IMACProfinity担体は、組換えポリヒスチジン(His)タグ付き タンパク質精製用のアフィニティー・クロマトグラフィー担 体です。IMACは、固定化した遷移金属に対するHisタグの親 和性に依存した強力な精製技術です。IMACProfinity担体は、
UNOsphereビーズがベースで、二価/三価金属イオンに対す るキレート・リガンドとしてイミノ二酢酸(IDA)を含みます。
その化学構造により、Ni2+や、Zn2+、Cu2+などの遷移金属で荷電 した場合、組換えHisタグタンパク質を高度に選択的に結合しま す。IMACProfinity担体は、高流速で高結合容量です。非変性ま たは変性条件下で使用でき、液体クロマトグラフィー機器、自 然落下カラム、スピンカラムを使用した精製に適しています。
担体は非荷電、またはNi2+のプレチャージ形状で入手可能です。
非荷電型(金属イオンフリータイプ)は、ご希望の金属イオン で荷電できます。
IMAC Profinity担体の特性
●高純度な標的タンパク質精製のための最適なリガンド密度。
●優れた物理的強度。
●迅速な精製、カラム洗浄、再平衡化を可能にする、耐圧性や 優れた圧力流量特性。
●pH1〜14での安定性。
●変性剤、界面活性剤、還元剤と併用可能。
IMACProfinity担体
Bio-Scale™Mini IMACProfinityカートリッジ
クロマトグラフィー担体
組換えタグアフィニティー精製
www.bio-rad.com/affinitymedia
See Also Bio-ScaleMini カートリッジ:
P.95
大腸菌ライセートからのリコンビナントHis-tagタンパク質精製における 他社製品との比較
変性剤存在下、マイクロバイオスピンカラムを用いてリコンビナントHis-tagタンパク質を精製した。
レーン1,8;プレシジョンプラススタンダード レーン2;大腸菌ライセート
レーン3;A社高結合容量Ni-IMAC担体(IDA-アガロースビーズ)
レーン4;A社IMAC担体(IDA-アガロースビーズ)
レーン5;バイオ・ラッド Ni-IMAC Profinity レーン6;B社Ni-IMAC担体(NTA-アガロースビーズ)
レーン7;C社Co-IMAC担体(4配位リガンド-アガロースビーズ)
ゲル写真中の数字は、QuantityOneソフトウェアで算出した精製度を示 しています。
250 150 100 75 50 37 2520 15 10
12345678
81% 78% 93% 89% 92%
(kDa)
試薬 濃度
〈バッファー関連試薬〉
Tris 50mM
HEPES 50mM
MOPS 50mM
リン酸塩(NaまたはK) 50mM
〈キレート剤〉
EDTA、EGTA 0.1mM
〈還元剤〉
β-Mercaptoethanol 30mM
DTT 5mM
TCEP 10mM
試薬 濃度
〈界面活性剤〉
非イオン性界面活性剤
(Triton、Tween、NP-40) 5%
両イオン性界面活性剤
(CHAPS、CHAPSO) 5%
陽イオン性界面活性剤
(CTAB) 1%
陰イオン性界面活性剤
(SDS、Sarkosyl) 1%
〈変性剤〉
塩酸グアニジン 6M
Urea 8M
試薬 濃度
〈その他〉
NaCl 2M(バッファーには300mM以 上のNaClを含むこと)
MgCl2 100mM(沈殿を防ぐため、
HEPESかTrisを使用すること)
CaCl2 10mM(沈殿を防ぐため、
HEPESかTrisを使用すること)
グリセロール 20%
エタノール 20%
イミダゾール 500mMforelution
クエン酸 80mM
His-tagタンパク質の結合に影響を及ぼさない共存可能試薬および濃度 IMACProfinity担体は界面活性剤、変性剤はもちろん、DTT等の還元剤にも対応可能です。
For More Information
Web: www.bio-rad.com/profinityIMAC
仕様
マトリクス UNOsphere(親水性ポリマー) 線流速 600cm/hrat25℃
リガンド IDA(Iminodiaceticacid) 耐圧性 100psi(0.7MPa)
包装 50%suspensionin20%エタノール、
Ni2+プレチャージ、未チャージ
pH安定性 1-14(>200hr)
操作温度 4-40℃
粒子径 45〜90μm(平均60μm) 保存 4℃〜常温、in20%ethanol
動的結合容量 15mg/ml オートクレーブ処理 可(0.1MSodiumacetate、120℃、30分)
金属イオン容量 12-30μmolCu2+/ml
クロマトグラフィー担体
組換えタグアフィニティー精製
www.bio-rad.com/affinitymediaOrdering Information
カタログ番号 品名 価格
Niチャージ済み担体
1560131 Ni-IMAC Profinity、10ml ¥15,000
1560133 Ni-IMAC Profinity、25ml ¥30,000
1560135 Ni-IMAC Profinity、100ml ¥95,000
1560137 Ni-IMAC Profinity、500ml ※
7324612 Bio-Scale Mini Ni-IMAC Profinityカートリッジ、5ml、1本 ¥16,000
7324614 Bio-Scale Mini Ni-IMAC Profinityカートリッジ、5ml、5本 ¥68,000
7324610 Bio-Scale Mini Ni-IMAC Profinityカートリッジ、1ml、5本 ¥22,000
アダプター・フィッティング
7320111 Bio-Scale MiniカートリッジFPLC用アダプター(FPLCシステム、M6タイプ接続用)1セット ¥8,000 7320112 Bio-Scale MiniカートリッジHPLC用アダプター(HPLCシステム、1/16"タイプ接続用)1セット ¥8,000 7320113 Bio-Scale MiniカートリッジBioLogic用アダプター(NGCシステム、BioLogicDuoFlowシステム、1/4-28タイプ接続用)
1セット ¥8,000
金属イオンフリー
1560121 IMAC Profinity、10ml ¥12,000
1560123 IMAC Profinity、50ml ¥50,000
1560125 IMAC Profinity、500ml ¥400,000
1560127 IMAC Profinity、1L ※
※マークはお問い合わせください。
Profinity™ GST Cartridges and Kits
ProfinityGSTは、GSTタグタンパク質を精製するために利用しま す。ProfinityGSTを充填したBio-ScaleMiniProfinityGSTカート リッジには、1ml、5mlの2サイズがあります。このカラムに加え、
脱塩カラム、バッファーなどをセットにした製品もご用意して います。
クロマトグラフィー担体
組換えタグアフィニティー精製
www.bio-rad.com/affinitymedia
For More Information
Web: www.bio-rad.com/profinityGST
Ordering Information
カタログ番号 品名 価格
Bio-Scale Miniカートリッジ
7324620 Bio-Scale Mini GST Profinityカートリッジ、1ml、5本 ¥44,000
7324622 Bio-Scale Mini GST Profinityカートリッジ、5ml、1本 ¥32,000
7324624 Bio-Scale Mini GST Profinityカートリッジ、5ml、5本 ¥126,000
アフィニティーバッファーキット
6200240 GSTバッファーキット ¥40,000
構成内容:GSTlysisバッファー、洗浄バッファー、溶出バッファー Profiniaバッファーキット
6200223 Profinia GSTバッファーキット ¥45,000
構成内容:精製バッファー、クリーニングおよび保存溶液、glutathione試薬を含む。10回分。
アフィニティー精製キット
6200243 GST精製キット,1ml ¥58,000
構成内容:GST精製バッファーキット、GSTカートリッジ(2×1ml)
6200244 GST精製キット,5ml ¥105,000
構成内容:GST精製バッファーキット(2)、GSTカートリッジ(1×5ml)
Profinia精製キット
6200226 Profinia GST精製キット 1mlカートリッジ ¥70,000
構成内容:ProfiniaGSTバッファーキット(1キット)、1mlGSTカートリッジ(2個)、
10ml脱塩カートリッジ(2個)
6200236 Profinia GST精製キット 5mlカートリッジ ¥130,000
構成内容:ProfiniaGSTバッファーキット(2キット)、5mlGSTカートリッジ(1個)、
50ml脱塩カートリッジ(1個)
Profiniaスターターキット
6200230 Profinia GSTスターターキット ¥72,000
構成内容:ProfiniaGSTバッファーキット(1キット)、1mlGSTカートリッジ(2個)、
10ml脱塩カートリッジ(2個)、E.coliライセート(1本)、glutathione試薬(1本)
Profinity eXact™ Expression Vector Kits and Cloning Products pPALベクターはT7発現プラスミドから派生したもので、T7lacpromoter とterminatorを利用します。そして、誘導性タンパク質生産用のために は、T7RNApolymeraseexpressionhostを用います。このプラスミドは ampicillin耐性を有し、常にターゲット遺伝子の翻訳をタイトにコント ロールできるようにlac I repressorを発現し、pMB1派生のColE1由来の replicationからなっています。ProfinityeXactpPALベクターに組み込まれ たターゲット遺伝子は、subtilisinprodomainタグと融合する形で発現され ます。