小児臨床検体由来インフルエンザ菌非 b 型莢膜株に関する検討
1）千葉県こども病院感染症科，2）同 検査科，3）千葉大学大学院医学研究院小児病態学，
4）千葉大学医学部附属病院感染症管理治療部，5）国立国際医療研究センター国府台病院内科，
6）千葉県がんセンター臨床検査部
朽名 悟
１）５）星野 直
１）深沢 千絵
１）徳武 翔子
１）奥井秀由起
１）澤田 恭子
２）６）佐藤 洋子
２）高橋 喜子
３）石和田稔彦
４）（平成 26 年 7 月 17 日受付）
（平成 26 年 9 月 17 日受理）
Key words : Haemophilus influenzae, non-serotype b encapsulatedHaemophilus influenzae, children
要 旨
2000〜2012 年の 13 年間に小児臨床検体より分離されたHaemophilus influenzae非 b 型莢膜株（non-b 莢膜 株）に関する検討を行った．13 年間に分離されたH. influenzaeは全 3,532 株で，その中で non-b 莢膜株は 57 株（1.6％），b 型莢膜株（Hib）は 152 株（4.3％），無莢膜株（NTHi）は 3,323 株（94.1％）であった．
スライド凝集法で確認した non-b 莢膜株の血清型は e 型（Hie）が 29 株，f 型（Hif）が 28 株であり，他 の血清型は検出されなかった．また，PCR 法の結果はスライド凝集法の結果と全株で一致した．これらの non-b 莢膜株のうち 52 株（91.2％）を気道由来株が占め，無菌部位由来株は血液由来の Hif 1 株（1.8％）の みであった．薬剤耐性については，βラクタマーゼ非産生 ampicillin 感受性株が 47 株（82.4％）と多く，β ラクタマーゼ産生株は 5 株（8.8％）であり，βラクタマーゼ非産生 ampicillin 耐性株（BLNAR）は 1 株（1.8％）
であった．
このように，non-b 莢膜株の検出頻度は Hib よりも低く，検体由来の内訳は気道検体が多い NTHi と同様 の傾向を示した．また，薬剤耐性についてはβラクタマーゼ産生株の頻度が高い Hib や，BLNAR の頻度が 高い NTHi の両者とも異なる特徴を有していた．
Hib ワクチンの普及が進んだ諸外国では，NTHi の他に Hie や Hif による侵襲性感染症の増加が報告され ている．今後は本邦でも Hib 以外の血清型による侵襲性H. influenzae感染症が中心となることが予想され るため，原因菌の血清型検査は必須といえる．同時に，市中における non-b 莢膜株の浸淫状況の継続的なモ ニタリングも重要と考えられる．
〔感染症誌 89：237〜243，2015〕
序 文
小児に様々な感染症を生じるHaemophilus influen- zaeは，莢膜の有無により莢 膜 株 と 無 莢 膜 株（non- typeable H. influenzae: NTHi）に分類される．莢膜株 は抗原性の違いから a から f まで 6 種類の血清型に分 類され，主に侵襲性感染症の原因となる．特に b 型
（H. influenzae type b : Hib）の侵襲性が強く，結合型 Hib ワクチンが導入される以前は侵襲性感染症のほと んどを Hib が占めたのは周知の通りである１）．
本邦では，2008 年 12 月に Hib ワクチンが導入され たが，2011 年の公費助成の開始により接種率が向上 し，さらに 2013 年 4 月に定期接種化された．その結 果，2011 年以降侵襲性H. influenzae感染症が激減し ており，一方で NTHi による侵襲性感染症が微増し ている２）．現状では，non-b 莢膜株による侵襲性感染 症の増加は確認されていないものの，Hib ワクチンの 普及が進んだ諸外国では，侵襲性H. influenzae感染症 の大幅な減少と共に原因菌の血清型分布に変化が生じ ており，NTHi や非 b 型莢膜株（non-b 莢膜株）によ る発症が主体となっている３）４）．本邦においても non-b 莢膜株による侵襲性感染症の増加が予想されるため，
原 著
別刷請求先：（〒272―8516）千葉県市川市国府台 1―7―1 国立国際医療研究センター国府台病院内科
朽名 悟
Fig. 1. Flow chart of detection of serotype for clinical isolates of Haemophilus influenzae
non-b: non-serotype b encapsulated Haemophilus in- fluenzae, Hib: H. influenzae type b, NTHi: non-type- able H. influenzae.
小児における non-b 莢膜株の分離頻度や血清型，抗菌 薬感受性の傾向を確認しておくことは重要と思われ る．そこで，小児臨床検体由来H. influenzae non-b 莢 膜株に関する検討を行った．
対象と方法 1．対象
千葉県こども病院において，2000 年〜2012 年の 13 年間に入院，外来の小児患者から分離され，抗菌薬感 受性を測定した臨床検体由来のH. influenzaeを対象と した．H. influenzae莢膜株は，チョコレート寒天培地 上に発育するコロニーがムコイド状を呈したものを莢 膜株として分類し，-80℃ に凍結保存してきた．莢膜 株のうちスライド凝集法により b 型への凝集を認め なかったものを non-b 莢膜株として扱った．
2．方法
13 年間にH. influenzaeが分離された患者背景，抗 菌薬感受性検査結果について診療録から後方視的に検 討した．今回，新たに 13 年間に分離された non-b 莢 膜株の血清型判定を実施した．また，non-b 莢膜株の 一部のデータに関しては，同時期に検出された Hib，
NTHi のデータとともに示した．
non-b 莢膜株の血清型判定は，スライド凝集法なら びに PCR 法により実施した．スライド凝集法による 判定は，インフルエンザ菌莢膜型別用免疫血清「生研」
（デンカ生研）を用い，目視にて凝集の有無を確認し た．PCR 法はサーマルサイクラー（GeneAmp PCR system 9700，Applied Biosystems 社製）を用い，Falla
らの報告５）に基づいて，菌株から DNA を抽出し，す べての莢膜株に共通しているbexA遺伝子を標的とし た primer と，莢膜血清型に特異的な primer により，
莢膜株であることを確認し，さらに莢膜型判定を行っ た．
対象菌株は，日本化学療法学会標準法に準拠した微 量 液 体 希 釈 法６）に よ り 測 定 し た ampicillin（ABPC）
および amoxicillin!clavulanic acid（CVA!AMPC）の MIC と，セフィナーゼディスク（Becton Dickinson）
を用い，ニトロセフィン法により確認したβ-lactamase 産 生 能 に よ り，β-lactamase-non-producting ABPC- sensitive strain（BLNAS : ABPC-MIC≦1μg!mL），β- lactamase-non-producting ABPC-intermediately re- sistant strain（BLNAI : ABPC-MIC＝2μg!mL），β- lactamase-non-producting ABPC-resistant strain
（ BLNAR : ABPC-MIC ≧ 4μg!mL ），β-lactamase- producting ABPC-resistant strain（BLPAR : CVA!
AMPC-MIC≦4μg!mL），β-lactamase-producting CVA
!AMPC-resistant strain（BLPACR : CVA!AMPC- MIC≧8μg!mL）に分類した７）．
成 績 1．菌株数（Fig. 1）
対象期間内に分離されたH. influenzaeは合計 3,532 株であった．形態学的に莢膜株と判定されたのは 209 株（5.9％）であり，NTHi は 3,323 株（94.1％）であっ た．莢膜株のうち，スライド凝集法で b 型に対する 凝集を認め Hib と判定されたのは 152 株（4.3％）で あり，凝集を認めず non-b 莢膜株と判定されたのは 57 株（1.6％）であった．
2．血清型
57 株の non-b 莢膜株は，スライド凝集法により 29 株が e 型（Hie），28 株が f 型（Hif）と判定され，a，c，
d 型は検出されなかった．また，PCR 法では，スラ イド凝集法で Hie と判定された 29 株はいずれも e 型，
Hif と判定された 28 株はいずれも f 型と判定された．
このように，全ての non-b 莢膜株がいずれかの血清型 に分類され，スライド凝集法と PCR 法による判定結 果はすべて一致した．
3．分離背景
1）検体別分離菌株数（Table）
Tableに各部位からの non-b 莢膜株の検出数（割合）
を示した．また，比較のため，Hib，NTHi の検出数
（割 合）も 併 記 し た．non-b 莢 膜 株 は，喀 痰 の 33 株
（57.9％）が最多で，以下咽頭・上咽頭 12 株（21.1％），
耳漏 7 株（12.3％）と続き，無菌部位からの検出は血 液由来の Hif 1 株（1.8％）のみであった．Hib は喀痰 の 67 株（44.1％）が 最 多 で あ っ た が，髄 液 29 株
（19.1％），血液 11 株（7.2％），関節液 3 株（2.0％）と
Fig. 2. Age distribution of 209 isolates of encapsulated H. influenzae non-b: non-serotype b encapsulated Haemophilus influenzae, Hib: H. influenzae type b.
The hatched lines show the strains isolated from a sterilized site.
Table Source of clinical isolates of Haemophilus influenzae
non-b Hib NTHi
CSF 0 29 (19.1%) 1 (0.03%)
blood 1 (1.8%) 11 (7.2%) 0
synovial fluid 0 3 (2.0%) 0
Sputum 33 (57.9%) 67 (44.1%) 2,139 (64.4%)
pharynx/nasopharynx 12 (21.1%) 30 (19.7%) 844 (25.4%)
otorrhea 7 (12.3%) 8 (5.3%) 210 (6.3%)
eye discharge 2 (3.5%) 2 (1.3%) 86 (2.6%)
urine 0 2 (1.3%) 18 (0.5%)
pus 2 (3.5%) 0 15 (0.5%)
others 0 0 10 (0.3%)
Total 57 152 3,323
non-b: non-serotype b encapsulated Haemophilus influenzae, Hib: H. influen- zae type b, NTHi: non-typeable H. influenzae.
無菌部位からの検出を 43 株（28.3％）と多く認めた．
NTHi は，やはり喀痰が 2,139 株（64.4％）と最多で，
咽頭・上咽頭 844 株（25.4％），耳漏 210 株（6.3％）と 続き，無菌部位からの検出は髄液由来の 1 株（0.03％）
のみであった．non-b 莢膜株の部位別分離頻度は，同 じ莢膜株である Hib よりも NTHi と類似した傾向を 示した．
2）年齢別頻度分布（Fig. 2）
Fig. 2に non-b 莢膜株と Hib の年齢別検出数を示し た．なおこのうち無菌部位由来株の数を斜線で示した．
non-b 莢膜株は，各年齢から数株ずつ分離されており，
年齢分布に偏りを認めなかった．一方，Hib は 1 歳代 にピークを持つ分布を呈しており，2 歳未満の児から 68 株（44.7％）検出されていた．唯一の無菌部位由来 non-b 莢膜株である Hif は 3 歳児より分 離 さ れ て い た．Hib では，無菌部位由来株は乳児や 1 歳代での頻
度が高く，2 歳未満から分離された 68 株中ほぼ半数 の 33 株を占めていた．
3）検出菌株数の年次推移（Fig. 3）
Fig. 3に年次毎の莢膜株の検出数を，non-b 莢膜株 と Hib を比較して示した．non-b 莢膜株は，2009 年 を除き例年 1 桁株分離されており，明らかな増減は見 られなかった．Hib は，2004 年以降に分離株数が増 加し，2009 年には 24 株と最も多く検出されていたが，
Hib ワクチンの導入，公費助成の開始に並行し，2010 年以降減少傾向を認めた．また，無菌株由来の non-b 莢膜株は 2004 年に 1 株分離されたのみであった．一 方，Hib は 2000，2002，2012 年を除いたいずれの年 も無菌部位から分離されていた．
4．ABPC および CVA!AMPC 耐性度別の分離頻度
（Fig. 4）
non-b 莢膜株では，BLNAS は 47 株（82.4％），BLNAI
Fig. 3. Annua1 change of the number of encapsulated H. in.fluenzae non-b: non-serotype b encapsulated Haemophilus influenzae, Hib: H. influenzae type b.
The hatched lines show the strains isolated from a sterilized site.
Fig. 4. Distribution of Haemophilus influenzae classified according to ampicillin or clavulanic acid/amoxicillin resistance between 2000 and 2012
non-b: non-serotype b encapsulated Haemophilus influenzae, Hib: H. influenzae type b, NTHi: non-typeable H. influenzae.
BLNAS: β-lactamase-non-producing ampicillin-sensitive strain, BLNAI: β-lactamase- non-producing ampicillin-intermediately resistant strain, BLNAR: β-lactamase-non- producing ampicillin-resistant strain, BLPAR: β-lactamase-producing ampicillin-re- sistant strain, BLPACR: β-lactamase-producing amoxicillin-clavulanic acid-resistant strain.
は 4 株（7％），BLNAR は 1 株（1.8％），BLPAR は 5 株（8.8％）であり，BLPACR は認められなかった．Hib では ， BLNAS は 88 株 （ 57.9％ ）， BLNAI は 13 株
（8.6％），BLNAR は 18 株（11.8％），BLPAR は 29 株
（19.1％），BLPACR は 4 株（2.6％）であった．NTHi で は，BLNAS は 1,618 株（48.7％），BLNAI は 365 株（11％），BLNAR は 1,067 株（32.1％），BLPAR は 170 株（5.1％），BLPACR は 103 株（3.1％）であった．
すなわち，non-b 莢膜株はβラクタマーゼ産生株の頻
度が高い Hib や，BLNAR の頻度が高い NTHi のいず れとも異なる分布を示した．
考 察
non-b 莢膜株の分離状況として，1990 年台前半に Hib ワクチンが導入されたヨーロッパの国々から咽 頭・上咽頭保菌株に関するデータが報告されている．
検出されたH. influenzaeのうち non-b 莢膜株の頻度 は，1999 年のフランスの保育施設では 2.5％（688 株 中 17 株）８），1996 年のスペインの学童では 3.8％（316
株中 12 株）９）であった．我々の検討は，検体の大部分 が Hib ワクチンの公費助成の開始前，すなわち Hib ワクチンの接種率が上昇する前に採取されたものであ るが，non-b 莢膜株の頻度は 1.6％（3,532 株中 57 株）
であった．咽頭・上咽頭由来株に限定すると 1.4％（886 株中 12 株）であり，上記 2 検討に比べ低率であった が，今回の対象が入院，外来通院児の臨床検体由来株 であったのに対し，上記 2 検討の対象は健康児の保菌 株であったことが検出頻度の差異となっている可能性 がある．
検出年齢は，Hib が年少児を中心に分離されていた のに対し，non-b 莢膜株は 3,532 株の中から検出され た 57 株を調べたにすぎないが，年齢による偏りなく 検出されており，その点で Hib とは異なっていた．ま た，国内の報告としては，同じ千葉県で Hib ワクチ ンの公費助成導入前後に実施された健常保育園児の保 菌状況に関する検討があるが，42 株のH. influenzae のうち non-b 莢膜株は 8 株（19％）検出されており，
Hib は検出されなかった１０）．本検討においても，Hib ワクチンの普及に伴い Hib の検出数は 2009 年をピー クに減少しており，今後 serotype replacement が生 じ，non-b 莢膜株が増加する可能性はある．
血清型の確認は，スライド凝集法および PCR 法で 実施した．スライド凝集法では 29 株が Hie，28 株が Hif と判定され，PCR 法の結果は全てスライド凝集法 と一致した．しかし，スライド凝集法は他の血清型と の交差反応や偽陽性が認められることがあり１１）１２），一 方，PCR 法は感度，特異度ともにスライド凝集法よ りも優れていると報告されている５）．今回の我々の検 討では，スライド凝集法と PCR の結果は全て一致し ており，臨床的には簡便なスライド凝集法でのスク リーニングが有用と考えられる．
H. influenzae莢膜株は，チョコレート寒天培地上に
発育するコロニーがムコイド状を呈するため，肉眼的 に無莢膜株との鑑別が可能である．当院細菌検査室で は，発育したH. influenzaeをコロニーの形態により莢 膜株，NTHi に分類し，莢膜株についてはスライド凝 集法により Hib のスクリーニングを実施してきた．
本検討では肉眼的にムコイド様を呈した 209 株に限 定し血清型を確認したが，その全てがいずれかの血清 型に分類された．すなわち，目視による莢膜株スクリー ニングの特異度は 100％ であった．一方で，スクリー ニングの段階で莢膜株を見落としていた可能性は残 る．そこで，Hib の分離頻度を小児全国サーベイラン スの結果１３）と比較すると，本検討の頻度が 4.3％ であっ たのに対し，全国サーベイランスの頻度は 2007 年が 3.6％，2010 年が 4.8％ であり，同等の数値であった．
全国サーベイランスでは全検体に対し PCR 法を実施
し Hib の同定を行ったことを考慮すると，目視スク リーニングの感度についても十分な数値が確保できた ものと考えられる．なお，検査技師の技量がスクリー ニングの精度に与える影響は小さくないと考えられ，
その点に留意してスクリーニングを実施する必要があ る．
今回，non-b 莢膜株の 57 株中 52 株（91.3％）が 気 道検体由来であり，無菌部位から分離されたのは血液 由来の Hif 1 株（1.8％）のみであった．これは，152 株中 43 株（28.3％）を無菌部位由来株が占めた Hib よりも，3,323 株中 3,193 株（96.1％）を気道検体が占 めた NTHi に近い傾向であった．スペインでの臨床 分離 Hif 49 株に関する検討では，半数強の 25 株が無 菌部位から検出されたとの報告があるが１４），我々の検 討における non-b 莢膜株は 1 株のみが無菌部位から検 出された侵襲性感染症であり，無菌部位以外では半数 以上が喀痰より検出されており（当院では洗浄喀痰培 養を以前より継続して実施している），主に局所感染 症に関与していたものと考えられる．
薬 剤 感 受 性 検 査 の 結 果 で は，non-b 莢 膜 株 で は ABPC 感受性菌，すなわち BLNAS が 82.4％ を 占 め た．βラクタマーゼ産生株は 8.8％，BLNAR はわず か 1.8％ であり，βラクタマーゼ産生株の頻度が高い Hib や BLNAR の頻度が高い NTHi のいずれとも異な る傾向を示した．Multilocus sequence typing（MLST）
法による解析により，NTHi が遺伝的多様性に富むの に対し，莢膜株は少数の sequence type（ST）が分 布していることが示されている１５）１６）．千葉県という限 られた地域での局地的な現象を捉えている可能性はあ るが，ABPC に感受性を有する特定のクローンが non- b 莢膜株の主体となっていることも考えられる．
今回分離された non-b 莢膜株は Hie と Hif のみであ り，他の血清型は認められなかった．Hib ワクチンが 普及した諸外国では，侵襲性H. influenzae感染症が大 幅に減少した一方で，原因菌の serotype replacement が生じている．そのなかでも NTHi の頻度が高いが，
non-b 莢 膜 株 で は Hif が 最 も 多 く，次 い で Hie が 多 い２）３）１６）．2001〜2010 年の英国では年 11％ の割合で Hif が増加しており，Hie も年 7.4％ のペースで増加して いた１２）．non-b 莢膜株による侵襲性感染症は，乳児や 高齢者での発症や，免疫不全を有する患者における日 和見感染が中心となっており１２）１５），本検討で唯一無菌 部位から分離された Hif も，代謝性疾患を基礎に持ち 敗血症を生じた 3 歳児の血液から分離されたもので あった．しかし，Hif の ST124１２）１６）や，Hie の ST18 と その類縁株１２）など，特定の ST が侵襲性感染症患者よ り分離されやすいことが示されており，non-b 莢膜株 には病原性の強い菌株が存在する可能性がある．この
ような株により，今後 non-b 莢膜株による小児侵襲性 感染症が増加することも予想される．我々は現在，保 存している non-b 莢膜株に対し，MLST 法による解 析を進めている．
侵襲性H. influenzae感染症は 2013 年 4 月より感染 症法に基づく 5 類全数届出疾患となり，報告が義務づ けられた．今後は Hib 以外の血清型による発症が中 心となることが予想されるため，侵襲性感染症原因菌 の血清型検査の重要性は増すと考えられる．同時に，
市中における浸淫状況のモニタリングも重要と考えら れ，今後も non-b 莢膜株の検討を継続していく予定で ある．
利益相反自己申告：申告すべきものなし 文 献
1）Ubukata K, Chiba N, Morozumi M, Iwata S, Su- nagawa K ; Working Group of Nationwide Sur- veillance for Bacterial Meningitis：Longitudinal surveillance of Haemophilus influenzae isolates from pediatric patients with meningitis through- out Japan, 2000-2011. J Infect Chemothher 2013；19：34―41.
2）西順一郎：侵襲性 non-typeable Haemophilus in- fluenzae感染症．IASR 2013；7：188―9.
3）Ladhani S, Slack MP, Health PT, Von Gottberg A, Chandra M, Ramsay ME,et al.：Invasive Haemophilus influenzae disease, Europe, 1996- 2006. Emerg Infect Dis 2010；16：455―63.
4）MacNeil JR, Cohn AC, Farley M, Mair R, Baum- bach J, Bennett N,et al.：Current epidemiology and trends in invasive Haemophilus influenzae disease-United States, 1989-2008. CID 2011；
53：1230―6.
5）Falla TJ, Crook DW, Brophy LN, Maskell D, Kroll JS, Moxon ER：PCR for capsular typing ofHaemophilus influenzae. J Clin Microbiol 1994；
32：2382―6.
6）日本化学療法学会抗菌薬感受性測定法検討委員
会：微量液体希釈による MIC 測定法（微量液体 希釈法）―日本化学療法学会標準法―．Chemo- therapy 1990；38：102―5.
7）Clinical and Laboratory Standards Institute：
Performance standards for antimicrobial suscep- tibility testing ; 17th informational supplement.
Clinical and Laboratory Standards Institute, M 100-S17, Wayne, PA, 2007.
8）Dabernat H, Plisson-Sauné MA, Delmas C, Séguy M, Faucon G, Pélissier R,et al.：Haemo- philus influenzae carriage in children attending
French day care centers : a molecular epidemi- ological study. J Clin Microbiol 2003；41：
1664―72.
9）Bou R, Domínguez A, Fontanals D, Sanfeliu I, Pons I, Renau J,et al.：Prevalence ofHaemophi- lus influenzae pharyngeal carriers in the school population of Catalonia. Working group on inva- sive disease caused by Haemophilus influenzae.
Eur J Epidemiol 2000；16：521―6.
10）Oikawa J, Ishiwada N, Takahashi Y, Hishiki H, Nagasawa K, Takahashi S,et al.：Changes in nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneu- moniae, Hamophilus influenzae and Moraxella ca- tarrhalis among healthy children attending a day-care centre before and after official financial support for the 7-valent pneumococcal conju- gate vaccine andH. influenzaetype b vaccine in Japan. J Infect Chemother 2014；20：146―9.
11）Satola SW, Collins JT, Napier R, Farley MM：
Capsule gene analysis of invasive Haemophilus influenzae: accuracy of serotyping and preva- lence of IS1016 among nontypeable isolates. J Clin Microbiol 2007；45：3230―8.
12）Ladhani SN, Collins S, Vickers A, Litt DJ, Craw- ford C, Ramsay ME,et al.：InvasiveHaemophilus influenzaeserotype e and f disease, England and Wales. Emerg Infect Dis 2012；18：725―32.
13）Hoshino T, Sato Y, Toyonaga Y, Hanaki H, Su- nakawa K：Nationwide survey of the develop- ment of drug-resistance in the pediatric field in 2007 and 2010 : drug sensitivity of Haemophilus influenzaein Japan (Second report). J Infect Che- mother 2013；19：495―503.
14）Campos J, Román F, Pérez-Vázquez M, Aracil B, Oteo J, Cercenado E,et al.：Antibiotic resis- tance and clinical significance ofHaemophilus in- fluenzae type f. J Antimicrob Chemother 2003；
52：961―6.
15）Campos J, Hernando M, Román F, Pérez- Vázquez M, Aracil B, Oteo J,et al.：Analysis of Invasive Haemophilus influenzae Infections after Extensive Vaccination against H. influenzae Type b. J Clin Microbiol 2004；42：524―9.
16）Giufré M, Cardines R, Accogli M, Pardini M, Cerquetti M：Identification ofHaemophilus influ- enzae clones associated with invasive disease a decade after introduction ofH. influenzaetype b vaccination in Italy. Clin Vaccine Immunol 2013；20：1223―9.
Analysis of Non-serotype b EncapsulatedHaemophilus influenzaeIsolated from Pediatric Patients Satoru KUTSUNA１）５）, Tadashi HOSHINO１）, Chie FUKASAWA１）, Shoko TOKUTAKE１）, Hideyuki OKUI１）,
Kyoko SAWADA２）６）, Hiroko SATO２）, Yoshiko TAKAHASHI３）& Naruhiko ISHIWADA４）
１）Division of Infectious Diseases and２）Division of Clinical Laboratory, Chiba Childrensʼ Hospital,
3)Department of Pediatrics, Chiba University Graduate School of Medicine,
4)Division of Control and Treatment of Infectious Diseases, Chiba University Hospital,
5)Department of Internal Medicine, National Center for Global Health and Medicine, Kohnodai Hospital,
6)Department of Clinical Laboratory, Chiba Cancer Center
We analyzed non-serotype b encapsulated Haemophilus influenzae (non-b Hi) isolated from pediatric pa- tients at Chiba Childrenʼs Hospital during 2000-2012. Among 3,532 clinical isolates ofH. influenzae, there were 57 (1.6％) strains of non-b Hi, 152 (4.3％) of serotype bH. influenzae(Hib), and 3,323 (94.1％) of non-typeable H.
influenzae(NTHi). Fifty-seven strains of non-b Hi were serotyped useing the slide agglutination test and PCR.
Twenty-nine strains were identified as type e (Hie) and 28 as type f (Hif), and the results according to the slide agglutination test and PCR were completely identical. Whereas 52 of 57 strains (91.2％) were isolated from respiratory specimen, only one Hif strain (1.8％) was isolated from a sterile site. There were 47 (82.4％) β-lactamase-non-producing ampicillin (ABPC)-sensitive strains (BLNAS), 5 (8.8％) β-lactamase-producing strains (BLP), and only 1 (1.8％)β-lactamase-non-producing ABPC-resistant strain (BLNAR).
Thus the frequency of non-b Hi was lower than that of Hib. The source of non-b Hi was similar to that of NTHi, which was mainly isolated from respiratory specimen. Antimicrobial resistant pattern of non-b Hi was different from that of Hib in which the frequency of BLP was relatively high, and NTHi in which that of BLNAR was high. An increase of invasive H. influenzaeinfections caused by NTHi, Hie, and Hif was re- ported in the countries where Hib vaccine had been widely used. Because it is assumed that invasive non- Hib infection will be predominant in the near future in Japan, serotyping of invasive strains is crucial. Con- tinuous monitoring of distribution of non-b Hi in the clinical isolates ofH. influenzaeis also important.
