(1)ヒ ト好 塩 基 球‑肥
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(2) 596. 津. 田. 隆. 史. Hypaque‑Ficollに. あ る.. MaCoy's solution. 5A medium,. (HBSS) (Grand. Grand. Island,. sulfate(明. IgE serum. AG, Marburg,. 間 遠 沈 した 。 好 塩 基 球 を 含 む 単 核 球 層 を 回収 し, HBSSに. mycinを. 含 む)に 浮 遊 さ せ た,得. plc,. 球 は,木. 村 ら の 好 塩 基 球‑好. sulfate. chondroitin. sulfate. 好 塩 基 球106‑7個. type. B (porcine. (95%air,. 加 え, CO2イ. 5%CO2,. をHBSSで6回. skin),. し た.な. おCML患. sulfateの. cartilage),. に 用 い た.ま. Sephadex. dextran. Dowex. Bio-Rad. protein. AG 1-X2 (100-200. mesh),. assay. Laboratries,. kit (Bio-Rad. CA)carbazole(石. roitin. ABC. AC. (東 京 化 成 工 業)antitrombin. chloride. III (AT. Sweden). Azure‑A,. III), H‑D‑. phenol(半. 井. 化 学 薬 品) 1)好. 塩 基 球 の 分 離 とproteoglycanの. Metcalfeら. IEC(International DPR. 6000遠. 標識. Electric. 沈 機 で3,500g,. 血 球 濃 厚 分 画 を 約20ml分. で 採 血 し,. エ ン酸 ナ トリウ 血球層 を 22℃,. 5分 間 遠 沈 し て 上 清 の 血 小 板 を 除 去 し た.そ Mg2+を. phore. 添 加 し, 37℃,. A23187を. 含 まな いHanks'. Balanced. 再 浮 遊 さ せ, 10mlの. 20分 間 加 温 し. て 放 出 を 惹 起 し た.そ. れ ぞ れ を,上. 分 沈 渣 と に分 離 し,非. 標識 好 塩 基 球 よ り得 た細. せ,凍. 結 融 解 を6回. れ. 清 と細 胞 成. 衝 液 に再 浮 遊 さ. 繰 り返 した 後, 500g,. 5分. 間 遠 沈 し て細 胞 成 分 沈 渣 抽 出 液 を得 た.. 凝 固 活 性, metachromatic. 分 離 した.そ れ ぞれの 多 白血 球 分 画 を400g,. Solution(HBSS)に. た 終 濃 度1μg/mlのCa‑iono‑. 析方法. ム で 採 血 し, 90分 間 室 温 に 静 置 後,白. らをCa2+,. 出 を 惹 起 した.ま. i)抗. 者 より. 濃 度1/25. 30分 間 加 温 して 放. 3)分. た好 塩基 球. Salt. 加 え, 37℃,. 5分 間 遠 沈 して 白 離 した.ま. の3.8%ク. な る よ うに添 加 して 受 身 感 作 後,終. Co., U. S.A.)社 製. 増 多 を伴 う慢 性 骨 髄 性 白 血 病(CML)患 静 脈 血20mlを1/7容. 衝 液 に再浮. 胞 成 分 沈 渣 は1mlのTyrode緩. の 方 法9)に 準 じて 行 っ た.す なわ ち,. 正 常 人 よ り血 液200mlをACD‑A液. を2mlのTyrode緩. レ ル ギ ー 患 者 か ら採 取 した 高IgE血. のAnti‑IgEを. (AB Kabi, Stockholm,. octylamine,. 遊 させ,ア. 身 感 作 を お こ な っ た.受. phenylalanyl-L-pipecolyl-L-arginyl-p-nitro anilide (S-2238), thrombin. 識 好 塩 基 球 及び 非標 識好 塩 基. 清 を終 濃 度1,000U/mlと. chondroitin-6-sulfat. 化 学 工 業)cetylpyridinlium. に記 した 方 法 と 同 様 に行 な っ た.. 球 約7.5×106個. lyase,. substance,. 出 反 応 実験. 本 論 文 第1編. chond. chondroitin. 2)放. metachromatic. す な わ ち[35S]標. Richmond,. 津 製 薬)heparinase,. lyase,. chondroitin-4-sulfate, ase(生. (Pharmacia. Sweden). 性 の測 定. た 正 常 人 よ り得 た 好 塩 基 球 はanti‑. 測 定 に 用 い た.. Uppsale,. の 実験 に使 用. 者 よ り得 た 好 塩 基 球 は[35S]. 性,. blue. 除 く目 的 で 細 胞. 標 識 と, anti‑thrombin活. histaminleの. G-25,. 間 培 養 し た.. 洗 浄 後 回 収 し,後. thrombin活. Chemicals,. ンキ ュベ ー ター. 37℃)で18時. porcine intestinal heparin, Hypaque-Ficoll SG 1.077) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Fine. 算 盤 にて. 細 胞 あ た り0.5‑1mCi/50ml. の[35S]sulfateを. 培 養 後, freeの[35S]sulfateを. (BSA),. type C (shark. 酸 球 同時 直接 算 定. 総 好 塩 基 球 数 を算 定 し た.. sulfate type A (whale cartilage),. chondroitin. Medium. られ た好 塩 基. 液10)で 染 色 後, Fuchs‑Rosenthal計. iono. albumin. 5A. (5u/mlのpenicillinGと100μg/mlのstrepto. (Ca-ionophore A23187), 6 acid, benzamidine hydro serum. て2回 洗 浄 後, MaCoy's. [35S]. anti. calcium. 40分. Co.,. (Anti-IgE)(Behringwerke. bovine. chondroitin. rabbit. West Germany). phore A23187 - aminohexanoic - chloride,. International England). 22℃,. salt. G potassium,. 治 製 菓)sodium. (Amersham. Buckinghamshire, human. Biological. NY) penicillin. streptomycin. sulfate. Hank's balanced Island. 重 層 し, 600g,. お よ びhistamineの 本 論 文 第1編 す な わ ち,抗. 測定. に 記 した 方 法 と 同 様 に行 な っ た. 凝 固 活 性 は, Lasserら. に 準 じ て 発 色 合 成 基 質S‑2238を thrombin. substance,. heparin様. の 方 法11) 用 い てanti‑. 活 性(anti‑thrombin活. 性 と 略 す)と. し て 測 定 した. metachromatic. substanceの. 測 定 は,. Parekhら. Jaquesら. の 方 法12)と. の 方 法13)を 改 変 し てAzure‑Aを. 用.
(3) ヒ ト好 塩 基 球‑肥 い て お こ な っ た.. 満 細 胞 系 か ら放 出 さ れ るproteoglycanの. histamineの. 測 定 は, Shore. の 方 法14)に 準 じて 行 な いTechnicon社. の 自動. 抗 凝 固 活 性 に 関 す る研 究. 含 む, pH7.0)を300μlのGAG分 parinase. 6U/ml,. 分 析 装 置 に て 測 定 し た15).. 0.6U/ml,. chondroitin. ii)ウ. chondroitin‑4‑sulfatase. ロ ン酸 の 定 量16). 75μlの 検 体 と450μlの 濃 硫 酸 を 混 和 し, 20. 6‑sulfatase. 水 で 冷 却 し た.次. い. で20μlの0.1%カ. ル バ ゾ ー ル を添 加 し て2時. 間. 液 を 加 え た.. 静 置 後, 535nmで. 吸 光 度 を 測 定 し た.. 分 間 沸 騰 水 中 で 加 熱 後,流. Rad蛋. 識proteoglycanの. Na. acetate,. aminohexanoic HClを. 0.01M. acid,. 含 む)(1M. EDTA,. 0.005M. 液2mlに. 0.1M. 加 え た.ま. れ. 40分 間 遠 沈 し て,そ. の. NaCl液)に. dex G‑25(column 1.5ml/hr)に. 除 くため に,溶. size 0.9×15cm,. flow. rate. て ゲ ル 濾 過 を お こ な い, [35S]標 識. め に, 1M. の[35S]標 NaClを. 衝 液(pH9.0)に X2(column. 4M. NaClに. 1.好. Tris‑HCl緩. size 1.0×10cm)に. 30分 間 遠 沈 して 合体 を0.1mlの. 得 た.こ. タノー ル. れ を 再 度0.4ml. の 放 射 活 性 を液 体 シ ン チ レ ー. 塩基球の分離. 4.6)×106個,. purityは6.2±1.7%(mean±se,. CML患. 者 で 絶 対 数(1.4±0.3)×107個,. purityは52.1±6.9%(mean±se,. n=3)で. Anti‑IgEお. よ びCa‑ionophore. A23187. 刺 激 に 対 す る好 塩 基 球 か らの 放 出 反 応(表1) よ びCa‑ionophore. A23187刺. 激 に よ り誘 導 さ れ る 好 塩 基 球 の 脱 顆 粒 反 応 に 際. て イ オ ン交換. して放 出 され るhistaminleやmetachromasiaを. ク ロ マ トグ ラ フ ィー を お こな った. [35S]標 識 検 体. 呈 す る物 質 と 一 緒 に,抗. は, 3M. が 放 出 さ れ る か 否 か に つ い て 検 討 し た.い. NaClを. (pH9.0)で. 含 む0.01M. 溶 出 さ れ,こ. そ れ ぞれ の[36]標. Tris‑HCl緩. 衝液. れ を 分 画 回 収 した.. 識 検 体 を‑50℃. の 活 性 も, Anti‑IgEお. に て保 存. し,以 下 の 実 験 に使 用 し た. 5). 解 酵 素 の影. 響 Sephadex. G‑25に. てゲ ル濾 過 され,分 画 回 収 さ. 識 検 体 を, 0.01M. 液(pH7.0)に. て24時 間 透 析 した. 300μlの[35S]標. 識 検 体 と, 200μlの0.05M NaCl,. 0.1%. bovine. よびCa‑ionophore. IgEの. Tris‑HCl緩. Tris‑HCl緩 serum. 衝. 衝 液. albuminを. A‑. して 示 した. Anti‑. 刺 激 により好 塩 基 球 か らは 上 清 中 にmeta‑ substanceは37.8±5.2%,. は7.8±0.8%が 2238で. ずれ. 激 後 の 上 清 中 の 活 性 と細 胞 成 分 沈 渣 抽. chromatic. れ た[35S]標. (0.1M. 23187刺. 凝 固 活 性 を有 す る物 質. 出液 中 の 活 性より遊 離 率(%)と. glycosaminoglycan(GAG)分. あ. っ た.. Anti‑IgEお. AG1‑. 果. 得 られ た 好 塩 基 球 の 絶 対 数 は 正 常 人 で(8.9±. 2.. 含 む0.01M. を 混 和 し,. 溶 解 し, 1.4mlの80%エ. 結. 識 分 画 を さらに精製 す るた. て 平 衡 さ れ たDowex. な. 識 検 体 と, 0.5mlの1%. のCPC‑GAG複. の 水 に溶 解 し,そ. n=11),. て 平 衡 され たSepha. 検 体 を 分 画 回 収 した. ま た,こ. 測定. 1時 間 加 温 後, 2,000g,. 沈 渣 を 得 た.こ. 抽 出 し た.. 取 込 ま れ て い な い[35S]sulfateを. Tris‑HCl衝. シ ョ ン カ ウ ン タ ー に て 測 定 した.. ら に,そ. 識proteoglycanを. 出 用 緩 衝 液(1M. 37℃,. 5分 間 遠 沈 し,上. 清 に 細 胞 成 分 沈 渣 抽 出 液 を 得 た.さ ぞ れ の 上 清 を10,000g,. た細. 6時 間 加 温 した.. chloride(CPC)と. を加 え て 精 製GAGを. 再 浮 遊 させ た 後,凍. 結 融 解 を6回 繰 り返 し, 500g,. 上 清 に[35S]標. 6‑. benzamidine. NaCl液)を. 胞 成 分 沈 渣 は,同. NaCl. chondroitin‑. 解 酵 素 処 理 後 の[35S]. わ ち, 0.1mlの[35S]標. 放 出 反 応 実 験 にて, [95]標 識 好 塩 基 球 をAnti‑. lyase 0.6U/ml,. の 方 法18)に 準 じて 行 なった.す. cetylpyridinium. 抽出. ABC lyase. 0.6U/ml,. 出 時 およびGAG分. Shimadaら. 白 測 定 法 を用 い て 測 定 した.. IgEで 刺 激 して得 られた 上 清 に, 2mlの1M (0.05M. AC. 標 識proteoglycanの 色 素 結 合 法17)を 利 用 す るBio‑. 4)[35S]標. chondroitin. 照 と して300μlの0.05M. 6)抽. iii)蛋 白 の 定 量 Bradfordの. 解 酵 素(he. 0.6U/ml)と37℃,. 尚,対. 597. 検 出 され た が,発. 測 定 したanti‑thrombin活. れ な か っ た.ま. たCa‑ionlophore. histamine 色 合 成 基 質S‑ 性 は検 出 さ A23187の. 刺. 激 に 対 して も 好 塩 基 球 か らはanti‑thrombin活 性 は 検 出 さ れ な か っ た. CML患. 者 よ り分 離 した.
(4) 598. 津. 表1. Anti‑IgEお. 田. 隆. よ びCa‑ionophore. A23187で. 球 よ り放 出 さ れ たanti‑thrombin活 histamineの 遊 離 率(%). supernatant percent. 性,. 刺 激 した 時 の ヒ ト好 塩 基. metachromatic. substance,. content ×100. release=. x±se:. 史. /supernatant+sediment. mean±standard. content. error. 11.2μg/mlは0.048U/ml,. porcine. intestinal. heparinの5.6μg/mlは0.184U/mlのheparin 濃 度 に相 当 す るmetachromasiaを 4.. Anti‑IgE刺. 呈 し た.. 激 に対 する好 塩 基 球 か らの[35S]. 標 識proteoglycanの. 放 出 反 応(図2). 標 識 さ れ た 好 塩 基 球 を細 胞 数 よ り3群(1× 107個,. 2×107個,. 感 作 後,終. 3×107個)に. 濃 度1/25量. 分 け て,受. のAnti‑IgEを. 身. 添 加 し,. 放 出 された[35S]標 識proteoglycan([35S]glycos aminoglycan: Heparin. 図1. concentration. 市 販 のheparin, 及 びtype. 2,. chondroitin. sulfate. BのAzure‑Aに. masiaの. type. 遊 離 率(%)に. A. よ るmetachro‑. 比較. 35S‑GAGと. は 変 化 が み ら れ なか っ た が,細. 胞 数 の 増 加 に比 例 して35S‑GAG量 した.ま. た,細. 性 は認 め. ら れ な か っ た. 3.. porcine sulfate. intestinal type. A,. BのAzure‑Aに. heparin,. chondroitin. sulfate. type. roitin. sulfate. masiaを. intestinal type. 測 定 し た.. chromasiaの. A,. に,. type. 標 準 曲 線 は,. porcine. chondroitin. type. intestinal. 示 す よ う. type. 識 好 塩 基 球 をAnti‑. ら れ た 上 清 に1M. た 細 胞 成 分 沈 渣 に は1M. え て 凍 結 融 解 した 後,こ. Sephadex A, B).図3,. Aの11.2μg/ml sulfate. の[35S]標. 刺 激 し,得. 図3,. G‑25に Aに. NaCl液. を を加. 抽 出 した.取. 込. ら分 離 す る た め に. て ゲ ル 濾 過 を 行 な った(図3 は 上 清 中 に放 出 さ れ た,ま. た. Bに は 細 胞 成 分 沈 渣 中 に 残 った[35S]標 識. 検 体 の 溶 出 パ ター ンを示 す.と Bの. NaCl液. れ ら を 超 遠 沈 し て,そ. ま れ て い な い[35S]sulfateか. 0.15U/ml,. 加量 の. 抽 出(図3,図4). の 上 清 に[35S]proteoglycanを. 用 い たmeta. 0.1U/ml,. sulfate. びchond. Bのmetachro. 希 釈 し て 作 製 し た.図1に. chondroitin. は0.022U/ml,. heparin及. Azure‑Aを. heparinを0.05U/ml, 0.2U/mlに. 約7.5×106個. 加 え,ま. 検 討(図1) 市 販 のporcine. 量 を 変 え る と,添. [35S]標 識proteoglycanの. IgEで. よ るmetachromasiaの. して,. 増 加 に と も な い 遊 離 率 は 一 定(約50%).な が らも 35S ‑GAG量 の 放 出 は 増 加 し た(図2 , B). 5.. chondroitin. の放 出 は増加. 胞 数 を 一 定(1×107個)に. 添 加 す るAnti‑IgEの 好 塩 基 球 に も 同 様 にanti‑thrombin活. 略 す)を 測 定 した(図. A).. も にblue. の ピ ー ク に一 致 す る高 い ピ‑ク. dextran. が 得 ら れ,こ. の.
(5) ヒ ト好 塩 基 球‑肥. 図2. Anti‑IgE刺. 満 細 胞 系 か ら放 出 され るproteoplycanの. 激 した 時 の ヒ ト好 塩 基 球 よ り放 出 さ れ た[35S]標. 抗 凝 固 活 性 に 関 す る研 究. 599. 識 検 体 中 のproteoglycanの. 遊 離 率(%) A:. 1×107,. B:. 1×107個. 2×107,. 3×107個. の 好 塩 基 球 に終 濃 度1/25量. の 好 塩 基 球 に 終 濃 度0,1/50,. 1/25量. のAnti‑IgEを. のAnti‑IgEを. 添 加 した時. 添 加 した時. ●‑●:. Anti‑IgE刺. 激 に よ り ヒ ト好 塩 基 球 よ り放 出 さ れ た35S‑GAG量(DPM). ○‑○:. Anti‑IgE刺. 激 に よ り ヒ ト好 塩 基 球 よ り放 出 さ れ た35S‑GAGの. 遊 離率. 図3. Anti‑IgEで. 刺 激 さ れ た[35S]. 標 識 好 塩 基 球 よ り上 清 中 に 放 出 さ れ た,お. よび 細胞 成 分 沈. 渣 中 に 残 存 す る[35S]標 識 検 体 のSephadex. G‑25に. よ る溶. 出パ ター ン A:. 上 清 中 に 放 出 さ れ た[35S] 標識検体. B: 細 胞 成 分 沈 渣 中 に 残 存 す る[35S]標 Column: Elution. buffer:. taining 0.01M. 1M. NaCl. 0.05M. Na. EDTA,. hexanoic benzamidine Flow. 識検体. 0.9×15cm. rate:. 0.1M. acid. and HCl. 1.5ml/hr. con. acetate, 6‑amino‑ 0.005M.
(6) 600. 津. 図4. Sephadex. G‑25に. よ り溶 出 さ れ た[35S]標. proteoglycan(Fraction AG1‑X2に. 田. 史. 識. 10‑16)のDowex. よ る イ オ ン交 換 クロ マ トグ ラ フ ィー. Column:. 隆. 図5. Sephadex. Equilibration containing Elution. buffer: 0.01M 1M. buffer:. NaCl. 3M. Flow. 1.5ml/hr. NaCl. Tris‑HCl. □:. buffer. 溶 出 さ れ た[35S]標. 対 す るGAG分. Anti‑IgE刺. Tris‑HCl. 識pro. 解 酵 素 の影 響. 激 後,受. 身 感作 好塩基 球 よ. り上 清 中 に 放 出 され た[35S]標. (pH9.0). 0.01M. containing rate:. G‑25で. teoglycanに. 1.0×10cm. 識proteo. glycan. buffer. 〓: Anti‑IgE刺. (pH9.0). 激 後,受. 身感作 好塩基球 の. 細 胞 成 分 沈 渣 中 に 残 存 した[35S]標 識pro teoglycan GAG分. ピ ー ク は 分 画 液 中 の ウ ロ ン酸 含 量 の ピ ー ク と も 一 致 す る た め 標 識 さ れ たproteoglycanと れ た.そ. 々No.. ル し て 保 存 し,以 Sephadex. 10‑16ま. 識proteoglycanと. 各GAG分. 解 酵 素 と反 応. させ た 後 に 残 存 する35S‑GAGをcetylpyridi ピー ク nium で の分 画 をプ ー. chlorideと. 結 合 さ せ,測. G‑25で. ゲ ル 濾 過 さ れ た[35S]標. さ ら に 精 製 す る た め に,上. 保 存 検 体 の 内,上. 清 中 に 放 出 さ れ た[35S]標. AG1‑X2に. 識. AC. 記. roitin‑6‑sulfataseと. 識 検. よ る イ オ ン交 換 クロ マ. ト グ ラ フ ィ ー を 行 な っ た(図4).混 浄 され,. 入 蛋 白 は1M. NaClで. 溶 出,洗. NaClで. 溶 出 さ れ る の でproteoglycanで. [35S]標. 識 検 体 は3M あ る こ. lyase,. 応 後,. chondroitin‑4‑sulfatase,. CPCを. そ れ ぞ れ 反 応 さ せ た.反. 添 加 し,. GAG分. 分 解 さ れ ず に 残 っ た[35S]標 CPCの. chond. 複 合 体 を 形 成 さ せ,こ. 解 酵 素 に よ って 識proteoglycanと れ を再 度 溶 解 して. 液 体 シ ン チ レ ー シ ョ ン カ ウ ン タ ー に て 測 定 した. 結 果 は,対. 照 に 比 較 して の 分 解 率(%)で. と が 確 認 さ れ た.. 上 清 及 び 細 胞 成 分 沈 渣 中 の[35S]標. 6.. glycanの. [35S]標. 識 好 塩 基 球proteoglycanのGAG. 分 解 酵 素 に 対 す る 影 響(図5) Anti‑IgEで れ た[35S]標 各 種GAG分. ぞ れ,. 刺 激 さ れ た 好 塩 基 球 よ り放 出 さ 識proteoglycanを. 同 定 す る 目 的 で,. 解 酵 素 に 対 す る 反 応 性 を 検 討 した.. す な わ ち,. Sephadex. G‑25で. ゲ ル濾 過 さ れ た. 上 清 及 び 細 胞 成 分 沈 渣 中 の[35S]標. ABC. 各GAG分. lyaseで. lyaseで で は80%, は2%,. rinase,. 10‑16分 chondroitin. 画)を24時 ABC. 表 した.. 識proteo. 解 酵素 による分 解率 は それ. heparinaseで. は0%,. は77%,. は76%,. 93%,. 95%,. 92%,. 1%,. chondroitin. chondroitin. AC. chondroitin‑4‑sulfatase. chondroitin‑6‑sulfataseで. 14%,で. あ っ た.. 識proteo 考. glycan(No.. 定 後 逆 算 して. 求 め た.. 後 の 実 験 に 使 用 し た.. proteoglycanを. 体 をDowex. 識. proteoglycanは,約2,000DPMの[35S]標. 考 えら. の 後 方 にfreeの[35S]sulfateの. が み ら れ た.各. 解 酵 素 に よ り変 性 分 解 し た[35S]標. 按. 間 透 析 後, hepa. lyase,. chondroitin. 正 常 人 の 末 梢 血 よ り分 離 さ れ た 好 塩 基 球 を 受.
(7) ヒ ト好 塩 基 球‑肥 身 感 作 の 後, ionophore. 満 細 胞 系 か ら放 出 され るproteoglycanの. Anti‑IgEで. A23187で. 刺 激 した 場 合 もCa. 受 身 感 作 の 後Anti‑IgEを. 刺 激 し た 場 合 も と も に抗. 凝 固 活 性 の 放 出 は 認 め ら れ な か つ た(表1).正 常 入 の 末 梢 血 よ り好 塩 基 球 を精 製 す る こ と は 困 難 で,今. 回 もpurityは6.2±1.7%と. し か し本 論 文 第1編 で の 検 討 で,細 thrombin活. 低 か っ た.. で 行 な っ た ヒ ト肺 肥 満 細 胞. 胞 数5×106/2ml個. でAnti. 性 及 びAnti‑FXa活. 胞 数(7.5×106個/2ml)で で,好. の1.5倍. の細. 検 出 され な か った の. 塩 基 球 か らの抗凝 固活 性 の放 出 は な かっ. た と 考 え ら れ る.し. か もAnti‑IgEで. した.図2,. Aに. 刺 激 した. 601. 添 加 し て放 出 を惹 起. 示 す よ うに遊 離 率(%)に. うに 細 胞 数 を一 定 に して,添 を 変 え る と,添. た.こ. 加 す るAnti‑IgE量. 加 量 の増 加 に と も ない放 出 され は 増 加 し,一. 定 の 遊 離 率 を示 し. れ は細 胞 内 で 産 生 され たproteoglycan. がAnti‑IgEの. 刺 激 で 一 定 の 遊 離 を し,し. そ れ は 刺 激(Anti‑IgE)の こ と が う か が わ れ た.こ proteoglycanを. の 放 出 さ れ た[35S]標 識. さ ら に 検 討 す る た め に,細. substance. 内 に 残 存 して い る[35S]標 識proteoglycanと. あ る い はhistamineの. ト肺 肥 満 細. 様 にSephadex. 胞 と 同 様 な 値 で 認 め られ て い る(表1).こ. の こ. とは 逆 に 抗 凝 固 活 性 を持 た な いmetachromasia. G‑25で. を呈 す る物 質 が 放 出 さ れ た こ と を示 して お り,こ. れ た[35S]標 識proteoglycanを AG1‑X2で. A, chondroitin. porcine. intestinal. sulfate. heparinの. 測 定 した(図1).. intestinal heparin. U/mlの. 標 準heparin濃. masiaを. 呈 し, chondroitin. びtype. Bは. sulfate. type. それ ぞれ. 標 準heparin濃. 度に. 相 当 す るmetachromasiaを. 呈 した.つ. ま り,. り高 濃 度 を必 要 とす るが, chondroitin. sulfate type A及. びtype. 示 され た.従 masiaを. 呈 す る こ とが. 来 よ りAzure‑Aに. 用 い て 細 胞 内heparinを. が な され て い た が13),例. よ るmetachro. え ば ラ ッ ト19)あ る い は. あ る よ うな 組 成 の. う.. を分 析 す るた め に, CML患. 標 識 した.ま. ず. [35S]標 識 さ れ た 好 塩 基 球 か ら,刺 激 によって[35S] 標 識proteoglycanが か を 調 べ る 目 的 で,細. 実 際 に放 出 さ れ る か ど う 胞 数 に よ り3群. にSephadex. G‑25で. 解酵. の 感 受 性 を検 討 した.図5に. 出 され たproteoglycanも. で, heparinaseに lyase,. 細 胞. 同 様 の結 果. は 分 解 され ず, chondroitin. chondroitin. AC. lyase,. chond. roitin‑4‑sulfataseに. よっ て 分 解 さ れ, chond. roitin‑6‑sulfataseに. よつて 僅 か に分 解 さ れ た.. type. A,. ABC. type. は 分 解 し な い.ま. す る がtype. lyaseはchondroitin. Bとtype. たchondroitin. sulfate. sulfate. Cを 分 解 するがheparin. type. AC. Aとtype. Bとheparinは. lyaseは Cを 分 解. 分 解 しない. chond. roitin‑4‑sulfataseとchondroitin‑6‑sulfatase sulfate type. Aとtype. Cを 分 解 す る がheparinとchondroitin. 者 の 末 梢 血 か ら精 製. した 好 塩 基 球 を[35S]sulfateで. NaClで. 出 され た あ るい は細胞 内 に残. は そ れ ぞ れchondroitin 塩 基 球 か ら放 出 され るproteoglycan. に 分 け,. 出 さ. 標 識 され て い るこ. 内 に 残 存 して い るproteoglycanも. chondroitin. 分 析 され た もの に 限 っ て 使 用 さ れ る べ きで あ ろ. 次 に,好. 示 す よ うに,放. chondroitin. 定 量 す る方法. ヒ ト肥 満 細 胞20)の よ う に,細 胞 内proteoglycan の ほ と ん どす べ て がheparinで. 素 と反 応 させ,そ. ABC. Bは ともにAzure‑Aと. 親 和 性 を持 ちmetachromasiaを. な うと[35S]標 識proteoglycanは3M. 存 した[35S]標 識proteoglycanをGAG分. A及. 0.048U/mlの. heparinよ. B).放. さ ら にDowex. 溶 出 され, proteoglycanが と が 確 認 さ れ た(図4).次. 5.6μg/mlは0.184. A,. イ オ ン交 換 ク ロ マ トグ ラ フ ィー を行. ゲ ル濾 過 後 の,放. 度 に相 当 するmetachro. そ の倍 量 の11.2μg/mlで. 0.022U/ml,. B及 び. 一 定量 に対 す る. Azure‑Aのmetachromasiaを porcine. type. 同. 者 ともウロ ン酸 の ピー ク に一 致 し, proteoglycan. れ を検 討 す る た め に.まず 市 販 のchondroitin fate type. 胞. ゲ ル 濾 過 した と ころ,両. で あ る こ とが 確 認 され た(図3,. sul. か も. 強 さ に依 存 して い る. 時 の 好 塩 基 球 か らのmetachromatic 遊 離 率 は,ヒ. は変. 化 が み ら れ な か っ た が細 胞 数 の 増 加 に比 例 して 35S ‑GAG量 が 増 加 した .ま た 図2, Bに 示 す よ. る35S‑GAG量. 性 の両 者 の. 抗 凝 固 活 性 が 認 め られ て お り,そ. 抗 凝 固 活 性 に 関 す る研 究. type. Bは 分 解 しな い.し. sulfate. た がって好塩 基 球 で 産. 生 あ るい は 放 出 され るproteoglycanは ん ど がchondroitin と が 示 さ れ た.こ が52.1±6.9%(n=3)で. sulfate. type. その ほ と Aで. あるこ. こ で 用 いた 好 塩 基 球 はpurity 他 は リンパ 球 で あっ た..
(8) 602. 津. リンパ 球 に は[35S]sulfateが が 示 さ れ て お り21),放. 田. 取込 まれないこと. 出 さ れ たproteoglycan. れ て い る た め,正. 者 は"blast. だ. 者 か ら採 取 さ. 常好 塩 基 球 との異 同 が問題 と. な る か も しれ な い.し. 状 態 で は な く,し. 成 の 阻 止 に は,内. たがっ. て 得 られ た好塩 基 球 は好塩 基性 顆 粒 と分葉 核 を. 関 与 が 報 告 さ れ24,25),事. て い る ら し い.こ で,内. とAT. が 含 ま れ て お り,そ る こ と を示 した.ま. sulfate. れ には抗 凝 固 活性 が存 在 す たGalliら23)はCML患. 者. 血 中 か ら除 去 し, thrombin. し て このthrombinの. はthrombinが. び 種 々 のcondroitin. の メ カ ニ ズ ム を研究 す る過 程. IIIの 反 応 を促 進 す る こ と が 示 さ れ て き. た26).そ. 結 合 し,ま. 内 に はheparin及. 内皮 細 胞 の 高親 和 性結 合部 位 と た 内 皮 細 胞 のAT. 凝 固 性proteoglycanで sulfateと. 急速 な阻害 に. III cofactorが. あ るhepa血. て 細 胞 表 面 のheparan thrombinの. sulfateが. sulfate. あ る こ と が 示 さ れ て い る18).ま. Aとtype. sulfate. をthrombinとAT. type. B, 16%のheparin. 告 した.し. 含 まれ る と 報. か しMetacalfeら9)は3人. 患 者 の 好 塩 基 球 内 のproteoglycanを 92%がchondroitin. sulfate type. type C,. A,. 2%が. て, Marcumら29)はthrombin.. 上 昇 し, heparin様. 二硫化二. る.ま. た 一 方 で はthrombinと. 応 で,他. トロ ンボ プ ラ ス チ ン 時 間 を用 い て 測 定 して お り,. な か で もthrombinと. こ の 方 法 で は 好 塩 基 球 内 に 存 在 す るproteo. factorで. glycanの. 抗 凝 固 活 性 を 論 ず る こ とは 不適 格 で. よ るprotein. あ る,著. 者 は極 めて 感度 の 高い発色 合成 基質 者由来. 出 さ れ たproteoglycan. Aか. heparin. ら成 り,ヒ proteoglycanと. sulfate. ト肺 肥 満 細 胞 で 分 析 さ れ た は 異 な っ て い る.組. 織 に 固 着 して い る 肥 満 細 胞 がIgEを. 介 する即 時. 型 過 敏 反 応 に お い て 放 出 す るheparinは,. そ の 内 皮 細 胞 表 面 のco. あ るthrombomodulinと Cの. fibrin. の 形 成 を阻 止 す る こ と に よ っ て 潜 在 的 に 重 要 な. Va,. Factor. VIIIaを. Factor. の よ うに血 管 内皮 細 胞 表 面. 血 栓 性 に働 い て い る こ と が 解 明. さ れ て き た が,血 質 で あ るAT. 漿 中 に も強 力 な凝 固 阻 止 物. IIIやheparin. ど が 存 在 して い る.故 るproteoglycanが と は,こ. Cは,. 不 活 性 化 す る こ とで凝 固. cofactor. IIな. に好塩 基 球 か ら放 出 され 抗 凝 固 活 性 を持 た な いこ. の細 胞 の環 境 か らは合 目的 で あ るの か. も し れ な い. そ れ で は こ の 好 塩 基 球 の 主 た る役 割 は 何 で あ. 役 割 を し て い る の か も し れ な い.そ. れ に 対 して. ろ うか. 流 血 中 を移 動 す る 好 塩 基 球 はIgEを. 介 する反応. の 遊 離 が 問 題 とな る.特. これ につ い てはheparin以. に お い て抗 凝 固 活 性 の 放 出 が 見 ら れ な か っ た.. tactic factor(NCF),. こ の こ とは そ れ ぞ れ の 細 胞 の 局 在 環 境 に お い て. factor(ECF),. 妥 当 な こ と な の か も し れ な い.な. 前. やleukotriene. よ り血 管 内 凝 固 特 に 血 管 壁 の 内 腔 表 面 の 血 栓 形. に よ っ て,反. ぜ な ら,以. の複 合 体 に. 活 性 化 が 知 られ て お り,こ の. 反 応 に よ り 活 性 化 さ れ たprotein. が 抗 凝 固 性,抗. ト好 塩 基 球 か ら放 出 さ れ. 内 皮細 胞 との反. の 生 物 学 的 影 響 が こ れ を修 飾 して い る.. 抑 制 的 に働 く30).こ. に も抗 凝 固 活 性 は検 出 さ れ な か っ た.. type. のよ. 物 質 は 抗 凝 固 性 に 対 して 重 要 な 役 割 を演 じ て い. こ れ らの 研 究 で は 抗 凝 固 活 性 は 感 度 の 低 い 部 分. 主 にchondroitin. 物 質 が こ. うに 血 管 内 皮 細 胞 表 面 上 に 存 在 す るheparin様. 凝 固 活 性 は認 め ら れ な い と し た.. 以 上 の 結 果 よ り,ヒ. III複 合 体. の 活 性 に 対 し て 影 響 を も つ と し て い る.こ. sulfate. るproteoglycanは. AT. 分 析 し,. 単 糖 類 で,抗. の 好 塩 基 球 内 に も,放. た ラ ッ トの 後 足. IIIで 潅 流 す る こ と に よ っ. のCML. 6%が. し. 一部 で は. 形 成 が10‑20倍. chondroitin. を用 い る精 製 系 で 測 定 し た が, CML患. やheparan. 内皮 細 胞 へ の 高親 和 性 結 合部 位 で. の 好 塩 基 球 内 には75%のchondroitin. sulfateが. 抗. 共 に機 能 す る必 要 が あ る26〜28).そ. type. C, 9%のchondroitin. れは. 皮 細 胞 表 面 は 最 も重 要 な 活 性 化 凝 固 因 子. も つ 成 熟 型 の もの で 未 熟 型 の も の は 認 め ら れ ず,. 者 か ら得 た好 塩 基 球. 実,こ. 血 液 の 流 動 性 を維 持 す る た め に 重 要 な働 き を し. 光 顕 的 に は 正 常 好 塩 基 球 と 区 別 で き な か っ た. Olssonら22)はCML患. 皮 細 胞 膜 の 表 面 のproteo. で あ るthrombinを. か し,採 血 さ れ たCML患. crisis"の. 史. glycanの. は 好 塩 基 球 由 来 で あ る こ と に 問 題 は な い.た [35S]標 識 した 好 塩 基 球 はCML患. 隆. 外 のmediator. にneutrophil eosinophil. platelet‑activating B4(LTB4)な. chemo. chemotactic factor(PAF). ど を遊 離 す る こと. 応 局 所 へ 好 中 球,好. 酸 球 な ど を遊.
(9) ヒ ト好 塩 基 球‑肥 走,集. 合 さ せ,局. 担 うleukotriene に よ り,遅. 満 細 胞 系 か ら放 出 され るproteoglycanの. 所 で の 反 応 で 中 心 的 な役 割 を. 出 され る,ま. C4(LTC4)を. 検 体 をSephadex. 遊 離 させ るこ と. か で も 好 塩 基 球 は, IgEレ. 603. た 細 胞 内 に残 存 して い る[35S]標 識 G‑25で. ゲ ル濾 過 し た と こ ろ. ウ ロ ン酸 の ピー ク に一 致 す る[35S]標 識proteo. 発 型 ア レル ギー 反応 に関 与 して い る. 可 能 性 が 強 い.な. 抗 凝 固 活 性 に 関 す る研 究. セ. glycanが. 抽 出 さ れ た.こ. のSephadex. G‑25で. プ タ ー を介 して 惹 起 さ れ る 即 時 型 反 応 以 外 に,. ゲ ル濾 過 された 放 出[35S]標 識proteoglycanは. 特 にIgGレ. Dowex. セ プ タ ー に 関 連 して.発現 す る遅 発 型. AG1‑X2の. イ オ ン交 換 クロマ トグ ラフ. 反 応 を繰 り返 し惹 起 す る 役 割 を有 して い る よ う. ィー に よ り3M. に思 わ れ る.好. で あ る こ と が 確 認 され た.放. 塩 基 球 の ア レルギ ー 反応 修 復 へ. の 関 与 に つ い て は な お 不 明 な 点 が 多 く,今. 後の. 残 存 し て い る[35S]標. 活 容出 されproteoglycan. 結. と,分 語 %, 即 時型 ア レ ルギ ー反 応 にお いて 好塩 基 球 か ら 放 出 され るproteoglycanの を解 明 す る 目 的 で,正. chondroitin. ABC. AC. 6‑sulfataseで2%,. り採 取 し た ヒ ト好 塩 基 球 を用 い て 検 討 し,以 下. 14%で. 1. lyaseで77%,. lyaseで76%,. 92%,. 93%,. roitin‑4‑sulfataseで80%,. 者 よ. 種々. 解 酵 素 と反 応 さ せ る. 解 率 は そ れ ぞ れ, heparinaseで0%,. chondroitin. 抗 凝 固 活性 の有 無. 常 人 お よ びCML患. 出 また は細 胞 内 に. 識proteoglycanを. のglycosaminoglycan分. 検 討 に ま ち た い.. 95%,. Chond. chondroitin‑. あ っ た.. 以 上 の 結 果 よ り ヒ ト好 塩 基 球 をAnti‑IgEで. の 結 果 を得 た. 1)正. NaClで. 刺 激 した 時 に 放 出 さ れ るproteoglycanは. 常 人 血 液200mlを. 患 者 血 液20mlを. 遠 沈 して,ま. たCML. ほ と ん ど がchondroitin. 静 置 して 白 血 球 濃 厚 分 画 を得,. そ れ ぞ れ をHypaque‑Ficollを 法 に て 精 製 し,ヒ. その. type. Aで. り,抗 凝 固 活 性 は 検 出 さ れ な か っ た.ヒ. 用 い た比 重遠 沈. ト好 塩 基 球 を 得 た.得. sulfate. 満 細 胞 か ら放 出 され るheparin. られ た. あ. ト肺 肥. proteoglycanが. その抗 凝 固 活性 に よ って即 時 型 過 敏反 応 に おけ るhistamineを. 好 塩 基 球 の 絶 対 数 は 正 常 人 で(8.9±4.6)×106. 主 とす る組 織 内 炎症 の遷 延 防 止. 個, purityは6.2±1.7%(mean±se,. n=11),. に か か わ っ て い る と 推 測 さ れ る の に対 して,好. CML患. purity. 塩 基 球 の この性 質 は それ ぞ れの細 胞 環 境 に おけ. 者 で 絶 対 数(1.4±0.3)×107個,. は52.1±6.9%(mean±se, 2)正. n=11)で. あ っ た.. あ るい はCa‑ionophore. A23187で. Anti‑IgEで stanceお. 刺 激 した 時, metachromatic よびhistamineの. 37.8±5‑2%, CML患. heparin以. 刺 激 した 時,. 抗 凝 固 活 性 の 放 出 は 検 出 さ れ な か っ た.し. 3). る合 目 的 性 を示 唆 して い る と 考 え ら れ,む. 常 人 よ り分 離 され た 好 塩 基 球 をAnti‑IgE. LTB4な. かし. 始 御 懇 篤 な る御 指 導 を賜 った 林. 刺 激 し た 時,放. Kitamura. Kitamura marrow. 4.. Hatanaka. Berlin, Heiderberg,. Y, Shimada. bone marrow 3.. 久 智 講 師 に深 謝 い. た し ます.. 献. M R: The human blood basophil, morphology, origin, kinetics; Function and Pathology.. Springer-Verlag, 2.. 応 に 関 与 して い る 可 能 性 が あ る.. 稿 を終 え る に あた り,御 指 導,御 校 閲 を賜 っ た恩. 者 よ り分 離 さ れ た 好 塩 基 球 を[33S]. Parwaresch. しろ PAF,. 師 木村 郁 郎 教授 に深 甚 の 謝 意 を表 す る と と も に,終. 文 1.. ECF,. sub. あ っ た.. sulfateで 標 識 し, Anti‑IgEで. ちNCF,. ど の 遊 離 に よ る遅 発 型 反 応 を 主 と す る. ア レ ル ギ‑反. 遊 離率 は それぞれ. 7.8±0.8%で. 外 のmediator即. M, Hatanaka. cells in irradiated. Y, Go S and Hatanaka transplantation. K, Kitamura. New York (1976) pp. 1-120. K and Miyano. mice.. Nature. K: Decrease. Y: Development. of mast cells from grafted. (1977) 268, 442-443. of cells in W/Wvmice. and their. increase. by bone. Blood (1978) 52, 447-452. Y and Nishimune. Y: Local development. of mast cells from bone marrow.
(10) 604. 津. 田. 隆. 史. derived precursors in the skin of mice. Blood (1979)53, 142-147. 5. Kitamura Y, Matsuda H and Hatanaka K: Clonal nature of mast-cell clusters formed in W/Wvmice after bone marrow transplantation.. Nature (1979)281, 154-155.. 6. Kobayashi T, Nakano T Nakahata T Asai H, Yagi Y, Tsuji K, Komiyama A, Akabane T Kojima S and Kitamura Y: Formation of mast cell colonies in methylcellulose by mouse peritoneal cells and differentiation of these cloned cells in both the skin and the gastric mucosa of W/Wvmice; Evidence that a common precursur can give rise to both "connective tissue-type". and "mucosal". mast cell. J Immunol (1986)136, 1378-1384. 7. Dvorak A, Galli S, Schulman E, Lichtenstein L and Dvorak H: Basophil and mast cell degranula tion. Ultrastructural. analysis of mechanism of mediator release. Fed Proc (1983)42, 2510-2515.. 8. Fox C C, Kagey-Sobotka A, Schleimer R P, Peters S P,MacGlashan D W Jr and Lichtenstein L M: Mediator release from human basophils and mast cells from lung and intestinal mucosa.. Int. Archs Allergy Appl Immun (1985)77, 130-136. 9. Metcalfe D D, Bland C E and Wasserman S I: Biochemical and functional characterization of pro teoglycans isolated from basophils of patients with chronic myelogenous leukemia. J Immunol (1984)132, 1943-1950. 10. 木 村 郁郎,谷. 崎 勝 朗:好. 塩 基 球 お よ び好 酸 球 の適 切 な同 時 直 接 算 定 法 の 考 案 と その 臨 床 的 評価.医. 学の あ. ゆ み(1969) 69, 25‑28.. 11. Lasser. E C, Lang J H, Curd J G, Cochrane. Revak S D: The plasma. contact. system. C G, Lyon S G, Howard. in atopic. asthma.. M M, Hamblin. A E and. J Allergy Clin Immunol (1983) 72, 83. - 88. 12. Jaques. L B and Wollin A: A modified. Canad J Pharmacol. method. for the colorimetric. determination. of heparin.. and hexosamine. in isolated. (1967) 45, 787-794.. 13. Parekh, A C and Glick D: Studies mast cells; Determination,. in histochemistry.. intracellular. Lxv. heparin. distribution,. and effects of biological. state.. J Biol Chem. assay. of histamine. (1962) 237, 280-286. 14. Shore P A, Burkhalter in tissues. 15. Siraganian Methods. A and Cohn V H Jr: A method. J Pharmacol. R P: Refinements (1975) 7,. for the fluorometric. Exp Ther (1959) 127, 182-186. in the automated. fluorometric. histamine analysis. system.. J Immunol. 283-290.. 16. Bitter T and Muir H M: A modified uronic acid carbazole reaction.. Anal Biochem (1962) 4,. 330-. 334. 17. Bradford protein. M M: A rapid utilizing. and sensitive. the principle. method. of protein-dye. for the quantitation. binding.. 18. Shimada K and Ozawa T: Evidence that cell surface thrombin. Biophys. A: The isolation. of heparin. and characterization. Cantor. of. Anal Biochem (1976) 72, 248-254. J Clin Invest (1985) 75, 1308-1316.. from mast cells of the normal. rat.. Biochem. Acta (1959) 31, 278-280.. 20. Metcalfe D D, Lewis R A, Silbert J E, Rosenberg. 21. Dovrak. quantities. heparin sulfate is involved in the high affinity. binding to cultured porcine aortic endothelial cells.. 19. Schiller S and Dorfman. of microgram. of heparin. A M, Galli S J, Marcum H, Rosenberg. cloned suppressor. from human. lung.. J Clin Invest. J A, Nabel G, Simonian. R D and Dvorak. T cells express. R D, Wasserman. S I and Austen. (1979) 64, 1537-1543.. H D, Goldin J, Monahan. H F: Cloned mouse cells with natural. ultrastructual. and biochemical. K F: Isolation. features. R A, Pyne K,. killer function not shared. and. by cloned.
(11) ヒ ト好 塩 基 球‑肥. inducer 22.. T cells.. Olsson. 23.. Galli. S J and. tivity;. in. Kirk. Med. B, Fransson. leukocytes.. Plenum 24.. J Exp. I, Berg. basophils. 満 細 胞 系 か ら放 出 され るproteoglycanの. L A Scand. Dvorak. Cellular,. 157,. and. Norden. H F: Basophils. Book. Co.,. Anticoagulant. New. mast. Clinical York. activity. A:. The. (1970). and. and. 605. 843-861.. J Haematol. Molecular,. Medical J E:. (1983). 抗 凝 固 活 性 に 関 す る研 究. 7, cells;. (1979). pp. of the. Structure,. Aspects. of human. identity. metachromatic. substance. of. 440-444. function,. of Allergic. and. Disorders.. role. in hypersensi. Gupta. and. Good. eds,. 1-53.. arterial. mucopolysaccharides.. Nature. (1959). 184,. Clin. Med. 369. - 370. 25.. Gore 56,. 26.. I and. Lollar. P. binding. and. on. Invest. Shifman. (1983). Shifman. M. Marcum plex. 30.. 66,. 32,. of aortic. mucopolysaccharides.. J Lab. (1960). (1984). Esmon. C T:. in. of. Possible. thrombin role. in. from the. circulation. inactivation. in of. rabbits. by. thrombin. by. high-affinity. antithrombin. III.. S V:. In. vivo. metabolism. of reversibly. inhibited ƒ¿-thrombin.. Biochem. 739-741. S V:. Chem. Mckenney. 74,. Clearance. 1222-1230.. Pizzo. J Biol. formation. G:. Pizzo. A and. J A,. Invest. - 1158.. W. (1980). complexes. 29.. activity. endothelium.. M A and. Pharmacol 28.. B J: Functional. Owen. sites. J Clin 27.. Larkey. 839-846.. rat. The. (1982) J B and. hindquarters. 257,. in vivo. metabolism. of. antithrombin. III. and. antithrombin. III. 3243-3248.. Rosenberg via. R D: heparinlike. Acceleration molecules. of. thrombin-antithrombin. bound. to. the. com. endothelium.. J Clin. 341-350.. Protein-C;. Biochemistry,. phisiology,. and. clinical. implications.. Blood. (1983). 62,. 1155.
(12) 606. 津. Anticoagulant. 田. human. activity. of. basophil-mast or. Anticoagulant. system. of. isolated. human. Medicine,. The. anticoagulant were. blood. basophilia. Ficoll. gradient. purity a. of. or. high. with. and. human. from. A,. as. from. also. and. well. filtered. on to. proteoglycans lung. made. up had. mast. cells.. of no. normal. fact. and. particularly. to. the. A.. No. were. was. lyase,. [35S]. detected. different. from to. the. in. pro sub. labeled. by. IgE. and. chondroitin-6 AC released. identified. the location. [35S]. Released. chondroitin. proteoglycans was. IgE. metachro. chromogenic. heparinase. heparin. relevant. were. a. with. anti-human. anti-human. ABC. that. obtained. stained. using. which rabbit. with. passive-sensi. rabbit. activity. Hypaque-. obtained. were. which. peripheral. by. were. which. method. resistant. chondroitin. type. activity be. were. basophils. CML, with. indicate. sulfate. basophils. with. evaluated.. high. enriched. donors,. amidolytic with. was. and. anticoagulant. the. were by. basophils. challenged. challenged G-25. School,. abnormally. proteoglycans. No. findings. may. and. patients. Sephadex. anticoagulant This. (1.4•}0.3)•~107. by. degaradation. chondroitin. (CML). from. histamine.. and. These. leukemia. released. basophils. human with. (8.9•}4.6)•~106. patient. from. from. patients. CML. A23187,. basophils. susceptible. donors. allergic. as. human. chondroitin-4-sulfatase. were. an. passive-sensitized. proteoglycans. and. with. Medical. Kimura). released. basophils. ionophore. Isolated. were. basophils phil. Azure. Ikuro. myelogenous. patients. from. 700. donors. normal. Isolated serum. released. - sulfatase,. from. calcium. S-2238.. sulfate, [35S]. IgE by. teoglycans strate. and. 52.1•}6.9%.. stimulated. matically. From. released. University. proteoglycans. chronic. with. TSUDA. Prof.. normal. sedimentation.. of. with. of. from. accompanying. 6.2•}1.7%,. purity. tized. activity. obtained. challenge. basophils. Okayama. (Director:. from. A23187. Okayama,. Basophils. by. proteoglycans. Takashi of. released. Ca-ionophore. activity. Department. 史. proteoglycans. cell. anti-IgE II.. 隆. The. lyase from baso. proteoglycans of. each. of cell..
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