A-1 B-1
A-2 B-2
図11：薬剤感受性の検討
ce ll v iab ilit y
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
0μM 0.1μM0.2μM0.3μM0.4μM
Dox
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
0μM 2μM 4μM 6μM 8μM
【図説】
図1：皮膚腫瘍モデルマウスにおけるDNAメチル化と遺伝子発現の網羅的解析
7.12dimethylbenzanthraceneと12-O-tetradecanoylpholbol-13-acetateの2つの発癌物質を用いて
皮膚腫瘍モデルマウスを作製し，その正常皮膚組織と皮膚腫瘍組織を用いてDNAメチル化
解析と遺伝子発現解析を網羅的に行った．正常皮膚組織と比較し皮膚腫瘍組織で低発現か
つ高メチル化状態であった遺伝子を4個（4領域），逆に高発現かつ低メチル化状態であっ
た遺伝子を41個（51領域）認めた（9）．
図2：TFAP2Eの構造とCpGiとの位置関係
CpGi-1はpromoter領域に，CpGi-2はintron 3領域に位置する．
図3：ヒト神経芽腫細胞株を用いた遺伝子発現解析
A はマウスで正常組織と比較し腫瘍組織において低発現かつ高メチル化状態であった遺伝
子，Bはマウスで正常組織と比較し腫瘍組織において高発現かつ低メチル化状態であった遺
伝子．横軸は左からadrenal gland（正常副腎組織），NB1，NB9，NB69，SK-N-SH，縦軸は
正常副腎組織を 1 としたときの遺伝子発現レベルの相対値．正常副腎組織とすべての細胞
株とで遺伝子発現に有意差を認めたのはTFAP2E，CREG2，DGCR2，DYNLL1，NCL，RCC2， COL18A1，FSCN1であった．（*P<0.05，**P<0.01）
46
図4：ヒト神経芽腫細胞株を用いたDNAメチル化解析
横軸は左からadrenal gland（正常副腎組織），NB1，NB9，NB69，SK-N-SH，縦軸はDNAメ
チル化レベル．CpGiを複数有する遺伝子については上流からCpGi-1，2と番号を割り振っ
た．正常副腎組織とすべての細胞株とでDNAメチル化レベルに有意差を認めたのはTFAP2E
（CpGi-1および2）であった．（*P<0.05，**P<0.01）
図5：神経芽腫腫瘍検体を用いた遺伝子発現解析（A），DNAメチル化解析（B）および遺
伝子発現レベルとDNAメチル化レベルの相関（C）
A，Bともに横軸は左からadrenal glands（正常副腎組織），tumor samples（神経芽腫腫瘍検
体）．Aの縦軸は正常副腎組織を1としたときの遺伝子発現レベルの相対値，Bの縦軸はDNA
メチル化レベル．TFAP2Eは正常副腎組織と比較し腫瘍検体で有意に高発現であった．また，
promoter領域およびintron 3領域のCpGiのいずれにおいても正常副腎組織と比較し腫瘍検
体で有意に低メチル化状態であった．（**P<0.01）
CはTFAP2Eの遺伝子発現レベルとDNAメチル化レベルの相関．縦軸は遺伝子発現レベル，
横軸はDNAメチル化レベル．CpGi-1においてTFAP2Eの遺伝子発現レベルとDNAメチル
化レベルに有意な正の相関を認めた．（P<0.05）
図6：5-aza-2 deoxycytidineを用いた遺伝子発現制御機構の解析
47
A，Bともに横軸は5-aza-2 deoxycytidine（5Az）添加の有（5Az+）無（5Az-），Aの縦軸は
DNAメチル化レベル，Bの縦軸は5Az-を1としたときの遺伝子発現レベルの相対値．遺伝
子発現レベルとDNAメチル化レベルに有意な相関を認めたpromoter領域のCpGi（CpGi-1）
において，5-aza-2 deoxycytidine 非添加群と比較し添加群で有意に低メチル化状態，高発現
となった．（**P<0.01）
図7：siRNA を用いたTFAP2Eの発現抑制の検討
Aはエレクトロポレーション法，Bはリポフェクション法．-1は遺伝子導入効率，-2は
negative control siRNA導入群を1としたときのmRNA発現レベルの相対値， -3はタンパク
発現レベル．導入効率はエレクトロポレーション法では95％，リポフェクション法では83％
であった．Negative control siRNA導入群と比較し，TFAP2E siRNA導入群で有意にTFAP2E
の転写レベルでの発現の低下を認め，タンパク発現も明らかに低下していた．（*P<0.05，
**P<0.01）
図8：TFAP2Eの発現抑制による細胞の形態変化
Aはエレクトロポレーション法，Bはリポフェクション法．-1はnegative control siRNA導入
群，-2はTFAP2E siRNA導入群．A，Bいずれもnegative control siRNA導入群とTFAP2E siRNA
導入群とで明らかな形態変化を認めなかった．
48
図9：TFAP2Eの発現抑制によるcell viabilityの変化の検討
Negative control siRNA導入群と比較し，TFAP2E siRNA導入群で有意にcell viabilityの低下
を認めた．（*P<0.05）
図10：TFAP2Eの発現抑制によるアポトーシス誘導効果の検討
Negative control siRNA導入群と比較し，TFAP2E siRNA導入群でcleaved CASP9の発現が増
強していた．
図11：薬剤感受性の検討
AはDox添加群，BはCDDP添加群．-1は至適濃度の検討，-2はDox/CDDP非添加群を1
としたときの遺伝子発現レベルの相対値．Dox/CDDP 非添加群と比較し添加群で，TFAP2E
は高発現，p53は低発現となった．（*P<0.05，**P<0.01）
49
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55
【研究業績】
星 玲奈
Ⅰ 発表
①一般発表 24
②特別発表 0
Ⅱ 論文
①原著論文 2（共 2 ）
②症例報告 4（共 4 ）
③総説 なし
Ⅲ 著書 なし
56
Ⅰ 発表
① 一般発表
1. 星 玲奈, 古屋 武史, 杉藤 公信, 吉澤 信輔, 植草 省太, 川島 弘之, 井上 幹也, 越永
従道, 谷ヶ崎 博, 麦島 秀雄：先天性間葉芽腎腫の2 例．第 26 回日本小児血液・がん
学会学術集会，大阪，2010年12月
2. 大橋 研介, 星 玲奈, 蘇我 晶子, 古屋 武史, 金田 英秀, 井上 幹也, 杉藤 公信, 池田
太郎, 越永 従道：当科における長期留置型中心静脈カテーテルの感染率．第48回日本
小児外科学会総会，東京，2011年7月
3. 井上 幹也, 星 玲奈, 渡邉 揚介, 橋本 真, 蘇我 晶子, 金田 英秀, 古屋 武史, 大橋 研
介, 杉藤 公信, 池田 太郎, 越永 従道：限局性腹腔内膿瘍を形成した小児急性虫垂炎に
対する治療法の検討．第48回日本小児外科学会総会，東京，2011年7月
4. 星 玲奈, 古屋 武史, 杉藤 公信, 蘇我 晶子, 吉澤 信輔, 金田 英秀, 大橋 研介, 井上
幹也, 池田 太郎, 越永 従道：治療抵抗性肝芽腫に対し肝動脈化学塞栓療法を施行した
2症例．第48回日本小児外科学会総会，東京，2011年7月
5. 井上 幹也, 橋本 真，星 玲奈, 渡邉 揚介, 金田 英秀, 南郷 容子, 古屋 武史, 大橋 研
介，杉藤 公信, 池田 太郎, 越永 従道：当院における待機的虫垂切除術の検討．板橋
区医師会医学会，東京，2011年9月
6. 大橋 研介, 星 玲奈, 渡邉 揚介, 橋本 真, 古屋 武史, 金田 英秀, 南郷 容子, 井上 幹
57
也, 杉藤 公信, 池田 太郎, 越永 従道：超低体重出生児に対する”Sutureless” ileostomy
～第2報～．日本小児外科学会秋季シンポジウム，大阪，2011年10月
7. 橋本 真, 大橋 研介, 星 玲奈, 渡邉 揚介, 蘇我 晶子, 金田 英秀, 古屋 武史, 南郷 容
子, 井上 幹也, 杉藤 公信, 池田 太郎, 越永 従道：胎便性腹膜炎に合併した胆道閉鎖
症の1例．第46回日本小児外科学会関東甲信越地方会，群馬，2011年10月
8. 吉澤 信輔, 杉藤 公信, 星 玲奈, 植草 省太, 大橋 研介, 池田 太郎, 越永 従道, 藤原
恭 子, 永 瀬 浩 喜, 相 馬 正 義 ：Beckwith-Wiedemann 症 候 群 細 胞 株 に お け る
Pyrrole-Imidazole Polyamideによるp57KIP2遺伝子の発現調節．第27回日本小児血液・
がん学会学術集会，群馬，2011年11月
9. 植草 省太, 杉藤 公信, 星 玲奈, 吉澤 信輔, 川島 弘之, 大橋 研介, 池田 太郎, 越永
従道, 篠島 由一, 渡邉 学郎, 藤原 恭子, 永瀬 浩喜, 相馬 正義：神経芽腫における
Zygote arrest 1(ZAR1)のDNAメチル化異常．第27回日本小児血液・がん学会学術集会，
群馬，2011年11月
10. 杉藤 公信, 橋本 真, 星 玲奈, 渡邉 揚介, 金田 英秀, 古屋 武史, 南郷 容子, 細田 利
史, 大橋 研介, 井上 幹也, 池田 太郎, 越永 従道：当院における小児腫瘍性疾患に対
する外科医の出番．第49回日本小児外科学会総会，神奈川，2012年7月
11. 吉澤 信輔, 杉藤 公信, 星 玲奈, 植草 省太, 大橋 研介, 池田 太郎, 越永 従道, 藤原
恭子, 相馬 正義：Beckwith-Wiedemann 症候群細胞株における P-I Polyamide による
58