熊 本 市 で 分 離 さ れ たSalmonella
Enteritidisの
テ ト ラ サ イ ク リ ン 耐 性plasmid
熊本市保健衛生研究所
本
田
れ
い
子
産業医科大学微生物学教室
谷
口
初
美
(平成6年5月6日 受 付) (平成6年8月2日 受 理)Key words: Salmonella Enteritidis, tetracycline resistance plasmid
要 旨
我 々 は1991年9月 に 熊 本 市 で 発 生 した 集 団 事 例 か ら分 離 したSalmonella choleraesuis subsp.choler-aesuis serovar Enteritidis(S.Enteritidis)が 保 有 す るplasmid上 に テ トラ サ イ ク リ ン(TC)耐 性 遺 伝 子 が 存 在 す る こ と を見 い だ し た.こ のplasmidは 約9kbで,脱 落 しや す く,大 腸 菌 に お い て も形 質 発 現 す る こ とが 出 来 た.そ こで,我 々 は こ のTC耐 性plasmidの 熊 本 市 に お け る侵 淫 状 況 及 び熊 本 以 外 で の 流 行 を知 る た め に,熊 本 市 で 分 離 さ れ た37件 の 散 発 性 下 痢 症 患 者 由来37株,北 九 州,千 葉,福 岡 で 発 生
し た3件 の 食 中 毒 由 来3株 及 び 熊 本 市 で 分 離 さ れ た 液 卵 由 来1株 の 計41株 に つ い て,こ のplasmidを probeと し たhybridization,薬 剤 感 受 性 及 びplasmidprofileを 調 べ た.そ の 結 果,散 発 事 例 由来 の37株 中28株,北 九 州,千 葉 で 発 生 し た 食 中 毒 由 来 株 及 び 液 卵 か ら検 出 さ れ た 株 が このTC耐 性plasmidを 保 有 して い た.こ の こ とか ら,調 査 した1992年7∼9月 に は,こ のTC耐 性plasmidを 保 有 す る株 が 熊 本 市 に お け るS.Enteritidisの 流 行 の 主 流 を 占 め て い た こ とが わ か っ た.ま た,こ のplasmidを 保 有 す る株 が 北 九 州,千 葉 で 発 生 し た 食 中 毒 事 例 か ら も検 出 され た こ と に よ り,こ の 株 の 流 行 が 地 域 的 な もの で な い こ とを,ま た 液 卵 か ら の検 出 が 鶏 卵 との 関 与 を 示 唆 した . 序 文 我 が 国 に お い て,1989年 頃 か ら 急 激 に 増 加 し は じ め た サ ル モ ネ ラ 食 中 毒 は1992年 に な っ て,そ の 発 生 件 数,患 者 数 と も に 病 因 物 質 が 判 明 し た 食 事 毒 の 中 で 首 位 と な っ た1).こ の よ う な サ ル モ ネ ラ 食 中 毒 の 増 加 の 原 因 の 一 つ にS.Enteritidisに よ る も の の 増 加 が 挙 げ ら れ る.S.Enteritidisの 検 出 率 は1987年 に は 全 サ ル モ ネ ラ の6.4%に 過 ぎ な か っ た が,1991年 に は25%を 占 め て い る2). 近 年,こ の よ う なS.Enteritidisの 急 激 な 増 加 に 伴 い,S.Enteritidisの 疫 学 調 査 がphage型 別, plasmidprofile等 の 手 法 を 用 い て 積 極 的 に 実 施 さ れ て い る.国 立 予 防 衛 生 研 究 所 で はphage型 の 全 国 調 査 が 実 施 さ れ て お り,そ の 流 行 の 推 移 が 明 ら か に さ れ て い る2).plasmid profileは 疫 学 マ ー カ ー の 一 つ と し て 各 地 方 衛 生 研 究 所 等 で 調 査 さ れ て い る3)∼5)が,Plasmidと 薬 剤 耐 性 と の 関 係 を 述 べ て い る も の は 少 な い.我 々 は,1991年 に 熊 本 市 で 集 団 発 生 し た 感 染 事 例 か ら 分 離 し たSEnter-itidisのplasmid上 にTC耐 性 遺 伝 子 が 保 持 さ れ て い る こ と を 確 認 し,ま た,そ のTC耐 性Plasmid を 保 有 す るSEnteritidisの 熊 本 市 に お け る 侵 淫 状 況 等 を 調 査 し た の で 報 告 す る. 材 料 と 方 法 1.供 試 菌 株 1)TC耐 性plasmidの 検 出:1991年9月 に 熊 別刷 請 求 先:(〒862)熊 本 市 田 迎 町 田井 島269 熊本 市 保健 衛 生 研 究所 本 田 れ い子
S.EnteritidisのTC耐 性Plasmid 1353
Table 1 Plasmid profiles, drugs resistant and phage types of S. Enteritidis iso-lated from food poisoning and egg solution
*: isolated in Kumamoto City.
本 市 で 集 団 発 生 し た 事 例 か ら 分 離 し たS.Enter-itidisのTC耐 性 株(strain no.40;Table1)と そ れ ら が 保 存 中 にTC感 受 性 と な っ た 株(no.40 d). 2)TC耐 性plasmidの 侵 淫 状 況 調 査:1992年 7∼9月 に 熊 本 市 内 の 検 査 セ ン タ ー で 分 離 さ れ た S.Enteritidis37株(no.1∼37;Table2)と 北 九 州,福 岡,千 葉 で 発 生 し た 食 中 毒 由 来 株(no.41, 42,43;Table1)及 び 熊 本 市 内 の 液 卵 製 造 業 者 か ら 収 去 さ れ た 液 卵 か ら 分 離 さ れ た(no.44; Table1)各1株 の 計41株. 3)transformation:受 容 菌 と し て 上 記S. Enteritidis TC感 受 性 株(no.40d)とEscherichia coli(E.coli)K12C600(hsdR,hsdM)を 使 用 し た. 4)TC耐 性plasmidの 安 定 性:-80℃ で,20% グ リ セ リ ン 加LB brothに 数 カ 月 間 保 存 し て い た 散 発 事 例 患 者 由 来 株 か ら無 作 為 に 選 ん だTC耐 性 plasmid保 有SEnteritidis3株(no.1,5,28) とtransformationで 得 ら れ たTC耐 性E.coli K12C600を 使 用 し た. 2.plasmidの 検 出
plasmid profileに はKadoの 変 法6),大 量 抽 出 の た め に はQiagen(フ ナ コ シ 株 式 会 社)を 使 用 し た. 3.薬 剤 感 受 性 試 験 下 記 の9薬 剤 に 対 し て 昭 和 一 濃 度 デ ィ ス ク を 用 い て 実 施 し た.TC,ス トレ プ トマ イ シ ン(SM), エ リ ス ロ マ イ シ ン(EM),フ ォ ス フ ォ マ イ シ ン, ク ロ ラ ム フ ェ ニ コ ー ル(CP),カ ナ マ イ シ ン,ア ミ ノ ベ ン ジ ル ペ ニ シ リ ン,セ フ ァ ロ リ ジ ン,ナ リ ジ ク ス 酸(NA) 4.hybridization SEnteritidisのtransformant由 来 の 約9kbの TC耐 性plasmidをGeneclean(フ ナ コ シ)を 用 い てagarose gelよ り 抽 出,精 製 し た も の を
probeと し て,colony及 びSouthern hybridiza-tionを 行 っ た.標 識 及 び 反 応 に は べ ー リ ン ガ ー ・ マ ン ハ イ ム 社 のDNALabeling and Detection Kit Nonradioactiveを 使 用 し た. 5.transformation TC耐 性 株 のcleared lysateを 抽 出 し,塩 化 カ ル シ ウ ム 法7)でTC感 受 性 株(no.40d)とE.coli K12C600の 形 質 転 換 を 行 い,25μg/mlTC加 感 受 性 試 験 用 培 地 でtransformantの 選 択 を 行 っ た. 6.TC耐 性Plasmidの 安 定 性 凍 結 保 存 し た 菌 液 を 自 然 解 凍 し,そ の10倍 希 釈 系 列 の 各0.1mlを25μg/ml TC加 及 び 無 添 加 感 受 性 試 験 用 培 地 に 塗 抹 し,37℃1晩 培 養 後,発 育 し た 集 落 数 を 算 定 し た. 成 績 1.TC耐 性Plasmidの 検 出 1991年9月,熊 本 市 で 発 生 し た 集 団 事 例 か ら 分 離 さ れ たS.Enteritidisの 薬 剤 感 受 性,Plasmid profileとphage型 別 をTable1に 示 し た.分 離 当 初 はSMとTCに 耐 性 で あ り,plasmid profile は 多 くのS.Enteritidisが 保 有 し て い る 約60kbの 他 に 約9と3kbの サ イ ズ のPlasmidを 保 有 し て い た.phage型 は1型 で あ っ た.し か し,こ れ ら の 株 の う ち12株 に つ い て 室 温 で 半 流 動 培 地 に 約3カ 月 間 保 存 後 に,TC耐 性 に つ い て 再 度 調 べ た と こ ろ,3株 がTC感 受 性 と な っ て い た.一 方SMに 平成6年11月20日
Table 2 Plasmid profiles, drugs resistant, phage types and colony hybridization of S. Enteritidis isolated from sporadic cases with diarrhea
*: On isolation from patients
, these strains were TC resistant, harboring 9kb and 3kb plasmids. However, after five months they changed to TC sensitive, losing both of plasmids. は 耐 性 の ま ま で あ っ た.そ こ で,こ れ ら の 株 の plasmid profileを 比 較 した と こ ろ,TC感 受 性 株 はTC耐 性 株 が 保 有 し て い た 約9と3kbのplas-midを 脱 落 し て い る こ とが 判 っ た(Fig.1).こ の こ とか ら,こ れ ら の 脱 落 し たplasmidの い ず れ か にTC耐 性 遺 伝 子 が 保 持 さ れ て い る こ と が 強 く示 唆 さ れ た.そ こ で,こ のTC耐 性 株 か らcleared lysateを 抽 出 し,TC感 受 性 と な っ たS.Enter-itidisとE.coliK12 C600のtransformation実 験 を 行 い,TC耐 性 と な っ たtransformantsのplas-mid profileを 調 べ た.そ の 結 果,TC感 受 性S Enteritidis株 のTC耐 性transformantsは 約60 と9kbのplasmidを 保 有 し て い た(Fig.2).ま た, E.coliK12C600のtransformantsも 約9kbの plasmidを 保 有 し,TC耐 性 と な っ た(Fig.3).し た が っ て,こ れ ら の2つ の 実 験 か ら約9kbのplas-midがTC耐 性 遺 伝 子 を 保 持 し,大 腸 菌 に お い て も 形 質 発 現 で き る こ と が わ か っ た.ま た,こ の
Fig. 1 Comparison between plasmid profiles of S. Enteritidis TCr and TO derivative
LN: Linear
CCC: covalently closed circular
1:LN marker A Hind 1
2:ccc marker pBR 322 (4.4kb)
3:ccc marker M13mp18(7.3kb)
4:ccc marker M13KU
(8.3kb)
5:TErstrain.of
S.Enteritidis(strain
no.40)
6:TCs derivative
(strain no.40d)
S.EnteritidisのTC耐 性Plasmid 1355
Fig. 2 Transformation of 9kb plasmid with TCs S. Enteritidis strains To determine which plasmid carries a gene encoding TC resistance, TO S. Enteritidis recipients were transformed with the cleared lysate of TC' S. Enter-itidis (strain no. 40), and the plasmid profiles of the TC` transformants were analyzed.
1:LN marker i Hind 1
2-12:TC' transformants
13-14:TC' S.Enteritidis
recipients
(strain
no.40d)
15:TC` S.Enteritidis
parent strain,
from which plasmid was isolated
for transformation.
(strain
no. 40)
Fig. 3 Transformation of 9kb plasmid with TCs E. coli strain
To determine which plasmid carries a gene encoding TC resistance, TCs E. coli recipients was transformed with cleared lysate of TCr S. Enteritidis (strain no. 40), and the plasmid profiles of the TC' transformants were analyzed.
1:LN marker ă Hind III 2-14: TCrtransformants
15:TCs E.coli recipient
16:TCr S.Enteritidis parent strain, from which plasmid was isolated for transformation. (strain no.40) 17:LN marker Z Hind II
Table 3 Stability of TCr plasmid
plasmidの 安 定 性 に つ い て,-80℃20%グ リ セ リ ン 加LB broth保 存 菌 液 に つ い て 調 べ た と こ ろ, TC加 平 板 に 発 育 し た 集 落 数 は 総 集 落 数 と比 較 し て10-2か ら10-3の 割 合 で 減 少 し て い た(Table 3). し た が っ て,通 常 の 遺 伝 子 保 持 の た め に 用 い ら れ て い る 保 存 法 に お い て も か な り の 頻 度 でplasmid の 脱 落 が 生 じ る こ とが わ か っ た. 2)TC耐 性plasmidの 侵 淫 状 況 熊 本 市 で 発 生 し た37件 の 散 発 事 例 か ら 分 離 さ れ たS.Enteritidis37株 の 薬 剤 感 受 性,plasmid profile,phage型 別 に つ い てTable2に 示 し た. plasmid profileは4種 類 の タ イ プ に 分 類 さ れ,タ イ プ1∼4に は 各 々8株,13株,15株,1株 が 分 類 さ れ た.こ の う ち タ イ プ1の8株 はTC感 受 性 で,約60kbの み を 保 有 し,約9kbのplasmidは 保 有 し て い な か っ た.phage型 は3,4,6,8で あ っ た.タ イ プ2と3は い ず れ もTC耐 性 で,約60及 び9kbのplasmidを 保 有 し て い た.そ の う ち タ イ プ3の 株 は さ ら に 約3kbのplasmidも 保 有 し て い た.こ れ ら の タ イ プ に 属 す る 株 のphage型 は1 株 を 除 く27株 が1型 で,残 り の1株 は7a型 で あ っ た.タ イ プ4に 分 類 さ れ た1株 はTC耐 性 で,約 200,60,2.5,2,1.5kbのplasmidを 保 有 し て い た が,約9kbのplasmidは 保 有 し て い な か っ た. phage型 は 型 別 出 来 な か っ た.し た が っ て,約9kb のplaSlnidを 保 有 し,TC耐 性 で あ っ た 株 は 散 発 事 例 由 来 株 の 約76%(28/37)を 占 め て い た.熊 本 以 外 で 発 生 し た 食 中 毒3事 例 及 び 液 卵 か ら検 出 さ れ たS.Enteritidisに つ い て の 調 査 結 果 をTable 1に 示 し た.北 九 州,福 岡,千 葉,で 発 生 し た 食 中 毒 事 例 由 来 株 と 液 卵 由 来 株 のplasmid prpfileは 各 々 タ イ ブ3,タ イ プ1,タ イ プ2,タ イ プ2で, 平成6年11月20日
福 岡 株 を 除 い て い ず れ もSM,TC耐 性 で,phage 型 は1で あ っ た. 今 回,散 発 事 例 か ら 分 離 さ れ た 株 のTC耐 性 と 我 々 が 集 団 事 例 か ら 確 認 し たTC耐 性plasmid と の 関 係 を 調 べ る た め に,SEnteritidisのTC耐 性transformantsのTC耐 性plasrnidをagar-osegelか ら抽 出 し た も の をprobeと し,ジ ゴ キ シ ゲ ニ ン で ラ ベ ル 後,colonyhybridizationを 行 っ た(Table2とFig.4).散 発 事 例 か ら分 離 さ れ た TC耐 性 の29株 の う ちcolonyhybridizationで 陽
Fig. 4 Colony hybridization test of S. Enteritidis isolated from sporadic cases with diarrhea 9kb TCr plasmid was used as a probe.
Each number indicates the strain number in Table 2. 性 を 示 し た も の が25株,陰 性 が4株 で あ っ た.分 離 当 初,約9kbのplasmidを 保 有 し て い た が,col-onyhybridizationで 陰 性 だ っ た3株(no.21,27, 30)に つ い て 再 度plasmidprofileとTC耐 性 を 確 認 し た 結 果,い ず れ も 既 に 陰 性 に 変 化 し て い る こ とが 判 っ た.残 り の1株 はTC耐 性 で あ っ た が, こ の サ イ ズ のplasmidを も た な い タ イ プ4の 株 で あ っ た.実 験 に 使 用 し た こ れ ら の37株 は20%グ リ セ リ ン加LBbrothで.80℃ に5カ 月 程 保 存 し た 株 で あ っ た.約9kbのplasmidを 保 有 し な い タ イ プ1と タ イ プ4の9株 に つ い て は,TC耐 性 の 有 無 に か か わ ら ずhybridization陰 性 で あ っ た. す な わ ち 約9kbのplasmid保 有 す る 株 の み が hybridization陽 性 で あ っ た.こ の こ と か ら散 発 事 例 か ら 分 離 さ れ た.S.Enteritidisが 保 有 す る 約9 kbのplasmidは 集 団 事 例 のSEnteritidisか ら 分 離 さ れ たTC耐 性plasmidと 同 じ で あ る こ と が 強 く示 唆 さ れ た.そ こ で,こ の 可 能 性 を さ ら に 詳 し く調 べ る た め に,同 じprobeを 用 い てSouth-ernhybridizationを 行 っ た(Fig.5).散 発 事 例 か ら のTC感 受 性3株,耐 性7株(約9kbのplasmid を 保 有 す る タ イ プ2と3か ら 無 作 為 に 選 ん だ6株 と こ のplasrnidを 保 有 し な い タ イ プ4の1株) と,北 九 州,福 岡,千 葉 で 発 生 し た 食 中 毒 由 来 の 各1株 及 び 液 卵 由 来1株 か ら 抽 出 し たplasmid に つ い て 調 べ た.positivecontrolと し てS EnteritidisのTC耐 性transformantに っ い て も 調 べ た.そ の 結 果,約9kbのplasmidの バ ン ド が 強 く反 応 し た.し た が っ て,こ れ ら の 株 が 有 す る 約9kbのplasmidは 集 団 事 例 か ら分 離 さ れ たTC
Fig. 5 Southern hybridization with plasmids of S . Enteritidis isolated from patients with diarrhea in sporadic and outbreak
S.EnteritidisのTC耐 性Plasmid 1357 耐 性plasmidと 同 じ も の で あ る 事 が 明 ら か と な っ た. 考 察 S.Enteritidisのplasmidprofileは 疫 学 マ ー カ ー の 一 つ と し て,全 国 で よ く調 べ ら れ て い る が, こ の 菌 の 薬 剤 耐 性Plasmidに つ い て は 接 合 伝 達 性 の あ る 大 き な サ イ ズ のplasmidが 数 例 報 告 さ れ て い る に す ぎ な い8)9). 我 々 は,1991年9月,熊 本 市 で 発 生 し た 集 団 事 例 由 来 のTC耐 性S.Enteritidisが 約3カ 月 間 の 室 温 保 存 で,12株 中3株 がTC感 受 性 に 変 化 し て い る こ と を 見 い だ し た.短 期 間 で の こ の よ う な 変 化 は,TC耐 性 遺 伝 子 がPlasmid上 に あ る 可 能 性 を 示 唆 す る も の で あ る こ と か ら,こ れ ら の 株 の plasmidprofileを 比 較 し た と こ ろ,TC感 受 性 に 変 化 し た 株 は 約9と3kbのPlasmidを 失 な っ て い た.TC感 受 性S.EnteritidisとE.coliを 受 容 菌 と し たtransformation実,験 で,約9kbplasrnid を 獲 得 し た 菌 株 がTC耐 性 に な っ た こ とか ら,TC 耐 性 遺 伝 子 は こ の 約9kbplasmid上 に保 持 さ れ て お り,大 腸 菌 に お い て も 形 質 発 現 で き る こ と が わ か っ た.ま た,こ のplasmidは20%グ リ セ リ ン 加 LBbrothで-80℃ に 保 存 し て も 容 易 に 脱 落 す る 傾 向 に あ っ た. と こ ろ で,我 々 は こ れ ま で に 報 告 の な い,こ の TC耐 性plasmidの 熊 本 市 に お け る 侵 淫 状 況 を 把 握 し,SEnteritidisの 疫 学 調 査 の 一 助 と す る た め に,散 発 事 例 由 来 株 に つ い てplasmidprofileを 調 べ た と こ ろ,そ のprofileは4つ の タ イ プ に 分 類 さ れ た.そ の う ち,2つ の タ イ プ が こ のTC耐 性 plasmidを 保 有 し,そ の 頻 度 は 約76%で あ っ た. し た が っ て,調 査 し た1992年7∼9月 の 熊 本 市 に お け るS.Enteritidisの 流 行 の 主 流 は こ のTC 耐 性plasmidを 保 有 し たphage1型 の 株 で あ っ た こ と が わ か っ た.ま た,S.Enteritidis食 中 毒 の 主 な 原 因 と し て 鶏 卵 の 汚 染 が 報 告 さ れ て い る10)11) が,熊 本 市 の 液 卵 製 造 業 者 か ら 収 去 さ れ た 液 卵 か ら も 同 様 の 株 を 見 い だ し た こ と か ら,こ のTC耐 性Plasmidを 保 有 す るS.Enteritidisも 鶏 卵 の 関 与 が 示 唆 さ れ た.1991年 に はTC耐 性plasmidと 同 じ サ イ ズ のPlasmidを 保 有 す るTC耐 性 のS. Enteritidisは 我 々 が 報 告 し た 以 外 に は な か っ た が,1992年 に な っ て,北 九 州12),千 葉3)で 集 団 発 生 し た 食 中 毒 由 来 株 か ら もTC耐 性plasmidを 検 出 し た.し か も,そ れ ら はphage1型 で あ っ た. 国 立 予 防 衛 生 研 究 所 の 報 告 に よ る と,phage1型 は1992年 に 急 増 し て い る が,そ の 検 出 頻 度 は27% で あ り,依 然 そ の 流 行 の 主 流 はphage4型 と な っ て い る2).し た が っ て 熊 本 市 で1992年7∼9月 に 既 にphage1型 が 散 発 事 例 の73%を 占 め て い る こ と は,全 国 に 先 駆 け てphage1型 が 流 行 し て い た の で は な い か と 考 え ら れ た.ま た,こ のTC耐 性 plasmidを 保 有 し て い る 株 の ほ と ん ど がphagel 型 で あ っ た こ と か ら,こ のTC耐 性Plasmidを 保 有 す るSEnteritidisもphage1型 と 同 じ よ う な 流 行 の 経 緯 を 経 た の で は な い か と考 え ら れ た. な お,TC耐 性Plasmid保 有SEnteritidisの ほ と ん ど がphage1型 で あ っ た こ と か ら,こ の plasmidの 保 持 に お け るphage型 特 異 性 の 有 無 や 伝i播様 式 等 に つ い て 現 在 検 討 中 で あ る. 謝辞 稿 を終 える に あた り,phage型 別 を して いた だ き ま した 国立 予 防 衛生 研 究 所 の 中村 明 子 博 士,plasmidサ イ ズマ ー カ ー菌 株 を分 与 して くだ さい ま した 東 京都 立 衛 生研 究 所 の楠 淳 先 生,散 発 事例 由来 株 を分 与 して い た だ き ま した 熊 本 市 医 師 会 検 査 セ ン ター 及 び 化 血 研 臨 床 検 査 セ ン タ ー細 菌 室 の皆 様 方 に深 謝 致 し ます.
文
献
1) 厚 生 省 生 活 衛 生 局 食 品 保 健 課: 平 成4年 食 中 毒 発 生 状 況. 食 品 衛 生 研 究, 520: 106-132, 1993. 2) 厚 生 省 保 健 医 療 局 疾 病 対 策 課:<特 集>サ ル モ ネ ラ ・エ ン テ リ テ ィ デ ィ ス 流 行1989. 1992. 10. 病 原 微 生 物 検 出 情 報, 14: 1-2, 1993. 3) 平 塚 奈 美 子, 岸 田 一 則, 小 岩 井 健 司, 鶴 岡 佳 久: 1986年 か ら1991年 に 千 葉 県 で 分 離 さ れ たSal-monella enterica subsp. enterica serovar Enter-itidisの プ ラ ス ミ ドプ ロ フ ァ イ ル,薬 剤 感 受 性 およ び フ ァー ジ型 に つ い て. 千 葉 県 衛 生 研 究 所 報, 16: 7-12, 1992.
4) 八 柳 潤, 斎 藤 志 保 子, 遠 藤 守 保, 佐 藤 宏 康,森 田 盛 大:秋 田 県 で 分 離 さ れ たSalmonella enter-icasubsp. enterica serovar Enteritidisの プ ラ ス ミ ドプ ロ フ ァ イ ル に つ い て (第1報). 秋 田 県 衛 生 科 学 研 究 所 報, 36: 39-41, 1992. 5) 金 子 通 治: 山 梨 県 に お け る 最 近3力 年 間 (1990-1992) の 散 発 性 下 痢 症 由 来 サ ル モ ネ ラ 血 清 型 サ ル モ ネ ラ ・エ ン テ リ テ ィ デ ィ ス の 疫 学 的 検 討. 山 梨 県 衛 生 公 害 研 究 所 報, 36: 33. 37, 1992. 平 成6年11月20日
6) 中 谷 林 太 郎: Rプ ラ ス ミ ドの 分 子 遺 伝 学 的 実 験 法, p.60, 菜 根 出 版, 1983.
7) 太 田 美 智 男: 新 し い 遺 伝 子 操 作 技 術 の 基 礎, p.55 -56 , 菜 根 出 版, 1989.
8) Lederberg, E. M. & Cohen, S. N.: Transforma-tion of Salmonella typhimurium by plasmid deoxyribonucleic acid. J. Bacteriol., 119: 1072 -1074
, 1974.
9) 堀 内 三 吉, 後 藤 延 一, 仲 谷 林 太 郎, 伊 藤 武, 高 橋 正 樹, 大 橋 誠: ヒ ト 由 来Salmonella typhimurium, S. enteritidis, Sbraenderuヵ プ ラ ス
ミ ド と薬 剤 耐 性. 感 染 症 誌, 61: 167-177, 1987. 10) 吉 田 好 文, 荒 井 健 三, 中 村 憲 久, 小 川 俊 雄, 田 村 延 一, 福 田 博 保, 富 樫 哲 也: 東 京 都 で 多 発 し たS. Enteritidisに よ る 食 中 毒 事 件 な ど の 疫 学 的 解 析 結 果. 食 品 衛 生 研 究, 510: 59. 65, 1992. 11) 本 田 武 司: 鶏 卵 内 サ ル モ ネ ラ 汚 染 と 食 中 毒 . メ デ ィヤ サ ー ク ル, 37: 293-298, 1992. 12) 加 野 成 明, 坂 田 和 歌 子, 杉 嶋 伸 緑: 二 つ の 食 中 毒 事 件 か ら検 出 さ れ たSalmonella Enteritidisに っ い て. 北 九 州 市 環 境 衛 生 研 究 所 報, 20: 73-74 , 1992.
Tetracycline-Resistant
Plasmid
of Salmonella
Enteritidis
Isolated
in Kumamoto
City
Reiko HONDA
Kumamoto Municipal Institute of Public Health
Hatsumi
TANIGUCHI
Department of Microbiology, University of Occupational and Environmental Health