L−32
1，2：未処理個体
3，4：37℃に達した時点の個体
5，6：37℃における死亡個体
7，g：37℃における3時間生残個
奇数番号は雌、偶数番号は雄
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図3−2各プライマーにおけるRT−PCR産物の泳動像（脳）
−95−
B．26
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B・32
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1，2：未処理個体
3，4：37℃に達した時点の個体 5，6：37℃における死亡個体 7，8：37℃における3時間生残矧
奇数番号は雌、偶数番号は雄
絶食考察
高温処理などのストレスにより発現するタンパク質としてHSP70が知られて いる（M。rimoto1989）。しかし、今回の解析でHSPファミリーの遺伝子は検出で きなかった。今回のSuppressionSubtraetiveHybridization解析では発現増 加と現象でそれぞれ約960個、合計1920のクローンを解析した。サブトラクシ
ョンをかけた時とかけなかった時とではcDNAの泳動像にはぅきりとした差異が 観察されていることから、高温処理時には相当数の遺伝子において発現量の変 化が生じているものと考えられる。今回の分析ではその一部が解析できたに過
ぎないと考えられる。今後より多くのクローンを得、解析を進め、HSPファミリ ーを含めたより多くの辻伝子に関して調べる必要がある。
今回の分析で高温処理により誘導が確認された連伝子はAllatoropin辻伝子 以外他の魚種や生物でも高温処理による誘導が確認されている（Pietroet al・
200l，ZagerandJohnson2001，Gornatietal．2004など）。これらはいずれ も代謝を制御する酵素をコードしている辻伝子であることから、高温になり活 発になる代謝を制御あるいは変性したタンパクの除去等に関与していると考え
られる。死亡個体と生残個体との間に明確な発現量の差異が観察されなかった ことは、高温耐性にはこれら辻伝子にそれぞれの処理能力が異なる対立遺伝子 が存在している可能性も考えられる。明確な個体差が観察される際は、それぞ れの辻伝子のクローニングと塩基配列の差異を調べることも今後必要になると 考えられる。
また、得られた辻伝子が最終的に高温耐性に関与しているかどうかを判定す るためには、解析用の系統を作出しておく必要がある。高温処理に対して確実 に強い系統と弱い系統を作出し、組換え近交系を用いた場合と同様の解析を行 い、高温耐性と遺伝子発現の有無との関連を雨べる方法が考えられる。Randaet 81．（1991）は系統間比較から少数の主働辻伝子による支配を示唆しており、
F。ji…tal．（1995）は選択実験から同様の示唆をしている。少数の主働連伝子 による支配であれば比較的早く系統が作成できる可能性がある。今後分析用系 統の作出とその系統を用いた解析が望まれる。
さらに、高温耐性に関連の可能性のある辻伝子の発現について、細胞レベル
−97−
での発現の解析が求められている。細胞レベルの解析軋処理に対する反応が 個体レベルより直接的に得られることが期待される0また動物を直接実験に使
用することが場困難な場合において、細胞レベルでの解析が有効である。
sakamotMtal．（2002）や有澤ら（2004）軋クローンギンブナの細胞と個体にお ける高温耐性を比較を行い、高温に強い個体から得られた細胞も高温に強いこ となどを明らかにしている0グッピーにおいても今後・細胞レベルでの高温耐 性を解析し、個体の高温耐性との関連を調べることが重要である。
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