学 位 論 文 内 容 の 要 旨
博 士 の 専 攻 分 野 の 名 称 博 士 （ 医 学 ） 氏 名 寺 本 忍
学 位 論 文 題 名
小 児 呼 吸 器 感 染 症 領 域 に お け る 新 興 ウ イ ル ス 感 染 症
～
KI, WU
ポ リ オ ー マ ウ イ ル ス を 中 心 と し て ～
【 背 景 と 目 的 】
ポ リ オ ー マ ウ イ ル ス(PyV)は エ ン ベ ロ ー プ を 持 た な い 二 本 鎖 DNA ウ イ ル ス で ，
2007 年 ， 呼 吸 器 感 染 症 に 罹 患 し た 小 児 の 鼻 咽 頭 ぬ ぐ い 液 か ら KI ポ リ オ ー マ ウ イ ル
ス(KIPyV)と WU ポ リ オ ー マ ウ イ ル ス(WUPyV)が 発 見 さ れ た 。KIPyV と WUPyV は 呼 吸 器 系 の 検 体 か ら 発 見 さ れ た ウ イ ル ス で は あ る が ， 実 際 に 呼 吸 器 感 染 症 の 原 因 病 原 体 と な っ て い る か は 不 明 で あ る 。 本 研 究 で は こ れ を 明 ら か に す る こ と が 第 一 の 目 的 で あ る 。さ ら に ，正 常 肺 組 織 と 肺 腺 癌 組 織 中 のKIPyVとWUPyVの 有 無 を 検 索 す る こ と で 両 ウ イ ル ス が 肺 組 織 に 潜 伏 感 染 し て い る 可 能 性 及 び 肺 腺 癌 の 病 態 に 関 連 し て い る 可 能 性 に つ い て 検 討 す る こ と が 第 二 の 目 的 で あ る 。
【 材 料 と 方 法 】
1. 材 料：(1) 2005年 6月 ～2007 年5月 の 期 間 に 道 内4施 設 の 小 児 科 で 採 取 し た0ヶ
月 ～7歳(平 均19 ヶ 月)の 呼 吸 器 感 染 症 患 者219名（ 男115名 ，女104名)の 鼻 咽 頭 拭 い 液 232 検 体 を 用 い た 。(2) 鼻 咽 頭 拭 い 液 か ら WUPyVが 検 出 さ れ た 1 名 の 患 者 の 急 性 期 及 び 回 復 期 血 清 と 各 年 齢 層(0～41歳)の ヒ ト 血 清 273検 体 を 用 意 し た 。(3) コ ン ト ロ ー ル 群 と し て1～7歳 の 健 常 小 児20 名 の 鼻 咽 頭 拭 い 液20検 体 と ，1ヶ 月 ～10 歳 の 気 道 感 染 症 以 外 の 疾 患 （ 急 性 胃 腸 炎 他 ）27名 の 鼻 咽 頭 拭 い 液27 検 体 の 合 計47 検 体 を 用 意 し た 。(4) 富 山 大 学 附 属 病 院 で 採 取 し た30名 分（ 男20 名 ，女10 名 ，45-77 歳 ， 平 均61.7 歳 ） の 肺 腺 癌 組 織 と そ の 近 傍 の 正 常 肺 組 織 か ら 抽 出 し た DNAを 用 意 し た （ 高 野 康 雄 博 士 よ り 分 与 を 受 け た ）。
2. KIPyV及 びWUPyVの 検 出 ： 呼 吸 器 感 染 症 患 者 の 鼻 咽 頭 拭 い 液 及 び 正 常 肺 組 織 ，
腫 瘍 組 織 か ら 抽 出 さ れ た DNA を 鋳 型 に Real-time PCR 法 を 用 い て KIPyV 及 び
WUPyVの 検 出 を 行 な っ た 。
3. 既 知 の 呼 吸 器 感 染 ウ イ ル ス の 検 出：呼 吸 器 感 染 症 患 者 の 鼻 咽 頭 拭 い 液 か ら 抽 出 し
たDNAあ る い は 合 成 し たcDNAを 鋳 型 と し て ，ヒ ト メ タ ニ ュ ー モ ウ イ ル ス(hMPV)， コ ロ ナ ウ イ ル ス(HCoV)， ヒ ト ボ カ ウ イ ル ス(HBoV)，RSウ イ ル ス(hRSV)， ラ イ ノ ウ イ ル ス(HRV)， エ ン テ ロ ウ イ ル ス(HEV)， ア デ ノ ウ イ ル ス(AdV)，A型 及 びB型 イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス(InfVA, B)， パ ラ イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス 1-3 型(PIV1-3)を
(RT-)PCR法 に て 検 出 し た 。
4. 塩 基 配 列 の 決 定 ： 呼 吸 器 感 染 症 患 者 の 鼻 咽 頭 拭 い 液 か ら 抽 出 さ れ た DNAを 鋳 型
にPCR 法(KIPyVは nested PCR法)を 用 い て 検 出 さ れ た KIPyV及 び WUPyVの 塩 基 配 列 の 決 定 を 行 な い ， 既 知 の 塩 基 配 列 と の 相 同 性 を 検 討 し た 。
5. 蛍 光 抗 体 間 接 法 に よ る IgG 抗 体 価 測 定 ： バ キ ュ ロ ウ イ ル ス 系 を 用 い て KIPyV 及
びWUPyVの VP1蛋 白 を 発 現 さ せ たSf9細 胞 を 用 意 し た 。 【 結 果 】
1. 小 児 呼 吸 器 感 染 症 患 者 の 鼻 咽 頭 拭 い 液 に お け る KIPyV及 びWUPyVの 検 出：呼 吸
出 さ れ た 。コ ン ト ロ ー ル 群 か ら はKIPyV及 び WUPyVは 検 出 さ れ な か っ た 。塩 基 配 列 の 解 析 が 可 能 で あ っ たKIPyV 7検 体 に つ い て は 既 知 のKIPyV株 の 塩 基 配 列 と 完 全 に 一 致 し た 。 塩 基 配 列 の 解 析 が 可 能 で あ っ た WUPyV 13検 体 の う ち 10 検 体 の 塩 基 配 列 は 既 知 のWUPyV株 と 完 全 に 一 致 し ， 残 り の 3検 体 に つ い て は 1bpの 置 換 を 認 め た 。
KIPyV陽 性 患 者 の 年 齢 は3ヶ 月 ～2歳 11ヶ 月 で ，WUPyV陽 性 患 者 の 年 齢 は1ヶ
月 ～4 歳 11 ヶ 月 で あ っ た 。KIPyV 陽 性 患 者 7 名 全 員(100%)と WUPyV 陽 性 患 者 38 名 中 34 名(89.5%)は 入 院 治 療 を 受 け て お り ， 入 院 期 間 は 3～11 日 間(平 均 5.6 日 間) で あ っ た 。KIPyV単 独 陽 性 者 3 名 全 員 ，WUPyV単 独 陽 性 者 20名 中 17名 が 入 院 治 療 を 必 要 と し た 。
KIPyV及 び WUPyV陽 性 患 者 の う ち ， 単 独 陽 性 者 と 他 の ウ イ ル ス と の 重 複 感 染 を
認 め た 者 と の 間 に 臨 床 像 の 有 意 差 は み ら れ な か っ た 。KIPyV及 び WUPyV単 独 陽 性 患 者 と ， 他 の 呼 吸 器 感 染 症 ウ イ ル ス5種 類 （RSV, hMPV, HRV, HBoV, PIV1） の 単 独 陽 性 者 と の 間 に 臨 床 像 の 有 意 差 は み ら れ な か っ た 。
2. 血 清 中 の WUPyVと 抗 WUPyV VP1蛋 白 抗 体 の 検 出 ： 鼻 咽 頭 拭 い 液 か らWUPyV
とRSVが 同 時 検 出 さ れ た 気 管 支 炎 患 者1名 の 急 性 期 血 清 か らWUPyVが 検 出 さ れ た が ，回 復 期 の 血 清 か ら はWUPyVは 検 出 さ れ な か っ た 。急 性 期 の 血 清 中 の 抗 WUPyV
VP1蛋 白 に 対 す るIgG抗 体 価 は<1:10で あ っ た が ，回 復 期 に は1:40と 上 昇 し て い た 。
各 年 齢 層 の ヒ ト 血 清 か ら は 抗WUPyV VP1蛋 白IgG 抗 体 を 測 定 し た が ， 全 て 測 定 感 度 以 下(<1:10)で あ っ た 。
3. 正 常 肺 組 織 と 肺 腺 癌 組 織 か ら の KIPyV及 びWUPyVの 検 出 ： 正 常 肺 組 織30 検 体
中 1 検 体(3.3%)か ら KIPyV が 検 出 さ れ た 。WUPyV は ど の 検 体 か ら も 検 出 さ れ な か っ た 。 肺 腺 癌 組 織30検 体 か ら は KIPyV及 び WUPyVは 検 出 さ れ な か っ た 。
【 考 察 】
1. KIPyV及 びWUPyVと 呼 吸 器 感 染 症 に 関 す る 考 察：本 研 究 で はKIPyV及 びWUPyV
が 小 児 呼 吸 器 疾 患 患 者 か ら 検 出 さ れ る こ と が 判 明 し た が ， 知 り 得 る 限 り ， 本 邦 初 の 報 告 で あ る 。KIPyVの 検 出 頻 度 は3.0%で ， 既 知 の デ ー タ と 一 致 す る 。WUPyVの 検 出 頻 度 は16.4%と 既 知 の デ ー タ よ り も 検 出 頻 度 が 高 い が ， 本 研 究 で はreal-time PCR 法 を 用 い た た め と 考 え ら れ る 。 両 ウ イ ル ス の 塩 基 配 列 は 既 知 の 塩 基 配 列 と 良 く 一 致 し て お り ， 両 ウ イ ル ス の 塩 基 配 列 は 世 界 的 に 良 く 保 た れ て い る こ と を 示 し て い る 。 本 研 究 で は ， コ ン ト ロ ー ル 群47検 体 よ り ， 他 の 呼 吸 器 感 染 症 ウ イ ル ス 12種 類 を 含 め ，KIPyV 及 び WUPyV は 一 切 検 出 さ れ な か っ た 。 従 っ て ，KIPyV 及 び WUPyV が 呼 吸 感 染 症 の 原 因 病 原 体 に な っ て い る 可 能 性 や 臨 床 経 過 に 何 ら か の 影 響 を 与 え て い る 可 能 性 が あ る と 言 え る 。 今 後 ， コ ン ト ロ ー ル 群 の 数 を 増 や し て 検 討 を 加 え る 必 要 が あ る 。
2. 血 清 中 か らWUPyVが 検 出 さ れ た 意 義 ：KIPyV及 びWUPyVが 鼻 咽 頭 拭 い 液 か ら
検 出 さ れ た 場 合 ， こ れ が bystander か 実 際 に 感 染 を 起 こ し て い る か が 問 題 と な る 。
WUPyV が 鼻 咽 頭 拭 い 液 か ら 検 出 さ れ た 患 者 の 急 性 期 血 清 中 か ら WUPyV が 検 出 さ
れ ， 回 復 期 に 抗 体 価 の 上 昇 を 伴 っ た こ と か ら ，WUPyV に つ い て は 実 際 に ヒ ト に 感 染 す る こ と が 示 さ れ た 。
3. 肺 へ の 潜 伏 感 染 と 肺 腺 癌 と の 関 連 に 関 す る 考 察 ：KIPyV が 正 常 肺 組 織 30 検 体 中
1 件 よ り 検 出 さ れ た 。 但 し ，KIPyV の コ ピ ー 数 は 少 な い の で 活 動 的 な 病 変 を 起 こ し
て い る と は 考 え に く く ， 潜 伏 感 染 の 可 能 性 が あ る 。 【 結 論 】
KIPyV及 び WUPyVが 呼 吸 感 染 症 の 原 因 病 原 体 に な っ て い る 可 能 性 あ る い は 臨 床
