緑膿菌算出用液体培地における培養温度の影響について

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(1)Title. 緑膿菌算出用液体培地における培養温度の影響について. Author(s). 青井, 陽; 横田, 正義 . Citation. 北海道教育大学紀要. 第二部. C, 家庭・養護・体育編, 43(2): 65-73. Issue Date. 1993-03. URL. http://s-ir.sap.hokkyodai.ac.jp/dspace/handle/123456789/6718. Rights. Hokkaido University of Education.

(2) . 平成５年３月. ３巻第２号北海道教育大学紀要（第２部Ｃ）第４. Ｍａｈｒｃ，１９９３. ｌＩＣ）ＶｏＳｅｃ恒ｏｎｌｆＥｄｕｉけｏｆＨｏ嘘顎ｄｏＵ国ｖｅ（ｄｏｎ（ｒｓ．２．４３ｉｏ凶事副ｏ，Ｎｏ. 緑膿薗算出用液体培地における培養温度の影響について青. 陽ｏ横. 井. 田. 正. 義. 北海道教育大学旭川分校保健学教室. ｆｅｃｔ唖ｌｎｃｕｂａｔｉｏｎＥｆ. Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ⑪ｎＲｅｃ⑪Ｖｅｒｙ. 唖. ｉｏｒｔ甑ｅＭｅｄＰｓ躍如鰯ｏ鰯ｓ御〆“＃雛ひ湖面鑓髭ｒｅｍＬｉｑ血ｄＣｕｌａｆ醤１ｉｏｎｏｆＰ． α好調部鷲ｏｓα ｕｌｎｎｅｒａｔｌ. ＹｏｈＡ甑鑓ｌｄＮ１ａｓａｙｏｓ粒ＹＯＫＯＴＡｒ通園ｗ暖ＣｏｎｆＨｅａｄｑｉＤｅｐ士頃ｅｎｔｏｅｇｅＩＳｃａｅｎｃｅａ１，Ａｓ，Ｈｏ嬬恋ｄｏｆＥｄｌ証繍昭１０７０Ｕ匝ｖｅｉｔａｕ鎚住ｏｎｒｓｙｏ，Ａｓ. Ａｂｓｔ『ａｃｔｉｄｃｌ山口ｕｆＰｓｅｕｄｏＴｈｅｒｅｃｏｖｅ１γ ｏｏｏｓａをｏｍｎａｔ田園ｄｖｅｒｗａｔｅｄ垢ｏｒ五ｑｕｒｅｅｒｗａｓｃｏｍｐ姫ｒｌｎｏｎａｓａｅ削ぎｄｌ忌口ｖａ誼ｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｔｉｒｅｓｉｄｄｉｉ鑑ｅｒｅｎｔｃｏ位（ＡＣＴＢ）ｒａ導出ｅａ紅・ｅｍｅｄａｗｅｒｅＡｃｅ桜回国ｄｅｂｒｍｅｄ．Ｔｈ，ＡＳＰ鎚ｆｉ萱ｆｈｄｉ証ＴｔＮｉＲＫＢ縦Ｄ髭山だｌｏｄｂｒｏｔｈ（ＡＳＰＢ）七Ｌｉｒ）口ｗｅｒｅａｅｓｏｃｖａｏｎｏｅａｃｍｅｕｍｍｅｍｍのｓｏ ‐ ｅｍｐｅｒ，紅ｏｏｌ口直ｅｄｏｕｔｂｙ仕ｌｄ４ＣｔＰｒｏｂａｂｒｅ３２Ｃ，３７Ｃ，ａｌｒｐｒｏｃｅｄｌ＝ｅＮｕｍｂｅｅ間ｌｏｓｌｚ，．Ｔｈｅｃｏｌｎｐ２唖ｓｏｎｓｗｅｒｅｃ皿ｆｂｌＦｄｉせまｉｄｒｔａｄｉｌｔｉｉｅｏｒｅｖｅｒｓｃｏｏａｃｙｏｖｅｒｐｒｅｖｏｕｓｐｒｏｃｅｌ刀「ｅｓｌｙｍｅｗｎ，ｅｍｏｗｈｃｈｗａｓｎｐｒｏｖｅｎａｃｃｍｒ ‐ ０ｆＰ‐ａｅ削ぎｔ３γＣｒｅｃｏｖｅｂｏｏｓａｗａｓａｃ誼ｅｖｅｄａ；γ ｏ ‐ Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒａｔｅｓａｔ３２Ｃｍｄ４Ｃｗｅｒｅｉｎｆｅｄｏｒｉｌａｉｍｅｄａｔ３７ｏＣ‐ Ａｔ３７ｏＣ，ｍａ１山ｍｕ薫ｎｒｅｃｏｖｅｌｙｏｆＰ．ａｅ・ｔｏ化ｌｒｕ岸ｎｏｓａｗａｓａｔｃ誼ｅｖｅｄｂｙＡＣＴＢ，ｆｏ－ｏｓｅｏｂｌｄＡＳＰＢｌｌｏｗｅｄｂｙＤＲＫＢａ．. 緒. 言. ）「・９緑膿菌は生活廃水，汚水，遊泳用プール水，河川水等の水系環境中に広く分布しており７れらの試料中に存在する緑膿菌を検出することは衛生公衆衛生学上重要な意味をもつ．１１｝およびＤｋのＮｌｏ培）アスパラギンブイヨン（ＡＳＰＢ）アセトアミドブイヨン（ＡＣＴＢ）ｒａｅｏ，. ５）の三種の液体培地はこのような液体試料中に存在する緑膿菌を定性定量的に分地（Ｄ鞭蝦），，離するために用いられてきた代表的な選択増殖培地である．これらの培地は窒素および炭素源を特殊な有機化合物に制限することによって，同時に存在している他の繭種の増殖を抑制し，緑膿菌の（６５）.

(3) . ２００. 青井. 陽・横田正義. みが発育できるように工夫している．. ）を用いて上記３種の培地の緑膿菌回収性能の比較を行ない自然環境中に存在私達は最確数法６，. する緑膿菌を回収する際にはどのような条件が最も良い成績を示すのかを見出そうとしてきた．今回，試料の培養温度を比較的低温である３２℃，中温の３７℃，比較的高温の４２℃に設定し緑膿菌の回収成績を比較した‐ 比較の基準となる緑膿菌試料は自然界に自由に存在している菌株を用いることとし，本菌が確実に検出されることが判明している河川水をその試料として用いた‐ 更に，それぞれの培地で最も高い回収成績を示す温度における，３種の培地の性能の比較を行なったので報告する．. 材料および方法１．培地１｝アスパラギンブイヨン用いた培地は以下の通りである‐ アセトアミドブイヨン（ＡＣＴＢ），. １）Ｄｒ５）ＮＡＣブイヨン培地（栄研化学株式会社；ＮＡＣＢ）（ＡｓｐＢ）ｋｅのＮｏｌｏ培地（Ｄ細田），ａ，，ＮＡＣ寒天培地（栄研化学株式会社；ＮＡＣＡ）プブイトリトソイヨン（栄研化学株式会社ＴＳＢ）；，２．最確数（ＭＰＮ）法を用いた各液体培地間の緑膿菌回収能の比較緑膿菌を含む試料として，旭川市街における河川水を用いた‐ ２倍濃度に作成した，各培地に等量の河川水試料を接種した．試料は，１０倍又は２倍段階希釈して接種した．希釈－段階について使用した試験管数は１０～５０本であった．培養は３２℃，３７℃，または４２℃で行なった‐ 培養開始後４日迄観察し，細菌の発育を示した試験管からＮＡＣ寒天平板に継代して，菌の発育の有無を調べた．発育したコロニーについて，各種の生物学的検査をおこない，オキシファームチューブ（日本ロシュ. 株式会社）によって，最終的に緑膿菌その他と同定した‐ 緑膿菌を同定する際に行なった検査項目は，以下の通りである；グラム染色，４２℃ 発育，ブドウ糖ＯＦ試験，チトクロームオキシダーゼ，. アルギニン水解，アシルアミダーゼ試験，グルコン酸酸化，運動性，ゼラチン液化，リシン脱炭酸，乳糖，白糖，キシロース，マルトース，マンニット，マニトール，フェニルアラニン，クエン酸分. ｝の方法に従いＮＥＣ解，インドール，尿素および色素産生性．最確数（ＭＩＰＮ）の算出は西原ら８，８０－９１コンピューターで行なった．河川水中の一般細菌の培養は，トリプトソイ寒天培地を用いて行なった‐ また，試料を希釈しなければならない際にはフォスフェイトバッファー（ＰＢＰＨ２），を用いた．試験管培養株はＩＦ０３０８０株を用いた‐. ３．サンプル採取場所河川水試料の採取場所は，旭川市緑橋付近における牛朱別川である‐ 当該地点は旭川市市街中心部に位置していた．採取季節は冬期，および夏期‐ 水温は冬期においては２～５℃，夏期においては１８～２４℃ であった．４．検. 定. ｝によって行なた回収成績の比較のための検定はＣｏｃ廠孤の方法４っ．. （６６）.

(4) . . 緑膿菌算出用液体培地の性能の比較・培養温度の影響結. ２０１. 果. 表１に，ＴＳＢにおいて３７℃１８時間培養した緑膿菌ＩＦ０３０８０株の，各種緑膿菌用選択培地におけ. る回収成績を示す．用いた培地はアセトアミドブイヨン（ＡＣＴＢ），，アスパラギンブイヨン（ＡＳＰＢ）ブＤｒａｋｅのＮＯＩＯ培地（Ｄ旺侶），ＮＡＣブイヨン（ＮＡＣＢ）およびトリプチケースソイイヨン（ＴＳＢ）であり試料の培養温度は３２℃，３７℃ および４２℃ であった‐ 表１に示したようにＡＣＴＢ，ＡＳＰＢおよびＤＲＫＢにおける回収成績と一般細菌用の増菌培地であるＴＳＢにおける回収成績の間には，培. 地および培養温度の違いによる相違は認められなかった‐ 一方ＮＡＣＢにおける回収成績は上記４２％であって，これらの成績の間には有意差が認められた．種培地のそれに対して低く２７～５表１実験室至培養緑膿菌株に対する各種培地の算出能の比較培地. ＡＳＰＢ. ＤＲＫＢ. ＴＳＢ. ２０. ３２℃. ｌｏａ｝. ３７℃. １０. ４２℃. １０. ２－１. ２冊２. １０. ７. ９. ７. ９. ５. ２－３. ２－４. （／ｍｌ）. １. ２．９０２５；７．１２４５］４．５４７４［. ３２℃. １０. ７. ５. １. ３７℃. １０. １０. ５. ２. ２‐２００４；５．１３５５］３‐３６１６［２．４４６２；５‐９５８８］３‐８１７９［. ４２℃. １０. ７. ５. ２. ］３．９６０４［２．６２３４；５．９７８７. ３２℃. １０. ９. ５. ０. ３７℃. １０. １０. ５. １. ２．２２５７；５．３８３１］３．４６１４［］３．８４４５［２‐４６０５；６．ｏｏ６９. ４２℃. １０. ９. ６. ２. ］３‐４６５４［２．２２７４；５．３９１４. １０. ５. ２. １０. １０. ５. ３. ４．３４９４［２．７９９０；６．７５８４］４‐３１５８［２．７８０９；６．６９７９］. ４２℃. １０. ８. ５. ２. ２．４１２９；５・６５２９３・６９３２［］. ３２℃. ９. ７. ３. ｏ. ３７℃. ９. ４. ４. ｏ. ］ｌ‐６８５５［１．０４３３；２．７２２９ｌ‐３９１２［０．８４５４；２‐２８９４］. ４２℃. ９. ７. ２. ０. １‐５６４６［０．９５８５；２‐５５４０］. 接種菌数. ｎ；１０. ※. －. １０. ３７℃. ．－. ３２℃. ハＵハＵ（＝Ｖ. ＮＡＣＢ. 温度. Ｎ十一ー. ＡＣＴＢ. ＭＰＮ［上限値；下限値］. 接種試料容量（ｍｌ）. 培養. ［２］３／ｍｌ ‐７５±０．２. 表江－１～４にＡＣＴＢにおける河川水中からの緑膿菌の回収成績を示す．表亘－１および２は，. ２℃，３２倍段階希釈試験管数５０本，試料培養温度３７℃および４２℃で得た成績，また表ロー３および４は，１０倍段階希釈試験管数５０本，試料培養温度３７℃および４２℃の２段階で得た成績である．表ロー１および２に示したように，３７℃ における成績は２８ｇおよび６０８と，３２℃ にお ‐８１０／ｌｏｏｍ．１８７月０ｏｍ. ける回収成績の１９．５９６／ｌｏｏｍｅおよび４５．６９７／ｌｏｏｍｅに比べて高く，これら二つの培養温度における回収成績には有意差が認められた．また４２℃ における回収成績はそれぞれ３３Ｂおよび．７２８月０ｏｍ４１Ｂであり，３７℃ における回収成績は４２℃ に比べてもほぼ等しいかまたは高い回収成績を．０８５／ｌｏｏｍ示した‐ ３２℃ における回収成績は４２℃ に対しても低いか，又はほぼ同等の成績であった．表ロー３. および４に，試料培養温度を３７℃および４２℃の２種とした際の緑膿菌の回収成績の比較を示した‐ ここに示したように表ロー１および２同様，３７℃での回収成績は４２℃に比べ高い傾向が見られてい（６７）.

(5) . . ２０２. 青井. 陽・横田正義. 表韮一１～４ＡＣＴＢの河川水（牛朱別」＝）中緑膿菌に対する培養温温度の違いによる算出能の比較. 表江一１. 培地ＡＣＴＢ. １９９１‐１．１７. 培養. 接種試料容量（ｍ）. 温度. ２２. ２１. ＭＰＮ［上限値；下限値］. ２０. ２－１. ２－２. （／ｌｏｏｍｌ）. ３２℃. ２５. １９. ５. ５. ６. ３１. ３０. １０. ４. ４. １９‐５９６［］１５．１６６；２５‐３２０２８・８１０［２２‐９７１；３６・１３３］. ※※. ３７℃ ４２℃. ３５. ２１. ・６. １〇. ８. ３３‐７２８［２７・２４・；４１－７６Ｏ］. ＮＳ. ５／ｍ一般細菌数３２℃ ［１］ ×１８±０‐１００ｌ．０４７℃ ［７３５±１‐ｏ６］ ×１０／ｍ１ ‐２. ｎ＝５０. 美江－２１９９０‐１１．１３. 培地. 培養. 接種試料容量（ｍ）２２. 温度. ２１. ２０. ＡＣＴＢ義一三一. ＭＰＮ［上限値；下限値］. ２－１. ２一. （／ｌｏｏｍｌ）. キーー喜憂露雲霧鴛Ｎｓ４／ｍ一般細菌数３２℃ ［８．６０土０．０４］ ×１０ｌ. ｎ＝５０. ５／ー３７℃ ［１‐２２±ｏ．ｏ５］ ×１０ｍ. 表虹－３１９９１．１２．２. 培地ＡＣＴＢ. 培養温度. 接種試料容量（ｍｌ）. ＭＰＮ［上限値；下限値］. ｌｏｏ. （／ｌｏｏｍｌ）. ｌｌｏ. ｌｏ一. Ｎｓ量奏者；８選者器量ｇ１奏覧翻丁４／１一般細菌数３２℃ ［１．９０±ｏ．ｏ５］ ×１０ｍ. ｎ＝５０. ３／ｍｌ３７℃ ［３．５８±１．４５］ ×１０. 表１１一４１９９１．１２‐１０. 培地ＡＣＴＢ. ｎ＝５０. 培養温度. 接種霊鏡斗容量（）ｍｌ. ＭＰＮ［上限値；下限値］. ０１０. （／ｌｏｏｍｌ）. １１０. １０－！. ｓｇｉｉ；驚義葺訂Ｎ憂ぎｌｌ畳藁葺５／１一般細菌数３２℃ ［５‐８３±０．１４］ ×１０ｍ. ４／皿３７℃ ［１‐ １９±ｏ２３］ ×１０．. る．ただしこれらの実験ではこの２つの培養温度における両者の成績の間には有意差は認められなかった‐. 表ｍ－１および２にＡＳＰＢにおける河川水中からの緑膿菌の回収成績を示す‐ 表皿－１は２倍段階希釈，表順一２は１０倍段階希釈，一希釈当たりの試験管数はともに５０本であり，試料培養温度３２℃，３７℃ および４２℃ で得た成績を示す‐ ３７℃ における回収成績はそれぞれ１２ βと ‐１３７および１３ ‐００８／ｌｏｏｍ. ２℃における成績４８月ｏｏｍ０いずれの場合にも最大値を示し，３４および５ βとの間には明らかな差 ‐５７．０）（６８.

(6) . . ２０３. 緑膿繭算出用液体培地の性能の比較・培養温度の影響表ｍ－１～２ＡＳＰＢの河川水中（牛朱別ｊ＝）緑膿菌に対する培養温度の違いによる算出能の比較. １９９０．９．２８. 表皿－１. 温度. ＭＰＮ［上限値；下限値］. ）接種詐緋斗容量（ｍｌ. 培養. ふ. ２４. ２３. ２２. ２１. ２０. （／ｌｏｏｍｌ）. ※ ※ ※ ＡＳＰ丁鵠議ョｌ凝ｇ ※ ｝ラ …喜憂ｌｉｌｌ４. ２．８０３［２．ｏ３７；３．８５７］. ５／ｍｌ一般細菌数３２℃ ［２７土０－０８］ ×１０ ‐０５／ｍｌ４２３０５士ｏｏ］ × １０７℃ ［．．. ｎ；５０. 表ｍ－２１９９１．１０．２８. 温度. ＭＰＮ［上限値；下限値］. 接種試料容量（ｍｌ）. 培養. 培地. ｌｌｏ. ｌｏｏ. Ａｓｐ三Ｉ ≦… ＝. ｌｏ－１. （／ｌｏｏｍｌ）. ※ 豪麗聯麗Ｅ計５／１一般細菌数３２℃ ［３‐５０±ｏ．９９］ ×１０ｍ４３７℃ ［７‐８５±ｏ‐９２］ ×１０／ｍｌ. ｎ＝５０. ｇであって，３７℃ におけるが認められた．また４２℃ における回収成績は，２ ‐８０３および１０ ‐７６４月ｏｏｍ. 回収成績よりも低かった． ‐一１～３にＤＲ表ＷＩ窺における回収成績を示す‐ 表Ｗ一目ま２倍段階希釈，表Ｗ－２および３２℃，３７℃お０本で実験した成績である．試料培養温度は３は１０倍段階希釈で，試験管数はそれぞれ５よび４２℃ であった．表Ｗ－１～３に示すように，３７℃ における回収成績は２０．２２７．６７４および，１９び収成よ０１８０も高い回績を示し，おる成の１８０７３０００お／ｍｏ βより３２℃ にけ績４１６６５５／ｌｏｏ βとｍｍ， ‐ ‐ ，． ‐. ２℃における回収成績いずれの場合にも有意差が認められた．同様に３７℃ における回収成績は，４１６，れたのは．２４７月０ｏｍ８と比較しても高い傾向があった‐ だが有意差が認めら ‐８２４ ‐６８６および１２，３１例のみであった‐ ＝）細膿菌に対する培養温度の違いによる算出能の比較表Ｗーｉ～３ＤＲＫＢの河川水中（牛朱別」ｒ－１表Ｎ. １９９０‐ｌｏ．１３. 接種試料容量（ｍｌ）. 培養. 培地. 温度. ２１. ２０. ２－ｉ. ＭＰＮ［上限値；下限値］２－２. （／ｌｏｏｍｌ）. ＤＲＫＢ. ＩＩ選も蕃ｉｌ誓言ー滋１孝養］寸十三Ｎｓ. ｎ＝５０. ５／１一般細菌数３２℃ ［１．１４±ｏ‐１１］ ×１０ｍ４３７℃ ［５‐３５±１．３４］ ×１０／ｍｉ. （６９）.

(7) . . . 青井. ２０４. 陽・横田正義. 表Ｗ一２１９９１．１０．１７. 培養. 培地ＤＲＫＢ. ＭＰＮ［上限値；下限値］. 接種試料容量（ｍｌ）. 温度. ｌｌｏ. ｏｌｏ. ｌｏ冊１. ３２℃. ６. ５. ０. （／ｌｏｏｍｌ）３，ｏｏｏ［１‐６５９；５．４２４］. ※ ※ 濯ぎ鵠１１ムー題さＥ誓言【１１聖霊汀※ ５／ｍ－殉磯田菌数３２℃ ［］ ×１０２．７６±０‐ｏ５. ｎ＝５０. ５／ｍｌ１．１］ ×１０３７℃ ［２６±ｏ‐ ９. ‐一３１９９１１１１１表Ｎ． ‐. 接種試料容量（ｍｌ）. ＭＰＮ［上限値；下限値］. 温度. ｌｌｏ. ｏｌｏ. ｌｏ－１. （／ｌｏｏｍｌ）. ３２℃. ｏ. ｌ. ｏ. 培養. 培地ＤＲＫＢ. ｏ．１８０［ｏ・ｏ２５；１－２７８］. ４／１一般細菌数３２℃ ［１．３０±０．４９］ ×１０ｍ３／ｌ３７℃ ［２．３０±ｏ．６４］ ×１０ｍ. ｎ＝５０. 表Ｖ－１および２にＡＣＴＢ，ＡＳＰＢおよびＤ細田の３種の培地間の回収成績の比較を示した‐ 表Ｖ－ ”こついては各培地につき，試料培養温度３２℃，３７℃および４２℃で比較した成績を，表Ｖ－２では３７℃のみでの比較を示した．試料の希釈は２倍段階であり，表Ｖ－１には一希釈当たり試験管数１０本で測定した成績を，また表Ｖー２には試験管数２０本での成績を示す．. 各種培地の河川水中（牛朱別川；１９９０‐２．１０）緑膿菌に対する培養温度の違いによる算出能の比較. 表Ｖ－１. 接種試料容量（ｍｌ）. 培養. 培地. 温度. ２１. ２０. ＭＰＮ［上限値；下限値］. ２冊１. ２『２. （／ｌｏｏｍｌ）（＼）. ＡＣＴＢ. ２２. －. を｛Ｉ；８３享； ≧ 驚喜墓Ｅ鰯雲蔓驚かｓ４２℃. １０. ４２℃ ＤＲＫＢ. １. ７. ５. ４. ≧. ；. １. ５. ４. ２. ・５６・９４８［１０１・０６７；２４３－７２４１. 孝ふきｇ霊祭駕篭ｇ轟け※ 三１. ＮＳ－. ＡｓＰＢＩ；を，Ｚ. １０. １９‐３３８［１１・１９９；３３・３９２］. 童謡言キー＝一喜－－ … 一一般. ＝１０１１＝. （７０）. ４／１９．１０±○．１１］＞く１０細菌数３２℃ ［ｍ４３７℃ ［６．５９土Ｏ．０５］Ｘ１０／皿.

(8) . 緑膿菌算出用液体培地の性能の比較・培養温度の影響. ２０５. １１７）緑膿菌に対する算出能の比較表Ｖ－２３７℃における各種培地の河川水中（牛朱別川；１９９ ‐１‐ ＭＰＮ［上限値；下限値］. ）接種試料容量（ｍｌ. 培地. ２３. ＡＣＴＢ. １９. １９. ８. ＡＳＰＢ. １４. １４. ＤＲＫＢ. １７. １３. ２２. ２０. ２冊１. １２. ７. ４. ３２．６８９；５９‐６５３］争Ｌ１５９［２７．７２３［２０．６８１；３７．１６４］. １３. ８. ５. ＆１２５．８ｉ；６；４６－３４３０９ｏ０］ ‐ｏ．５０８［. ２１. ７. （／ｌｏｏｍ．） ※ ＮＳ. ４／ｍ１一般細菌数３２℃ ［０４‐ ６５±１．ｏ６］ ×１. １１＝２０. ３／１３７℃ ［６．６５±ｏ‐９２］ ×１０ｍ. ［注］ａ）緑巌菌分離陽性言鵜灸管数；試涛乎接種影刻庚管数はｎ＝で表示したＮＳ：Ｎｏｉｆｉｉｔｓｔ；１ｃａｎｇロ ※ ：Ｐ＜ｏ－０５； ※ ※ ：Ｐ＜○‐ｏｌ ※※ ※ ：Ｐ＜○‐ｏｏｌ. 表Ｖ－１に示したように，ＡＳＰＢおよびＤＲＫＢでは３７℃ における回収成績が１００ ‐１２９および. ２℃および４２℃ における成績に比較して有意差が認められた‐ ま／１２４１ｌｏｏｍ８と最大値を示し，３ ‐４３８とほぼ等したＡＣＴＢにおいては３７℃ および４２℃ における回収成績は１６２ ‐９４８／ｌｏｏｍ ‐９７２および１５６く，一方３２℃ における成績はこれらにくらべて低かった．ただしこれらの成績の間に有意差は認められなかった‐ また３者の培地の間で最大の回収成績を示したのは，ＡＣＴＢでありＤ細くＢ，. ７℃であった．同様の成績を表Ｖ－２に示す‐ ＡＣＴＢＡＳＰＢがこれに次いだ‐ 培養温度はいずれも３ｅの約１における回収成績は４４ｅと最も低いＡＳＰＢの成績２７ ‐６倍であった． ‐１５９月ｏｏｍ．７２３／ｌｏｏｍ. 察. 考. 私達は従来一般的に用いられてきた緑膿菌の分離定量用液体増菌培地のうちでどの培地が最も優れているのか，また分離に際してはどのような条件が最もよいのかを，比較検討の手段として最確. ）比較を行なた培地はＳ園ｎｄｄＭｍｄｆｏｒ批Ｅ３ｏ，，ｌ数法を用いて解明しようとしてきた２ａｒｅｏｓｅっ．ｌ）ｆＷａｔｔｔａｎ血ａｂｏｎｏｅｒａｎｄＷａｓｅｗａｅｒに採用されているアセトアミドブイヨン（ＡＣＴＢ）およびア. ・〈用いら６０～１９スパラギンブイヨン（ＡＳＰＢ）７０年代に水系環境からの緑膿菌分離用としてよ，１９れていたＤｒＯ培地（Ｄ旺僅）ｋｅのＮＯＩａ，また参考として発育阻害物質を添加することによって分離能を高めたＮＡＣブイヨン（ＮＡＣＢ）である．これらの培地は窒素および炭素源に特殊な有機化合物を用いることにより，あるいは抗菌物質を添加し他の菌種の発育を強く阻害することにより，緑膿菌を選択的に発育させようとしている．だが自然界の水系環境中の細菌集団は非常に複雑であり，多様な栄養要求を示す多種類の菌によって構成されていて，これらの培地を用いて緑膿菌の分離実験を行なう際には緑膿菌以外の菌種が高頻度に分離されてくる．その代表的な菌種はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｕｏｒｅｓｃｅｎｓであり，この菌は緑膿菌の定. 量に際して緑膿菌の検出を妨害するものと考えられる‐ 緑膿菌は蛍光を発するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの中では例外的に比較的高温で増殖を行なう菌種であり，一方Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｕｏｒｅｓｃｅｎｓは低温でよりよく発育する性質がある．前回の研究で我々は４段階に温度を設定して河川水試料の培養を行ない，２５℃での河川水中級膿菌の回収成績はこれよりも高温での分離には劣ると思われる成績を得た２１そこで今回我々は上記３種の培地について緑膿菌と他のＰｓｄｏｍｏｅｕｎａｓ属細菌との鑑別に用いられ２℃を設定して河川水試料の培る温度である４２℃，一般的培養温度である３７℃，これらよりも低い３（７１）.

(9) . ２０６. 陽・横田正義. 青井. 養を行ない，緑膿菌の回収成績に培養温度による差異が現れるか否かをより精密に検討しようとした．. 一般細菌用増菌培地であるＴＳＢを用いて３７℃１８時間培養した緑膿菌では，回収成績に各培地間についても，また培養温度についても大きな差異は認められなかった‐ ただしＮＡＣＢにおける回. 収成績はすべての培養温度で他の培地よりも低く，約１／４～１／２の回収率となった‐ ＮＡＣＢは合成培地に培養した細胞に対しても弱いながらある程度の発育阻害作用を有していると思われる．以前の研究では河川水を用いた実験ではＮＡＣＢによる緑膿菌回収成績は他の培地によるものよりも大きく劣ることが示されていて，自然界における緑膿菌を対象とした分離定量用の培地としては）したがてこれ以降の実験ではＡＣＴＢ不向きであると思われる２っ．，ＡＳＰＢおよびＤ旺狙の３種. の培地について緑膿菌回収能力を比較検討した‐ ２℃での成績は河川水試料を用いて検討したところ，使用した３種の培地のほぼすべてにおいて３３７℃ および４２℃ に比べて劣る成績が得られた‐ これは低温を好むＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｕｏｒｅｓｃｅｎｓの増殖. により緑膿菌の発育が桔抗的に抑制された結果なのであるうと考えている．また以前行なった実験）河川５℃における緑膿菌の回収成績は他の温度にくらべて劣る傾向にあった２では河川水からの２．水湖沼水等の自然環境中に存在する細菌の大部分は低温細菌であると考えられており，今回実験に２℃で発育する菌数は３７℃発育用いた河川水中でも，トリプチケースソイ寒天を用いた塗沫法では３２℃での回収に影響を与えるのかもしれない．菌数よりも多く存在していた‐ このことも３また４２℃培養の成績も３７℃に比べると同程度か又は劣っていて以前の実験で得られたと同様の成績であった‐ 近縁種の発育を抑制するこのような高温培養での回収成績が中温度での培養にくらべてかならずしも高くはないという結果が生じたことの原因は不明である．が，前回の実験では抗生物質を加えることによって選択能を与えたＮＡＣＢによる河川水からの緑膿繭回収成績は他の培地にくらべて著しく低く，その低下は合成培地培養実験室株を用いたよりも強く現れていて，河川水試料中に存在する緑膿菌細胞は，試験管培養細胞とは異なった性状を有しているのではないかと思われる．以上の結果から比較した３段階の温度では用いた各培地に共通して３７℃培養が最も優れていると考えられる‐. また３７℃ に培養温度を固定して３種の培地の比較を行なったところＡＣＴＢが最高の値を示しＤ鞭窺，ＡＳＰＢがこれに次いだ．ＡＣＴＢの成績は最低の成績であったＡＳＰＢの約１ ‐５倍程度となっ. た．以上の成績から河川水中に存在する緑膿菌を定性定量する際にはＡＣＴＢを用いた３７℃培養が最も優れていると思われるがこれについては今後更に詳しい検討を加えて行こうと考えている．. 要. 約. ３種類の培地を用いて河川水中の緑膿菌の回収における試料培養温度の影響を調べた．用いた培地はアセトアミドブイヨン（ＡＣＴＢ）ａｋｅのＮＯＩＯ培，アスパラギンブイヨン（ＡＳＰＢ）およびＤｒ. 地（ＤＲＩ鍋）であった‐ 比較は最確数法によって行なった．最も高い回収成績を示した温度は各培地共通して３７℃ だった．３２℃ および４２℃ での成績は３７℃ の成績よりも低かった‐ ３７℃ において最も高い成績を示したのはＡＣＴＢでありＤ鞭（Ｂ，ＡＳＰＢがこれに次いだ．. （７２）.

(10) . 緑膿菌算出用液体培地の性能の比較・培養温度の影響. 引. 踊. 文. ２０７. 献. １）紅ロｅｎｃ１ｂ＝ｈＡＳ（遊ｄｏｎａｎＰＩｃＨ‘遡ｔｓｏ１６ｍｅｄｉｎｓ加“如糊賜疏吻禽元γ 陶Ｅ期伽ま解放粥げ粥瞬けα ，〆朝僻Ｚｂｏｎ）．ｌｅｗα卿（，Ｅｄｉｂ恥ＨｅｌｄｈＡｓｉｗｈ面ＤｌＣ９８Ｇ狐音ロ１５８８０ ÷ ８８ａｓｏｃａ口ｏｎ（）２ａｓｏｎｇｔ．ｂｙＡｇｎｅＰ．．．，．‐. ２）青井陽，横田正義（１９９１）緑膿菌算出用液体培地の性能の比較‐ 北海道教育大学紀要（第ｎ部Ｃ）４９－）（１，２，８１００・３）ＢｅｕＣねａ１９７６ｆｍｅｔＬ（鯨角ｒｍｅｒ）Ｓｗｉ畑牡ｏｎｏｆｈｅａｒｖａｙｏｔｅｓｕｓｃ－ｓセｅｓｓｅｄ湾ああＰ解凍幽醐ｏ汐加婚．′ ‐Ｒ ‐（ ‐Ａ粋‘ ．β叱勿旬‘ ．，４０５３ ÷ ６０ ‐ ，４）Ｃｏｃ脳ａｎＷ ‘ ：鎚ｄｅｎｉｄｅｓｂｙｍｅｆ菌ｅ‘侭ｌｔＰｒｂｌｓａｎｓｏｏｓｂｏｂａｅＮ ‐Ｇ‐（１９５０）Ｅｓ誼＝隠亘ｏｎｏｆｂａｃｔａｔｍｎｅｒ．β鰯粥鱗鴎６，１０５÷ １１６．５）Ｄｒ１９６６ｌｆ（粗ｔ）Ｅｖｄ陵免ｒ徳ｅｉａｋｅＣｒｌａｆＰｓ粥汝鰯札伽榔徳留夢効ｓα 猛８〆肋ｕａｂｏｎｏｕｅｍｅｓｏａｄｏｎａｎｄｅｎｍｎｅｒａｄｏｎｏ ‐Ｈ．（上々わ１３〇 ÷ １９．ｓｄ． ‐・，，ｌ６）Ｈａｉｌ１９３３ｆｓ蝕むｃｖｏｒ）Ａｐｐｎ慌ｄｏｎｏｓｏｎＨ‐０‐ ＆ＺｒＮ．Ｒｌｅｇｅｉｌｔｆｄｅｓｔｏｐｒｏｂｅｍｓ印ｂａ１血ｇｃｅｌｏｔｏａｎｓｏ．（ｅヰｇｙ．１．Ａｍｅｂａｃｌｌｔｔｈｏｄ ′ βααのめＺｅ鷹司ｐｏ２１ａ檀ｏｎｂｙ化ｅ山腹□ｏｎｍｅｐｕ－－，２５，１０１一１７）ＨｏａｌｄＰｉｄｅｙＡＷロ【毎ｓｚｍｐ詞ひ ” 鰯伽硲ｎｔ鍵辱ｓｃｅｗａ伽ｒＵ ” 姥物ｅｓ卿鰯帥鯛榔解離夢効ｓα βｃ．；〆錦鈍感 α晒ゑ嬢籾ごＤ無＃ ‐ ＭＲａＰＢｋＮのめ晩銘α数脚，ＥｄＹｋ（ｔ紅聡Ｖ１９７７３１５７ｖｅｎ）ｉｒｅｓｓｏｏｓｗｅｏｒ一．ｂｙＹｏＰ． ‐ ‐ ．，. ８）西原力他（１９８６）マイクロコンピューターによる最確数の計算‐ 衛生化学，３２２６一２２８．，２．ａ印ｅＦ９）醐ｂｌｈｌｉｄｅｍｉｌｅｅｃｏｏ鰯ａｎｄｅｐｆＰｓｏｏｇｙｏ血Ｐの隙ｇ “承鰯尻鯛郡解忽拶彰ｏ ‐Ｓ．１ｓ α ｂ伽郡僻溜拶鰯ｓ α ａ故Ｌ ‐ ｓ解ｙｓａ ‐Ｅｄ ‐ｂ ‐ Ｄ．Ｈ組ａｌｂ五１９７９ ÷５１ｌｓＨｕｂｅｒｌ）Ｐｓｈｅｒｓｌｎ（ ‐３１ ‐ ，Ｂｅ. ｄｇｅＥ１０）Ｒｉｆｓ１９７０ｔｓｏｌ）Ｅ掻ｅＣｉａｂｌｔｆ凡２ｏ１ｍｅ孟ｚｕｅｎｔｓｕｐｏｎＶｅｃｏｔｕ］ｓｏ０ｏ彰に勿ブ承れｏ．Ｈ．（ ’ ｃｏα泌粥．／ひ弱ＯＬ．Ｇｅ“ ．Ａ弾Ｚ．既た〆，１６．，１８９÷１９２. ３（７）.

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