パンフレットの｜ニッポンジーン

■ 関連製品

製品名 容量 希望納入価格(税別）

Code No.

316-08271

311-06543

319-05961

311-07763

315-08383

314-06251

TA-Enhancer Cloning Kit

TA-Blunt Ligation Kit

Ligation-Convenience Kit

Gene RED PCR Mix Plus

Hot-Start Gene RED PCR Mix

Bac'n'Roll Beads

25 回分

50 回分

100 回分

96 回分

96 回分

100 回分

￥23,000

￥22,000

￥20,000

￥8,600

￥13,500

￥4,400

高効率TAクローニングキット

TA・平滑ライゲーション専用試薬

簡単・迅速ライゲーション試薬

2×プレミックスタイプPCR試薬

2×プレミックスタイプPCR試薬

プレーティングビーズ

Cloning

TM

Competent

ECOS

TM

Competent

E. coli

ECOS

E. coli

大 腸 菌 コ ン ピ テ ン ト セ ル

大 腸 菌 コ ン ピ テ ン ト セ ル

ECOS

TM

_Competent

_{E. coli}

は、回復ステップであるSOC培地での培養を必要とせず、

短時間で形質転換を行うことができる画期的なコンピテントセルです。

また、形質転換効率も高く、凍結融解や長期保存が可能です。

超 迅 速 !

超 迅 速 !

ECOS

TM

_Competent

_{E. coli}

シリーズ

ECOS

TM

_Competent

_{E. coli}

シリーズ

※３） カルタヘナ法該当品です。

製品名 容量 希望納入価格(税別）

Code No.

310-06236

310-06231

316-06233

314-06234

312-07031

317-06246

317-06241

313-06243

311-06244

311-06521

317-06523

315-06524

318-06531

314-06533

312-06534

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

DH5α

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

DH5α

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

DH5α

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

DH5α

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

DH5α -Jumbo Pack-

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

JM109

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

JM109

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

JM109

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

JM109

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

_XL1-Blue

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

_XL1-Blue

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

_XL1-Blue

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

_BL21(DE3)

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

_BL21(DE3)

ECOS

TM

_Competent

_E.coli

_BL21(DE3)

50μl×40 本

100μl×

0

2 本

100μl×20 本

100μl×80 本

500μl×

0

6 本

50μl×40 本

100μl×

0

2 本

100μl×20 本

100μl×80 本

100μl×

2 本

100μl×10 本

100μl×20 本

100μl×

0

2 本

100μl×10 本

100μl×20 本

￥40,000

￥9,000

￥

36,000

￥132,000

￥

39,000

￥40,000

￥

9,000

￥36,000

￥132,000

￥10,000

￥24,000

￥

44,000

￥10,000

￥

27,000

￥50,000

※３ ※３ ※３

314-07731

310-07733

ECOS

TM

_{X Competent}

_E.coli

DH5α

ECOS

TM

_{X Competent}

_E.coli

DH5α

100μl×

0

2 本

100μl×10 本

￥11,000

￥32,000

製品名 容量 希望納入価格（税別）

Code No.

ECOS

TM

_{X Competent}

_{E. coli}

DH5α

ECOS

TM

_{X Competent}

_{E. coli}

DH5α

形質転換効率（ECOS™ 1 分間プロトコールで実施した場合）

DH5α、JM109、XL1-Blue ≧ 1 x 10（7cfu / μg pUC19 DNA）

BL21（DE3）≧ 1 x 10（6 cfu / μg pUC19 DNA）

形質転換効率（ECOS™X 6 分間プロトコールで実施した場合）

DH5α ≧ 1 x 10（9 cfu / μg pUC19 DNA）

最短１分間で完了！

最短１分間で完了！

高効率(10

9

_{)なDH5α株には}

高効率(10

9

_{)なDH5α株には}

⑤ ク ロ ー ニ ン グ キ ッ ト と の 組 み 合 わ せ に も 最 適

迅速で高効率な

TA

クローニング

使 用 例

pANT Vector (25 ng/μl） PCR産物

5×Ligation Mix 10×Enhancer Solution ddH2O

1.8 x 4 2 up to 20

μl μl μl μl μl

★

★ ★

① Hot-Start Gene Taq NT（Code No. 311-07523）等のTdT活性のある

  PCR酵素を用いて目的の配列を増幅する（インサートの調製）。

② ISOSPIN PCR Product（Code No.315-08001）等のPCR産物精製キット   を用いて、PCR反応液の精製を行う。

③ ライゲーション液を調製する。

④ 16℃で30分間反応させる。 高効率なTAクローニングキット

TA-Enhancer Cloning Kit

200 bp 500 bp 1 kbp 3 kbp 5 kbp

2500

2000

1500

1000

500

0

A

社製品

白コロニー 青コロニー 白コロニー率（％）

200 bp 500 bp 1 kbp 3 kbp 5 kbp

2500

2000

1500

1000

500

0

TA-Enhancer Cloning Kit

超迅速 大腸菌コンピテントセル

ECOS

TM

_Competent

_{E. coli}

2．大腸菌への形質転換

＜6分間プロトコール＞

① 氷上でコンピテントセルを融解する。 ② ①にライゲーション反応液を加える。 ③ １秒間ボルテックス

④ 氷上で5分間インキュベート ⑤ 42℃で45秒間インキュベート ⑥ 1秒間ボルテックス

⑦ LBプレートに塗布し、37℃で16時間培養。

1.

ライゲーション

On ice 5 min.

④

Heat shock 45 sec.

⑤

プレーティング

⑦ ECOSTM+_DNA

②

①

Vortex

③

Vortex

⑥

＜結果＞

本品はA社製品と比較して、コロニー数 および白コロニー率において優位性が 認められた。

TA-Enhancer Cloning KitとA社ライゲーション用試薬を比較するため、各社製品プロトコールに従ってクローニングを行った。各インサート長のPCR産物を用

いて、16℃、30分間（A社：室温、60分間）のライゲーション反応を行った。ECOSTM _{Competent E. coliJM109}へ形質転換（₆分間プロトコール）し、本品とA社製品

のライゲーション効率を比較した。

3．インサートチェック

2×プレミックスタイプのPCR試薬

Gene RED PCR Mix Plus

■ 他社製品との比較 − 各鎖長のライゲーション効率 ー

● PprAタンパク質で高効率なライゲーションが可能

● 30分間でライゲーション反応が完了

● 反応終了液はそのまま形質転換に使用可能

★・・・キット構成品

● 簡単操作の2×プレミックスタイプ

● 高速反応が可能 （伸長時間10秒／kb）

● 2色のDye入りで、そのままアプライ可能

● 様々なサンプルに対応

● ６分間プロトコール

● ６分間プロトコール

短時間

プロトコール

短時間でも高効率を実現！

● １分間プロトコール

● １分間プロトコール

● ヒートショック不要

   (オプションプロトコール)

● ヒートショック不要

   (オプションプロトコール) サブクローニングにお勧め！

お好みの量に小分けして、

残りを−80℃で凍結保存可能。 形質転換効率低下の目安は１年間で約１/２程度です。

−80℃のフリーザーで保管した 場合の実績に基づいています。

凍結融解

ができる

凍結融解

ができる

長期保存

長期保存

ができる

ができる

高速・高効率

で形質転換できる

高速・高効率

で形質転換できる

6分間、1分間プロトコールはセレクションにアンピシリンを使う場合にのみ有効です。薬剤耐性機構の違いにより、その他の薬剤(テトラサイクリン、カナマイシン等)の 場合は、ヒートショック後にSOC培地を加え、30分間培養してからプレーティングして下さい。

一度の凍結融解（再融解）では形質転換効率はほとんど低下しませんが、凍結融解の繰り返しは大幅な低下につながります。 ※１）

※２）

※１ ※２

TM

₍

イ ー コ ス ) コ ン ピ テ ン ト セ ル に つ い て

ECOS

本  社 〒540-8605 大阪市中央区道修町三丁目1番2号 TEL：06-6203-3741 (代表)

東京本店 〒103-0023 東京都中央区日本橋本町二丁目4番1号 TEL：03-3270-8571 (代表)

フ リ ー ダ イ ヤ ル 0120-052-099 フリーファックス 0120-052-806 

〒930‐0834 富山市問屋町二丁目7番18号 TEL： 076‐451‐6548 FAX： 076‐451‐6547

● 薬剤にアンピシリンを使用する場合、回復ステップであるSOC培地での培養が不要です。

① 大 腸 菌 の 形 質 転 換 が 最 短 １ 分 間 で 完 了 し ま す

● 形質転換効率低下の目安は、−80℃のフリーザーで保管した場合、1年間で約1/2程度

※2

です。

※2) －80℃のフリーザーで保管した場合の実績に基づいています。

③ S O C 培 地 に よ る 回 復 培 養 な し で も 効 率 は 下 が り ま せ ん

ECOS

TM

_Competent

_{E. coli}

_JM109

及び従来型

_A

社

_JM109

を各社プロトコール

で比較した。プロトコールは、

ECOS

TM

1分間プロトコール、

_ECOS

TM

6分間プロ

トコール、A社製品プロトコール（SOC培地を添加して培養する従来型のプロト

コール, 約2時間）で行った。

≪実験例２≫ 回復培養の有無による形質転換効率の違い

＜結果＞

本品は、1分間プロトコールでも十分な効率が得られます。

さらに6分間プロトコールは、従来型A社プロトコール（2時間）で

使用した場合と同等以上の性能を発揮しました。

② 凍 結 融 解 に よ る 効 率 低 下 を 最 小 限 に 抑 え ら れ ま す

≪実験例１≫ 再凍結融解による形質転換効率への影響

ECOS

TM

_Competent

_{E. coli}

DH5α

および従来型の

_B

社製品を氷上で融解後、

−

80°C

で再凍結させたものを使用し、各社プロトコールで形質転換を行った。

＜結果＞

本品は、凍結融解後でも約85%以上の効率を維持

＊

_{しました。}

＊ 一度の凍結融解（再凍結）では形質転換効率はほとんど低下しませんが、凍結融解の繰り 返しは大幅な低下につながります。

A

B

C

D

E

F

A ： ECOSTM ₁分間プロトコール

B ： ECOSTM ₁分間プロトコール（凍結融解後）

C ： ECOSTM ₆分間プロトコール

D ： ECOSTM ₆分間プロトコール（凍結融解後）

E ： 従来型 B社プロトコール

F ： 従来型 B社プロトコール（凍結融解後）

形質転換効率

（

×1

0

7 cf

u

/µ

g

p

U

C

1

9

）

● お好みの量に小分けして、残りを −80℃で再度保管できます。

④ 長 期 保 存 が で き ま す

A, D ： ECOSTM ₁分間プロトコール

B, E ： ECOSTM ₆分間プロトコール

C, F ： 従来型 A社プロトコール、2時間（回復培養あり）

A

B

C

D

E

F

形質転換効率

（

×1

0

7 cf

u

/µ

g

p

U

C

1

9

）

1 min 6 min 2 h 1 min 6 min 2 h

ECOS

TM

_{X Competent}

_E.coli

_DH5

α

さらに高い形質転換効率が必要な実験には

＜6分間プロトコールでの形質転換効率の比較＞

※1) 薬剤にアンピシリンを使用する場合。

●

高効率 ≧ 1×10

_{（cfu/μg pUC19 DNA）}

9

●

短時間 （6分間プロトコール）

●

高度なクローニングやライブラリー作製に使用可能

形質転換効率

（

×1

0

8 cf

u

/µ

g

p

la

smi

d

）

7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0

オプションプロトコール （ヒートショック不要）

2.7 kb（pUC19 DNA） 7.5 kb（約5 kb インサート, pUC系）

1分間プロトコール 6分間プロトコール

＜短時間プロトコールによる形質転換効率の比較＞ ECOSTM _{Competent E. coli} DH5αを「オプションプロトコール（ヒートショック

不要）」、「1分間プロトコール」、「6分間プロトコール」で、pUC19 DNA（2.7 kb）

とpUC系プラスミドDNA（7.5 kb）を用いて形質転換を行いました（n=3）。

● ヒートショック無しで本当に大丈夫 ？

Q. 「オプションプロトコール（ヒートショック不要）」の結果

  にご満足頂けましたか？

（45件回答）

ECOSTM 体験キャンペーンを行い、評価結果をお聞きしました。

ヒートショックを行う従来の1分間プロトコールと

同等の効率が得られました！

お試し頂いた結果、93%の方が「非常に満足」

または「満足」と答えています！

「1分間プロトコール」からヒートショックを省けます

● 形質転換効率は？

特別な製法で調製した

ECOS

TM

_{コンピテントセルは薬剤にアンピシリンを使用する場合、回復培養の工程を省略して短時間で形質転換を}

行うことができます。

0 5 10 15 20 25 30 35

ECOSTM _X

DH5α

ECOSTM DH5α

形質転換効率

（

×1

0

8 cf

u

/µ

g

p

U

C

1

9

）

従来型

DH5α

※1

６分間プロトコール

_{回復培養プロトコール}

１分間プロトコール

氷上で静置 5分

ヒートショック 45秒

LBプレートに塗布

37℃でインキュベート 氷上でコンピテントセルを融解

冷却したプラスミド溶液 または ライゲーション溶液を添加

ボルテックスで 1秒 撹拌

氷上で静置 2分 SOC培地を加え、37℃で 約30分間インキュベート

LBプレートに塗布

37℃でインキュベート 氷上で静置 5分

ヒートショック 45秒

操作時間

約１分間

操作時間

約６分間

操作時間

約40分間

大腸菌形質転換の操作フロー

その他の薬剤を使用

薬剤にアンピシリンを使用

Plasmids < 6 kb Plasmids > 6 kb

オプション

プロトコール

ECOS

TM

コンピテントセル

１分間プロトコール

６分間プロトコール

氷上で静置 2分 SOC培地を加え、37℃で 約60分間インキュベート

LBプレートに塗布

37℃でインキュベート 氷上で静置 20分

ヒートショック 45秒 氷上で融解

DNA溶液を添加

操作時間

約1時間30分

従来プロトコール

従来コンピテントセル

≪短時間プロトコールの使い分け≫

・・・ サブクローニングにお勧め、 ヒートショック不要

・・・ 短時間でも高効率に形質転換できる （1分間プロトコールの2∼3倍）

オプション プロトコール

詳しくは     をご覧下さい。

従来の「1分間プロトコール」から42℃のヒートショック処理を省くことができます。ヒートショック用のウォーターバス等を用意する手間も

なくなり、より簡単で迅速に形質転換を完了できます。

T M

C o m p e t e n t の 特 長 に つ い て

E C O S

E . c o l i

※1

ヒートショック 45秒

LBプレートに塗布

37℃でインキュベート

省略可

49% 非常に満足 満足

44%