カラム選択のてびき
YMCカラム一覧(HPLC、SFC)
10,11
USP一覧
12
カラム選択の手引き(バイオクロマトグラフィー)
13
分離モードによる比較
14〜16
ペプチドおよびタンパク質の逆相分離例
17〜20
カラム選択の手引き(低分子有機化合物)
21
アプリケーション1
(脂溶性ビタミン、水溶性ビタミン)
22
アプリケーション2
(水溶性ビタミン、有機酸、アミノ酸)
23
逆相カラム選択ガイド
24
主要市販逆相カラムの分離選択性比較
24
YMC カラム一覧(HPLC, SFC)
製品名
CLASS No.
USP
(nm)
細孔径
(μm)
粒子径
C% シラノール
処理
使用pH
レンジ
掲載ページ
分析カラム 分取カラム
逆 相 系 ODS YMC-Triart C18 L1 12 1.9, 3, 5 20 あり 1.0 〜 12.0 68 〜 71 166 C18 ExRS 8 1.9, 3, 5 25 72, 73 Meteoric Core C18 8 2.7 7 1.5 〜 10.0 84 〜 87 – C18 BIO 16 2.7 5 Pro シリーズ Pro C18 12 2, 3, 5, 10 16 2.0 〜 8.0 94 〜 99 167 Hydrosphere C18 12 2, 3, 5 12 94, 95, 100, 101 Pro C18 RS 8 3, 5 22 1.0 〜 10.0 102, 103 YMC-Pack ODS-A 12 3, 5, 10, 15 17 2.0 〜 7.5 104, 105 168 20 5, 10 12 30 3, 5, 10 7 ODS-AM 12 3, 5 17 106, 107 170 ODS-AQ 12 3, 5, 10, 15 14 108, 109 169 20 5, 10 10 ODS-AL 12 5 17 なし 110, 111 170 J'sphere ODS-H80 8 4 22 あり 1.0 〜 9.0 112, 113 170 ODS-M80 8 4 14 2.0 〜 7.5 ODS-L80 8 4 9 YMC-Pack PolymerC18 – – 6, 10 – – 2.0 〜 13.0 114, 115 – ODS 以外 YMC-Triart C8 L7 12 1.9, 3, 5 17 あり 1.0 〜 12.0 74, 75 166 Phenyl L11 12 1.9, 3, 5 17 1.0 〜 10.0 76, 77 PFP L43 12 1.9, 3, 5 15 なし 1.0 〜 8.0 78 〜 80 Meteoric Core C8 L7 8 2.7 5 あり 1.5 〜 9.0 84 〜 87 – Pro シリーズ Pro C8 L7 12 3, 5 10 2.0 〜 7.5 120, 121 171 Pro C4 L26 12 3, 5 7 YMC-Pack C8 L7 12 3, 5, 10, 15 10 122, 123 172 20 5, 10 7 30 5, 10 4 C4 L26 12 3, 5, 10 7 124, 125 173 20 5, 10 5 30 5, 10, 15 3 TMS L13 12 3, 5, 10 4 126, 127 174 Ph L11 12 3, 5, 10 9 128, 129 174 CN L10 12 3, 5, 10 7 130, 131 175 30 5 3 PROTEIN-RP L26 20 5 4 – 1.5 〜 7.5 132, 133 175 YMCbasic L7 20 3, 5 7 あり 2.0 〜 7.5 134 – YMC Carotenoid L62 – 3, 5 – – 2.0 〜 7.5 135 175製品名
CLASS No.
USP
(nm)
細孔径
(μm)
粒子径
C% シラノール
処理
使用pH
レンジ
掲載ページ
分析カラム 分取カラム
順 相 系 YMC-Triart Diol-HILIC L20 12 1.9, 3, 5 12 – 2.0 〜 10.0 81, 82 – YMC-Pack SIL L3 12 3, 5, 10, 15, 20 – 2.0 〜 7.5 140, 141 176 SIL-06 6 5, 10 Diol-NP L20 6 5 144, 145 177 12 5 CN L10 12 3, 5, 10 142, 143 175 30 5 Polyamine Ⅱ – 12 5 146, 147 177 NH2 L8 12 5 148 177 イ オ ン 交 換 YMC-BioPro QA – porous 5 – – 2.0 〜 12.0 42 〜 45 – SP porous 5QA-F porousnon- 3, 5
SP-F porousnon- 3, 5 サ イ ズ 排 除 シ リ カ 基 材 YMC-Pack Diol-60 L20 L33 L59 6 3, 5 – – 5.0 〜 7.5 54 〜 56 178 Diol-120 12 3, 5 Diol-200 20 3, 5 Diol-300 30 3, 5 YMC-GPC – 5 10 – – – – 57, 58 ポ リ マ ー 基 材 10 10 50 10 100 10 MIX 10 キ ラ ル 分 離 CHIRAL ART Amylose-SA L99 – 3, 5 – – 2.0 〜 9.0 26 〜 33 26 〜 33 Cellulose-SB – – 3, 5 Cellulose-SC – 3, 5 Amylose-C L51 – 3, 5 – Cellulose-C L40 – 3, 5 YMC CHIRAL NEA (R), (S) – 30 5 – – 2.0 〜 6.5 34, 35 – α-CD BR 12 5 3.5 〜 6.5 38, 39 – β-CD BR 12 5 γ-CD BR 12 5 分 析 用 脂 肪 酸 YMC-Pack FA&ラベル化試薬 – – – – – – 154 〜 157 – YMC-Pack CA&ラベル化試薬 – – S F C キ ラ ル 分 離 Alcyon SFC CSP Amylose-SA – – 3, 5 – – – 184 〜 189 184 〜 189 Cellulose-SB – 3, 5 Cellulose-SC – 3, 5 Amylose-C – 3, 5 Cellulose-C – 3, 5 ア キ ラ ル 分 離 Alcyon SFC Triart C18 – 12 5 20 あり – Triart Diol 12 5 12 なし Triart PFP 12 5 15 なし CN 12 5 – あり SIL 12 5 – キ ラ ル 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤
2
イ オ ン 交 換 カ ラ ム・ 担 体3
S E C 用 カ ラ ム4
有 機 シ リ カ ハ イ ブ リ ッ ド カ ラ ム5
コ ア シ ェ ル カ ラ ム6
汎 用 分 析 用 カ ラ ム O D S7
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 逆 相 系8
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 順 相 系9
ナ ノ・ マ イ ク ロ L C 用 カ ラ ム10
脂 肪 酸 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤11
分 取 用 カ ラ ム12
S F C 用 カ ラ ム13
バ ル ク 充 填 剤14
サ ン プ ル 前 処 理 ・ ア ク セ サ リ ー15
分 取 シ ス テ ム16
フ ロ ー 反 応 シ ス テ ム・ 周 辺 機 器17
受 託 精 製18
取 扱 製 品19
イ ン フ ォ メ ー シ ョ ン20
カ ラ ム 選 択 の て び き1
USP一覧
USP
CLASS
No.
USP Description
官能基
YMC製品
掲載ページ
L1 Octadecyl silane chemically bonded to porous or non-porous silica or ceramic micro-particles, 1.5 to 10 µm in
diameter, or a monolithic rod. C18
YMC-Triart C18 68〜71
YMC-Triart C18 ExRS 72, 73
Meteoric Core C18 84〜87
Meteoric Core C18 BIO 84〜87
YMC-UltraHT Pro C18 94, 95 YMC-UltraHT Hydrosphere C18 94, 95 YMC-Pack Pro C18 96〜99 Hydrosphere C18 100, 101 YMC-Pack Pro C18 RS 102, 103 YMC-Pack ODS-A 104, 105 YMC-Pack ODS-AM 106, 107 YMC-Pack ODS-AQ 108, 109 YMC-Pack ODS-AL 110, 111 J'sphere ODS-H80 112, 113 J'sphere ODS-M80 J'sphere ODS-L80
L3 Porous silica particles, 1.5 to 10 µm in diameter, or a monolithic silica rod. SIL YMC-Pack SILYMC-Pack SIL-06 140, 141
L7 Octylsilane chemically bonded to totally or superficially porous silica particles, 1.5 to 10 µm in diameter, or a
monolithic silica rod. C8
YMC-Triart C8 74, 75
Meteoric Core C8 84〜87
YMC-Pack Pro C8 120, 121
YMC-Pack C8 122, 123
YMCbasic 134
L8 An essentially monomolecular layer of aminopropylsilane chemically bonded to totally porous silica gel support, 1.5
to 10 µm in diameter, or a monolithic silica rod. NH2 YMC-Pack NH2 148
L10 1.5 to 10 µm in diameter, or a monolithic silica rod.Nitrile groups chemically bonded to porous silica particles, CN YMC-Pack CN 130, 131
L11 1.5 to 10 µm in diameter, or a monolithic silica rod.Phenyl groups chemically bonded to porous silica particles, Phenyl YMC-Triart Phenyl 76, 77
YMC-Pack Ph 128, 129
L13 Trimethylsilane chemically bonded to porous silica particles, 3 to 10 µm in diameter. C1 YMC-Pack TMS 126, 127
L20 Dihydroxypropane groups chemically bonded to porous silica or hybrid particles, 1.5 to 10 µm in diameter, or a
monolithic silica rod. Diol
YMC-Triart Diol-HILIC 81, 82 YMC-Pack Diol-NP 144, 145 YMC-Pack Diol-60 54〜56 YMC-Pack Diol-120 YMC-Pack Diol-200 YMC-Pack Diol-300
L26 Butyl silane chemically bonded to totally porous or superficially porous silica rod.silica particles, 1.5 to 10
µm in diameter. C4
YMC-Pack Pro C4 120, 121
YMC-Pack C4 124, 125
YMC-Pack PROTEIN-RP 132, 133
L27 Porous silica particles, 30 to 50 µm in diameter. SIL YMC-Pack SIL-HG 194, 195
L33
Packing having the capacity to separate dextrans by molecular size over a range of 4,000 to 500,000 Da. It is spherical, silica-based, and processed to provide pH stability. Diol YMC-Pack Diol-60 54〜56 YMC-Pack Diol-120 YMC-Pack Diol-200 YMC-Pack Diol-300
L40 Cellulose tris-3,5-dimethylphenylcarbamate coated porous silica particles, 3 to 20 µm in diameter.
セルロース誘導体 (Cellulose
tris-3,5-dimethylphenylcarbamate coated)
CHIRAL ART Cellulose-C 26〜33
L43 Pentafluorophenyl groups chemically bonded to silica particles by a propyl spacer, 1.5 to 10 µm in diameter. PFP YMC-Triart PFP 78〜80
L51 Amylose tris-3,5-dimethylphenylcarbamate-coated, porous, spherical, silica partilces, 3 to 10 µm in diameter.
アミロース誘導体 (Amylose
tris-3,5-dimethylphenylcarbamate coated)
CHIRAL ART Amylose-C 26〜33
L59
Packing for the size-exclusion separations of proteins (separation by molecular weight) over the range of 5 to 7,000 kDa. The packing is spherical 1.5 to 10 µm, silica or hybrid packing with a hydrophilic coating.
Diol YMC-Pack Diol-60 54〜56 YMC-Pack Diol-120 YMC-Pack Diol-200 YMC-Pack Diol-300
L62 C30 silane bonded phase on a fully porous spherical silica, 3 to 15 µm in diameter. C30 YMC Carotenoid 135
L99 Amylose tris-(3,5-dimethylphenylcarbamate), immobilized on porous, spherical, silica partilces, 3 to 5 µm in
diameter.
アミロース誘導体 (Amylose
tris-3,5-dimethylphenylcarbamate coated)
CHIRAL ART Amylose-SA 26〜33
カ ラ ム 選 択 の て び き
1
糖類の分析や分子量測定に
高極性化合物の分析に
サイズ排除
HILIC
糖類
YMC-Pack Diol
YMC-Pack Polyamine Ⅱ
YMC-Triart Diol-HILIC
電荷の違いによる分離に
逆相では保持されにくい高極性化合物の分析に
イオン交換
HILIC
タンパク質
ペプチド
YMC-BioPro
サイズ排除
YMC-Pack Diol
YMC-Triart Diol-HILIC
ODS カラムのファーストチョイス
超高速分析を実現するコアシェルカラム
分子サイズによる分離に
高温条件との組み合わせにより分子量 3 万程度まで適応
分子量 3 万程度まで適応するコアシェルカラム
高分子量の化合物の分離に
耐酸性に優れたタンパク質・ペプチド分析専用カラム
分子量 5,000以下
分子量 5,000以上
逆相
YMC-Triart C18
Meteoric Core C18
YMC-Triart C18
Meteoric Core C18 BIO
Wide-Pore Columns
YMC-Pack PROTEIN-RP
電荷の違いによる分離に
高極性化合物の分析に
イオン交換
HILIC
核酸
YMC-BioPro
サイズ排除
YMC-Pack Diol
YMC-Triart Diol-HILIC
YMC-Pack Polyamine Ⅱ
水 100% 移動相で使用可能
分子サイズによる分離に
水 100% 移動相で使用可能
高分子量の化合物の分析に
核酸塩基
ヌクレオシド
ヌクレオチド
核酸塩基
ヌクレオシド
ヌクレオチド
オリゴヌクレオチド
オリゴヌクレオチド
核酸
オリゴヌクレオチド
核酸
逆相
YMC-Triart C18
Hydrosphere C18
YMC-Triart C18
Hydrosphere C18
Wide-Pore Columns
水 100% 移動相で使用可能
P.54∼56
P.146,147
P.81,82
P.42∼45
P.81,82
P.68∼71
P.84∼87
P.54∼56
P.68∼71
P.84∼87
P.17
P.132,133
P.42∼45
P.81,82
P.146,147
P.42∼45
P.94,95,100,101
P.54∼56
P.42∼45
P.94,95,100,101
P.17
P.42∼45
P.94,95,100,101
逆相
YMC-Triart C18
Hydrosphere C18
カラム選択の手引き(バイオクロマトグラフィー)
キ ラ ル 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤2
イ オ ン 交 換 カ ラ ム・ 担 体3
S E C 用 カ ラ ム4
有 機 シ リ カ ハ イ ブ リ ッ ド カ ラ ム5
コ ア シ ェ ル カ ラ ム6
汎 用 分 析 用 カ ラ ム O D S7
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 逆 相 系8
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 順 相 系9
ナ ノ・ マ イ ク ロ L C 用 カ ラ ム10
脂 肪 酸 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤11
分 取 用 カ ラ ム12
S F C 用 カ ラ ム13
バ ル ク 充 填 剤14
サ ン プ ル 前 処 理 ・ ア ク セ サ リ ー15
分 取 シ ス テ ム16
フ ロ ー 反 応 シ ス テ ム・ 周 辺 機 器17
受 託 精 製18
取 扱 製 品19
イ ン フ ォ メ ー シ ョ ン20
カ ラ ム 選 択 の て び き1
分離モードによる比較
0 10 20 30 min Transferrin Albumin N080313E IgG mAU 10 0 YMC-BioPro QA 5 μm, 50×4.6 mmI.D. 0 10 20 30 40 50 60 min N080616A IgG Albumin Transferrin mAU 150 100 0 50YMC-Pack Diol-300 + Diol-200 5 μm, 300×8.0 mmI.D. ×2
Eluent : A)20 mM Tris-HCl(pH 8.6)
B)20 mM Tris-HCl(pH 8.6)containing 0.5 M NaCl 0-30%B(0-15 min), 30-100%B(15-30 min)
Flow rate :0.5 mL/min
Temperature :25℃ Detection :UV at 280 nm
Injection :20 μL(100 μL/mL)
Eluent :0.1 M KH2PO4-K2HPO4(pH 7.0)containing 0.2 M NaCl
Flow rate :0.5 mL/min
Temperature :ambient(25℃) Detection :UV at 280 nm Injection :20 μL(100 μL/mL)
ヒト血清をイオン交換モードおよびサイズ排除(SEC)モードで分離しています。イオン交換モードでは電荷の違いにより分離されるのに対して、サイ
ズ排除モードでは分子量の違いにより分離されるので、両者分離パターンが異なっています。
タンパク質の分離例
ヒト血清中のタンパク質
Human serum
イオン交換
サイズ排除
min 2 4 6 8 10 12 14 16 0 NaN3Mouse monoclonal IgG1 (Anti-human IgG4) mAU 0 1 2 3 4 5 P080220A
YMC-BioPro QA-F 5 μm, 30×4.6 mmI.D.
0 5 10 15 20 25 30 min
NaN3
Mouse monoclonal IgG1 (Anti-human IgG4) 0 10 20 30 40 mAU P080530A
YMC-Pack Diol-200 5 μm, 300×4.6 mmI.D.
Eluent : A)20 mM Tris-HCl(pH 8.1)
B)20 mM Tris-HCl(pH 8.1)containing 0.5 M NaCl 10-25%B(0-18 min)
Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :25℃ Detection :UV at 220 nm
Injection :10 μL(0.1 mg/mL)
Eluent :0.1 M KH2PO4-K2HPO4(pH 7.0)
Flow rate :0.17 mL/min
Temperature :ambient(25℃) Detection :UV at 220 nm
Injection :10 μL(0.05 mg/mL)
抗ヒトモノクローナル抗体の分離例です。サイズ排除モードではほぼ単一ピークになっているのに対して、イオン交換モードではアイソフォームに由来す
ると考えられる複数のピークが認められます。
モノクローナル抗体
Mouse monoclonal IgG1 anti-human IgG4(Purified by DEAE chromatography, containing NaN
3)
1. Rabbit IgG 2. Mouse IgG Fc fragment
min mAU 0 5 10 15 20 0 25 50 R080623D 1 2
YMC-Pack Diol-200 5 μm, 300×8.0 mmI.D.
30 35 40 25 20 15 10 5 0 min R080619B
Mouse IgG Fc fragment
mAU 0 10 20 30 YMC-Pack C4(30 nm)5 μm, 150×4.6 mmI.D.
Eluent :0.1 M KH2PO4-K2HPO4(pH 6.9)containing 0.2 M NaCl
Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :ambient(27℃) Detection :UV at 220 nm Injection :5 μL(0.5 mg/mL) Eluent : A)water/TFA(100/0.1) B)acetonitrile/TFA(100/0.1) 25-45%B(0-40 min)
Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :37℃ Detection :UV at 220 nm
Injection :5 μL(1.0 mg/mL)
サイズ排除カラムはIgG全分子とそのフラグメントのように分子量に差があるものの分離に有用です。一方、逆相カラムでは分子量が大きいIgG全分子
の分離は困難ですが、Fcフラグメントのような分子量10万以下のフラグメントの分離には有効です。
IgG Fcフラグメント
Mouse IgG Fc fragment(Prepared from normal serum)
イオン交換
サイズ排除
サイズ排除
逆 相
カ ラ ム 選 択 の て び き1
0 10 20 30 40 50 60 min N080422B * 0 10 20 mAU YMC-BioPro QA 5 μm, 50×4.6 mmI.D.
Eluent : A)20 mM Tris-HCl(pH 8.6)
B)20 mM Tris-HCl(pH 8.6)containing 0.5 M NaCl 0-15%B(0-30 min), 15-60%B(30-60 min)
Flow rate :0.5 mL/min
Temperature :25℃ Detection :UV at 220 nm
Injection :20 μL
タンパク質の分離例
BSAのペプチドマッピング
Tryptic digest of BSA
イオン交換
0 10 20 30 40 50 60 min 0 30 50 mAU 60 40 20 10 N080623L 105 102 103 104 MW 5 4 3 2 1 101 *YMC-Pack Diol-120 + Diol-60 5 μm, 500×8.0 mmI.D. ×2
BSA(MW 66,000)のトリプシン消化物を3種類の分離モードで分離しています。サイズ排除のクロマトグラムから、この試料中には、分子量が100前
後から20,000程度のものまで幅広い分子量のフラグメントが存在していることが分かります。一方、イオン交換や逆相は、各成分の構造の違いによる分
離能に優れ、非常に多くのピークが検出できています。
サイズ排除
Eluent : 0.1 M KH2PO4-K2HPO4(pH 7.0) containing 0.2 M NaCl/acetonitrile(70/30)Flow rate :0.7 mL/min
Temperature :ambient(25℃) Detection :UV at 220 nm Injection :5 μL 0 10 20 30 40 50 60 min 0 20 30 mAU 10 40 N080318B * * undigested BSA YMCbasic 5 μm, 150×2.0 mmI.D.
逆 相
Eluent : A)water/TFA(100/0.1) B)acetonitrile/TFA(100/0.1) 5-35%B(0-50 min), 35-45%B(50-55 min), 45%B(55-60 min)Flow rate :0.2 mL/min
Temperature :37℃ Detection :UV at 220 nm Injection :1 μL タンパク質・ペプチド 較正曲線 1. Myoglobin (MW 17,000) 2. Insulin (Bovine) (MW 5,700) 3. Neurotensin (MW 1,672) 4. Tetraglycine (MW 246) 5. Glycine (MW 75) 20 min 10 0 G910607A YMC-Pack ODS-A(12 nm)5 μm, 150×4.6 mmI.D.
糖鎖の分離例
ピリジルアミノ(PA)化糖
Pyridylamino(PA)-Sugar chains
逆 相
20 min 10 0 G910620A YMC-Pack Polyamine Ⅱ 5 μm, 150×4.6 mmI.D.糖タンパク質などの糖鎖解析で多用されるピリジルアミノ(PA)化糖の逆相、HILIC両モードでの分離例を示しています。このようなモードが異なる分
離法を組み合わせる二次元HPLCは糖鎖解析に有用です。
HILIC
Eluent :methanol/20 mM NH4H2PO4(5/95)Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :37℃
Detection :FLS at Ex. 320 nm, Em. 400 nm
Injection :2 μL(3.3 pmol/mL)
Sample : PA-Sugar Chain Series,
manufactured by TAKARA BIO INC.
Eluent :methanol/20 mM NH4H2PO4(80/20)
Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :37℃
Detection :FLS at Ex. 320 nm, Em. 400 nm
Injection :3 μL(3.3 pmol/mL)
Sample : PA-Sugar Chain Series,
manufactured by TAKARA BIO INC.
キ ラ ル 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤
2
イ オ ン 交 換 カ ラ ム・ 担 体3
S E C 用 カ ラ ム4
有 機 シ リ カ ハ イ ブ リ ッ ド カ ラ ム5
コ ア シ ェ ル カ ラ ム6
汎 用 分 析 用 カ ラ ム O D S7
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 逆 相 系8
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 順 相 系9
ナ ノ・ マ イ ク ロ L C 用 カ ラ ム10
脂 肪 酸 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤11
分 取 用 カ ラ ム12
S F C 用 カ ラ ム13
バ ル ク 充 填 剤14
サ ン プ ル 前 処 理 ・ ア ク セ サ リ ー15
分 取 シ ス テ ム16
フ ロ ー 反 応 シ ス テ ム・ 周 辺 機 器17
受 託 精 製18
取 扱 製 品19
イ ン フ ォ メ ー シ ョ ン20
カ ラ ム 選 択 の て び き1
分離モードによる比較
核酸の分離例
N080212G 0 10 20 30 min 0 50 100 mAUYMC-BioPro QA-F 5 μm, 100×4.6 mmI.D.
DNAフラグメント
1 kb DNA ladder(75-12,216 bp)
イオン交換
Eluent : A)20 mM Tris-HCl(pH 8.1)containing 0.7 M NaCl
B)20 mM Tris-HCl(pH 8.1)containing 1.0 M NaCl 0-100%B(0-30 min)
Flow rate :0.5 mL/min
Temperature :25℃ Detection :UV at 260 nm
Injection :20 μL
DNAフラグメントの分離例です。高分離能を有するYMC-BioPro QA-Fの100 mm長カラムは、核酸の高分離分析に最適です。
YMC-BioPro QA-F 5 μm, 100×4.6 mmI.D.
0 5 10 15 20 25 min
N080610F
Plasmid pBR322 Hae III digest (8-587 bp)
Plasmid pBR322 (4,361 bp) 10 20 30 40 mAU 0
プラスミドpBR322の制限酵素Hae Ⅲ分解物
Plasmid pBR322 restriction fragments
イオン交換
Eluent : A)20 mM Tris-HCl(pH 8.1)
B)20 mM Tris-HCl(pH 8.1)containing 1.0 M NaCl 70-85%B(0-20 min), 85%B(20-25 min)
Flow rate :0.5 mL/min
Temperature :35℃ Detection :UV at 260 nm
Injection :10 μL
YMC-Pack Diol-300 + Diol-200 5 μm, 500×8.0 mmI.D. ×2
P080617A
Plasmid pBR322 Hae III digest (8-587 bp) Plasmid pBR322 (4,361 bp) 10 20 30 40 mAU 0 0 10 20 30 40 50 min
サイズ排除
Eluent :0.1 M KH2PO4-K2HPO4(pH 7.0)containing 0.2 M NaCl
Flow rate :0.7 mL/min
Temperature :ambient(25℃) Detection :UV at 260 nm
Injection :10 μL
プラスミドDNAの制限酵素断片で、8-587 bpのサイズのフラグメントをイオン交換モードおよびサイズ排除(SEC)モードで分離しています。個々の
フラグメントの同定など高い分離能が必要な場合はイオン交換カラムが適しています。一方、分子量による分離にはサイズ排除カラムが有用です。
5’-pUGG AGU GUG ACA AUG GUG UUG-3’ (21 nt, MW 6890.1)
5’-pUGG AGU GUG ACA AUG GUG UUG U-3’ (22 nt, MW 7196.3)
mAU 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min 0 10 20 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min 5 0
UV
MS
MIC (m/z 1721.5, m/z 1798.1) 21 nt22 nt 21 nt22 ntCourtesy of M.Yamada, SHIMADZU CORPORATION YMC-Triart C18 3 μm, 150×2.0 mmI.D.
5’-pUGG AGU GUG ACA AUG GUG UUG-3’ (21 nt, MW 6890.1)
5’-pUGG AGU GUG ACA AUG GUG UUG U-3’ (22 nt, MW 7196.3)
mAU 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min 0 10 20 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min 5 0
UV
MS
MIC (m/z 1721.5, m/z 1798.1) 21 nt22 nt 21 nt22 ntCourtesy of M.Yamada, SHIMADZU CORPORATION YMC-Triart C18 3 μm, 150×2.0 mmI.D.
オリゴヌクレオチド(miRNA)
Oligonucleotide(miRNA)
Eluent : A)10 mM DBAA*(pH 7.5)B)10 mM DBAA*(pH 7.5)/acetonitrile(50/50) 62-72%B(0-20 min)
Flow rate :0.2 mL/min
Temperature :30℃
Detection :UV at 260 nm and ESI-negative mode
Injection :4 μL (5 nmol/mL)
Instrument : LC)Shimadzu Prominence MS)Shimadzu LCMS2020 * di-n-butylamine-acetic acid
オリゴヌクレオチドの逆相LC/MS分離例です。親水性化合物
の分離にも適したTriart C18はオリゴヌクレオチドの分離にも
適しており、鎖長1残基違いのオリゴヌクレオチドの分離も可能
です。
逆 相
F120202A カ ラ ム 選 択 の て び き1
ペプチドおよびタンパク質の逆相分離例
逆相カラム選択の目安
タンパク質およびペプチドを分離する際、分離対象化合物の分子量を目安にカラムの選
定を行います。右表に示すように、分子量が約5,000以下の小さいペプチドに関しては
C18, 12 nmが、約5,000から20,000までのタンパク質およびペプチドに関してはC8,
20 nmが、約20,000以上のタンパク質に関してはC4, 30 nmがそれぞれ適したカラムに
なります。また、分子量のほかに化合物の疎水性の大きさ、官能基の種類などが分離に影
響をおよぼすこともありますので、◎のカラムで目的の分離が得られない場合は表中の矢
印を参考に最適化を行ってください。また、表中のC18、C8、C4のほかに選択性の異なる
PROTEIN-RPおよびCNタイプなどもあります。
核酸、オリゴヌクレオチドなどを分離する場合もタンパク質、ペプチドに準じて分子量に
応じたカラムを選択します。
ペプチド(MW 574 - 3,465)の分離例
分子量5,000程度以下のペプチド分離には、低分子化合物に用いられるようなC18, 12 nmなどの汎用カラムが適しています。特に、塩基性ペプチドの
場合には高度にエンドキャッピングされたTriart C18やProシリーズカラムが有効です。上図に示すように、他社ODSカラムのBrand E2は塩基性ペプ
チドである1、7のピークがテイリングしています。それに対しHydrosphere C18は良好な分離とピーク形状を示しています。
Eluent : A)water/TFA(100/0.1)
B)acetonitrile/TFA(100/0.1) 20-40%B(0-15 min), 40%B(15-20 min)
Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :37℃ Detection :UV at 220 nm
1. BAM-12P (MW 1,425)
2. [D-Ala2,Met5]-Enkephalinamide (MW 587)
3. α-Endorphin (MW 1,746)
4. Met-Enkephalin (MW 574)
5. [D-Ala2,Met5]-Enkephalin (MW 588)
6. γ-Endorphin (MW 1,899) 7. β-Endorphin (MW 3,465) Hydrosphere C18(12 nm)5 μm, 150×4.6 mmI.D. Hydrosphere C18(12 nm)5 μm, 150×4.6 mmI.D. 1 2 3 4 5 6 7 0 5 10 15 20 min A000308B
優れたピーク形状
Brand E2(10 nm)5 μm, 150×4.6 mmI.D. (親水性化合物分離用ODS) Brand E2(10 nm)5 μm, 150×4.6 mmI.D. (親水性化合物分離用ODS) 1 2 3 4 5 6 7 0 5 10 15 20 min A000313Dペプチドおよびタンパク質(MW 4,300 - 17,000)の分離例
分子量4,300から17,000のペプチドおよびタンパク質について、細孔径と官能基が各々異なるカラムによる分離の比較を示します。上図に示すように
充填剤の細孔径および官能基のどちらかが最適化されていない場合でも、
ピークのブロードニングや化合物同士または不純物ピークとの分離が悪くな
るなどの現象が生じています。一方、上の「逆相カラム選択の目安」の表に示すように、目的の化合物の分子量に対して最適なカラム(C8, 20 nm)を
Column : YMC-Pack 5 μm 150×4.6 mmI.D. Eluent : A)water/TFA(100/0.1) B)acetonitrile/TFA(100/0.1) 25-60%B(0-20 min)Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :37℃ Detection :UV at 220 nm 1. Cytochrome c (MW 12,400) 2. Insulin (Bovine) (MW 5,700) 3. Amyloid β-protein (MW 4,300) 4. Lysozyme (MW 14,300) 5. α-Lactalbumin (MW 14,100) 6. Myoglobin (MW 17,000) C8, 30 nm C8, 12 nm 04073006.D min 0 5 10 15 04080204.D 1 2 56 4 3 1 2 3 5 6 4 細孔径の違いによる影響
細孔径および官能基の違いによる分離への影響
C4, 20 nm C18, 20 nm min 0 5 10 15 04073002.D 04072910.D 1 2 3 5 6 4 1,2 3 5 6 4 官能基の違いによる影響 1 2 3 5 6 4 min 0 5 10 15 04082002.DC8, 20 nm
最適な細孔径と官能基の組み合わせ試料の
分子量
官能基
細孔径
C18
C8
C4
12 nm
◎
○
○
20 nm
○
◎
○
30 nm
○
○
◎
5,000
20,000
100,000
キ ラ ル 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤2
イ オ ン 交 換 カ ラ ム・ 担 体3
S E C 用 カ ラ ム4
有 機 シ リ カ ハ イ ブ リ ッ ド カ ラ ム5
コ ア シ ェ ル カ ラ ム6
汎 用 分 析 用 カ ラ ム O D S7
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 逆 相 系8
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 順 相 系9
ナ ノ・ マ イ ク ロ L C 用 カ ラ ム10
脂 肪 酸 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤11
分 取 用 カ ラ ム12
S F C 用 カ ラ ム13
バ ル ク 充 填 剤14
サ ン プ ル 前 処 理 ・ ア ク セ サ リ ー15
分 取 シ ス テ ム16
フ ロ ー 反 応 シ ス テ ム・ 周 辺 機 器17
受 託 精 製18
取 扱 製 品19
イ ン フ ォ メ ー シ ョ ン20
カ ラ ム 選 択 の て び き1
ペプチドおよびタンパク質の逆相分離例
タンパク質(MW 66,000 - 96,000)の分離例
C4, 30 nmのカラムを用いた高分子タンパク質の分離において、移動相に使用する有機溶媒の違いが分離パターンにおよぼす影響を示します。タンパク質
やペプチドを分離する際の移動相は、TFAを含むアセトニトリルと水のグラジエント溶出を行うのが一般的です。しかし上図の1、2のピークのように、アセ
トニトリルと水の系では分離困難なものが、2-プロパノールなど種類の異なる有機溶媒を添加することで選択性が変わり分離可能となる場合もあります。
Column : YMC-Pack C4(5 μm, 30 nm) 150×4.6 mmI.D. Eluent : 30-75%B(0-15 min), 75%B(15-20 min)Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :37℃ Detection :UV at 220 nm 1. BSA (MW 66,000) 2. Conalbumin (MW 77,000) 3. Lipoxidase (MW 96,000)
移動相の違いによる分離への影響(C4, 30 nm)
細孔径および官能基の違いによるタンパク質の分離への影響を示します。図に示すように、分離対象化合物の分子量66,000から96,000のような高分子タン
パク質の分離においては、細孔径が小さくなるにつれピークがブロードになり分離が悪くなっています。また、充填剤の官能基についてC8、C18と側鎖が長くなり
疎水性が大きくなるにつれて分離が悪くなっています。このように、試料の分子サイズに対して充填剤の細孔径や官能基が適切でない場合、
ピーク形状の悪化
が生じてしまいます。分子量20,000 〜 100,000程度のタンパク質の分離には、細孔径が大きく官能基の疎水性が小さいC4, 30 nmのカラムが適しています。
1. BSA (MW 66,000) 2. Conalbumin (MW 77,000) 3. Lipoxidase (MW 96,000)細孔径および官能基の違いによる分離への影響
Column :5 μm, 150×4.6 mmI.D. Eluent : A)water/TFA(100/0.1) B)acetonitrile/2-propanol/TFA(50/50/0.1) 30-75%B(0-15 min), 75%B(15-20 min)Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :37℃ Detection :UV at 220 nm 1 3 2 A) water/TFA(100/0.1) B) acetonitrile/TFA(100/0.1) 05011405.D 0 5 10 15 min 3 1 2 A) water/TFA(100/0.1)
B) acetonitrile/2-propanol/TFA(50/50/0.1)
04093007.D 0 5 10 15 min 2-propanol添加
1
2
3
1
2
3
C4, 20 nm
C4, 12 nm
0 4 8 12 16 min 細孔径の違いによる影響 05011714.D 05011711.D1
2
3
C4, 30 nm
04093007.D 12 16 min 8 4 01 2
3
1 2
3
0 4 8 12 16 minC8, 30 nm
C18, 30 nm
官能基の違いによる影響 05011708.D 05011802.D カ ラ ム 選 択 の て び き1
※ 「ペプチド・タンパク質の高温条件での高分離分析」「ペプチド・
タンパク質の分離最適化のポイント」の資料をご用意しており
ます。お問い合わせください。
PC (peak capacity) = 1 + (gradient time/peak width*)
*peak width = 2W
0.5haverage
ペプチド・タンパク質の分離におけるカラム温度の効果
分子量(MW)が異なるペプチド・タンパク質の分離を0.1% TFAを含む移動相条件下にて、40℃と70℃で比較しています。
分子量が大きいペプチド・タンパク質の分離には移動相への2-プロパノールの添加がピーク形状の改善に有効ですが、分子量が10,000以上の場合、
40℃においてはブロードなピークとなっています(condition B 上図)。
40℃と比較して70℃の高温条件では分離選択性の変化やピーク形状の改善により分離度が向上し、この効果は特に分子量が大きい場合に顕著です。一
般的に大きい分子は小さい分子よりも拡散速度が遅いため、ピークがブロードになる傾向があります。高温条件では、移動相の粘度の低下と物質移動速度
の上昇によりピーク形状が改善されます。
ペプチド・タンパク質の分離において、カラム温度の変更は分離度の向上に有効です。
21.8-25.8 MPa (3,160-3,740 psi) 15.8-18.5 MPa (2,290-2,680 psi)40˚C
70˚C
Condition A (MW 500-18,400)
Condition B (MW 14,300-25,700)
mAU 1 2 3 min* 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 0 10 20 30 40 50 60 F111226B 1 2 3 mAU 0 10 20 30 40 50 60 min* 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 F111226A 1 2 3 min* 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 mAU 0 10 20 30 40 50 60 F111228A 1 2 3 4 5 1 2 4, 3 5 F111228B min* 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 mAU 0 10 20 30 40 50 60 1 2 4, 3 5Peak capacity
= 230
Peak capacity
=
279
Peak capacity
= 67
Peak capacity
=
107
37.0-37.5 MPa (5,370-5,440 psi) 27.4-28.4 MPa (3,970-4,120 psi)Column : YMC-Triart C18(1.9 µm, 12 nm), 50×2.0 mmI.D.
Eluent :A)water/TFA(100/0.1)
B) acetonitrile/TFA(100/0.1) - condition A
B) acetonitrile/2-propanol/TFA(50/50/0.1) - condition B
Gradient : 10-80%B(0-5 min) - condition A
30-60%B(0-5 min) - condition B
Flow rate :0.4 mL/min
Detection :UV at 220 nm
Injection : 1 µL(50 µg/mL) - condition A
1 µL(250 µg/mL) - condition B
System :Agilent 1200SL
Analytes MW Peak width 1/2 ½(min)
40℃ 70℃ Condition A 1. Oxytocin 1,007 0.017 0.014 2. Leu-Enkephalin 556 0.015 0.015 3. β-Endorphin 3,465 0.016 4. Insulin 5,733 0.015 5. β-Lactoglobulin A 18,400 0.043 0.030 Condition B 1. Lysozyme 14,300 0.069 0.044 2. α-Chymotrypsinogen 25,700 0.080 0.049 3. β-Lactoglobulin A 18,400 0.080 0.048 キ ラ ル 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤
2
イ オ ン 交 換 カ ラ ム・ 担 体3
S E C 用 カ ラ ム4
有 機 シ リ カ ハ イ ブ リ ッ ド カ ラ ム5
コ ア シ ェ ル カ ラ ム6
汎 用 分 析 用 カ ラ ム O D S7
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 逆 相 系8
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 順 相 系9
ナ ノ・ マ イ ク ロ L C 用 カ ラ ム10
脂 肪 酸 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤11
分 取 用 カ ラ ム12
S F C 用 カ ラ ム13
バ ル ク 充 填 剤14
サ ン プ ル 前 処 理 ・ ア ク セ サ リ ー15
分 取 シ ス テ ム16
フ ロ ー 反 応 シ ス テ ム・ 周 辺 機 器17
受 託 精 製18
取 扱 製 品19
イ ン フ ォ メ ー シ ョ ン20
カ ラ ム 選 択 の て び き1
ペプチドおよびタンパク質の逆相分離例
※ 「ペプチド・タンパク質の高温条件での高分
離分析」「ペプチド・タンパク質の分離最適化
のポイント」の資料をご用意しております。お
問い合わせください。
高温条件およびUHPLC用1.9 µmカラムの連結による分離度の向上
ヘモグロビンのトリプシン消化物の分離においてカラム温度を70℃に上げることで、ピークキャ
パシティ (分離可能ピーク数)が23%向上しています。
粒子径1.9 µm、長さ100 mmのTriart C18カラムを2本連結することで分離は劇的に向上して
います。また、高温条件のため、総カラム長200 mmながら多くのUHPLC用システムの耐圧より
十分に低圧力で分析可能です。このような手法は、ペプチドマッピングなど高分解能が要求され
る分離に有効です。
Column :YMC-Triart C18(1.9 µm, 12 nm)Eluent : A) water/TFA(100/0.1)
B) acetonitrile/TFA(100/0.08) 5-40%B(0-15 min)for a single column 5-40%B(0-30 min)for two coupled columns
Flow rate :0.4 mL/min
Detection :UV at 220 nm
Injection : 10 µL for a single column
20 µL for two coupled columns
Sample :Tryptic digest of Bovine Hemoglobin
System :Agilent 1290
40˚C
70˚C
Peak capacity = 365
15
P110728A15
15
min 0 2 4 6 8 10 12 14 mAU 0 10 20 3030
P110707A30
30
min 0 4 8 12 16 20 24 28 mAU 0 10 20 301.9 µm, 100 × 2.0 mmI.D.
15
min gradient
27.6-28.6 MPa (4,000-4,150 psi)Two coupled
1.9 µm, 100 × 2.0 mmI.D.
30
min gradient
58.1-61.6 MPa (8,430-8,930 psi) P110705A15
0 2 4 6 8 10 12 14 mAU 0 10 20 3015
min1.9 µm, 100 × 2.0 mmI.D.
15
min gradient
46.5-48.5 MPa (6,740-7,030 psi)Peak capacity =
450
Peak capacity =
630
min min 9 19 20 21 9.4 9.8 10.2 10.6 25mAUカラム
2本連結
25mAUカラム選択の手引き(低分子有機化合物)
逆相分析のファーストチョイス
メソッドスクリーニングに有効な 5 種のカラム
順相カラムの標準
シリカゲルとは異なる分離を示す順相カラム
逆相では保持されにくい高極性化合物の分析に
水 100%移動相で使用可能
(イオンペア試薬や緩衝液を用いて保持可能)
ファーストチョイスの ODS
ノンエンドキャップの ODS 構造の近い化合物同士の分離に
ODS とは異なる分離選択性
ビタミン C などの分離に(HILIC モードとして)
多成分一斉分析に有効
P.68∼71
P.60∼80
P.140,141
P.144,145
P.81,82
P.68∼71
P.68∼71
P.110,111
P.135
P.146∼148
P.81,82
トコフェロールなどの分離に
水溶性ビタミン
脂溶性ビタミン
水溶性ビタミン
脂溶性ビタミン
逆相
順相
HILIC
逆相
HILIC
順相
医薬・農薬
代謝物
食品添加物
天然物
その他
ビタミン
YMC-Triart C18
YMC-Triart
(C18, C18 ExRS, C8, PFP, Phenyl)
YMC-Pack SIL, SIL-06
YMC-Pack Diol-NP
逆相
順相
光学異性体
CHIRAL ART
YMC CHIRAL NEA
CHIRAL ART
YMC CHIRAL NEA
YMC-Triart Diol-HILIC
YMC-Triart C18
YMC-Triart C18
YMC-Pack ODS-AL
YMC Carotenoid (C30)
YMC-Pack Polyamine Ⅱ, NH
2YMC-Triart Diol-HILIC
YMC-Pack SIL, SIL-06
YMC-Pack Polyamine Ⅱ
水 100%移動相で使用可能
簡便なラベル化法による高感度分析が可能
順相カラムの標準
有機酸
ラベル化体
逆相
順相
有機酸
脂肪酸
YMC-Triart C18
YMC-Pack FA
YMC-Pack CA
YMC-Pack SIL, SIL-06
分子種分離に
ファーストチョイスの ODS
クラス種分離に
P.140,141
P.146,147
P.68∼71
P.154∼157
P.140,141
P.68∼71
P.140,141
P.144,145
ラベル化体
逆相
順相
リン脂質
YMC-Triart C18
YMC-Triart C18
YMC-Pack SIL, SIL-06
YMC-Pack Diol-NP
HILIC モードでアミノ酸 20 種の一斉分析も可能
水 100%移動相で使用可能
疎水性の高いアミノ酸に有効
逆相
HILIC
アミノ酸
YMC-Triart Diol-HILIC
YMC-Triart C18
Hydrosphere C18
フリーアミノ酸
フリーアミノ酸
高官能基密度型で平面認識能に優れた ODS
カロテノイドの分離に有効
Triart C18 とは異なる分離 構造異性体の分離にも有効
極性化合物、異性体の分離に有効
構造異性体の分離にも有効
順相カラムの標準
構造異性体の分離にも有効
P.68∼71
P.81,82
P.68∼71
P.94,95,100,101
P.72,73
P.135
P.74,75
P.78∼80
P.26∼33
P.140,141
P.26∼33
光学異性体の分離に
光学異性体の分離に
P.26∼33
P.34,35
P.26∼33
P.34,35
逆相
順相
構造異性体
YMC-Triart C18 ExRS
YMC Carotenoid (C30)
YMC-Triart C8
YMC-Triart PFP
CHIRAL ART
YMC-Pack SIL, SIL-06
CHIRAL ART
キ ラ ル 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤2
イ オ ン 交 換 カ ラ ム・ 担 体3
S E C 用 カ ラ ム4
有 機 シ リ カ ハ イ ブ リ ッ ド カ ラ ム5
コ ア シ ェ ル カ ラ ム6
汎 用 分 析 用 カ ラ ム O D S7
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 逆 相 系8
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 順 相 系9
ナ ノ・ マ イ ク ロ L C 用 カ ラ ム10
脂 肪 酸 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤11
分 取 用 カ ラ ム12
S F C 用 カ ラ ム13
バ ル ク 充 填 剤14
サ ン プ ル 前 処 理 ・ ア ク セ サ リ ー15
分 取 シ ス テ ム16
フ ロ ー 反 応 シ ス テ ム・ 周 辺 機 器17
受 託 精 製18
取 扱 製 品19
イ ン フ ォ メ ー シ ョ ン20
カ ラ ム 選 択 の て び き1
アプリケーション1(脂溶性ビタミン、水溶性ビタミン)
逆相水溶性ビタミン
1. Thiamine HCl (Vitamin B1) 2. Pyridoxine HCl (Vitamin B6) 3. Nicotinamide 4. Cyanocobalamin (Vitamin B12)5. L-Ascorbic acid 2-glucoside 6. L-Ascorbic acid (Vitamin C) 7. Erythorbic acid 8. Riboflavin (Vitamin B2) 9. Nicotinic acid 1 7 6 4 5 3 2 min 5 10 15 20 25 mAU 0 5 10 15 20 9 8 0 Column : YMC-Triart C18 (5 μm, 12 nm) 250×4.6 mmI.D.
Eluent : phosphate buffer※/acetonitrile (90/10)
※Dissolve 1.4 g KH2PO4 in 800 mL water → add 26 mL 10% TBA・OH
→ adjust pH 5.2 by 20% H3PO4 → add water to make 1000 mL
Flow rate :0.8 mL/min
Temperature :40℃ Detection :UV at 260 nm Injection :10 μL (5 μg/mL)
イオンペア試薬を用いて、水比率の高い移動相で分離
順相ビタミンE(トコフェロール)
1. 2. 3. 4. 1 2 3 4 0 5 10 15 min α-Tocopherol O HO H3C CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 O HO CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 β-Tocopherol O HO CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 H3C γ-Tocopherol O HO CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 δ-TocopherolColumn : YMC-Pack SIL(5 μm, 12 nm)
250×4.6 mmI.D.
Eluent :n-hexane/2-propanol/acetic acid(1000/6/5)
Flow rate :1.4 mL/min
Temperature:35℃ Detection :FLS at Ex 298 nm, Em 325 nm Injection :20 μL(5〜20 μg/mL)
トコフェロール同族体の分離
逆相ビタミンD
min Cholecalciferol (Vitamin D3) Ergocalciferol (Vitamin D2) 1. 2. 0 10 20 30 mAU 0 5 10 15 1 2Column : YMC-Pack ODS-AL(5 μm, 12 nm)
150×4.6 mmI.D.
Eluent :acetonitrile/water(95/5)
Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :40℃ Detection :UV at 265 nm Injection :10 μL(0.01 mg/mL)
構造の近い化合物同士の分離
(P040819C) (R100315D) (S970702A) HILIC水溶性ビタミン
20 min* 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 mAU 0 50 100 150 1 2 3 4 5 6 8 7 9 10 11 N N N N O O N NH2 O N OH OH OH Cl H N NH N OH OH O O O H N OH NH N H O O O H O O O OH O H O H O H H 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. CN Co+ N N N N N O P N O O -O O N H O O O O O H O O O NH2 N H2 N H2 NH2 N H2 NH2 O H O O O H O H O H H O O O H OH OH OH Caffein Nicotinamide Pyridoxine hydrochloride Riboflavin Orotic acid Erythorbic acid (D-Isoascorbic acid) N OH O Nicotinic acid O O OH O H O H O H H L-Ascorbic acid 2-O-α-D-Glucopyranosyl -L-ascorbic acid (Ascorbic acid 2-glucoside)Thiamine hydrochloride Cyanocobalamin N N N+ S OH NH2 Cl- HCl
Column : YMC-Triart Diol-HILIC (5 μm, 12 nm)
150×3.0 mmI.D.
Eluent : A) acetonitrile/water (90/10) containing 10 mM HCOOH-HCOONH4(pH 3.6)*
B) acetonitrile/water (50/50) containing 10 mM HCOOH-HCOONH4(pH 3.6)*
0-75%B(0-20 min)
Flow rate :0.425 mL/min
Temperature :40℃ Detection :UV at 254 nm
Injection :4 μL (50 μg/mL)
HILICモードで分離
(F121012A)
* pH value of 200 mM buffer solution
カ ラ ム 選 択 の て び き
1
アプリケーション2(水溶性ビタミン、有機酸、アミノ酸)
HILICビタミンC(アスコルビン酸)
min 1 2 3 0 10 20 1. Nicotinic acid 2. Erythorbic acid 3. L-Ascorbic acidColumn : YMC-Pack Polyamine Ⅱ
250×4.6 mmI.D.
Eluent :acetonitrile/50 mM NH4H2PO4(70/30)
Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :30℃ Detection :UV at 250 nm Injection :10 μL (0.05 〜 0.1 mg/mL)
HILICモードで分離
(A970603A) 逆相有機酸
1. Oxalic acid 2. Tartaric acid 3. Glycolic acid 4. Formic acid 5. L-Malic acid 6. Malonic acid 7. Lactic acid 8. Acetic acid 9. Maleic acid 10. Citric acid 11. Succinic acid 12. Fumaric acid 13. Acrylic acid 14. Propionic acid mAU 50 40 30 20 10 0 10 8 6 4 2 0 min 2,3 1 4 5 7 8 9 10 11 6 12 14 13 Column : YMC-Triart C18 (3 μm, 12 nm) 150×3.0 mmI.D.Eluent :20 mM phosphoric acid
Flow rate :0.425 mL/min
Temperature :37℃ Detection :UV at 220 nm Injection :2 μL (0.005 〜 1.5 mg/mL)
水100%移動相で分離
(U111212Q) (F130618A) 逆相アミノ酸
0 2 4 6 min 0 50 100 150 mAU 2 3 1 Standard solution*1(1.10 mg/mL L-Valine, 0.92 mg/mL L-Isoleucine, 1.84 mg/mL L-Leucine)
System suitability
requirement Result
Resolution (2, 3) 1.5 2.68
1 0.02%
2 0.02%
Relative standard deviation of the retention time
(each of the peaks) 1.0%
3 0.02% L-Isoleucine L-Leucine L-Valine C H3 COOH NH2 H CH3 H3C COOH NH2 H C H3 C H3 COOH CH3 NH2 H H 1. 2. 3. Column : YMC-Triart C18 (3 µm, 12 nm) 150×4.6 mmI.D.
Eluent : phosphate buffer(pH 2.8)*2/acetonitrile(97/3)
*2 Dissolve 31.2 g of NaH
2PO4・2H2O in 1000 mL of water and adjust pH 2.8 with H3PO4
Flow rate : 0.9 mL/min(adjust the flow rate so that the retention time of L-Valine is about 2.5 min)
Temperature :40℃ Detection :UV at 210 nm
Injection :20 µL
(The Japanese Pharmacopoeia 17th; Identification)
水比率の高い移動相で、疎水性のアミノ酸を分離(JP条件)
*1 Standard solution was prepared from L-Valine, L-Isoleucine and L-Leucine supplied as a reagent for laboratory use.
HILIC
アミノ酸
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 min Alanine (Ala) Tryptophan (Trp) Leucine (Leu) Phenylalanine (Phe) Isoleucine (Ile) Methionine (Met) Tyrosine (Tyr) Valine (Val) Cysteine HCl (Cys) Proline (Pro) Threonine (Thr)γ-Aminobutyric acid (GABA) Serine (Ser) Glycine (Gly) Asparagine (Asn) Glutamine (Gln)
Citrulline (Cit)
Glutamic acid (Glu)
Histidine (His)
Aspartic acid (Asp) Arginine HCl (Arg)
Lysine (Lys)
Ornithine HCl (Orn) *
*Chloride ion contained in the sample solution **Sodium ion contained in the sample solution
* ** * * 0 pA 100 200 300 400 500
Column : YMC-Triart Diol-HILIC(5 μm, 12 nm)
150×4.6 mmI.D.
Eluent :A)100 mM HCOOH-HCOONH4(pH 3.6)
B)acetonitrile
83-80%B(0-12 min), 80-68%B(12-20 min)
Flow rate :1.0 mL/min
Temperature :40℃
Detection :Corona® CAD®(Charged Aerosol Detector)
Injection :10 μL(0.1 mg/mL)
HILICモードでアミノ酸の一斉分析も可能
Corona and CAD are trademarks of Thermo Fisher Scientific.
(F130618A) (U120210A) キ ラ ル 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤
2
イ オ ン 交 換 カ ラ ム・ 担 体3
S E C 用 カ ラ ム4
有 機 シ リ カ ハ イ ブ リ ッ ド カ ラ ム5
コ ア シ ェ ル カ ラ ム6
汎 用 分 析 用 カ ラ ム O D S7
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 逆 相 系8
汎 用 分 析 用 カ ラ ム 順 相 系9
ナ ノ・ マ イ ク ロ L C 用 カ ラ ム10
脂 肪 酸 分 離 用 カ ラ ム・ 充 填 剤11
分 取 用 カ ラ ム12
S F C 用 カ ラ ム13
バ ル ク 充 填 剤14
サ ン プ ル 前 処 理 ・ ア ク セ サ リ ー15
分 取 シ ス テ ム16
フ ロ ー 反 応 シ ス テ ム・ 周 辺 機 器17
受 託 精 製18
取 扱 製 品19
イ ン フ ォ メ ー シ ョ ン20
カ ラ ム 選 択 の て び き1
逆相カラム選択ガイド
主要市販逆相カラムの分離選択性比較
Triart C18
移動相
温度
構造差が小さい
(異性体)
Triart C18 ExRS
Triart C8
YMC-Pack ODS-AL
YMC Carotenoid
キラル分離用カラム
Triart Phenyl
芳香族化合物(π電子ドナー)
シス-トランス異性体
極性化合物
含ハロゲン
Triart PFP
芳香族化合物(π電子アクセプター)
共役系化合物
特徴的な構造/官能基がある
×
他のC18カラムでは分析が難しい 以下の化合物にも対応可能!! • 保持が小さい • ピーク形状が悪い • 移動相pHに制約あり etc.1st choice!
2nd choice!
幅広い極性の化合物に
1種で対応可能!!
分離
改善
変更
保持
改善
Triart C8
Triart PFP
HILICモード
(Triart Diol-HILIC)
保持が大きすぎる
(ピーク同士が離れすぎている)
保持が小さい
(高極性化合物)
塩基性化合物
L-column ODS L-column2 ODSMightysil RP-18 Inertsil ODS-3 CAPCELL PAK C18 AQ
CAPCELL PAK C18 MGII CAPCELL PAK C18 MGIII
Develosil ODS-MG Develosil C30-UG Develosil ODS-SR TSKgel ODS-80Ts TSKgel ODS-100S Luna C18(2) Gemini C18 Gemini-NX C18 XTerra MS C18 Symmetry C18 Atlantis dC18
Pro C18
Hydrosphere C18
Sunfire C18 Atlantis T3 ZORBAX SB-C18 ZORBAX Extend-C18 Cadenza CD-C18 Unison UK-C18 CAPCELL PAK C18 MG XBridge C18 Hypersil GOLD Eternity-C18Triart C18
Inertsil ODS-4Pro C8
Pro C4
Triart C8
InertSustain C18 CAPCELL PAK C18 ACR0.030 0.050 0.070 0.090 0.110 0.130 0.150 0.170 1.00 3.00 5.00 7.00 9.00 11.00 13.00 15.00 17.00
Triart C18 ExRS
Pro C18 RS
Meteoric
Core C8
Eluent: methanol/water (80/20) [Amylbenzene] methanol/water (30/70) [Caffeine, Benzene]
(S150318A)