〔測定原理〕
MMP は 37℃、pH7.5～8.0 の条件下でゼラチンやコラーゲンなどの基質を分解
する酵素である。不活性条件下で基質（ゼラチン）を含むゲルにサンプルを電気泳 動によって分画する。電気泳動後にゲルを活性化条件下におくことで、MMP がゲ ル中のゼラチンを分解する。このゲルを染色すると、MMP 活性が見られる部位は 白抜きのバンドが見られる。
〔使用装置・器具・試薬〕
・ゲル板(前面ガラス板、ミミ付ガラス板)、
・シリコンガスケット、
・プラスチック製クリップ
・コーム
・電気泳動槽(AE-6410型,ATTO)
・電源装置(クロスパワー500,ATTO)
・Tris(トリスヒドリキシメチルアミノメタン)
・SDS(ドデシル硫酸ナトリウム)
・HCl
・アクリルアミド(Wako)
・Bis (N.N'-メチレンビスアクリルアミド)(Wako)
・APS(過硫酸アンモニウム)
・グリシン
・TEMED(N,N,N’,N’－テトラメチルエチレンジアミン)
・分子量マーカー(HMW SDS Marker Kit,Amersham)
・CBB-R250(クマシーブリリアントブルー)
・TritonX-100
〔操作〕
Ⅰ．各溶液の調整
・アクリルアミド/bisアクリルアミド溶液
アクリルアミド58gとbisアクリルアミド2.0gを脱イオン水で溶解し、200mlにする。
・separating buffer
Tris54.5g、SDS1.2gを脱イオン水に溶かし、5N HCl(約17ml)を加えてpH8.8に合 わせ、脱イオン水で300mlにメスアップする。
・staking buffer
Tris6.0g、SDS0.4gを脱イオン水に溶かし、5N HCl(約9ml)を加えてpH6.8に合わ せ、脱イオン水で100mlにメスアップする。
・10×ゼラチン基質溶液
ブタの皮膚のゼラチン800mgをガラス容器内で100mlの脱イオン水に溶解する。
均一に染まったバックグランドを得るため、ゲルへの取り込みの前に完全にタンパク 質を溶解する。溶液が沸騰するまで電子レンジで加熱する（吹きこぼれないように する）。タンパク質が溶液に溶解するように回す。
・スクロース溶液
スクロース50gとNaN3 0.02gを～50mlの脱イオン水に溶解する。トルエン30μlを 加え、脱イオン水で100mlにする。
・10％(w/v)過硫酸アンモニウム
過硫酸アンモニウム0.5gに5mlの脱イオン水を加え溶解する。
・泳動バッファー
Tris3.0g、グリシン14.4gを脱イオン水に溶かし、脱イオン水で1000mlにメスアップ する。その後、SDS1.0gを加え、溶解させる。
・染色溶液
クマシーブリリアントブルーR-250(0.125％) 2.5gを混合物（メタノール1.25l、酢酸 0.5l、脱イオン水0.75l）で溶解する。
・脱色溶液
メタノール1.5l、脱イオン水3.5l、ギ酸50mlを混合する。
・Sample loading buffer
SDS(2%) 0.2gとブロモフェノールブルー(0.1%) 0.01gをstacking gel buffer 5mlに 溶解し、グリセロール5mlを加える。
・APMA
4-アミノフェニル水銀アセテート(20mM) 7mgにNaOH (80mM)1mlを加え溶解す る。
・酵素復元バッファー
Developing bufferにTriton X-100を25ml加える。
・Developing buffer
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン(50mM) 6.055g、NaCl(200mM) 11.69g、ZnCl 0.7mg、CaCl・2H2O(5mM) 0.74g、NaN3(0.02%) 0.2gを～900mlの脱イオン水で溶 解し、HClでpH7.5に合わせる。脱イオン水で1000mlにする。
Ⅱ．電気泳動
① 以下の表に従って separating gel、stacking gel を作製する。ただし、
TEMED はこの時点では加えない。separating gel をアスピレーターで