氏 名 ・（本籍） 渡邉 伸之助（東京都）
専 攻 分 野 の 名 称 博士(医学)
学 位 記 番 号 医博甲第 1037 号 学 位 授 与 の 日 付 令和 3 年 3 月 22 日
学 位 授 与 の 要 件 学位規則第 4 条第 1 項該当 研 究 科 ・ 専 攻 医学系研究科医学専攻 学 位 論 文 題 名
論 文 審 査 委 員 （主査） 後藤 明輝 教授
論 文 審 査 委 員 （副査） 寺田 幸弘 教授 大森 泰文 教授
Rapid HER2 cytologic fluorescence in situ hybridization for breast cancer using noncontact alternating current electric field mixing
(
電 界 非 接 触 攪 拌 技 術 を 用 い た 乳 癌HER2
に お け る 迅 速 細 胞 診Fluorescence In Situ Hybridization (Rapid CytoFISH))
Akita University
学 位 論 文 内 容 要 旨
Rapid HER2 cytologic fluorescence in situ hybridization for breast cancer using noncontact alternating current electric field mixing
電 界 非 接 触 攪 拌 技 術 を 用 い た 乳 癌
HER2
に お け る 迅 速 細 胞 診Fluorescence In Situ Hybridization (Rapid CytoFISH)
申 請 者 氏 名 渡 邉 伸 之 助
研 究 目 的
乳 癌 診 療 に お い て ，
Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2)
遺 伝 子 増 幅 の 有 無 は ト ラ ス ツ ズ マ ブ 感 受 性 や 予 後 因 子 と し て 重 要 で あ り ，HER2
ス コ ア の よ り 正 確 な 評 価 が 重 要 で あ る ．HER2
遺 伝 子 増 幅 の 評 価 は 病 理 組 織 の 免 疫 組 織 化 学 染 色(Immunohistochemistry
， 免 疫 染 色)
お よ び 遺 伝 子 プ ロ ー ブ 法(in situ hybridization ; ISH)
で 判 定 さ れ る が ， 特 にISH
はDNA
プ ロ ー ブ の 反 応 に 長 時 間 を 要 し ，ほ ぼ 全 て の 病 院 で 外 注 検 査 に 頼 っ て い る た め ，進 行 癌 患 者 の 治 療 導 入 の 遅 れ に 繋 が る 可 能 性 が あ る ．当 科 で は 電 界 非 接 触 攪 拌 技 術 を 用 い 、通 常 は 診 断 ま で 数 時 間 を 要 す る 免 疫 染 色 を 約20
分 ま で 短 縮 を 可 能 に し た 迅 速 免 疫 染 色 装 置 を 開 発 し ， こ の 装 置 を 応 用 し て 乳 癌HER2
や 肺 癌anaplastic lymphoma kinase (ALK)
融 合 遺 伝 子 に お け るISH
のDNA
プ ロ ー ブ 反 応 時 間 短 縮 に 成 功 し た ． 本 研 究 で は ， 従 来 ， 組 織 検 体 で 評 価 さ れ て い たISH
を 細 胞 診 検 体 に 応 用 し ， よ り 簡 便 ・ 迅 速 に 乳 癌HER2
を 評 価 可 能 な プ ロ ト コ ー ル の 開 発 お よ び 臨 床 的 有 用 性 を 検 討 す る こ と を 目 的 と し た ．研 究 方 法
本 研 究 で は ， 現 在 本 邦 で 体 外 診 断 用 医 薬 品 と し て 認 め ら れ て い る
Histra-HER2 fluorescence ISH (FISH) kit (In Vitro Diagnostics, HOKOH, Shizuoka, Japan)
を 使 用 し ， 熱 処 理 ， プ ロ テ ア ー ゼ 処 理 ，DNA
変 性 ， ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン ， 洗 浄 処 理 ， の 工 程 は 従 来 法 通 り に 遵 守 し て プ ロ ト コ ー ル 作 成 を 検 討 し た ． 細 胞 診 検 体 で は ， 従 来 のFISH
プ ロ ト コ ー ル で は 良 好 な シ グ ナ ル を 得 ら れ ず ， 熱 処 理 の 前 に カ ル ノ ア 液 と10%ホ ル マ リ ン 液 で 再 固 定 す る こ と に よ り 良 好 な シ グ ナ ル を 得 る
こ と が で き た ． さ ら に ， 従 来14〜 18
時 間 要 し たDNA
プ ロ ー ブ の ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン 時 間 を ， 電 界 非 接 触 攪 拌 技 術 を 用 い て3
時 間 ま で 短 縮 さ せ る こ と で 迅 速 細 胞 診FISH
の プ ロ ト コ ー ル を 完 成 さ せ た ．2018
年10
月 か ら2020
年3
月 ま で ， 秋 田 大 学 医 学 部 附 属 病 院 ， 秋 田 厚 生 医 療 セ ン タ ー ， 市 立 秋 田 総 合 病 院 ， 秋 田 赤 十 字 病 院 で 施 行 さ れ た 乳 癌 針 生 検 検 体93
例 ， 手 術 検 体
50
例(計 143
例)を 対 象 と し た ． 針 生 検 検 体 は BD CytoRich
systems Red (BD Franklin Lakes, NJ, USA)
に 洗 浄 液 状 細 胞 診 と し て 保 存 し ， 手 術 検 体 は95%エ タ ノ ー ル に 捺 印 も し く は 塗 抹 細 胞 診 と し て ス ラ イ ド ガ ラ ス に 保 存
し た ． な お ， 全 ホ ル マ リ ン 固 定 パ ラ フ ィ ン 包 埋 （FFPE） 組 織 で 免 疫 染 色 お よ び ISH(Dual color ISH, FFPE-tissue DISH)が 施 行 さ れ て お り ， HER2 0/1+， 2+，
3+の い ず れ か の 判 定 を 得 て い る ． 全 細 胞 診 検 体 に つ い て ， 従 来 通 り に ハ イ ブ リ ダ
イ ゼ ー シ ョ ン 時 間 を 確 保 し た 方 法(Cyto FISH)， 電 界 非 接 触 攪 拌 技 術 を 用 い て ハ
イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン 時 間 を 短 縮 し た 方 法(Rapid-Cyto FISH)
の 両 者 でFISH
を 施 行 し ，ASCO(American Society of Clinical Oncology)/CAP(College of
American Pathologists) HER2
検 査 ガ イ ド ラ イ ン に 準 拠 し た 判 定 基 準 に 従 っ てHER2/centromeric probe for chromosome (CEP) 17
シ グ ナ ル 比 を 求 め た ． 結 果 はJMP IN V.14.2.0
を 用 い て ， ダ ネ ッ ト 多 重 比 較 検 定 で 統 計 学 的 に 比 較 し ， コ ー エ ン の κ 係 数 を 用 い て 従 来 法 と の 一 致 率 を 評 価 し た ．研 究 成 績
143
検 体 のHER2
免 疫 染 色 強 度 ス コ ア の 内 訳 は ，(0) 49
例 ，(1+) 49
例 ，(2+) 31
例 ，(3+) 14
例 だ っ た ．Cyto FISH
お よ びRapid-Cyto FISH
に お い て ， 適 正 に シ グ ナ ル が 検 出 さ れ た 検 体 は 両 者 と も139/143(97.2%)
で あ り ，HER2
判 定 は 全 て 一 致 し て い た ．FFPE-tissue DISH
と 比 較 し ，全 検 体 のHER2
判 定 の 一 致 率 は95.1%
(κ 係 数 =0.771, 95% Confidence Interval (CI) 0.614-0.927)
で あ り ， 中 等 度 か ら 良 好 な 一 致 を 示 し た ． な お ， 手 術 検 体 に お け るHER2 ISH
判 定 の 一 致 率 は92.0%
(κ 係 数 =0.633, 95% CI 0.312-0.955)
で ， 針 生 検 検 体 に お け るHER2 ISH
判 定 の 一 致 率 は96.8% (κ 係 数 =0.847, 95% CI 0.687-1.000)で あ っ た ．ま た ， HER2/CEP17
シ グ ナ ル 比 に お い て も ，FFPE-tissue DISH
と 比 較 し ，Cyto FISH
お よ びRapid- Cyto FISH
両 方 に お い て 良 好 な 一 致 が 見 ら れ た(p>0.05)．
結 論
乳 癌 に お い て ， 細 胞 診 を 使 用 し た
