B) Spiked dry type petfood for dogs (Spiked levels were 1 mg/kg for AMPA, GLUF, MPPA and GLYP, respectively.)
3.9 定量限界(下限)及び検出限界
本法の測定対象成分のうち愛玩動物用飼料において残留基準値が設定されているのは
GLYP
のみであり,その値は15 mg/kg
である.従って,目標とする定量限界(下限)及び検出限界は,iv ii iii i
Retention time/ min
In te ns it y/ a rb .u ni ts
0 2 4 6 8
v iv ii
iii
i
Retention time/ min
In te ns it y/ a rb .u ni ts
0 2 4 6 8
v iv ii
iii
i
Retention time/ min
In te ns it y/ a rb .u ni ts
0 2 4 6 8
134
飼料研究報告Vol. 37 (2012)
ドライ製品及びセミドライ製品でそれぞれ3 mg/kg
以下及び1.5 mg/kg
以下,ウェット製品(水分
90 %の場合)でそれぞれ 1.2 mg/kg
以下及び0.8 mg/kg
以下である.当試験室で使用した
LC-MS/MS
で十分なSN
比が得られる濃度を推定し,目標定量限界をドラ イ製品及びセミドライ製品で1 mg/kg
,ウェット製品で0.5 mg/kg
と設定した.当該濃度におけ る添加回収試験結果は前項のTable 8
から11
までに記載のとおりであり,GLYP,GLUF 及びMPPA
について,いずれの試料においてもピークのSN
比が10
を超え,かつ,標準偏差(σ)の10
倍が当該目標濃度を超えていなかった。従って,本法の定量限界(下限)は,
GLYP
,GLUF
及びMPPA
について,ドライ製品及びセ ミドライ製品で1 mg/kg,ウェット製品で 0.5 mg/kg
とした.また,検出限界は,先の標準偏差に自由度
4,片側有意水準 0.05
のStudent
のt-値の 2
倍(= 4.26)を乗じた値を参考として,すなわち定量限界の
4.26/10
として,それぞれ0.4 mg/kg
及び0.2 mg/kg
とした.3.10
共同試験本法の室間再現精度を確認するため,市販の犬用ドライ製品,猫用ドライ製品,犬用セミドラ イ製品,犬用ウェット製品及び猫用ウェット製品に
GLYP,AMPA,GLUF
及びMPPA
を添加し た共通試料を用い,10
試験室で共同試験を実施した.試験の概要は以下のとおりである.i)
分析試料の調製 ドライ製品及びセミドライ製品については,遠心粉砕機で粉砕した無添 加試料を送付し,各試験室において一定量を量り取った後,濃度非通知の添加用標準液(水溶液,各
1 mL)を分析開始の前日に添加して調製した.ウェット製品については,フードプロ
セッサーでペースト状にした分析用試料を送付し,各試験室において一定量を量り取った後,
濃度非通知の添加用標準液(水溶液,各
0.5 mL
)を分析開始の30
分前に添加して調製した.5
種類の試料について,非明示の2
点反復で試験を実施した.それぞれの添加濃度はTable 12
のとおりである.Table 12 Spiked levels of GLYP, AMPA, GLUF and MPPA in the collaborative study expressed relative to original matter
GLYP AMPA GLUF MPPA
Moisture spiked level spiked level spiked level spiked level
less than (%) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg)
Dry type for dogs 11 2.0 2.0 5.0 5.0
Dry type for cats 12 15 15 2.0 2.0
Semi-dry type for dogs 30 7.0 7.0 2.0 2.0
Wet type for dogs 86 1.0 1.0 2.5 2.5
Wet type for cats 80 3.5 3.5 1.0 1.0
Petfood types
ii)
参加試験室 財団法人日本食品分析センター 多摩研究所,全国酪農業協同組合連合会 分 析センター,協同飼料株式会社 研究所,日本ハム株式会社 中央研究所,独立行政法人農林水 産消費安全技術センター肥飼料安全検査部,同札幌センター,同仙台センター,同名古屋セン ター,同福岡センター及び同神戸センター(計10
試験室).iii)
試験実施期間 平成23
年9
月12
日から平成23
年10
月14
日までiv) 結果の報告 分析結果は,試料原物中濃度(mg/kg)として有効数字 3
けたで報告させた.また,GLYP については,全ての試料について
GLYP-
13C
2,
15N
の回収率で補正後の値を報告さ愛玩動物用飼料中の含リンアミノ酸系農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時定量法
135
せるとともに,最終試料溶液中のGLYP-
13C
2,
15N
誘導体の濃度(ng/mL)についても参考のた め報告させた.v)
結果の解析IUPAC
のプロトコール9)に従い,Cochran
検定,はずれ値1
個のGrubbs
検定及 びはずれ値2
個のGrubbs
検定を行い,はずれ値の棄却等を行った上で平均回収率,繰返し精 度の相対標準偏差(RSDr)及び室間再現精度の相対標準偏差(RSDR)を算出した.得られたRSD
Rから,修正Horwitz
式を用いてHorRat
を求めた.結果の概要は以下のとおりである.
1) GLYP
GLYP
の各分析結果及び統計解析結果はTable 13
のとおりであり,犬用ドライ製 品,猫用ドライ製品,犬用セミドライ製品,犬用ウェット製品及び猫用ウェット製品について,平均回収率(%)はそれぞれ
95.5,90.6,94.9,99.7
及び99.8,RSD
r(%)はそれぞれ5.4,
7.0
,5.3
,5.8
及び4.3
,RSD
R(%
)はそれぞれ8.7
,7.0
,6.9
,8.4
及び5.5
,HorRat
はそれぞれ0.60
,0.65
,0.58
,0.53
及び0.42
であった.いずれも良好な結果であった.なお,参考までに
GLYP-
13C
2,
15N
についても統計解析を行った.その結果(表省略)は,平 均回収率(%)はそれぞれ70.9,84.8,79.5,71.6
及び72.6,RSD
r(%)はそれぞれ10,11,
13
,12
及び18
,RSD
R(%
)はそれぞれ21
,17
,14
,31
及び20
,HorRat
はそれぞれ1.1
,0.91
,0.78
,1.5
及び0.99
であった.2) AMPA AMPA
は,測定不能であった1
試験室を除く9
試験室から報告があった.各分析結果及び統計解析結果は
Table 14
のとおりであり,犬用ドライ製品,猫用ドライ製品,犬用セ ミドライ製品,犬用ウェット製品及び猫用ウェット製品について,平均回収率(%
)はそれぞ れ73.4
,92.1
,89.9
,86.0
及び86.1
,RSD
r(%
)はそれぞれ11
,20
,12
,14
及び18
,RSD
R(%)はそれぞれ
22,22,21,24
及び22,HorRat
はそれぞれ1.5,2.0,1.7,1.5
及び1.6
で あった.当試験室での添加回収試験結果と同様,犬用ドライ製品で回収率が低かった.また,繰返し精度及び室間再現精度が他の成分よりも劣っていたものの,室間再現精度の規準は満た していた.
3) GLUF GLUF
の各分析結果及び統計解析結果はTable 15
のとおりであり,犬用ドライ製品,猫用ドライ製品,犬用セミドライ製品,犬用ウェット製品及び猫用ウェット製品について,
平均回収率(
%
)はそれぞれ98.6
,104
,112
,93.2
及び101
,RSD
r(%
)はそれぞれ11
,10
,6.4
,7.5
及び15
,RSD
R(%
)はそれぞれ15
,13
,9.4
,23
及び21
,HorRat
はそれぞれ1.2
,0.94,0.66,1.6
及び1.3
であった.回収率及び繰返し精度の値が当試験室での検討結果よりやや大きい試料があったが,室間再現精度は全て良好であった.
4) MPPA
MPPA
は,測定不能であった1
試験室を除く9
試験室から報告があった.各分析 結果及び統計解析結果はTable 16
のとおりであり,犬用ドライ製品,猫用ドライ製品,犬用セ ミドライ製品,犬用ウェット製品及び猫用ウェット製品について,平均回収率(%)はそれぞれ
90.3,97.2,98.3,94.1
及び96.4,RSD
r(%)はそれぞれ7.8,6.2,6.9,7.2
及び6.2,RSD
R(
%
)はそれぞれ11
,8.6
,6.9
,9.4
及び9.0
,HorRat
はそれぞれ0.83
,0.59
,0.48
,0.67
及び0.56
であった.いずれも良好な結果であった.136
飼料研究報告 Vol. 37 (2012)T a b le 1 3 R e su lts o f co lla b o ra tiv e s tu d y (G L Y P ) 1 1. 88 1. 92 13 .0 13 .8 5. 78 6. 05 1. 05 1. 16 3. 26 3. 19 2 2. 04 1. 92 13 .9 14 .5 7. 06 6. 67 0. 89 1 0. 93 7 3. 68 3. 87 3 2. 04 1. 75 15 .5 13 .7 7. 07 6. 72 0. 91 4 0. 77 7 3. 39 3. 47 4 1. 74 1. 74 13 .6 16 .7 7. 35 6. 96 1. 09 1. 05 3. 74 3. 42 5 1. 92 1. 78 14 .4 14 .3 6. 52 6. 79 0. 94 9 1. 03 3. 59 3. 62 6 1. 99 1. 96 13 .2 14 .8 6. 21 6. 30 1. 09 0. 94 3 3. 47 3. 45 7 1. 83 1. 60 13 .4 13 .1 6. 40 6. 63 0. 97 8 1. 01 3. 51 3. 81 8 1. 98 1. 86 13 .3 13 .6 6. 86 6. 00 1. 01 1. 01 3. 60 3. 18 9 2. 25 2. 19 16 .2
b)18 .4
b)6. 60 7. 65 1. 04 1. 00 3. 44 3. 31 10 - --
a)1 .8 9
a)13 .9 13 .0 6. 59 6. 58 1. 03 0. 98 0 3. 37 3. 47 M ea n va lu e (m g/ kg )
c)S pi ke d le ve l ( m g/ kg ) B la nk ( m g/ kg ) R ec ov er y (% ) R S D
rd)( % ) R S D
Re)( % ) PR S D
Rf)( % ) H or R at
0. 99 7 3. 49
fo r ca ts ( m g/ kg ) D ry ty pe p et f oo d D ry ty pe p et f oo d S em i- dr y ty pe p et f oo d 2. 00 15 .0 7. 00 1. 00 3. 50
W et ty pe p et f oo d W et ty pe p et f oo d 1. 91 14 .0 6. 64 T r. 0. 4 T r. N D N D 95 .5 90 .6 94 .9 99 .7 99 .8 7. 0 5. 3 5. 8 4. 3 8. 7 7. 0 6. 9 8. 4 5. 5 13 0. 60 0. 65 0. 58 0. 53 0. 42
L ab or at or y N o. fo r do gs ( m g/ kg ) fo r ca ts ( m g/ kg ) fo r do gs ( m g/ kg ) fo r do gs ( m g/ kg ) 15 11 12 16
5. 4 a) D at e ex cl ud ed b ec au se o f la ck o f co un te rp ar t in e xp er im en ta l di so rd er b) D at a ex cl ud ed b y si ng le G ru bb s te st c) D ry t yp e fo r do gs : n = 1 8 (w it ho ut l ab or at or y N o. 1 0) ; dr y ty pe f or c at s: n = 1 8 (w it ho ut l ab or at or y N o. 9 ); o th er s: n = 2 0 d) R el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pe at ab il it y w it hi n la bo ra to ry e) R el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pr od uc ib il it y be tw ee n la bo ra to ri es f) P re di ct ed r el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pr od uc ib il it y be tw ee n la bo ra to ri es c al cu la te d fr om t he m od if ie d H or w it z eq ua ti on
愛玩動物用飼料中の含リンアミノ酸系農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時定量法
137
T a b le 1 4 R e su lts o f co lla b o ra tiv e s tu d y (A M P A ) 1 1. 39 1. 07 8. 32 18 .2 4. 22 6. 10 0. 69 7 0. 60 4 2. 98 2. 69 2 1. 28 1. 39 10 .1 10 .1 5. 56 4. 70 0. 93 5 0. 94 9 3. 13 2. 64 3 1. 30 1. 44 13 .1 18 .1 4. 25 5. 63 0. 95 5 1. 05 3 .5 9
b)3 .3 6
b)4 1 .9 9
b)2 .0 7
b)17 .3 16 .5 8. 69 7. 61 0. 56 8 0. 91 9 2. 21 2. 99 5 1. 63 1. 18 14 .8 15 .0 6. 55 7. 03 0. 90 5 0. 96 7 2. 85 2. 53 6 1. 35 1. 50 9. 19 12 .7 7. 22 8. 10 0. 75 6 0. 74 4 2. 51 2. 69 7 1. 07 1. 33 15 .6 15 .0 6. 02 6. 76 0. 74 6 0. 69 6 3. 02 2. 53 8 1 .9 6
b)1 .9 3
b)15 .0 15 .1 6. 21 6. 77 1. 26 1. 24 4 .4 2
b)4 .0 3
b)9 1. 36 1. 20 13 .0 11 .6 5. 30 4. 34 0. 90 8 0. 58 4 2. 04 4. 05 10 - --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)M ea n va lu e (m g/ kg )
c)S pi ke d le ve l ( m g/ kg ) B la nk ( m g/ kg ) R ec ov er y (% ) R S D
rd)( % ) R S D
Re)( % ) PR S D
Rf)( % ) H or R at
L ab or at or y N o. fo r do gs ( m g/ kg ) fo r ca ts ( m g/ kg ) fo r do gs ( m g/ kg ) fo r do gs ( m g/ kg ) 15 11 12 16
11 14 1. 5 2. 0 1. 7 1. 5 1. 6 20 12 14 18 22 22 21 24 22
N D T r. N D N D T r. 73 .4 92 .1 89 .9 86 .0 86 .1
2. 00 15 .0 7. 00 1. 00 3. 50
W et ty pe p et f oo d W et ty pe p et f oo d 1. 47 13 .8 6. 30 0. 86 0 3. 01
fo r ca ts ( m g/ kg ) D ry ty pe p et f oo d D ry ty pe p et f oo d S em i- dr y ty pe p et f oo d a) L ac k of d at a be ca us e of L C -M S /M S m al fu nc ti on in g b) T o m ak e va li d nu m be r of l ab or at or ie s no t le ss t ha n 8, p ai re d G ru bb s te st w as a vo id ed . I f th es e tw o la bo ra to ri es w er e ex cl ud ed b y pa ir ed G ru bb s te st , r ec ov er y (% ), R S D
r( % ), R S D
R( % ) an d H or R at f or d ry t yp e pe t fo od f or d og s w ou ld b e 66 .0 , 1 4, 1 4 an d 0. 89 , r es pe ct iv el y, a nd f or w et t yp e pe t fo od f or c at s, 7 9. 3, 2 2, 2 2 an d 1. 6, r es pe ct iv el y. c) n = 1 8 (w it ho ut l ab or at or y N o. 1 0) d) R el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pe at ab il it y w it hi n la bo ra to ry e) R el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pr od uc ib il it y be tw ee n la bo ra to ri es f) P re di ct ed r el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pr od uc ib il it y be tw ee n la bo ra to ri es c al cu la te d fr om t he m od if ie d H or w it z eq ua ti on
138
飼料研究報告 Vol. 37 (2012)T a b le 1 5 R e su lts o f co lla b o ra tiv e s tu d y (G L U F ) 1 4. 30 5. 01 1. 93 2. 31 2. 28 2. 38 1. 98 1. 58 0. 91 7 0. 84 7 2 6. 06 5. 70 2. 26 2. 28 2. 66 2. 26 2. 85 2. 93 1. 10 1. 12 3 5. 02 4. 69 2. 08 2. 36 2. 32 2. 49 2. 06 2. 13 0. 95 9 0. 97 1 4 4. 94 4. 98 1. 88 2. 01 2. 21 2. 03 1. 79 2. 17 0. 79 2 0. 88 4 5 4. 71 4. 52 1. 96 1. 95 1. 89 1. 89 2. 45 2. 49 0. 96 9 0. 92 3 6 3. 99 3. 94 1. 44 1. 74 2. 21 2. 40 1. 83 1. 93 0. 95 7 0. 96 4 7 5. 25 4. 92 2. 15 2. 43 2. 47 2. 17 3. 21 3. 06 1. 13 1. 38 8 6. 89 4. 82 3 .2 5
b)3 .2 3
b)3 .2 8
b)3 .4 9
b)2. 70 3. 03 1. 63 1. 15 9 4. 65 4. 34 2. 34 1. 73 1. 99 2. 10 1. 71 2. 02 0. 75 3 1. 13 10 - --
a)4 .7 2
a)2. 21 2. 45 2. 32 2. 29 1. 65 1. 69 0. 87 0 0. 83 0 M ea n va lu e (m g/ kg )
c)S pi ke d le ve l ( m g/ kg ) B la nk ( m g/ kg ) R ec ov er y (% ) R S D
rd)( % ) R S D
Re)( % ) PR S D
Rf)( % ) H or R at
2. 33 1. 01
fo r ca ts ( m g/ kg ) D ry ty pe p et f oo d D ry ty pe p et f oo d S em i- dr y ty pe p et f oo d 5. 00 2. 00 2. 00 2. 50 1. 00
W et ty pe p et f oo d W et ty pe p et f oo d 4. 93 2. 08 2. 24 N D N D N D N D N D 98 .6 10 4 11 2 93 .2 10 1 10 6. 4 7. 5 15 15 13 9. 4 23 21 16 1. 2 0. 94 0. 66 1. 6 1. 3
L ab or at or y N o. fo r do gs ( m g/ kg ) fo r ca ts ( m g/ kg ) fo r do gs ( m g/ kg ) fo r do gs ( m g/ kg ) 13 14 14 14
11 a) D at e ex cl ud ed b ec au se o f la ck o f co un te rp ar t in e xp er im en ta l di so rd er b) D at a ex cl ud ed b y si ng le G ru bb s te st c) D ry t yp e pe t fo od f or d og s: n = 1 8 (w it ho ut l ab or at or y N o. 1 0) ; dr y ty pe p et f oo d fo r ca ts a nd s em i- dr y ty pe p et f oo d fo r do gs : n = 1 8 (w it ho ut la bo ra to ry N o. 8 ); o th er s: n = 2 0 d) R el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pe at ab il it y w it hi n la bo ra to ry e) R el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pr od uc ib il it y be tw ee n la bo ra to ri es f) P re di ct ed r el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pr od uc ib il it y be tw ee n la bo ra to ri es c al cu la te d fr om t he m od if ie d H or w it z eq ua ti on
愛玩動物用飼料中の含リンアミノ酸系農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時定量法
139
T a b le 1 6 R e su lts o f co lla b o ra tiv e s tu d y (M P P A ) 1 4. 58 4. 53 1. 86 2. 00 1. 93 1. 93 2. 26 2. 17 0. 90 8 0. 95 9 2 4. 99 4. 77 2. 01 1. 91 2. 11 1. 74 2. 03 2. 11 1. 03 1. 08 3 4. 59 4. 76 2. 02 2. 05 1. 98 2. 02 2. 37 2. 38 0. 98 5 0. 91 4 4 5. 28 4. 76 2. 09 1. 86 2. 19 1. 91 2. 21 2. 29 0. 92 3 1. 03 5 4. 70 4. 56 1. 99 1. 90 1. 96 1. 96 2. 52 2. 44 0. 96 5 0. 92 9 6 3. 40 4. 27 1. 62 1. 76 1. 86 2. 15 2. 78 2. 42 1. 10 1. 13 7 3. 84 4. 13 1. 59 1. 92 2. 01 1. 97 2. 59 2. 38 0. 93 6 0. 90 7 8 4. 63 3. 84 2. 21 2. 09 1. 93 1. 97 2. 39 2. 17 0. 97 0 0. 83 0 9 5. 12 4. 50 1. 97 2. 13 1. 79 1. 96 2. 13 2. 21 0. 80 7 0. 94 5 10 - --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)- --
a)M ea n va lu e (m g/ kg )
b)S pi ke d le ve l ( m g/ kg ) B la nk ( m g/ kg ) R ec ov er y (% ) R S D
rc)( % ) R S D
Rd)( % ) PR S D
Re)( % ) H or R at
2. 35 0. 96
fo r ca ts ( m g/ kg ) D ry ty pe p et f oo d D ry ty pe p et f oo d S em i- dr y ty pe p et f oo d 5. 00 2. 00 2. 00 2. 50 1. 00
W et ty pe p et f oo d W et ty pe p et f oo d 4. 51 1. 94 1. 97 N D N D N D N D N D 90 .3 97 .2 98 .3 94 .1 96 .4 6. 2 6. 9 7. 2 6. 2 11 8. 6 6. 9 9. 4 9. 0 16 0. 83 0. 59 0. 48 0. 67 0. 56
L ab or at or y N o. fo r do gs ( m g/ kg ) fo r ca ts ( m g/ kg ) fo r do gs ( m g/ kg ) fo r do gs ( m g/ kg ) 13 14 14 14
7. 8 a) L ac k of d at a be ca us e of L C -M S /M S m al fu nc ti on in g b) n = 1 8 (w it ho ut l ab or at or y N o. 1 0) c) R el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pe at ab il it y w it hi n la bo ra to ry d) R el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pr od uc ib il it y be tw ee n la bo ra to ri es e) P re di ct ed r el at iv e st an da rd d ev ia ti on o f re pr od uc ib il it y be tw ee n la bo ra to ri es c al cu la te d fr om t he m od if ie d H or w it z eq ua ti on
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飼料研究報告Vol. 37 (2012)
参考のため,各試験室で用いた液体クロマトグラフタンデム型質量分析計の機種等をTable 17
に示した.Table 17 Instruments used in the collaborative study LC column
(i.d. × length, particle size)
LC: Agilent Technologies 1200 Agilent Technologies
MS/MS: Agilent Technologies ZORBAX Eclipse XDB-C18
6410 Triple Quad LC/MS (2.1 mm × 150 mm, 5 µm)
Agilent Technologies
Waters Quattro Premier XE ZORBAX Eclipse XDB-C18
(2.1 mm × 150 mm, 5 µm)
LC: Waters Alliance 2695 Agilent Technologies
MS/MS: Micromass ZORBAX Eclipse XDB-C18
Quattro micro API (2.1 mm × 150 mm, 5 µm)
Agilent Technologies
Waters ACQUITY TQD ZORBAX Eclipse XDB-C18
(2.1 mm × 150 mm, 5 µm) Agilent Technologies
Waters ACQUITY TQD ZORBAX Eclipse XDB-C18
(2.1 mm × 150 mm, 5 µm) Agilent Technologies
Waters ACQUITY TQD ZORBAX Eclipse XDB-C18
(2.1 mm × 150 mm, 5 µm)
LC: Agilent Technologies 1200 Kanto Chemical
MS/MS: AB Sciex Mightysil RP-18 GP
API-3200 Q TRAP (2.0 mm × 150 mm, 5 µm)
LC: Waters Alliance 2695 GL Science
MS/MS: Waters Inertsil ODS-3
Quattro micro (2.1 mm × 150 mm, 5 µm)
LC: Agilent Technologies 1100 Agilent Technologies
MS/MS: Applied Biosystems ZORBAX Eclipse XDB-C18
API-2000 (2.1 mm × 150 mm, 5 µm)
LC: Agilent Technologies 1200 Agilent Technologies
MS/MS: Agilent Technologies ZORBAX Eclipse XDB-C18
6410 Triple Quad LC/MS (2.1 mm × 150 mm, 5 µm)
LC-MS/MS
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ドキュメント内
全体版 (Full version) PDF
(ページ 141-148)