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様式１-５

種目（一般研究Ⅰ）

ェルラ酸含量が高いことが報告されており³⁾，中国と韓国では原料 もしくは製造工程が異なることが示唆された．

【GC-MS検出成分】

神麹の原料とされるセイコウ，ソウジ，タデは精油を含んでおり，

精油成分に含まれるセスキテルペン類は唾液や胃液の分泌を促進す ることで健胃作用を示すことが知られている⁴⁾．そこで，神麹に含ま れる精油成分をGC-MSを用いて調べた．その結果，神麹市場品には 23 種類の共通成分があることが分かった (表2). その中にはlinalool やterpinen-4-ol, dihydroactinolide などの植物由来の精油成分に加え，

phenlyethyl alcoholや g-nonalactoneなどの発酵食品に特徴的な香気成 分も含まれていた．

検出された全成分の主成分分析を行なったところ，市場品が大き く3グループに分類された (図1A)．中国産神麹は全て同じグループ に分類され，韓国産神麹は入手先によって2グループに分けられた．

各成分の主成分負荷量を調べたところ，中国産には4-vinylguaiacolや pyradine 類などが多い傾向があり，韓国産の H, I, J には linalool や

mentholなど植物由来の精油成分，韓国産のK, L, Mには短鎖の脂肪

酸や脂肪族アルデヒドが多く含まれる傾向があった (図 1B)．4-vinylguaiacolやpyrazine類は加熱により生成する成分であることが報 告されており^{5, 6)}，中国産神麹は製造過程で加熱乾燥されていること が予想された．

2. 神麹に存在する微生物の分析

【生菌数の測定】

神麹を滅菌水に懸濁した液を適宜希釈後，平板培地に塗抹，培養した後，出現したコロニー数を測定した (表 1)．その結果，麹菌を含む糸状菌様のコロニーはほとんど検出できず，生菌として麹菌を検出することが困難で あった．一方，中国産神麹には一般細菌，特に耐熱性の細菌が10^8以上存在しており，麹菌以外の細菌類が多く 存在することが示唆された．

【菌叢解析】

生菌数の結果より，麹菌以外の細菌が多量に存在することが示唆されたため，次世代シーケンサーによるアン プリコンシーケンス解析により微生物の群集構造を調べた．神麹からDNA抽出を行い (ZR Fecal DNA MiniPrep)，

プライマーセットV3V4f－V3V4rを用いて細菌16S rDNA V3/V4領域を，またITS1F_KYO1－ITS2_KYO2を用い

て真菌ITS 1領域を対象としたPCR増幅を行った．各試料について，得られたアンプリコンを次世代シーケンス

装置MiSeq (Illumina) に供して2×300 bpの条件でシーケンシングを行なった．得られたリードは，クオリティフ ィルタリングを行なった後，Qiimeを用いて細菌及び真菌の帰属分類群の推定を行なった．結果を図2に示す．

図1 GC-MSで検出される成分の主成分分析結果 A: スコアプロット，B: ローディングプロット

表2神麹市場品に共通する成分

-1.2 -1 -0.8 -0.6 -0.4 -0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

-1.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5

Ethyl benzoate Trimethyl-pyrazine

4-Vinylguaiacol

Benzonitrile

g-Nonalactone

Hexanoic acid Decanal 1-Octen-3-ol 1-Octen-3-ol

Menthol

Linalool Terpinen-4-ol

Borneol PC1

PC2

B

(B )

(C )

A

Acids Dodecanoic acid

Palmitic acid Octanoic Acid

Alcohols

Linalool Terpinen-4-ol Benzyl Alcohol Phenylethyl Alcohol

Aldehydes

2-(E)-Heptenal Benzaldehyde Hexanal Nonanal Decanal Esters Methyl salicylate

2-Phenylethyl acetate Ketones Pulegone

Piperitone 2-Octanone Lactones γ-NonalactoneGeranylaceton

Others

Dihydroactinolide Paeonol

Naphthalene Methyleugenol

様式１-５

種目（一般研究Ⅰ）

0% 20% 40% 60% 80% 100%

M L K J I H

0% 20% 40% 60% 80% 100%

G F E D C B A

0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100%

F

Chroroplast mitochondria Bacillus Leuconostocaceae

Streptomyces Lactobacillus Pediococcus Bacillaceae

Paenibacillus Thermoactinomycetaceae Lactobacillaceae Rickettsia

Sphingomonas Oxalobacteraceae Erwinia Enterobacteriaceae

Pseudomonas Others

sp.

sp.

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sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

A

0% 20% 40% 60% 80% 100%

G F E D C B A

0% 20% 40% 60% 80% 100%

M L K J I H

0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100%

G

Aspergillus sp. Rhizopus sp. Wallemia sp. Fusarium sp. Wickerhamomyces sp.

Xeromyces sp. Alternaria sp. Botrytis sp. Xerochrysium sp. Phaeobotryon sp.

Mucor sp. Cladosporium sp. Tilletia sp. Aureobasidium sp. Penicillium sp.

Botryosphaeria sp. Cercospora sp. Curvularia sp. Didymella sp. Microidium sp.

Candida sp. Kazachstania sp. Saccharomyces sp. Diaporthe sp. Pestalotiopsis sp.

Sarocladium sp. Marasmius sp. Lichtheimia sp. Others sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

sp.

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B

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ドキュメント内 富山大学 和漢医薬学総合研究所年報 44 巻 2017 年 Annual Report of Institute of Natural Medicine (ページ 116-120)