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IMAC Profinity担体の特性

IMACProfinity担体は、組換えポリヒスチジン(His)タグ付き タンパク質精製用のアフィニティー・クロマトグラフィー担 体です。IMACは、固定化した遷移金属に対するHisタグの親 和性に依存した強力な精製技術です。IMACProfinity担体は、

UNOsphereビーズがベースで、二価/三価金属イオンに対す るキレート・リガンドとしてイミノ二酢酸(IDA)を含みます。

その化学構造により、Ni2+や、Zn2+、Cu2+などの遷移金属で荷電 した場合、組換えHisタグタンパク質を高度に選択的に結合しま す。IMACProfinity担体は、高流速で高結合容量です。非変性ま たは変性条件下で使用でき、液体クロマトグラフィー機器、自 然落下カラム、スピンカラムを使用した精製に適しています。

担体は非荷電、またはNi2+のプレチャージ形状で入手可能です。

非荷電型(金属イオンフリータイプ)は、ご希望の金属イオン で荷電できます。

IMAC Profinity担体の特性

高純度な標的タンパク質精製のための最適なリガンド密度。

優れた物理的強度。

迅速な精製、カラム洗浄、再平衡化を可能にする、耐圧性や 優れた圧力流量特性。

pH1〜14での安定性。

変性剤、界面活性剤、還元剤と併用可能。

IMACProfinity担体

Bio-Scale™Mini IMACProfinityカートリッジ

クロマトグラフィー担体

組換えタグアフィニティー精製

www.bio-rad.com/affinitymedia

See Also Bio-ScaleMini カートリッジ:

P.95

大腸菌ライセートからのリコンビナントHis-tagタンパク質精製における 他社製品との比較

変性剤存在下、マイクロバイオスピンカラムを用いてリコンビナントHis-tagタンパク質を精製した。

レーン1,8;プレシジョンプラススタンダード レーン2;大腸菌ライセート

レーン3;A社高結合容量Ni-IMAC担体(IDA-アガロースビーズ)

レーン4;A社IMAC担体(IDA-アガロースビーズ)

レーン5;バイオ・ラッド Ni-IMAC Profinity レーン6;B社Ni-IMAC担体(NTA-アガロースビーズ)

レーン7;C社Co-IMAC担体(4配位リガンド-アガロースビーズ)

ゲル写真中の数字は、QuantityOneソフトウェアで算出した精製度を示 しています。

250 150 100 75 50 37 2520 15 10

12345678

81% 78% 93% 89% 92%

(kDa)

試薬 濃度

〈バッファー関連試薬〉

Tris 50mM

HEPES 50mM

MOPS 50mM

リン酸塩(NaまたはK) 50mM

〈キレート剤〉

EDTA、EGTA 0.1mM

〈還元剤〉

β-Mercaptoethanol 30mM

DTT 5mM

TCEP 10mM

試薬 濃度

〈界面活性剤〉

非イオン性界面活性剤

(Triton、Tween、NP-40) 5%

両イオン性界面活性剤

(CHAPS、CHAPSO) 5%

陽イオン性界面活性剤

(CTAB) 1%

陰イオン性界面活性剤

(SDS、Sarkosyl) 1%

〈変性剤〉

塩酸グアニジン 6M

Urea 8M

試薬 濃度

〈その他〉

NaCl 2M(バッファーには300mM以 上のNaClを含むこと)

MgCl2 100mM(沈殿を防ぐため、

HEPESかTrisを使用すること)

CaCl2 10mM(沈殿を防ぐため、

HEPESかTrisを使用すること)

グリセロール 20%

エタノール 20%

イミダゾール 500mMforelution

クエン酸 80mM

His-tagタンパク質の結合に影響を及ぼさない共存可能試薬および濃度 IMACProfinity担体は界面活性剤、変性剤はもちろん、DTT等の還元剤にも対応可能です。

For More Information

Web: www.bio-rad.com/profinityIMAC

仕様

マトリクス UNOsphere(親水性ポリマー) 線流速 600cm/hrat25℃

リガンド IDA(Iminodiaceticacid) 耐圧性 100psi(0.7MPa)

包装 50%suspensionin20%エタノール、

Ni2+プレチャージ、未チャージ

pH安定性 1-14(>200hr)

操作温度 4-40℃

粒子径 45〜90μm(平均60μm) 保存 4℃〜常温、in20%ethanol

動的結合容量 15mg/ml オートクレーブ処理 可(0.1MSodiumacetate、120℃、30分)

金属イオン容量 12-30μmolCu2+/ml

クロマトグラフィー担体

組換えタグアフィニティー精製

www.bio-rad.com/affinitymedia

Ordering Information

カタログ番号 品名 価格

Niチャージ済み担体

1560131 Ni-IMAC Profinity、10ml ¥15,000

1560133 Ni-IMAC Profinity、25ml ¥30,000

1560135 Ni-IMAC Profinity、100ml ¥95,000

1560137 Ni-IMAC Profinity、500ml

7324612 Bio-Scale Mini Ni-IMAC Profinityカートリッジ、5ml、1本 ¥16,000

7324614 Bio-Scale Mini Ni-IMAC Profinityカートリッジ、5ml、5本 ¥68,000

7324610 Bio-Scale Mini Ni-IMAC Profinityカートリッジ、1ml、5本 ¥22,000

アダプター・フィッティング

7320111 Bio-Scale MiniカートリッジFPLC用アダプター(FPLCシステム、M6タイプ接続用)1セット ¥8,000 7320112 Bio-Scale MiniカートリッジHPLC用アダプター(HPLCシステム、1/16"タイプ接続用)1セット ¥8,000 7320113 Bio-Scale MiniカートリッジBioLogic用アダプター(NGCシステム、BioLogicDuoFlowシステム、1/4-28タイプ接続用)

1セット ¥8,000

金属イオンフリー

1560121 IMAC Profinity、10ml ¥12,000

1560123 IMAC Profinity、50ml ¥50,000

1560125 IMAC Profinity、500ml ¥400,000

1560127 IMAC Profinity、1L

※マークはお問い合わせください。

Profinity™ GST Cartridges and Kits

ProfinityGSTは、GSTタグタンパク質を精製するために利用しま す。ProfinityGSTを充填したBio-ScaleMiniProfinityGSTカート リッジには、1ml、5mlの2サイズがあります。このカラムに加え、

脱塩カラム、バッファーなどをセットにした製品もご用意して います。

クロマトグラフィー担体

組換えタグアフィニティー精製

www.bio-rad.com/affinitymedia

For More Information

Web: www.bio-rad.com/profinityGST

Ordering Information

カタログ番号 品名 価格

Bio-Scale Miniカートリッジ

7324620 Bio-Scale Mini GST Profinityカートリッジ、1ml、5本 ¥44,000

7324622 Bio-Scale Mini GST Profinityカートリッジ、5ml、1本 ¥32,000

7324624 Bio-Scale Mini GST Profinityカートリッジ、5ml、5本 ¥126,000

アフィニティーバッファーキット

6200240 GSTバッファーキット ¥40,000

構成内容:GSTlysisバッファー、洗浄バッファー、溶出バッファー Profiniaバッファーキット

6200223 Profinia GSTバッファーキット ¥45,000

構成内容:精製バッファー、クリーニングおよび保存溶液、glutathione試薬を含む。10回分。

アフィニティー精製キット

6200243 GST精製キット,1ml ¥58,000

構成内容:GST精製バッファーキット、GSTカートリッジ(2×1ml)

6200244 GST精製キット,5ml ¥105,000

構成内容:GST精製バッファーキット(2)、GSTカートリッジ(1×5ml)

Profinia精製キット

6200226 Profinia GST精製キット 1mlカートリッジ ¥70,000

構成内容:ProfiniaGSTバッファーキット(1キット)、1mlGSTカートリッジ(2個)、

10ml脱塩カートリッジ(2個)

6200236 Profinia GST精製キット 5mlカートリッジ ¥130,000

構成内容:ProfiniaGSTバッファーキット(2キット)、5mlGSTカートリッジ(1個)、

50ml脱塩カートリッジ(1個)

Profiniaスターターキット

6200230 Profinia GSTスターターキット ¥72,000

構成内容:ProfiniaGSTバッファーキット(1キット)、1mlGSTカートリッジ(2個)、

10ml脱塩カートリッジ(2個)、E.coliライセート(1本)、glutathione試薬(1本)

Profinity eXact™ Expression Vector Kits and Cloning Products pPALベクターはT7発現プラスミドから派生したもので、T7lacpromoter とterminatorを利用します。そして、誘導性タンパク質生産用のために は、T7RNApolymeraseexpressionhostを用います。このプラスミドは ampicillin耐性を有し、常にターゲット遺伝子の翻訳をタイトにコント ロールできるようにlac I repressorを発現し、pMB1派生のColE1由来の replicationからなっています。ProfinityeXactpPALベクターに組み込まれ たターゲット遺伝子は、subtilisinprodomainタグと融合する形で発現され ます。

Profinity eXact™ pPAL7 Supercoiled