フイリマングース (Herpestes auropunctatus) の避妊ワクチンに関する研究

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Title フイリマングース (Herpestes auropunctatus) の避妊ワクチン_{に関する研究( 本文(Fulltext) )} Author(s) 國永, 尚稔 Report No.(Doctoral Degree) 博士(獣医学) 甲第528号 Issue Date 2019-03-13 Type 博士論文 Version ETD URL http://hdl.handle.net/20.500.12099/77959 ※この資料の著作権は、各資料の著者・学協会・出版社等に帰属します。

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(10)

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8 ➨ ➨ 2 ❶ ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ⏕య࡟࠾ࡅࡿྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢᢠయ⏘⏕ㄏᑟ⬟ࡢホ౯ 2–1. ⫼ᬒ࠾ࡼࡧ┠ⓗ ࡇࢀࡲ࡛ࡢ◊✲࡟ࡼࡾ㸪࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢ ZP3 ⢭Ꮚ༸⤖ྜ㒊఩ࡢ࢔࣑ࣀ㓟㓄ิࡀゎㄞ ࡉࢀ㸪ࡇࢀࢆᇶ࡟2 ✀ࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ (Peptide A ࠾ࡼࡧ B) ࡀ㑊ዷ࣡ࢡࢳࣥೃ⿵ᢠ ཎ࡜ࡋ࡚ࢹࢨ࢖ࣥࡉࢀࡓ (55)ࠋࡇࢀࡽࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࢆ࢘ࢧࢠ࡟ᢞ୚ࡋ࡚ᚓࡽࢀࡓ ⾑Ύࡣච␿⤌⧊໬Ꮫⓗゎᯒ࡟ࡼࡾ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ༸㏱᫂ᖏ࡟≉␗ⓗ࡟཯ᛂࡍࡿࡇ࡜ࡀ♧ ࡉࢀࡓ (53)ࠋ௚᪉࡛㸪ࡇࢀࡲ࡛࣐ࣥࢢ࣮ࢫ⏕య࡟ᑐࡍࡿྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢຠᯝࡣ᳨ド ࡉࢀ࡚࠾ࡽࡎ㸪ච␿࡟ࡼࡾᢠయ⏘⏕ࡀㄏᑟࡉࢀࡿ࠿ྰ࠿ࡣ౫↛࡜ࡋ࡚୙࡛᫂ࡗࡓࠋ2 ✀ࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡣ࠸ࡎࢀࡶ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ ZP3 ⏤᮶ࡢ࢔࣑ࣀ㓟㓄ิࢆᶍࡗࡓࡶࡢ࡛࠶ ࡾ㸪ࡘࡲࡾ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡟ᑐࡋ࡚ࡣ⮬ᕫᢠཎ࡜ࡋ࡚స⏝ࡍࡿࡇ࡜ࡀᮇᚅࡉࢀࡿࠋࡋ࠿ࡋ㸪 ୍⯡ⓗ࡟⮬ᕫ⏤᮶ࡢෆᅉᛶ≀㉁ࡣච␿ᐶᐜ࡟ࡼࡾᢠཎ࡜ࡋ࡚ㄆ㆑ࡉࢀ㞴ࡃ㸪ᢞ୚᪉ἲ ࡸᐜ㔞࡟ࡼࡗ࡚ࡣᢠయ⏘⏕ࢆㄏᑟࡋᚓ࡞࠸ྍ⬟ᛶࡶ⪃࠼ࡽࢀࡿࠋ ୖ㏙ࡢ2 ✀ࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡣ࡜ࡶ࡟ 19 ṧᇶࡢ࢔࣑ࣀ㓟ࢆᣢࡕ㸪࢚ࣆࢺ࣮ࣉ㒊఩࡜ ண ࡉࢀࡿ࢔࣑ࣀ㓟㓄ิࢆࡑࢀࡒࢀ 2 㒊఩ᣢࡘࠋࡑࡢ࠺ࡕࡢ 1 㒊఩ࡣ࣌ࣉࢳࢻ㛫࡛ ඹ㏻ࡢ㓄ิ࡛࠶ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿ (Sigma-Aldrich Japan ⚾ಙ)ࠋᢠཎᛶࡣ࢚ࣆࢺ࣮ࣉ ࡢᢠཎᥦ♧⬟ຊ࡟౫Ꮡࡍࡿࡓࡵ㸪࢚ࣆࢺ࣮ࣉࡢ࢔࣑ࣀ㓟㓄ิࡸ࣌ࣉࢳࢻࡢ❧యᵓ㐀ࡢ ᕪ␗࡟ࡼࡗ࡚㸪2 ✀ࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ㛫࡛ᢠཎᛶ࡟ᕪࡀ⏕ࡌࡿࡶࡢ࡜᥎ᐹࡉࢀࡿࠋ ௨ୖࡢࡼ࠺࡞⫼ᬒࢆ㋃ࡲ࠼㸪ᮏ◊✲࡛ࡣ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ⏕య࡬ࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻᢞ୚ (Peptide A ࠾ࡼࡧ B) ࡟ࡼࡿᢠయ⏘⏕ࡢྍྰࢆ☜ㄆࡋ㸪ᢠయࡀ⏘⏕ࡉࢀࡿሙྜ࡟ࡣ㸪 ࡑࡢᙉᗘࡸᣢ⥆ᛶ࡟㛵ࡋ࡚Peptide A㸪B 㛫࡛ẚ㍑ࢆ⾜࠺ࡇ࡜ࢆ┠ⓗ࡜ࡋࡓࠋࡇࢀࡽ ࡣ㸪㑊ዷ࣡ࢡࢳࣥ࡜ࡋ࡚ࡢᢠཎ㑅ᐃ࡟᭷⏝࡞᝟ሗ࡜࡞ࡿ࡜࡜ࡶ࡟㸪࣐ࣥࢢ࣮ࢫ⏕యෆ ࡛ࡢච␿ືែ࡟㛵ࡍࡿ୍ᐃࡢ♧၀ࢆ୚࠼ࡿࡶࡢ࡜ᮇᚅࡉࢀࡿࠋ

(14)

9 22–2. ᮦᩱ࠾ࡼࡧ᪉ἲ

2–2–1. ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢస〇

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2–2–3. ච␿࠾ࡼࡧ᥇⾑

2014 ᖺ 2 ᭶ࡼࡾ㸪ྛಶయ࡬ࡢච␿ࢆ㛤ጞࡋࡓࠋA ⩌࠾ࡼࡧ B ⩌࡬ࡣྛྜᡂ࣌ࣉࢳ ࢻ 150 μg/150 ml ࢆ➼㔞ࡢ୙᏶඲࢔ࢪࣗࣂࣥࢺ (TiterMax® Gold, TiterMax USA Inc., Norcross, GA, USA) ࡛࢚࣐ࣝࢪࣙࣥ໬ࡋࡓࡶࡢࢆ㸪㯞㓉ୗ࡛⫼㒊⓶ୗ࡟ᩘ⟠ᡤ

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10 ࡟ศࡅ࡚ᢞ୚ࡋࡓࠋC ⩌࡟㛵ࡋ࡚ࡣ㸪ྠᵝ࡟࢚࣐ࣝࢪࣙࣥ໬ࡋࡓࣜࣥ㓟⦆⾪⏕⌮㣗ሷ Ỉ (PBS) ࢆᢞ୚ࡋࡓࠋච␿ࡣ 2 㐌㛫㛫㝸࡛ 4 ᅇ⾜࠸㸪ච␿᫬ (2 ᅇ┠ࢆ㝖ࡃ) ࠾ࡼ ࡧ᭱⤊ච␿࠿ࡽ1 㐌㛫ᚋ࡟ᚰ᥇⾑࡟ࡼࡾྛ 1 ml ࡢ⾑ᾮࢆ᥇ྲྀࡋࡓࠋ᥇ྲྀࡋࡓ඲࡚ࡢ ⾑ᾮࡣ෭ⶶᗜ୍࡛ᬌ㟼⨨ࡋࡓࡢࡕ㸪㐲ᚰ (10,000 rpm, 10 ศ) ࡟ࡼࡾ⾑Ύࢆศ㞳ࡋ㸪⾑Ύࢧࣥࣉࣝࡣゎᯒ᫬ࡲ࡛−80 Υ࡛ಖᏑࡋࡓࠋ ᢠయ౯ࡢᣢ⥆ᛶࢆ☜ㄆࡍࡿࡓࡵ㸪୍㒊ࡢಶయ (A-1 ࠾ࡼࡧ B-2) ࡟ࡘ࠸࡚ࡣ⥅⥆ⓗ ࡟᥇⾑ࡋ㸪ᢠయ౯ࢆࣔࢽࢱࣜࣥࢢࡋࡓࠋࡲࡓ㸪ࡇࡢ2 ಶయ࡟ࡘ࠸࡚ࡣᢠయ౯ࡀపୗࡍ ࡿࡢࢆ☜ㄆࡋࡓࡢࡕ㸪ච␿グ᠈ࡢホ౯ࢆ┠ⓗ࡟㸪ୖグ࡜ྠ᮲௳࡛ྛྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢ༢ ᅇࡢ෌ච␿ࢆᐇ᪋ࡋ㸪෌ච␿࠿ࡽ2 ࠾ࡼࡧ 4 㐌㛫ᚋ (B-2 ಶయࡣ 2 㐌㛫ᚋࡢࡳ) ࡟᥇ ⾑ࡋࡓࠋ 㯞㓉࡟ࡣᑓ⏝ࡢ㔠ᒓ〇ࡢࢣ࣮ࢪࢆ⏝࠸㸪ࢣࢱ࣑ࣥሷ㓟ሷ (0.5 mg/㢌; ࢣࢱ࣮ࣛࣝ® 㟼ὀ⏝, ➨୍୕ඹ, ᮾி) ࠾ࡼࡧ࣓ࢹࢺ࣑ࢪࣥሷ㓟ሷ (0.07 mg/㢌; ࢻ࣑ࢺ࣮ࣝ®, ᪥ ᮏ඲⸆ᕤᴗ㸪⚟ᓥ) ࡢΰྜ㯞㓉⸆ࢆ➽⫗ෆᢞ୚ࡍࡿࡇ࡜࡛୙ື໬ࡋࡓࠋච␿࠾ࡼࡧ᥇ ⾑ࢆࡋࡓࡢࡕ㸪࢔ࢳࣃ࣓ࢰ࣮ࣝሷ㓟ሷ (0.35 mg/㢌; ࢔ࣥࢳࢭࢲࣥ®, ᪥ᮏ඲⸆ᕤᴗ) ࡢ➽⫗ෆᢞ୚࡟ࡼࡾぬ㓰ࢆಁ㐍ࡋࡓࠋ᭱⤊᥇⾑ᚋ㸪඲࡚ࡢಶయࡣ The American Veterinary Medical Association ࡢ࢞࢖ࢻࣛ࢖ࣥ (AVMA; 2007) ࡟ᚑ࠸㸪㯞㓉ୗ࡛ ࡢ඲᥇⾑࡟ࡼࡾᏳᴦẅฎศࡋࡓ (3)ࠋ

2–2–4. ᢠయ౯ࡢ ᐃ

ࡍ࡭࡚ࡢ⾑ΎࡣEnzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) ࡟ࡼࡗ࡚ᢠయ౯ ࢆ ᐃࡋࡓࠋⅣ㓟-㔜Ⅳ㓟ࣂࢵࣇ࢓࣮ (C3041, Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA) ࡛ᕼ㔘ࡋࡓ KLH ࢥࣥࢪࣗࢤ࣮ࢺࡉࢀ࡚࠸࡞࠸ Peptide A ࡶࡋࡃࡣ B (100 μl; 5 μg/ml) ࢆ 96 ✰࣐࢖ࢡࣟࣉ࣮ࣞࢺ (#3590, Corning Inc., Corning, NY, USA) ࡟ῧ ຍࡋ㸪ᐊ ࡛ 1 ᫬㛫㟼⨨ࡋ࡚ᅛᒙ໬ࡋࡓࠋ200−300 μl/well ࡢ 0.05% Tween®₂₀

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11

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(17)

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(18)

13 ࡜ࡀ♧၀ࡉࢀࡓࠋඛ㏙ࡢ㏻ࡾ㸪୧ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡣ1 ࡘࡢඹ㏻ࡢ࢚ࣆࢺ࣮ࣉ㒊఩࡜ 1 ࡘ ࡢ␗࡞ࡿ㓄ิࡢ࢚ࣆࢺ࣮ࣉ㒊఩ࢆࡑࢀࡒࢀᣢࡘ࡜᥎ ࡉࢀࡿࠋࡘࡲࡾ㸪A ⩌ࡀ♧ࡋࡓ 㧗࠸ᢠయ౯ࡣ㸪Peptide A ࡢࡳࡀᣢࡘ࢔࣑ࣀ㓟㓄ิࡢ࢚ࣆࢺ࣮ࣉ㒊఩ࡢᢠཎᛶ࡟⏤᮶ ࡋ࡚࠸ࡿྍ⬟ᛶࡀ⪃࠼ࡽࢀࡓࠋ ࠸ࡎࢀࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻᢞ୚⩌࡜ࡶ㸪࡯࡜ࢇ࡝ࡢಶయࡀච␿ᅇᩘ࡟ᛂࡌ࡚ᢠయ౯ࡀୖ ᪼ࡋ㸪4 ᅇ┠ࡢච␿࠿ࡽ 1 㐌㛫ᚋ (7 㐌┠) ࡟᭱㧗್ࢆ♧ࡋࡓࠋࡇࢀࡣ㸪ච␿ᅇᩘ࡟ ᛂࡌ࡚ᾮᛶච␿ࡀ่⃭ࡉࢀ㸪ᢠయ⏘⏕ࡀ⿵ᙉࡉࢀࡓࡶࡢ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿࠋ୍᪉࡛㸪ྛ⩌ ࡛᭱ࡶ㧗࠸ᢠయ౯ࢆ♧ࡋࡓಶయ (A-1 ࠾ࡼࡧ B-2) ࡟㛵ࡋ࡚ࡣ㸪4 ᅇࡢච␿ᚋ࡟ࡴࡋ ࢁᢠయ౯ࡢࢃࡎ࠿࡞పୗࡀㄆࡵࡽࢀࡓࠋࡇࢀࡣච␿ࡋࡓᢠཎࡢ㔞ࡸᅇᩘ࡟ᑐࡋ࡚ᢠయ ⏘⏕ࡀ㢌ᡴࡕ࡟࡞ࡗࡓࡇ࡜ࢆព࿡ࡋ࡚࠸ࡿ࠿ࡶࡋࢀ࡞࠸ࠋ࠸ࡎࢀ࡟ࡏࡼ㸪ྛᢞ୚⩌࡜ ࡶ࡟3 ಶయ࡜ᑠつᶍ࡞ᐇ㦂⣔࡛࠶ࡾ㸪ಶయᕪࡢᙳ㡪ࢆ᤼㝖ࡍࡿ࡟ࡣ༑ศ࡜ࡣゝ࠼ࡎ㸪 ಶయᩘࡢᣑ඘࡜࡜ࡶ࡟ᢞ୚㔞ࡸᅇᩘࡢኚ᭦࡞࡝ࡉࡽ࡞ࡿ᳨ドࡢవᆅࡀ࠶ࡿࠋ 2–4–2. ᢠయ⏘⏕ࡢᣢ⥆ᛶ࡜ච␿グ᠈ A-1㸪B-2 ಶయࡢᢠయ⏘⏕ࡣࡑࢀࡒࢀ 21 㐌㸪7 㐌௨ୖᣢ⥆ࡋࡓࠋᢠయ⏘⏕ࡢᣢ⥆ᛶ ࡟࠾࠸࡚ࡶPeptide A ࡀඃ఩࡛࠶ࡾ㸪ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢᢠཎᛶࡢᙉᗘ࡜ࡢ㛵㐃ᛶࡀ♧၀ ࡉࢀࡓࠋỈᬗయ㔜㔞࡟ࡼࡿᖺ㱋ᰝᐃࡢ◊✲⤖ᯝ࠿ࡽ㸪࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢ୍⯡ⓗ࡞ᑑ࿨ࡣ2 ᡯ௨ୗ࡛࠶ࡿ࡜᥎ᐃࡉࢀ࡚࠸ࡿ (1, 5)ࠋࡲࡓ㸪࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡣᏘ⠇⦾Ṫື≀࡛࠶ࡾ㸪᪥ ᮏ࡟࠾ࡅࡿ࣓ࢫࡢⓎ᝟ᮇࡣ୺࡟᫓ (3−5 ᭶) ࡛㸪1 ᡯ࡛ึᅇⓎ᝟ࢆ㏄࠼ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀ ࡿ (62)ࠋ࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢࡇࢀࡽࡢ⦾Ṫ⏕≀Ꮫⓗ≉ᛶࢆ⪃࠼ࡿ࡟㸪⣙ 5 ࣨ᭶࡟ࢃࡓࡿᢠ య౯ࡢᣢ⥆ᮇ㛫ࡣ⦾Ṫ㜼ᐖ࡟ࡼࡿಶయᩘᢚไࢆ㐩ᡂࡍࡿࡢ࡟㐺ᙜ࡛࠶ࡿ࠿࡜ᛮࢃࢀ ࡿࠋࡋ࠿ࡋ࡞ࡀࡽ㸪ᮏ◊✲ᡂᯝࡀ♧ࡍᢠయ౯ࡢᣢ⥆ᛶࡣ㸪࠶ࡃࡲ࡛⏕య࡬ࡢ」ᩘᅇࡢ ┤᥋ච␿࡟ࡼࡾᚓࡽࢀࡓᢠయࡢ⏘⏕ࢆ☜ㄆ࡛ࡁࡿᮇ㛫࡛࠶ࡾ㸪ᮏ᮶ⓗ࡞㑊ዷຠᯝࡢᣢ ⥆ᮇ㛫࡜ࡣ᰿ᮏⓗ࡟␗࡞ࡿࡇ࡜࡟␃ពࡋ࡞ࡃ࡚ࡣ࡞ࡽ࡞࠸ࠋᮇᚅࡉࢀࡿ㑊ዷຠᯝࡢᣢ ⥆ᮇ㛫ࡀᢠయ౯ࡢᣢ⥆ᮇ㛫ࡼࡾࡶ▷ࡃ࡞ࡿࡇ࡜ࢆ᝿ᐃࡍࢀࡤ㸪5 ࣨ᭶࡜࠸࠺ᢠయࡢᣢ

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14 ⥆ᮇ㛫ࡀ༑ศ࡛࠶ࡿ࠿ࡣ㸪ᐇ㝿ࡢ㑊ዷຠᯝࡢ᳨ドࢆ⾜ࡗ࡚࠿ࡽุ᩿ࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋ ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ࡟ᑐࡍࡿච␿グ᠈ࡢホ౯࡟㛵ࡋ࡚㸪ᮏ◊✲࠿ࡽࡣグ᠈ච␿ࡀㄏᑟࡉࢀ ࡓ࠿ྰ࠿ࢆุ᩿ࡍࡿࡢ࡟༑ศ࡞⤖ᯝࡣᚓࡽࢀ࡞࠿ࡗࡓࠋPeptide A ࢆᢞ୚ࡋࡓ A-1 ಶ య࡟࠾࠸࡚ࡣ㸪෌ච␿࡟ࡼࡾ୍㐃ࡢ 4 ᅇࡢึᅇච␿ 2 ᅇศ࡜ྠ⛬ᗘࡢᢠయ౯ࡢୖ᪼ ࡀㄆࡵࡽࢀࡓࡀ㸪㧗ᗘ࡞ච␿グ᠈ࢆᮇᚅ࡛ࡁࡿࡶࡢ࡛ࡣ࡞࠿ࡗࡓࠋ㔝እ࡟࠾ࡅࡿ࣐ࣥ ࢢ࣮ࢫࡢᑑ࿨ࡸⶽṪࡢᏘ⠇ᛶࢆ⪃៖ࡍࡿ࡜㸪ච␿グ᠈ࡣᚲ㡲࡛ࡣ࡞࠸ࡶࡢࡢ㸪ᙉᅛ࡞ ⦾Ṫᢚไᢏ⾡࡟ࡣ㠀ᖖ࡟᭷⏝࡛࠶ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿࠋᢠయࡢᣢ⥆ᛶ࡟㛵ࡍࡿ⪃ᐹ࡜ేࡏ ࡚⪃࠼ࢀࡤ㸪ࡉࡽ࡞ࡿᢠཎᛶࡢ⿵ᙉࡀㄢ㢟࡟࡞ࡿ࡜᥎ᐹࡉࢀࡿࠋ

(20)

15 22–5. ᑠᣓ 1. స〇ࡋࡓ 2 ✀ࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡣ࡜ࡶ࡟࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡟ᑐࡋ࡚ᢠཎᛶࢆ᭷ࡋ࡚࠾ࡾ㸪 ᮏ◊✲ࡢᢞ୚᮲௳࡛ࡣᴫࡡᢞ୚ᅇᩘ౫Ꮡᛶࡢᢠయ⏘⏕ࢆㄏᑟࡋࡓࠋ≉࡟ Peptide A ࡣᢠཎᛶࡀᙉࡃ㸪ᢞ୚ಶయ⩌ࡣ⥲ࡌ࡚㧗࠸ᢠయ౯ࢆ♧ࡋࡓࠋ㑊ዷ࣡ࢡࢳࣥࡢᢠ ཎೃ⿵ࡢ㑅ᐃ࡟㛵ࢃࡿ୍ᐃࡢ♧၀ࢆᚓࡓࠋ 2. ᢠయ౯ࡢᣢ⥆ᛶ࡟㛵ࡋ࡚ࡶ Peptide A ࡀඃ఩࡛࠶ࡾ㸪࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢⓎ᝟ᮇ㛫ࡼࡾ ࡶ㛗࠸ᣢ⥆ᛶࢆ♧ࡋࡓࠋࡋ࠿ࡋ㸪ᮇᚅࡉࢀࡿ㑊ዷຠᯝࡢᣢ⥆ᮇ㛫ࡣࡼࡾ▷ࡃ࡞ࡿ ࡜᥎ᐹࡉࢀࡿࡓࡵ㸪༑ศ࡞ᣢ⥆ᮇ㛫࡜ゝ࠼ࡿ࡯࡝࡛ࡣ࡞࠿ࡗࡓࠋࡲࡓ㸪ච␿グ᠈ ࡟ࡘ࠸࡚ࡶ୍ᐃࡢᢠయ౯ࡢୖ᪼ࡣㄆࡵࡽࢀࡓࡶࡢࡢ㸪㧗ᗘ࡞ච␿グ᠈ࢆᮇᚅ࡛ࡁ ࡿࡶࡢ࡛ࡣ࡞࠿ࡗࡓࠋ 3. ᢠయ౯࠾ࡼࡧࡑࡢᣢ⥆ᛶ࡟㛵ࡋ࡚ࡣᐇ㝿ࡢ㑊ዷຠᯝ࡜ేࡏ࡚ホ౯ࡉࢀࡿᚲせࡀ ࠶ࡿࠋࡑࢀࢆ㋃ࡲ࠼㸪ࡼࡾ㧗ᗘ࡞ᢠཎᛶࢆ᭷ࡍࡿྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢస〇ࡸᢞ୚᪉ἲ ࡢᨵၿ࡟ㄢ㢟ࡀぢฟࡉࢀࡓࠋ

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16 ᅗ2-1. ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ A (a) ࠾ࡼࡧ B (b) ࡟ࡼࡿච␿࡟ᑐࡍࡿ ࣐ࣥࢢ࣮ࢫྛಶయࡢ⾑Ύࡢᢠయ౯ (྾ගᗘ㸸450̽655nm) 3 㔜ヨ㦂ࡋࡓྛ⾑Ύࡢᖹᆒ್࠾ࡼࡧᶆ‽ㄗᕪࢆࣉࣟࢵࢺࡋ㸪ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻච␿ಶయ⾑ Ύࡢᢠయ౯ࡢ᥎⛣ࢆᐇ⥺㸪ᑐ↷ಶయ⾑Ύࡢᢠయ౯ࡢ᥎⛣ࢆ◚⥺࡛⾲ࡋࡓࠋࡑࢀࡒࢀࡢ ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ࡟ᑐࡍࡿ඲ᑐ↷ಶయ⾑Ύࡢᢠయ౯࠿ࡽ࢝ࢵࢺ࢜ࣇ್ (ᖹᆒ್㸩ᶆ‽೫ ᕪࡢ3 ಸ) ࢆ⟬ฟࡋࡓࠋ

(22)

17 ᅗ2-2. ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ A ᢞ୚ಶయ(A-1) ࠾ࡼࡧ B ᢞ୚ಶయ (B-2) ⾑Ύࡢ ᢠయ౯ᣢ⥆ᛶ (྾ගᗘ㸸450-655nm) ࠾ࡼࡧ෌ච␿࡟ᑐࡍࡿච␿グ᠈ࡢホ౯ ྛච␿ಶయ⾑Ύࡢ྾ගᗘࡢᖹᆒ್࡜ᶆ‽ㄗᕪࢆࣉࣟࢵࢺࡋ㸪ᢠయ౯ࡢ᥎⛣ࢆ⾲ࡋࡓࠋ ࡑࢀࡒࢀࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ࡟ᑐࡍࡿ඲ᑐ↷ಶయ⾑Ύࡢᢠయ౯࠿ࡽ࢝ࢵࢺ࢜ࣇ್ (ᖹᆒ ್㸩ᶆ‽೫ᕪࡢ3 ಸ) ࢆ⟬ฟࡋࡓࠋᶓ㍈ࡣึᅇච␿࠿ࡽࡢ᫬㛫⤒㐣㸦㐌㸧ࢆ᫬⣔ิ࡟ ➼㛫㝸࡛୪࡭ࡓࡶࡢ࡛࠶ࡾ㸪ࡑࡢ㛫㝸ࡢ᫬㛫ࢫࢣ࣮ࣝࡣ␗࡞ࡿࠋࡲࡓ㸪ᶓ㍈ࡢᣓᘼෆ ࡢᩘᏐࡣ༢ᅇࡢ෌ච␿࠿ࡽࡢ᫬㛫⤒㐣ࢆ⾲ࡍࠋ

(23)

18 ➨ ➨ 3 ❶ ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡟࠾ࡅࡿྜᡂ࣌ࣉࢳࢻᢞ୚࡟ࡼࡿ⤌⧊യᐖ ࠾ࡼࡧ⏘⏕ᢠయ࡟ࡼࡿ⮬ᕫᢠཎㄆ㆑⬟ࡢホ౯ 3–1. ⫼ᬒ Peptide A ࠾ࡼࡧ B ࡣ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ༸㏱᫂ᖏࢱࣥࣃࢡ (ZP3) ࡢ⢭Ꮚ༸⤖ྜ㒊఩ࡢ࢔ ࣑ࣀ㓟㓄ิࢆᇶ࡟ྜᡂࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋ➨2 ❶ࡢ⤖ᯝࡼࡾ㸪௒ᅇస〇ࡋࡓ୧ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ ࡀ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡟ᑐࡋ࡚ᢠయ⏘⏕ࢆㄏᑟࡍࡿࡇ࡜ࡀ♧ࡉࢀࡓࠋ≉࡟㸪⏘⏕ࡉࢀࡿᢠయࡣ ᢠཎ࡜ࡋ࡚ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡑࢀ⮬యࢆㄆ㆑ࡋ࡚࠸ࡿࡇ࡜ࡀ᫂ࡽ࠿࡜࡞ࡗࡓࠋ୍᪉࡛㸪ྜ ᡂ࣌ࣉࢳࢻࡀ⏘⏕ࢆㄏᑟࡋࡓᢠయࡀ⮬ᕫᢠཎ࡜࡞ࡿ༸㏱᫂ᖏࢱࣥࣃࢡࢆㄆ㆑ࡍࡿ࠿ ྰ࠿ࡣ౫↛࡜ࡋ࡚୙࡛᫂࠶ࡿࠋ ௚✀ື≀ࢆᑐ㇟࡜ࡋࡓ༸㏱᫂ᖏ࡟ᑐࡍࡿ㞤ᛶ㑊ዷ࣡ࢡࢳࣥࡢ㛤Ⓨࡸࣄࢺࡢච␿ᛶ ୙ዷ࡟㛵ࡍࡿ◊✲࡟࠾࠸࡚㸪⮬ᕫᢠయࡀ࡝ࡢࡼ࠺࡞ࣉࣟࢭࢫ࡛⦾Ṫᢚไࢆࡶࡓࡽࡍ࠿ ࡣ᫂ࡽ࠿࡟ࡉࢀ࡚࠸࡞࠸ (30)ࠋࡋ࠿ࡋ㸪ᢠయࡀ༸㏱᫂ᖏࢆᶆⓗ࡜ࡋ࡚ㄆ㆑ࡋ⦾Ṫࢆ ᢚไࡍࡿ୺࡞⤒㊰࡜ࡋ࡚㸪ձ༸ᕢ୰ࡢᡂ㛗㐣⛬࡟࠶ࡿ༸⬊ࡢയᐖ㸪ࡶࡋࡃࡣղ༸⟶࠶ ࡿ࠸ࡣᏊᐑෆ࡟࠾ࡅࡿ᤼༸༸Ꮚࡢཷ⢭㜼ᐖࡀᣲࡆࡽࢀࡿ (30)ࠋᐇ㝿㸪࢖࢚ࢿࢥࡢ⦾ Ṫᢚไ࡟㛵ࡍࡿ◊✲࡞࡝࡛ࡣ༸ᕢ⅖ࡢᡤぢࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ (12, 46)ࠋ ୍᪉࡛㸪࣐ ࢘ࢫ࡟࠾ࡅࡿ㑊ዷ࣡ࢡࢳࣥ㛤Ⓨࡢ౛࡞࡝࡛ࡣ㸪༸ᕢࡢ␗ᖖࢆㄆࡵࡎ࡟㧗࠸㑊ዷຠᯝࡀ ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ (21)ࠋ࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢ㑊ዷ࣡ࢡࢳࣥ࡟࠾࠸࡚ࡶ㸪᭱⤊ⓗ࡟㑊ዷຠᯝࡀᚓ ࡽࢀࡓ㝿࡟ࡣࡑࡢຠᯝࡢⓎ⏕ᶵᗎࡀ᫂ࡽ࠿࡟ࡉࢀࡿ࡭ࡁ࡛࠶ࡿࠋ࠸ࡎࢀ࡟ࡏࡼ㸪㑊ዷ ຠᯝࡢⓎ⌧࡟ࡣྜᡂ࣌ࣉࢳࢻᢞ୚࡟ࡼࡗ࡚⏘⏕ࡉࢀࡿᢠయࡀ⮬ᕫᢠཎ࡜࡞ࡿ༸㏱᫂ ᖏࢱࣥࣃࢡࢆᶆⓗ࡜ࡋ࡚ㄆ㆑ࡍࡿࡇ࡜ࡀ๓ᥦ࡜࡞ࡿࠋ ୖグࡢࡼ࠺࡞⫼ᬒ࠿ࡽ㸪ᮏ❶࡛ࡣྜᡂ࣌ࣉࢳࢻᢞ୚࡟ࡼࡗ࡚⏘⏕ࡉࢀࡿᢠయࡀ༸ᕢ ⤌⧊ࢆയᐖࡍࡿ࠿ྰ࠿ࢆ⤌⧊Ꮫⓗ࡟ホ౯ࡍࡿࡇ࡜ࢆ┠ⓗ࡜ࡋࡓࠋࡲࡓ㸪⾑Ύ୰ᢠయࡢ ච␿⤌⧊Ꮫ໬Ꮫⓗゎᯒ࡟ࡼࡾ㸪⮬ᕫᢠཎㄆ㆑⬟ࢆ᳨ドࡍࡿࡇ࡜ࢆ┠ⓗ࡜ࡋࡓࠋ

(24)

19 33–2. ᮦᩱ࠾ࡼࡧ᪉ἲ 3–2–1. ༸ᕢࡢ᥇ᮦ࠾ࡼࡧ⤌⧊ษ∦ࡢస〇 ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻᢞ୚࡟ࡼࡿ༸ᕢࡢ⤌⧊യᐖ࡟ࡘ࠸࡚ࡢホ౯ࢆ⾜࠺┠ⓗ࡛㸪2−2−3. ࡢ ච␿ಶయࡢᏳᴦẅฎศ᫬࡟ゎ๗ࡋ࡚༸ᕢࢆ᥇ᮦࡋࡓࠋ᥇ྲྀࡋࡓ༸ᕢࡣಶయࡈ࡜࡟ᕥྑ ྠ୍ࡢ㐲ᚰࢳ࣮ࣗࣈ࡟ධࢀ㸪༑ศ㔞ࡢ 4 㸣⦆⾪࣐࣍ࣝࣜࣥ࡟ࡼࡾ౑⏝᫬ࡲ࡛ᐊ ࡛ ᅛᐃࡋࡓࠋࡲࡓ㸪ච␿⤌⧊Ꮫⓗゎᯒ࡟⏝࠸ࡿ༸ᕢࡣ㸪ྠ㜵㝖஦ᴗෆ࡛ᤕ⋓ࡉࢀࡓᡂ⋇ ࣓ࢫ࠿ࡽ᥇ᮦࡋ㸪௚ࡢᶆᮏ࡜ྠᵝ࡟ᅛᐃࡋࡓࠋ ࠸ࡎࢀࡢᶆᮏࡶ࣐࣍ࣝࣜࣥ࡟ࡼࡿᅛᐃᚋ㸪ὶỈ࡛ࡋࡤࡽࡃỈὙࡋࡓࡢࡕ㸪⮬ືໟᇙ ᶵࢆ⏝࠸࡚ࣃࣛࣇ࢕ࣥࢆᾐ㏱ࡉࡏࡓࠋࣃࣛࣇ࢕ࣥࣈࣟࢵࢡస〇ᶵࢆ⏝࠸࡚ࣃࣛࣇ࢕ࣥ ࣈࣟࢵࢡࢆస〇ࡋ㸪⁥㉮ᘧⷧษᶵࢆ⏝࠸࡚ࣃࣛࣇ࢕ࣥࣈࣟࢵࢡ࠿ࡽ4 μm ࡢ⤌⧊ษ∦ ࢆษࡾฟࡋࡓࠋච␿ಶయࡈ࡜࡟⾑Ύ୰ᢠయࡢᢠཎᢠయ཯ᛂࢆẚ㍑ࡍࡿࡓࡵ㸪ච␿⤌⧊ ໬Ꮫⓗゎᯒ࡟⏝࠸ࡓ༸ᕢ࠿ࡽࡣ㐃⥆ษ∦ (ྛ 4 μm) ࢆస〇ࡋࡓࠋ 3–2–2. ༸ᕢ࡟࠾ࡅࡿ⤌⧊യᐖࡢホ౯ (HE ᰁⰍ) ⤌⧊യᐖࡢホ౯࡟ࡣච␿ಶయ (n = 4) ࠾ࡼࡧᑐ↷ಶయ (n = 3) ࡢ༸ᕢࢆ⏝࠸ࡓࠋᢠ య౯ࡢᣢ⥆ᛶヨ㦂࡟⏝࠸ࡓಶయ (A-1 ࠾ࡼࡧ B-2) ࡢ༸ᕢࡣ㸪௚ࡢච␿ಶయ 4 㢌࡜ࡣ ච␿ࢫࢣࢪ࣮ࣗࣝ࡟┦㐪ࡀ࠶ࡾẚ㍑ࡀᅔ㞴࡞ࡓࡵᮏホ౯ᑐ㇟࠿ࡽ㝖እࡋࡓࠋᐃἲ࡟ᚑ ࠸㸪࢟ࢩ࣭ࣞࣥ࢔ࣝࢥ࣮ࣝ⣔ิ࡟ࡼࡾ⬺ࣃࣛࣇ࢕ࣥࡋࡓࡢࡕ㸪10 ศ㛫ὶỈỈὙࡋ㸪 ࣐࢖࣮ࣖࡢ࣐࣊ࢺ࢟ࢩࣜࣥ (Ṋ⸨໬Ꮫ㸪ᮾி) ࡟ 1 ศ㛫ᾐₕࡋ࡚᰾ᰁⰍࡋࡓࠋ10 ศ㛫 ࡢὶỈỈὙ࡟ࡼࡗ࡚ⓎⰍࡋࡓᶆᮏࢆ࢚࢜ࢪࣥ (ࢧࢡࣛࣇ࢓࢖ࣥࢸࢵࢡࢪࣕࣃࣥ㸪ᮾ ி) ࡛ᚋᰁⰍࡋ㸪࢔ࣝࢥ࣮࣭ࣝ࢟ࢩࣞࣥ⣔ิ࡛⬺Ỉ࠾ࡼࡧ㏱ᚭࡋࡓࠋ⤌⧊ษ∦ࡢほᐹ ࡟ࡣගᏛ㢧ᚤ㙾 (AX70㸪OLYMPUS㸪ᮾி) ࢆ⏝࠸㸪㢧ᚤ㙾⏝࣓࢝ࣛ (DP-20㸪 OLYMPUS) ࡛෗┿᧜ᙳࡋࡓࠋ⅖⑕ᛶ⣽⬊ࡢᾐ₶࡜ቯṚࡢᡤぢࢆඖ࡟༸ᕢ⅖ࡢ᭷↓ࢆ ホ౯ࡋࡓࠋ

(25)

20 3–2–3. ච␿ಶయ⾑Ύࢆ⏝࠸ࡓච␿⤌⧊໬Ꮫⓗゎᯒ ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࢆච␿ࡋ࡚࠸࡞࠸ᡂ⋇࣓ࢫಶయ࠿ࡽ᦬ฟࡋࡓ༸ᕢࡢࣃࣛࣇ࢕ࣥࣈࣟ ࢵࢡࡼࡾ㐃⥆ษ∦ࢆస〇ࡋ㸪ᐃἲ࡟ᚑࡗ࡚⬺ࣃࣛࣇ࢕ࣥࡋࡓࡢࡕỈὙࡋࡓࠋᢠཎ㈿ά ໬ࡢࡓࡵ㸪ࢡ࢚ࣥ㓟ࣂࢵࣇ࢓࣮ (pH 5.4) ࡟ᾐₕࡋ㸪࣏ࢵࢺ (90 °C) ࡛ 40 ศ㛫ຍ ࡋࡓࡢࡕᐊ ࡛20 ศ㛫෭༷ࡋࡓࠋPBS ࡛ 3 ᅇ (ྛ 5 ศ㛫) Ὑίࡋ (௨㝆ྠ᮲௳࡛Ὑ ί)㸪ෆᅉᛶ࣌ࣝ࢜࢟ࢩࢲ࣮ࢮࡢኻάࢆ┠ⓗ࡟ 3 % H2O2 ࡟ᾐₕࡋ࡚ᐊ ࡟࡚ 15 ศ 㛫㟼⨨ࡋࡓࠋὙίᚋ㸪㠀≉␗཯ᛂࡢࣈࣟࢵ࢟ࣥࢢࡢࡓࡵ 3 % BSA (A3590㸪Sigma-Aldrich Co.) ຍ PBS ࢆῧຍࡋ (100 μl/ษ∦)㸪‵₶⟽୰࡟࡚ 4 °C ୍࡛ᬌ㟼⨨ࡋࡓࠋ ᘬࡁ⥆ࡁ㸪3 % BSA ຍ PBS ࡛ 50 ಸᕼ㔘ࡋࡓྛච␿ಶయ⾑Ύ (7 㐌┠) ࢆ୍ḟᢠయ࡜ ࡋ࡚ῧຍࡋ (100 μl/ษ∦)㸪ᐊ ࡟࡚ 1 ᫬㛫㟼⨨ࡋࡓࠋࡉࡽ࡟Ὑίᚋ㸪HRP ᶆ㆑ࣉࣟ ࢸ࢖ࣥA (1:1,000㸪100 μl/ษ∦; ab7456, Abcam, Cambridge, UK) ࢆ஧ḟᢠయ࡜ࡋ

࡚ῧຍࡋ㸪ᐊ ࡟࡚ 1 ᫬㛫㟼⨨ࡋࡓࠋࡲࡓ㸪࢔ࣅࢪࣥ-ࣅ࢜ࢳࣥ཯ᛂࢆቑᙉࡍࡿ┠ⓗ

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24 33–5. ᑠᣓ 1. ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࢆᢞ୚ࡋࡓಶయࡢ༸ᕢ࠿ࡽ㸪⤌⧊യᐖࢆ♧၀ࡍࡿᡤぢࡣᚓࡽࢀ࡞࠿ ࡗࡓࠋ⌧ẁ㝵࡛ࡣ㸪௒ᅇస〇ࡋࡓྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡀ⤌⧊യᐖࢆࡶࡓࡽࡉ࡞࠸ྍ⬟ᛶ ࡶࡋࡃࡣ༑ศ࡞ᢠయࡀ⏘⏕ࡉࢀ࡚࠸࡞࠸ྍ⬟ᛶ࠸ࡎࢀࡶࡀ᝿ᐃࡉࢀࡿࠋ୍᪉࡛㸪 ๪స⏝ࡢ୙ᅾࡣື≀⚟♴ୖ㔜せ࡛࠶ࡿࠋ 2. స〇ࡋࡓ 2 ✀ࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢᢞ୚࡟ࡼࡗ࡚⏘⏕ࡉࢀࡓᢠయࡣ㸪࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢ ༸㏱᫂ᖏࢆㄆ㆑ࡋ⤖ྜࡍࡿࡇ࡜ࡀ♧ࡉࢀࡓࠋࡑࡢ཯ᛂࡣPeptide A ࢆᢞ୚ࡋࡓ A ⩌࡛ࡼࡾ㧗ᗘ࡛࠶ࡾ㸪㏱᫂ᖏࢆᙧᡂࡍࡿ඲ࢫࢸ࣮ࢪࡢ༸⬊࡛཯ᛂࡀㄆࡵࡽࢀࡓࠋ 3. ྾཰ヨ㦂ࡢ⤖ᯝࡼࡾ㸪௒ᅇ☜ㄆࡉࢀࡓᢠཎᢠయ཯ᛂࡣྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ࠾ࡼࡧ࣐ࣥࢢ ࣮ࢫ༸㏱᫂ᖏ࡟≉␗ⓗ࡛࠶ࡗࡓࠋࡘࡲࡾ㸪እᅉᛶࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢᢞ୚࡟ࡼࡾ㸪 ෆᅉᛶࡢ༸㏱᫂ᖏࢆ≉␗ⓗ࡟ᶆⓗ࡜ࡍࡿᢠయࡀ⏘⏕ࡉࢀࡓࡇ࡜ࡀ♧၀ࡉࢀࡓࠋ 4. 㠀≉␗ⓗ࡟ IgG ࢆㄆ㆑ࡍࡿࣉࣟࢸ࢖ࣥ A ࢆ⏝࠸ࡓච␿ᰁⰍ࡟࠾࠸࡚㸪࣐ࣥࢢ࣮ ࢫ༸㏱᫂ᖏ࡬ࡢ཯ᛂࡣ᫂ࡽ࠿࡟ᙉㄪࡉࢀࡓࡇ࡜࠿ࡽ㸪୍ḟᢠయ࡜ࡋ࡚⏝࠸ࡓච␿ ⾑Ύࡣ㧗࠸≉␗ᛶࢆ᭷ࡋ࡚࠸ࡿ࡜᥎ᐹࡉࢀࡓࠋ

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27 ᅗ3-3. ྛࢫࢸ࣮ࢪࡢ༸㏱᫂ᖏ࡟ᑐࡍࡿ A-2 ಶయ⾑Ύࡢච␿཯ᛂᛶ ẚ㍑ⓗᙉᗘ࡞ᢠཎᢠయ཯ᛂࡀㄆࡵࡽࢀࡓ A-2 ಶయࡢ⾑Ύࢆ⏝࠸ࡓච␿ᰁⰍࡢ⤖ᯝࢆ ♧ࡋ㸪ྛ༸⬊ࢫࢸ࣮ࢪࡢ༸㏱᫂ᖏ࡟ᑐࡍࡿ཯ᛂᛶࢆẚ㍑ࡋࡓࠋᢠཎᢠయ཯ᛂࡣ༸㏱ ᫂ᖏࡀᙧᡂࡉࢀࡿࡍ࡭࡚ࡢ༸⬊ࢫࢸ࣮ࢪ࡛ㄆࡵࡽࢀ㸪ࡑࡢ཯ᛂᙉᗘ࡟㐪࠸ࡣㄆࡵࡽ ࢀ࡞࠿ࡗࡓࠋPF㸸1 ḟ༸⬊㸪SF㸸2 ḟ༸⬊㸪TF㸸3 ḟ༸⬊㸪GF㸸ࢢ࣮ࣛࣇ༸⬊㸪 AF㸸㛢㙐༸⬊㸪㸸༸㏱᫂ᖏ㸪࠾ࡼࡧ Bar㸸50 μmࠋ

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28 ᅗ3-4. ච␿࣐ࣥࢢ࣮ࢫ⾑Ύ྾཰ヨ㦂ࡢ⤖ᯝ ච␿࡟⏝࠸ࡓྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ࡛⾑Ύ୰ᢠయࢆ྾཰ࡋ㸪ᢠయ྾཰ࡢ᭷↓࡟ࡼࡿᢠཎᢠయ ཯ᛂࡢᙉᗘࢆẚ㍑ࡋࡓࠋA㸸A-2 ⾑Ύ㸪b㸸A-2 ⾑Ύ (ᢠయ྾཰)㸪c㸸B-1 ⾑Ύ㸪d㸸 B-1 ⾑Ύ (ᢠయ྾཰)ࠋᢠయ྾཰࡞ࡋ (a㸪c) ࡜ẚ㍑ࡋ㸪ᢠయ྾཰⾑Ύ (b㸪d) ࡛ࡣ᫂ ࡽ࠿࡞ᢠཎᢠయ཯ᛂࡢῶᙅࡀㄆࡵࡽࢀࡓࠋ 㸸༸㏱᫂ᖏ㸪Bar㸸50 μm㸪㸨㸨㸸༸Ꮚࠋ

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29 ➨ ➨ 4 ❶ ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡬ࡢ࣍ࣝࣔࣥฎ⌮࡟ࡼࡿ㐣᤼༸ㄏ㉳ࡢヨࡳ 4–1. ⫼ᬒ ࡇࢀࡲ࡛ࡢ◊✲࡟ࡼࡾ㸪స〇ࡋࡓ 2 ✀ࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࢆ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡬ᢞ୚ࡍࡿࡇ ࡜࡛㸪ձᢠయ⏘⏕ࡀㄏᑟࡉࢀࡿࡇ࡜ (➨ 2 ❶)㸪ղ⏘⏕ࡉࢀࡓᢠయࡣ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ༸㏱ ᫂ᖏ࡟≉␗ⓗ࡟⤖ྜࡍࡿࡇ࡜ (➨ 3 ❶) ࡀ♧ࡉࢀࡓࠋḟ࡞ࡿẁ㝵࡜ࡋ࡚㸪ྜᡂ࣌ࣉࢳ ࢻࡀᐇ㝿࡟࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡟ᑐࡋ࡚⦾Ṫᢚไຠᯝࢆ᭷ࡋ㸪㑊ዷ࣡ࢡࢳࣥ࡜ࡋ࡚ࡢຠᯝࢆⓎ ᥹ࡍࡿ࠿ࢆ᳨ドࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋࡑࡢࡓࡵ࡟ࡣච␿ಶయࢆ஺㓄ࡉࡏ㸪⏘Ꮚࡢ᭷↓ࡸᩘ ࢆṇᖖ࡜ẚ㍑ࡍࡿࡇ࡜ࡀ⪃࠼ࡽࢀࡿࠋࡋ࠿ࡋ㸪ࡇࢀࡲ࡛࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢ⦾Ṫࢆヨࡳࡓ᪥ ᮏᅜෆࡢ◊✲࡟࠾࠸࡚ࡣ㸪㞤㞝㛫࡛ࡢඹ㣗࠸ࡀ㉳ࡇࡿ࡞࡝࡛ᮍࡔ⦾Ṫ࡟ᡂຌࡋࡓ஦౛ ࡣሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸࡞࠸ (⎔ቃ┬ࡸࢇࡤࡿ㔝⏕⏕≀ಖㆤࢭࣥࢱ࣮ ୰⏣Ặ ⚾ಙ)ࠋ⮬↛஺ 㓄࡟ࡼࡿ࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢ㣫⫱ୗ⦾Ṫࢆヨ㦂ࡍࡿ࡟ࡣ㸪㞤㞝ࡀ⮬⏤࡟⾜ື࡛ࡁࡿẚ㍑ⓗᗈ ࠸㣫⫱ࢫ࣮࣌ࢫࡸ㣫⫱⎔ቃࡀồࡵࡽࢀࡿࡀ㸪኱つᶍ࡞タഛᢞ㈨ࢆᚲせ࡜࡞ࡿࠋࡲࡓ㸪 ಶయࡢ┦ᛶࡸᰤ㣴≧ែ࡞࡝࡟ࡼࡗ࡚㸪஺㓄㸪ཷ⢭ࡸ╔ᗋ࡞࡝ࡢྍྰࡀᕥྑࡉࢀࡸࡍ࠸ ࠺࠼㸪⦾Ṫࡢᡂྰࡢ☜ㄆ࡟㈝ࡸࡉࢀࡿ᫬㛫ࡶ㛗ࡃ࡞ࡿࡇ࡜ࡀண᝿ࡉࢀࡿࠋࡑࡇ࡛㸪⦾ Ṫᢚไຠᯝࡢẚ㍑࡟ࡣேᕤᤵ⢭ࡸ⏕Ṫ⣽⬊ࢆ⏝࠸ࡓ⢭Ꮚ༸⤖ྜヨ㦂࡞࡝ࡢ௦᭰ᡭἲ ࡟ࡼࡿ᳨ドࡀ㐺ᙜ࡜⪃࠼ࡽࢀࡓࠋ஺㓄ヨ㦂ࡸேᕤᤵ⢭ヨ㦂ࡢ࠸ࡎࢀࡢ᪉ἲࢆᐇ᪋ࡍࡿ ሙྜ࡛ࡶ㸪≉ᐃእ᮶⏕≀࡟ᣦᐃࡉࢀ࡚࠸ࡿ࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢ⦾Ṫࡣཎ๎⚗Ṇࡉࢀ࡚࠾ࡾ㸪 እ᮶⏕≀ἲࡢࠕ㣫㣴➼࡟㛵ࡍࡿᡭ⥆ࡁࠖࢆ⤒࡚⎔ቃ┬࡟ࡼࡿチྍࡀᚲせ࡜࡞ࡿࡇ࡜࡟ ኚࢃࡾࡣ࡞࠸ (➨ 1 ❶ཧ↷)ࠋ ୖグࡢࡼ࠺࡞஺㓄ヨ㦂ࡢ௦᭰ἲࢆ⏝࠸ࡿࡓࡵ࡟ࡣ㸪࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡢ᤼༸ࡢࢥࣥࢺ࣮ࣟ ࣝࡸຠ⋡ⓗ࡞༸Ꮚࡢ᥇ྲྀ᪉ἲࡢ☜❧ࡀᚲせ࡜࡞ࡿࠋ࣐ࣥࢢ࣮ࢫࡣ஺ᑿ᤼༸ື≀࡛࠶ࡾ㸪 ஺ᑿ่⃭࡟ࡼࡗ࡚ LH ࢧ࣮ࢪࡀ㉳ࡁ㸪᤼༸ࡀㄏ㉳ࡉࢀࡿ (58)ࠋἈ⦖ᮏᓥ࡟࠾ࡅࡿ࣐ ࣥࢢ࣮ࢫࡢ୺࡞ዷፎᮇࡣ4 ᭶࠿ࡽ 9 ᭶࡛࠶ࡾ (ࣆ࣮ࢡࡣ 6 ᭶)㸪ዷፎᮇ㛫ࡀ 7 㐌㛫࡛ ࠶ࡿࡇ࡜࠿ࡽ㸪஺ᑿᮇࡣ2 ᭶࠿ࡽ 7 ᭶㡭࡜⪃࠼ࡽࢀࡿ (58, 62)ࠋື≀ࡢ࣍ࣝࣔࣥฎ⨨

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33 ࣔࣥ (GnRH) ࢆㄪ⠇ࡋ࡚࠸ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀ࡚࠸ࡿ (8, 82)ࠋ௒ᅇࡢ◊✲࡛ࡣ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ ࡢ⦾Ṫᮇࡢ๓ᚋ࡛ᐇ㦂ࢆ⾜ࡗ࡚࠸ࡿࡀ㸪ග่⃭ࡢࢥࣥࢺ࣮ࣟࣝࡣ⾜ࡗ࡚࠸࡞࠸ࡓࡵ㸪 ᑡ࡞࠿ࡽࡎ᪥㛗ࡢᙳ㡪ࡀ࠶ࡗࡓྍ⬟ᛶࡀ⪃࠼ࡽࢀࡓࠋ ᮏ◊✲࡟࠾࠸࡚ࡣ㸪⬊≧༸⬊ࡢ኱ࡁࡉ࡟ࡘ࠸࡚ࡣゝཬࡋ࡞࠿ࡗࡓࡀ㸪᤼༸࡟⮳ࡿ༸ ⬊ࡢ኱ࡁࡉࡀ☜ㄆ࡛ࡁࢀࡤ㸪ᡂ⇍༸⬊ࡢ᭷↓ࡀุᐃ࡛ࡁࡿࡶࡢ࡜ᛮࢃࢀࡿࠋ༸⬊୰ࡢ ༸Ꮚᛶ≧࡜ࡢẚ㍑࡟ࡼࡿ༸⬊ࢫࢸ࣮ࢪࡢ᥎ ࡣྍ⬟࡛࠶ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿࠋࡲࡓ㸪⤌⧊ Ꮫⓗ࡞ᡤぢ࡟ᇶ࡙ࡃ᥎ ࡶ᝿ᐃࡉࢀࡿࡀ㸪⬺Ỉ࡟ࡼࡿ཰⦰ࡸ㛗ᚄ࡛ࡢษࡾฟࡋࢆᛕ㢌 ࡟࠾ࡃᚲせࡀ࠶ࡿࠋ㏻ᖖ㸪Ꮚࡢᩘ࡟ᛂࡌࡓᩘࡢ༸Ꮚࡀ᤼༸ࡉࢀࡿ࡜᝿ᐃࡉࢀࡿࡀ㸪࣐ ࣥࢢ࣮ࢫࡣ୍⭡1−4 㢌㸦ᖹᆒ⣙ 2 㢌㸧ࡢᏊࢆ⏘ࡴࡇ࡜࠿ࡽ (62)㸪ᮏ◊✲࡟࠾࠸࡚ࡣ ༸⬊ࡢ㐣Ⓨ⫱ㄏ㉳࡟ࡼࡾከᩘࡢ༸⬊ࡀ␗ᖖ࡟Ⓨ⫱ࡋࡓ≧ែ࡛࠶ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿࠋࡑࡢ ࡓࡵ㸪≀⌮ⓗᅽ㏕ࡸ༸⬊Ⓨ⫱ࡢ୙㡰࡞࡝࡟ࡼࡾ㸪㏻ᖖࡢ༸⬊ࢫࢸ࣮ࢪ࡜༸⬊ᚄࡢ┦㛵 ࡟ᙜ࡚ࡣࡲࡽ࡞࠸ྍ⬟ᛶࡶ࠶ࡿࡇ࡜࡟ࡶ␃ពࡍ࡭ࡁ࡛࠶ࡿࠋ 4–4–2. ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡟ᑐࡍࡿ㐺ษ࡞᤼༸ㄏ㉳᪉ἲࡢ᳨ウ eCG–hCG ฎ⨨࡟ࡼࡿ᤼༸ㄏ㉳ࡣ㸪ࢿࢥ┠ࡢ஺ᑿ᤼༸ື≀ࢆྵࡴᵝࠎ࡞ື≀✀࡛ࡑ ࡢ᭷⏝ᛶࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠾ࡾ㸪ࡸࡣࡾ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡟࠾࠸࡚ࡶ᭷ຠ࡛࠶ࡿ࡜ᮇᚅࡉࢀࡿࠋ ᮏ◊✲࡛ࡣ᤼༸࡟ࡣ⮳ࡽ࡞࠿ࡗࡓࡶࡢࡢ㸪༸⬊ࡢⓎ⫱࡟ࡣ୍ᐃࡢຠᯝࡀ࠶ࡾ㸪ࡲࡓࡑ ࡢࣉࣟࢺࢥ࣮ࣝ࡟ࡣᨵၿࡢవᆅࡀぢฟࡉࢀࡓࠋලయⓗ࡟ࡣ㸪hCG ࡢస⏝᫬㛫ࡢᘏ㛗 ࡜⦾Ṫ࡟㐺ࡋࡓ᪥㛗ࡢ⪃៖࡛࠶ࡿࠋhCG ࡢస⏝᫬㛫࡟ࡘ࠸࡚ࡣ㸪ࣇ࢙ࣞࢵࢺࡸ࢖࢚ ࢿࢥ࡟࠾ࡅࡿ◊✲⤖ᯝࢆཧ⪃࡟㸪25–36 ᫬㛫⛬ᗘ࡛ヨ㦂ࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࡶࡢᛮࢃࢀ ࡿࠋࡲࡓ㸪2016 ᖺ 9 ᭶࡟ప⏝㔞ࡢ࣍ࣝࣔࣥࢆฎ⨨ࡋࡓணഛᐇ㦂࡟࠾࠸࡚㸪ዷፎಶయ ࡢ๭ྜࡀẚ㍑ⓗ㧗࠿ࡗࡓࡇ࡜࠿ࡽ㸪⦾Ṫᮇ–⦾Ṫᚋᮇࡢᤕ⋓ಶయࢆ⏝࠸ࡓᐇ㦂ࡣ⌧ᐇ ⓗ࡛ࡣ࡞ࡃ㸪⦾Ṫᮇ๓࡟ᤕ⋓ࡋࡓಶయࡢ౑⏝ࡀ㐺ᙜ࡛࠶ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿࠋࡑࡢ᪉ἲ࡜ ࡋ࡚ࡣ㸪ග่⃭⟶⌮ୗ࡛ࡢ⦾Ṫᮇ๓ࡢᐇ㦂ࡸ⦾Ṫᮇࡲ࡛㣫⫱⥔ᣢࡋ࡚ᐇ㦂࡟౪ࡍࡿሙ ྜࡀ᝿㉳ࡉࢀࡿࠋeCG ࠾ࡼࡧ hCG ࡢᢞ୚㔞࡟㛵ࡋ࡚ࡣ㸪௒ᅇࡢ⤖ᯝ࡜௚ࡢ㣗⫗┠ື

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(40)

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37

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(43)

38

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(45)

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(46)

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(47)

42 2. ྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࢆᢞ୚ࡋࡓಶయࡢ༸ᕢ࠿ࡽ㸪⤌⧊യᐖࢆ♧၀ࡍࡿᡤぢࡣᚓࡽࢀ࡞࠿ ࡗࡓࠋ⌧ẁ㝵࡛ࡣ㸪௒ᅇస〇ࡋࡓྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡀ⤌⧊യᐖࢆࡶࡓࡽࡉ࡞࠸࠿༑ศ ࡞ᢠయࡀ⏘⏕ࡉࢀ࡚࠸࡞࠸࠿୙࡛᫂࠶ࡿࡀ㸪๪స⏝ࡢ୙ᅾࡣື≀⚟♴ୖ㔜せ࡛࠶ ࡿࠋస〇ࡋࡓ2 ✀ࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢᢞ୚࡟ࡼࡗ࡚⏘⏕ࡉࢀࡓᢠయࡣ㸪࣐ࣥࢢ࣮ࢫ ࡢ༸㏱᫂ᖏࢆㄆ㆑ࡋ⤖ྜࡍࡿࡇ࡜ࡀ♧ࡉࢀࡓࠋࡑࡢ཯ᛂࡣPeptide A ࢆᢞ୚ࡋࡓ A ⩌࡛ࡼࡾ㧗ᗘ࡛࠶ࡾ㸪㏱᫂ᖏࢆᙧᡂࡍࡿ඲ࢫࢸ࣮ࢪࡢ༸⬊࡛཯ᛂࡀㄆࡵࡽࢀ ࡓࠋ྾཰ヨ㦂ࡢ⤖ᯝࡼࡾ㸪௒ᅇ☜ㄆࡉࢀࡓᢠཎᢠయ཯ᛂࡣྜᡂ࣌ࣉࢳࢻ࠾ࡼࡧ࣐ ࣥࢢ࣮ࢫ༸㏱᫂ᖏ࡟≉␗ⓗ࡛࠶ࡗࡓࠋࡘࡲࡾ㸪እᅉᛶࡢྜᡂ࣌ࣉࢳࢻࡢᢞ୚࡟ࡼ ࡾ㸪ෆᅉᛶࡢ༸㏱᫂ᖏࢆ≉␗ⓗ࡟ᶆⓗ࡜ࡍࡿᢠయࡀ⏘⏕ࡉࢀࡓࡇ࡜ࡀ♧၀ࡉࢀࡓࠋ ࡲࡓ㸪㠀≉␗ⓗ࡟IgG ࢆㄆ㆑ࡍࡿࣉࣟࢸ࢖ࣥ A ࢆ⏝࠸ࡓච␿ᰁⰍ࡟࠾࠸࡚㸪࣐ ࣥࢢ࣮ࢫ༸㏱᫂ᖏ࡬ࡢ཯ᛂࡣ᫂ࡽ࠿࡟ᙉㄪࡉࢀࡓࡇ࡜࠿ࡽ㸪୍ḟᢠయ࡜ࡋ࡚⏝࠸ ࡓච␿⾑Ύࡣ㧗࠸≉␗ᛶࢆ᭷ࡋ࡚࠸ࡿ࡜᥎ᐹࡉࢀࡓࠋ(➨ 3 ❶)

3. ࣐ࣥࢢ࣮ࢫ࡟ᑐࡍࡿ eCG (50–200 IU)㸪hCG (50–200 IU) ࡢᢞ୚࡟ࡼࡾ㸪༸⬊ ࡢ㢧ⴭ࡞Ⓨ⫱ࡀ☜ㄆࡉࢀࡓࡶࡢࡢ㸪᤼༸ࢆ♧ࡍᡤぢࡣᚓࡽࢀ࡞࠿ࡗࡓࠋࡑࡢせᅉ

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