2015

A/Hyogo/3061/2014

A/Hyogo/3140/2014

A/Hyogo/3063/2014

A/Hyogo/3055/2014

A/Hyogo/3071/2014

A/Hyogo/3151/2015

A/Hyogo/3072/2014

A/Hyogo/3214/2015

A/Hyogo/3240/2015

A/Hyogo/3116/2015

A/Hyogo/3168/2015

A/Hyogo/3058/2014

A/Hyogo/3175/2015

A/Hyogo/3218/2015

A/Hong Kong/5739/2014(EPI ISL 165556)

A/Hong Kong/5738/2014(EPI ISL 166844)

A/Hyogo/3197/2015

A/Hong Kong/4801/2014(EPI ISL 222828)

A/Hyogo/1089/2013

A/Hong Kong/146/2013(EPI ISL 136375)

A/Hyogo/3187/2015

A/Hyogo/3188/2015

A/Hyogo/3160/2015

A/Hyogo/3158/2015

A/Hyogo/3149/2014

A/Switzerland/9715293/2013(EPI ISL 166310)

A/Samara/73/2013(EPI ISL 143568)

A/Hyogo/1116/2014

A/New York/39/2012(EPI ISL 166861)

A/Hyogo/1101/2014

A/England/527/2014(EPI ISL 170285)

A/Florida/09/2015(EPI ISL 172743)

A/Netherlands/525/2014(EPI ISL 175051)

A/Austria/830719/2014(EPI ISL 170627)

A/Texas/50/2012(EPI ISL 138980)

A/Victoria/361/2011(EPI ISL 134450)

0.002

3C.2

3C.3

3C.2a

3C.3a

3C.3b

L3I

N144S

F159Y

K160T

N225D

Q311H

N145S

V186G

T128A

R142G

A138S

F159S

K326R

Y94H

S198P

N122D

E62K K83R R261Q

(15/16 Vaccine strain)

3C.1

□

2013/14season

○ _{2014/15season}

● _{2015/16 season}

Hyogo strains

(16/17 Vaccine strain)

T160K

N171K

3C.2a１

Fig.5 Phylogenetic analysis of influenza A(H3N2) HA genes (HA1)

(6)

B/Hyogo/1211/2016 MAR

B/Hyogo/1161/2016 FEB

B/Hyogo/1227/2016 MAR

B/Hyogo/1107/2016 JAN

B/Hyogo/1058/2016 JAN

B/Hyogo/1048/2015 DEC

B/Hyogo/1119/2016 FEB

B/Hyogo/1138/2016 FEB

B/Hyogo/2012/2016 FEB

B/Hyogo/3223/2015

B/Hyogo/1133/2016 MAR

B/Texas/02/2013(EPI ISL 156529)

B/Hyogo/3088/2012

B/Hyogo/3076/2012

B/Hyogo/3036/2013

B/Hyogo/1271/2012

B/Hyogo/2017/2012

B/Hyogo/3151/2013

B/Hyogo/3149/2013

B/Hyogo/1157/2012

B/Hyogo/2019/2012

B/Hyogo/3027/2012

B/Hyogo/3122/2013

B/Hyogo/3232/2014

B/Hyogo/3207/2014

B/Hyogo/3156/2014

B/Hyogo/3227/2014

B/Hyogo/3249/2014

B/Hyogo/3211/2014

B/Hyogo/3203/2014

B/Hyogo/4002/2010

B/Hyogo/4001/2011

B/Brisbane/60/2008(EPI ISL 129018)

B/Hyogo/168/2008

B/Hyogo/169/2009

B/Hyogo/3023/2010

B/Hyogo/3145/2012

B/Uruguay/12/2008(EPI ISL 23970)

B/Wisconsin/01/2009(EPI ISL 29552)

B/Brisbane/32/2002(EPI ISL 21112)

0.002 V146I

N75K

S172P

(11/12 vaccine strain)

1A

1B

N165K

L58P

N129D

V146I

I117V

□

2013/14season

○ _{2014/15season}

● 2015/16 season

Hyogo strains

(7)

B/Hyogo/1062/2016 JAN

B/Hyogo/3016/2016 MAR

B/Hyogo/3002/2016 APR

B/Hyogo/3003/2016 APR

B/Hyogo/1073/2016 JAN

B/Hyogo/1150/2016 MAR

B/Hyogo/1135/2016 FEB

B/Hyogo/1209/2016 MAR

B/Hyogo/1137/2016 FEB

B/Hyogo/1146/2016 FEB

B/Hyogo/1224/2016 MAR

B/Hyogo/3236/2015

B/Hyogo/2010/2016 FEB

B/Hyogo/3008/2016 APR

B/Hyogo/3112/2015

B/Hyogo/1131/2016 MAR

B/Hyogo/1101/2016 FEB

B/Hyogo/1219/2016 MAR

B/Hyogo/5001/2016 APR

B/Hyogo/1124/2016 FEB

B/Hyogo/1140/2016 FEB

B/Hyogo/3206/2015

B/Hyogo/1155/2014

B/Hyogo/3106/2014

B/Hyogo/3215/2015

B/PHUKET/3073/2013(EPI ISL 186619)

B/Hyogo/1102/2013

B/Hyogo/1231/2014

B/Hyogo/1276/2014

B/Hyogo/3112/2013

B/Wisconsin/01/2010(EPI ISL 112325)

B/Bangladesh/2113/2009(EPI ISL 138595)

B/Hyogo/1288/2012

B/Bangladesh/3333/2007(EPI ISL 20697)

B/Hyogo/1270/2012

B/Hyogo/1267/2012

B/Hyogo/1200/2012

B/Massachusetts/02/2012(EPI ISL 138284)

B/Estonia/55669/2011(EPI ISL 132495)

B/Hong Kong/3577/2012(EPI ISL 128126)

B/Hyogo/1243/2014

B/Hyogo/3174/2013

B/Brisbane/3/2007(EPI ISL 118626)

B/Florida/4/2006(EPI ISL 80395)

0.005

3

2

K88R

S150I

N165Y

S229D

T181A

R48K

P108A

S229G

D196N

K298E

E312K

L172Q

□

2013/14season

○ _{2014/15season}

● 2015/16 season

Hyogo strains

N116K

M251V

Fig.7 Phylogenetic analysis of influenza B (Yamagata-lineage) HA genes (HA1)

(8)

1件検出された．過去の流行では，A型が先行してピークを形成し，その後に B型が遅れて増加するパターンが多いが，本シーズンのピーク期はB型がA型よりも多く検出されていることから，B型の流行が例年よりも早く，その後も流行が持続して，A型の流行と重なったため流行ピークが長期化したものと思われる．また，流行の主体となった_{A(H1N1)pdm09とB型} (Yamagata 系統 ) 以外にも B 型 (Victoria 系統 ) や A(H3N2)型も全流行期間を通じて全体の20％及び10％程度がそれぞれ検出されており，これらの4種類のウイルスが混合流行したことも本シーズンの流行の特徴であった． 4．抗インフルエンザ薬剤耐性株の検出 Real-Time RT-PCR 法によりA(H1N1)pdm09 ウイルス株 53 株の抗インフルエンザ薬耐性株を調査した結果， H275Y 置換は認められなかった．全国の調査では，国内分離 A(H1N1)pdm09 の 2565 株のうち48 株 (1.9%) のオセルタミビル・ペラミビル耐性株が散発的に検出されており7)_{，今後も検出動向を注視する必要がある．} 5．県内分離ウイルス株の遺伝子解析 A(H1N1)pdm09 ウイルス分離株の HA タンパク (HA1 領域) の遺伝子系統樹解析の結果を Fig.4 に示した． A(H1N1)pdm09 ウイルスは，クレード 1～8 に区分され，クレード6 はさらにサブクレード 6A，6B，6C に分類される11)_．_{2013/14 及び 2014/15 シーズンの県内解析} 株はD97N，S185T 及び K283E のアミノ酸置換を持ち，さらにK163Q と A256T のアミノ酸置換を持つクレード 6B であった8),10)_{．本シーズンの分離株は，}_{6B クレード内} に_{S84N，S162N，I216Tを持つクレード6B.1とV152T，} V173I を持つクレード 6B2 に分類され6),7)_{，解析した県} 内株は，21 株のうち 16 株 (76%) がクレード 6B.1 に，残りの5 株がクレード 6B.2 に属していた．国立感染症研究所による国内分離株の解析でも_{80.1％がクレード6B.1} となっており7)_{，県内分離株と同様の結果であった．} A(H3N2)型ウイルス分離株の HA タンパク (HA1 領域) の遺伝子系統樹解析の結果を Fig.5 に示した．県内のA(H3N2)型ウイルス株は，2012/13 シーズン以降S45N と T48I のアミノ酸置換を特徴とするクレード 3C が主流で9)_，_{2013/14 シーズンに入りクレード 3C が} 3C.1 (代表株:A/Texas/50/2012) ，3C.2，3C.3 のサブクレードへと派生した10)_．_{3C.2 は L3I，N144S，F159Y，} N225D のアミノ酸置換を有する 3C.3a と E62K，K83R， N122D のアミノ酸置換を有する 3C.3b サブグループが追加されている 8),10)_{．本シーズンは，さらにサブグルー}

プ3C.2a 内に N171K，I406V，G484E を持つ 3C.2a1 サブクレードが新たに形成されており6),7)_{，今回我々が解} 析した10 株はすべてサブグループ 3C.2a のサブクレード3C.2a1 であった．全国の結果でも 98.4%がサブグループ_{3C.2a に属し，サブクレード 3C.2a1 に分類される} 傾向がみられており7)_{，県内の結果と同様であった．} B 型 (Victoria 系統) 分離株の HA タンパク (HA1 領域) の遺伝子系統樹解析結果を Fig.6 に示した． Victoria 系統は，Brisbane/60 クレードのサブクレード1A と L58P 置換を持つサブクレード 1B に分類される12)_．_{2013/14 シーズンの県内の分離株は，すべてサブ} クレード 1A に属し 10)_，_{2014/15 シーズンの分離株は} V146I を持つサブクレード 1A であった8)_{．本シーズン} に解析した 12 株もすべて 2014/15 シーズンと同様に V146I を持つサブクレード 1A に属した．全国的にも，本シーズンの分離株はすべてサブクレード_{1A に属しており}7)_{，県内と同様の結果であった．} B 型 (Yamagata 系統) ウイルス分離株のHA タンパク (HA1 領域) の遺伝子系統樹解析の結果を Fig.7 に示した． Yamagata 系統は，B/Florida/4/2006 株を代表とするクレード_{1，R48K，P108A，T181A 及び S229G のアミノ} 酸置換が特徴のクレード2，S150I，N165Y 及び S229D のアミノ酸置換を持つクレード3 に区分される12)_．県内の2013/14 シーズンの分離株は，前のシーズンと同様にクレード2 と3 が混在し，クレード3 が優勢であった10)_． 2014/15 シーズンは，クレード 2 と 3 は混在することなく，すべてクレード3 であった8)_．本シーズンの分離株で解析した19株はすべてM251V を持つクレード_{3に属し，前シーズンと同じくクレード2} に属する株はみられなかった．全国の解析でも，本シーズンはすべてクレード3に属しており7)_{，県内と同様の結} 果であった．

Ⅳ 結論

兵庫県における2015/16 シーズンのインフルエンザの流行は過去 5 シーズンで 2 番目の規模となり，主に A(H1N1)pdm09及びB型 (Yamagata系統) ウイルスが検出され，A(H3N2)型と B 型 (Victoria 系統) も検出された．遺伝子系統樹解析の結果，_{A(H1N1)pdm09 ウイルスは，}

(9)

兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター研究報告第 8 号 2017 系統樹解析からクレード6B.1 (76%) 及び6B.2 (24%) に属し，_{A(H3N2)型ウイルスはすべて 3C.2a1 クレードに} 属した．B 型 (Victoria 系統) はサブクレード 1A に属し， B 型 (Yamagata 系統) の分離株は，すべてクレード 3 に属した．

謝辞

本研究を実施するにあたり，検体採取，連絡調整にご協力いただきました県疾病対策課，県健康福祉事務所ならびに病原体定点医療機関に深謝致します.

文献

1) Hause BM, Ducatez M, Collin EA, Ran Z, Liu R, Sheng Z, et al. Isolation of a novel swine influenza virus from Oklahoma in 2011 which is distantly related to human influenza C viruses. PLoS Pathog. , 9，e1003176 (2013) 2) 国立感染症研究所：病原体検出マニュアルインフルエンザ診断マニュアル(第3版) (2014) 3) 山岡政興，押部智宏，稲元哲朗：A香港型インフルエンザウイルスのキモトリプシン存在下でのMDCK細胞による分離について．兵庫県立健康環境科学研究センター紀要，4，54-57 (2007) 4) 根路銘国昭，杉浦昭，植田昌宏：オルソミクソウイルス．ウイルス実験学各論，改訂二版，国立予防衛生研究所学友会編，287～330 (1982) 5) 根路銘国昭：インフルエンザウイルス，微生物検査必携，ウイルス・クラミジア・リケッチア検査，第Ⅱ分冊，各論1，厚生省監修，第3版，2-24，日本公衆衛生協会 (2004)

6) WHO influenza centre The Francis Crick Institute London : Report prepared for the WHO annual consultation on the composition of influenza vaccine for the Southern Hemisphere 2017 26th_-28th

September 2016 : https://www.crick.ac.uk/media /326439/september_2016_interim_report.pdf 7) 国立感染症研究所感染症疫学センター：IASR病原微生物検出情報 (月報)，37，211-221 (2016) 8) 押部智宏，荻美貴，髙井伝仕，岡藤輝夫ほか：兵庫県における_{2014/15シーズンのインフルエンザウイルス} 分離株の性状解析．兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター研究報告，7，1-9 (2016) 9) 押部智宏，荻美貴，髙井伝仕，岡藤輝夫ほか：兵庫県における2013/14シーズンのインフルエンザウイルス分離株の性状解析．兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター研究報告，6，1-11 (2015) 10) 押部智宏，荻美貴，髙井伝仕，岡藤輝夫ほか：兵庫県における_{2012/13シーズンのインフルエンザウイルス} 分離株の性状解析．兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター研究報告，5，17-23 (2014) 11) 国立感染症研究所感染症疫学センター：IASR病原微生物検出情報_{(月報)，36，199-207 (2015)} 12) 国立感染症研究所感染症疫学センター：IASR病原微生物検出情報 (月報)，35，254-258 (2014) （平成29年3月13日受理）兵庫県立健康生活科学研究所健康科学研究センター研究報告第 8 号 2017

［ノート］

兵庫県における 2015/16 シーズンのインフルエンザウイルスの性状解析

押部 智宏

荻 美貴

髙井 伝仕

近平 雅嗣

望月 利洋

Characteristic Analysis of the Seasonal Influenza Viruses in Hyogo

Prefecture

,

Japan

,

during the 2015/16 Season

Tomohiro O

, Miki O

, Denshi T

, Masatsugu C

and Toshihiro M

Infectious Disease Research Division

,

Public Health Science Research Center

,

Hyogo Prefectural

Institute of Public Health and Consumer Sciences 2-1-29

,

Arata-cho

,

Hyogo-ku

,

Kobe 652-0032

,

Japan

,

,

Ⅰ はじめに

Ⅱ 材料と方法

Ⅲ 結果及び考察

A/Hyogo/1123/2016 FEB

A/Hyogo/1098/2016 FEB

A/Hyogo/1197/2016 FEB

A/Hyogo/2005/2016 JAN

A/Hyogo/1134/2016 FEB

A/Slovenia/2903/2015(EPI ISL 206099)

A/Hyogo/1066/2016 JAN

A/Hyogo/1130/2016 FEB

A/Hyogo/1129/2016 FEB

A/Hyogo/1111/2016 FEB

A/Hyogo/3003/2016 MAR

A/Hyogo/3002/2016 APR

A/Hyogo/1166/2016 MAR

A/Hyogo/1108/2016 FEB

A/Hyogo/1201/2016 MAR

A/Hyogo/1180/2016 FEB

A/Hyogo/1170/2014

A/Hyogo/1218/2014

A/Hyogo/3174/2015

A/Hyogo/1179/2014

A/YAMAGATA/88/2014(EPI ISL 157413)

A/Hyogo/1251/2014

A/Hyogo/1264/2014

A/YAMAGUCHI/43/2013(EPI ISL 153044)

A/Hyogo/1050/2016 JAN

A/Hyogo/1052/2016 JAN

A/Hyogo/1193/2016 MAR

A/England/377/2015(EPI ISL 212237)

A/Hyogo/1084/2016 JAN

A/Hyogo/1077/2016 JAN

A/Louisiana/10/2013(EPI ISL 150298)

A/Hyogo/1215/2014

A/KOCHI/2/2014(EPI ISL 156436)

A/YAMAGUCHI/2/2014(EPI ISL 159034)

A/South Africa/3626/2013(EPI ISL 153195)

A/Hyogo/1086/2013

A/Hyogo/1116/2014

A/TOKYO/32434/2013(EPI ISL 154460)

A/Hyogo/1190/2014 @

A/HIROSHIMA/57/2014 @ (EPI ISL 160499)

A/Louisiana/06/2013(EPI ISL 149354)

A/Sichuan-Wuhou/SWL2259/2013@ (EPI ISL 153293)

A/HOKKAIDO/2/2014@ (EPI ISL 156432)

押部智宏

_{荻美貴}

_{髙井伝仕}

_{近平雅嗣}

_{望月利洋}

_{2015/16 season}