Toll-like receptor 3 increases allergic and irritant contact dermatitis.

論 文 内 容 の 要 旨 論 文 提 出 者 氏 名 中 村 直 美 論 文 題 F 1 Toll-likeRecep(０ｒ３１ｎｃｒｅａｓｅｓＡｌｌｅｒｇｉｃａｎｄｌｒｒｉｉａｎ（ContactDermatitis 論 文 内 容 の 要 旨 自然免疫は病原体の初期認識に重要な役割を果たし、病原体固有に存在する構造（Path-0gen-associatedmoIecularpatterns：PAMPS）を認識する。ｌＩｉｈ乳類では、Ｔｏｌｌ様受容体 （Toll-likereceptor：TLR）がPAMPSを認識する主な受容体であることが知られている。 TLRはこれまでに少なくとも１１種類同定されており、マクロファージや樹状細胞､頼粒球、 ＮＫ細胞、Ｔ細胞、線維芽細胞、上皮細胞などに発現している。ＴＬＲ３は、ウイルスの２本鎖 RNAやＰｏｌｙ(I:C)を外因性リガンドとして認識し、ｌ型インターフェロン、炎症性サイトカ インを産生し免疫反応を誘導する。近年ＴＬＲ３はウイルス感染だけでなく、アレルギー炎症 や 創 傷 治 癒 へ の 関 与 も 報 告 さ れ て い る 。 ア レ ル ギ ー 性 接 触 皮 膚 炎 は 、 代 表 的 な ア レ ル ギ ー 性炎症性皮膚疾患であり、これまでにTLR2、ＴＬＲ４の関与は報告されているが、ＴＬＲ３の役割 は未だ解明されていない。そこで著者は、初めにアレルギー性接触皮膚炎へのＴＬＲ３の関与 を 検 討 し 、 さ ら に 非 抗 原 特 異 的 反 応 で あ る 刺 激 性 接 触 皮 膚 炎 に お け る 関 与 も 調 べ 、 炎 症 性 皮膚疾患におけるＴＬＲ３シグナルの果たす役割の解明を行うことを目的とした。 まず、アレルギー性接触皮膚炎にＴＬＲ３が関与するかを調べるため、ｗｉｌｄtype、〃r3 Knockout(KO)、〃〃Transgenic(Tg)マウスを用い、アレルギー性接触皮膚炎のマウスモ デルである接触過敏反応（contacthypersensitivity：CHS）を誘導した。方法としてはマ ウスの腹部にハブテンである２，４，６−lrinitro-l-chlorobenzene(TKCB)を２５/皿塗布し感作 させ、７日後に耳介前後に２０/４１の１％ＴＭＢを塗布し、ＣＨＳを惹起した。誘導された炎症の 評 価 と し て 、 ２ ４ 時 間 後 に 耳 介 の 厚 さ の 変 化 を 計 測 し 、 皮 膚 組 織 切 片 を 作 製 し て 病 理 組 織 学 的に検討を行い、浸潤した炎症細胞数をカウントした。その結果、ｗｉｌｄｔｙｐｅマウスに比 べ、７/ｒ３ＫＯマウスでは、有意に耳介の腫脹、炎症細胞の浸潤や浮腫が抑制されており、 〃〃Ｔｇマウスでは、それらの増強がみられ、ＴＬＲ３のＣＨＳへの関与が明らかとなった。 次 に 、 ア レ ル ギ ー 性 接 触 皮 膚 炎 は 、 感 作 相 、 惹 起 相 か ら 成 り 立 つ が 、 そ の ど ち ら の 相 に TLR3が関与するのかを調べるため、ＴKCBにて感作したｗｉｌｄｔｙｐｅマウス、刀/･３ＫＯマウス から採取したリンパ球を、それぞれ、未感作の〃用ＫＯマウス、ｗｉｌｄｔｙｐｅマウスに尾静注 し、養子移入を行った。コントロールとして、感作したｗｉｌｄｔｙｐｅマウスのリンパ球を、 未感作ｗｉｌｄｔｙｐｅマウスに養子移入した。その後直ちに、耳介前後に２０/皿の１％TKCBを 塗 布 し 、 ２ ４ 時 間 後 に 耳 介 の 厚 さ の 変 化 を 計 測 、 組 織 採 取 し 、 炎 症 反 応 を 評 価 し た 。 コ ン ト ロ ー ル 群 と 比 岐 し 、 感 作 し た 〃 ﾉ ･ ３ Ｋ Ｏ マ ウ ス か ら 採 取 し た リ ン パ 球 を 、 未 感 作 の ｗ ｉ ｌ ｄ typeマウスに養子移入した群では、有意差が見られなかったが、感作したｗｉｌｄｔｙｐｅマウ ス か ら 採 取 し た リ ン パ 球 を 未 感 作 の 〃 ｒ ３ Ｋ Ｏ マ ウ ス に 養 子 移 入 し た 群 で は 、 有 意 に 耳 介 の 腫脹、炎症細胞の浸潤、浮腫が抑制されており、惹起相でのＴＬＲ３の関与が示唆された。 また、抗原非特異的な刺激性接触皮府炎におけるＴＬＲ３の役割を検討するため、ｗｉｌｄ type，〃ｒ３ＫＯ，ノＺｒ３Ｔｇマウスに２％クロトンオイルを２０/』ｌ耳介前後に塗布し、611寺間後 に 耳 介 の 厚 さ の 変 化 を 計 測 し 、 病 理 組 織 学 的 に 検 討 を 行 っ た と こ ろ 、 ア レ ル ギ ー 性 接 触 皮 膚炎と同様に、ｗｉｌｄｔｙｐｅマウスに比べ、刀ｒ３ＫＯマウスでは、有意に耳介の腫脹、炎症細 胞 の 浸 潤 や 浮 腫 が 抑 制 さ れ て お り 、 〃 〃 Ｔ ｇ マ ウ ス で は 、 そ れ ら の 増 強 が み ら れ 、 抗 原 非 特 異 的 な 炎 症 に も Ｔ Ｌ Ｒ ３ が 関 与 す る こ と が 明 ら か と な っ た 。 さらに、ＴＬＲ３がアレルギー性および刺激性接触皮膚炎を増強する機序を解明するため、各 々の細胞におけるＴＬＲ３の機能を検討した。まず、アレルギー性接触皮膚炎において主要な 役割を担う抗原提示細胞である樹状細胞や、炎症を増強するリンパ球の機能をｗｉｌｄtype， 刀ｒ３ＫＯマウスを用い調べた。樹状細胞の遊走能を調べるため、マウスの腹部にIluo-resceinisothiocyanate(FITC)を塗布し、これを貧食し所属リンパ節へ遊走した樹状細胞 を採取し、細胞数や割合をフローサイトメトリーにて解析した。ｗｉｌｄtype，刀ｒ３ＫＯマウ ス間で、CDllc＋、ＣＤ86＋、ＭＨＣclassⅡ＋樹状細胞数および割合はともに有意差を認めなかっ た。樹状細胞の抗原提示能は、ｗｉｌｄtype、〃ｒ３ＫＯマウスの樹状細胞(BALB/ｃ由来)を、 CFSEで染色したallogeneicなリンパ球(C57BL/６マウス由来)と共に培養するmixedleu-kocytereactionを行い、増殖したリンパ球をフローサイトリーにて解析した｡ｗｉｌｄtype、 〃 ｒ ３ Ｋ Ｏ 間 で 、 リ ン パ 球 の 増 殖 に 有 意 差 を 認 め な か っ た 。 同 様 に 、 リ ン パ 球 の 増 殖 能 は 、 CFSEにて標識したＷｉｌｄtype，〃ｒ３ＫＯマウスのリンパ球をallogeneicな樹状細胞で刺激 し増殖させ解析したが、両者に有意差は見られなかった。以上より、ＴＬＲ３は樹状細胞、リ ン パ 球 の 機 能 に は 関 与 し な い こ と が わ か っ た 。 keratinocyteやfibroblastもＴＬＲ３を発現し、種々のサイトカイン、ケモカインを産生 す る こ と に よ り 、 炎 症 細 胞 を 浸 潤 さ せ 、 炎 症 の 増 強 に 重 要 な 役 割 を 果 た す 。 そ こ で サ イ ト カ イ ン 、 ケ モ カ イ ン の 関 与 を 解 析 す る た め 、 接 触 皮 購 炎 を 起 こ し た マ ウ ス 耳 介 組 織 や 、 polｙ(I:C)で刺激したkeratinocyte，Iibroblastの初代培養細胞よりＲＫＡを採取し、アレ ルギー性および刺激性接触皮膚炎に重要とされる、TKF−α、ＩＬ−ｌａ、ＩＬ−ｌβ、IP-lO、 RANTES，ＫＣをリアルタイム定量ＰＣＲにて測定した。その結果、IP-lOとRAKTESがｗｉｌｄ typeマウスに比べ、７/ｒ３ＫＯマウスでは産生が抑制されていた。 今回我々の研究では、ＴＬＲ３はアレルギー性および刺激性接触皮噸炎を増強することが明 らかとなり、その分子学的機序の一因として、keralinocyleやfibroblastからのIP-lOや RANTESなどのケモカイン産生冗進による可能性が示唆された。