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平成24年 7 月20日
新型アデノウイルス（53，54 および 56 型）に対する イムノクロマトキットの性能評価
国立感染症研究所感染症情報センター
花岡 希 小長谷昌未 谷口 清州 岡部 信彦 藤本 嗣人
（平成 24 年 2 月 13 日受付）
（平成 24 年 3 月 22 日受理）
Key words : adenovirus, immunochromatography, endemic keratoconjunctivitis, rapid diagnosis
序 文
イムノクロマト法を利用したベッドサイドでの迅速 診断は様々な感染症において利用される簡便かつ有力 な病原体診断ツールである．アデノウイルス（Ad）感 染症においても既に多種類のイムノクロマトキットが 販売され評価されている
１）．流行性角結膜炎（EKC）
は感染症法によって 5 類感染症定点把握疾患に定めら れており，全国約 600 カ所の眼科定点から毎週症例数 が報告されている．これまで EKC の原因ウイルスと しては主にアデノウイルス D 種の 8 型，19 型および 37 型が主要原因型として検出されてきた
２）．しかし近 年，アデノウイルス 53 型
３）および 54 型
４）が新型 Ad 型 として，日本国内で流行している
２）．また，新型 Ad56 型も EKC の流行を引き起こしている
５）．しかしこれ までに新型 Ad に対するイムノクロマトキットの評価 は行われていない．
そこで，本研究では，これら近年報告されている新 型アデノウイルスを既存のイムノクロマトキットで検 出できるかを検討したので報告する．
材料と方法
イムノクロマトキットとしてクイックナビ・アデノ
（デンカ生研）を用いた．
使用した Ad 株は，我々で保管，管理している Ad 5 型標準株（実験コントロール），Ad53 分離株，Ad54 分離株，Ad56 分離株を使用した．各株はアデノウイ ルスレファレンス活動の一環としてゲノム解析行い，
増殖及び維持管理されているものである．各型のス トックウイルス液の TCID
50! mL を Read and Muench 法
６）で算定した．また，アデノウイルスコピー数算出
法
７）を用いてウイルスのコピー数を求めた．キット付 属の検体浮遊液を用いて，ウイルス原液を 10 段階（×
10
−1〜10
−5）および 2 倍段階希釈（×2，〜×2,048）し た Ad 希釈液を用いて，2 回の測定結果を基に最少検 出感度を測定し，確認のため再度最少検出感度付近で，
希釈系列を作製し，感度測定を行った．キットへの希 釈 Ad 液適下量は 100 μ L とした．適下後指示書に従 い 8 分間で陽性バンドの有無を観察した．
結果と考察
試験した Ad 型すべてがクイックナビ・アデノで検 出できた．最少検出感度を TCID
50，コピー数でまと めて Table 1に示した．本試験での最少感度は TCID
50では Ad54 での 1.8×10
0TCID
50! 100μL であり，コピー 数としては 7.1×10
3copy! 100μL であった．またコン トロールとして使用した Ad5 では，2.3×10
2TCID
50! 100μL を示し概ねこれまでの報告
８）と大きな違いを示 さなかった．Ad53，Ad56 も高感度で検出すること ができた（Table 1）．また，最少感度でも試験開始か ら数分ではっきりした反応バンドが確認でき，最少感 度以下の試験結果では，8 分以上反応させてもバンド は確認できなかった．
以上の結果より，クイックナビ・アデノは新型 Ad を高感度で既存の型と遜色なく検出できることが明ら かとなり，EKC の検査に使用可能と考えられる．
Ad53，Ad54，Ad56 等 の 新 型 Ad は 既 存 の Ad の 組換え型であることが示唆されている．近年みられる Ad53，Ad54 および Ad56 型による EKC の流行をイ ムノクロマトキットで検出できることが明らかになっ た．本試験では 1 種類のイムノクロマトキットでのみ 新型 Ad への感受性を比較したが，今後は他のキット でも同様の検討が必要であろう．
短 報
別刷請求先：（〒162―8640）東京都新宿区戸山 1―23―1
国立感染症研究所 花岡 希
花岡 希 他 426
感染症学雑誌 第86巻 第 4 号 Table 1 Detection limit with QuickNavi Adeno.
Adenovirus type TCID50/100μL Copy number/100μL
5 2.3×102 3.8×105
53 7.1×100 2.0×105
54 1.8×100 7.1×103
56 5.7×101 1.9×105
謝辞：本研究遂行にあたりご助力頂いた当研究室実習生 木村愛氏に感謝いたします．また，本研究は平成 23 年 度厚生労働科学研究費補助金（新型インフルエンザ等新 興・再興感染症研究事業）国際的な感染症情報の収集，分 析，提供機能およびわが国の感染症サーベイランスシステ ムの改善・強化に関する研究（主任 谷口清州，分担研究 者：藤本嗣人）で実施された．
文 献
1
）藤本嗣人，花岡 希：アデノウイルス感染症の 病 原 体 迅 速 診 断．小 児 科 2011；52（13）：
1923―9.
2
）藤 本 嗣 人，花 岡 希，岡 部 信 彦，渡 部 香，五 十嵐郁美，長谷川道弥，他：新型アデノウイル ス 53 型と 54 型の同定について．病原体検出情 報 2010；31：236―7.
3
）Walsh MP, Chintakuntlawar A, Robinson CM, Madisch I, Harrach B, Hudson NR, et al.：Evi-
dence of molecular evolution driven by recombi- nation events influencing tropism in a novel hu- man adenovirus that causes epidemic kerato- conjunctivitis. PLoS One 2009；34（6）：e5635.
4
）Ishiko H, Shimada Y, Konno T, Hayashi A, Oh- guchi T, Tagawa Y, et al.：Novel human ade- novirus causing nosocomial epidemic keratocon- junctivitis. J Clin Microbiol 2008；46（6）：
2002―8.
5
）吉冨秀亮，前田詠里子，石橋哲也，世良暢之，鬼 木隆夫，花岡 希，他：眼疾患，角結膜炎の患 者からのアデノウイルス 56 型の検出―福岡県．
病原体検出情報 2011；32：148.
6
）Reed LJ, Muench H：A simple method of esti- mating fifty percent endpoints. Am. J. Hygiene 1938；27：493―7.
7
）Fujimoto T, Konagaya M, Enomoto M, Tsuboi K, Hashimoto K, Taniguchi K, et al.：Novel high-speed real-time PCR method (Hyper-PCR) : results from its application to adenovirus diag- nosis. Jpn J Infect Dis 2010；63（1）：31―5.
8
