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Table 1 Plasmid profiles, drugs resistant and phage types of S. Enteritidis food poisoning and egg solution *: in Kumamoto City.

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(1)

熊 本 市 で 分 離 さ れ たSalmonella

Enteritidisの

テ ト ラ サ イ ク リ ン 耐 性plasmid

熊本市保健衛生研究所

産業医科大学微生物学教室

(平成6年5月6日 受 付) (平成6年8月2日 受 理)

Key words: Salmonella Enteritidis, tetracycline resistance plasmid

要 旨

我 々 は1991年9月 に 熊 本 市 で 発 生 した 集 団 事 例 か ら分 離 したSalmonella choleraesuis subsp.choler-aesuis serovar Enteritidis(S.Enteritidis)が 保 有 す るplasmid上 に テ トラ サ イ ク リ ン(TC)耐 性 遺 伝 子 が 存 在 す る こ と を見 い だ し た.こ のplasmidは 約9kbで,脱 落 しや す く,大 腸 菌 に お い て も形 質 発 現 す る こ とが 出 来 た.そ こで,我 々 は こ のTC耐 性plasmidの 熊 本 市 に お け る侵 淫 状 況 及 び熊 本 以 外 で の 流 行 を知 る た め に,熊 本 市 で 分 離 さ れ た37件 の 散 発 性 下 痢 症 患 者 由来37株,北 九 州,千 葉,福 岡 で 発 生

し た3件 の 食 中 毒 由 来3株 及 び 熊 本 市 で 分 離 さ れ た 液 卵 由 来1株 の 計41株 に つ い て,こ のplasmidを probeと し たhybridization,薬 剤 感 受 性 及 びplasmidprofileを 調 べ た.そ の 結 果,散 発 事 例 由来 の37株 中28株,北 九 州,千 葉 で 発 生 し た 食 中 毒 由 来 株 及 び 液 卵 か ら検 出 さ れ た 株 が このTC耐 性plasmidを 保 有 して い た.こ の こ とか ら,調 査 した1992年7∼9月 に は,こ のTC耐 性plasmidを 保 有 す る株 が 熊 本 市 に お け るS.Enteritidisの 流 行 の 主 流 を 占 め て い た こ とが わ か っ た.ま た,こ のplasmidを 保 有 す る株 が 北 九 州,千 葉 で 発 生 し た 食 中 毒 事 例 か ら も検 出 され た こ と に よ り,こ の 株 の 流 行 が 地 域 的 な もの で な い こ とを,ま た 液 卵 か ら の検 出 が 鶏 卵 との 関 与 を 示 唆 した . 序 文 我 が 国 に お い て,1989年 頃 か ら 急 激 に 増 加 し は じ め た サ ル モ ネ ラ 食 中 毒 は1992年 に な っ て,そ の 発 生 件 数,患 者 数 と も に 病 因 物 質 が 判 明 し た 食 事 毒 の 中 で 首 位 と な っ た1).こ の よ う な サ ル モ ネ ラ 食 中 毒 の 増 加 の 原 因 の 一 つ にS.Enteritidisに よ る も の の 増 加 が 挙 げ ら れ る.S.Enteritidisの 検 出 率 は1987年 に は 全 サ ル モ ネ ラ の6.4%に 過 ぎ な か っ た が,1991年 に は25%を 占 め て い る2). 近 年,こ の よ う なS.Enteritidisの 急 激 な 増 加 に 伴 い,S.Enteritidisの 疫 学 調 査 がphage型 別, plasmidprofile等 の 手 法 を 用 い て 積 極 的 に 実 施 さ れ て い る.国 立 予 防 衛 生 研 究 所 で はphage型 の 全 国 調 査 が 実 施 さ れ て お り,そ の 流 行 の 推 移 が 明 ら か に さ れ て い る2).plasmid profileは 疫 学 マ ー カ ー の 一 つ と し て 各 地 方 衛 生 研 究 所 等 で 調 査 さ れ て い る3)∼5)が,Plasmidと 薬 剤 耐 性 と の 関 係 を 述 べ て い る も の は 少 な い.我 々 は,1991年 に 熊 本 市 で 集 団 発 生 し た 感 染 事 例 か ら 分 離 し たSEnter-itidisのplasmid上 にTC耐 性 遺 伝 子 が 保 持 さ れ て い る こ と を 確 認 し,ま た,そ のTC耐 性Plasmid を 保 有 す るSEnteritidisの 熊 本 市 に お け る 侵 淫 状 況 等 を 調 査 し た の で 報 告 す る. 材 料 と 方 法 1.供 試 菌 株 1)TC耐 性plasmidの 検 出:1991年9月 に 熊 別刷 請 求 先:(〒862)熊 本 市 田 迎 町 田井 島269 熊本 市 保健 衛 生 研 究所 本 田 れ い子

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S.EnteritidisのTC耐 性Plasmid 1353

Table 1 Plasmid profiles, drugs resistant and phage types of S. Enteritidis iso-lated from food poisoning and egg solution

*: isolated in Kumamoto City.

本 市 で 集 団 発 生 し た 事 例 か ら 分 離 し たS.Enter-itidisのTC耐 性 株(strain no.40;Table1)と そ れ ら が 保 存 中 にTC感 受 性 と な っ た 株(no.40 d). 2)TC耐 性plasmidの 侵 淫 状 況 調 査:1992年 7∼9月 に 熊 本 市 内 の 検 査 セ ン タ ー で 分 離 さ れ た S.Enteritidis37株(no.1∼37;Table2)と 北 九 州,福 岡,千 葉 で 発 生 し た 食 中 毒 由 来 株(no.41, 42,43;Table1)及 び 熊 本 市 内 の 液 卵 製 造 業 者 か ら 収 去 さ れ た 液 卵 か ら 分 離 さ れ た(no.44; Table1)各1株 の 計41株. 3)transformation:受 容 菌 と し て 上 記S. Enteritidis TC感 受 性 株(no.40d)とEscherichia coli(E.coli)K12C600(hsdR,hsdM)を 使 用 し た. 4)TC耐 性plasmidの 安 定 性:-80℃ で,20% グ リ セ リ ン 加LB brothに 数 カ 月 間 保 存 し て い た 散 発 事 例 患 者 由 来 株 か ら無 作 為 に 選 ん だTC耐 性 plasmid保 有SEnteritidis3株(no.1,5,28) とtransformationで 得 ら れ たTC耐 性E.coli K12C600を 使 用 し た. 2.plasmidの 検 出

plasmid profileに はKadoの 変 法6),大 量 抽 出 の た め に はQiagen(フ ナ コ シ 株 式 会 社)を 使 用 し た. 3.薬 剤 感 受 性 試 験 下 記 の9薬 剤 に 対 し て 昭 和 一 濃 度 デ ィ ス ク を 用 い て 実 施 し た.TC,ス トレ プ トマ イ シ ン(SM), エ リ ス ロ マ イ シ ン(EM),フ ォ ス フ ォ マ イ シ ン, ク ロ ラ ム フ ェ ニ コ ー ル(CP),カ ナ マ イ シ ン,ア ミ ノ ベ ン ジ ル ペ ニ シ リ ン,セ フ ァ ロ リ ジ ン,ナ リ ジ ク ス 酸(NA) 4.hybridization SEnteritidisのtransformant由 来 の 約9kbの TC耐 性plasmidをGeneclean(フ ナ コ シ)を 用 い てagarose gelよ り 抽 出,精 製 し た も の を

probeと し て,colony及 びSouthern hybridiza-tionを 行 っ た.標 識 及 び 反 応 に は べ ー リ ン ガ ー ・ マ ン ハ イ ム 社 のDNALabeling and Detection Kit Nonradioactiveを 使 用 し た. 5.transformation TC耐 性 株 のcleared lysateを 抽 出 し,塩 化 カ ル シ ウ ム 法7)でTC感 受 性 株(no.40d)とE.coli K12C600の 形 質 転 換 を 行 い,25μg/mlTC加 感 受 性 試 験 用 培 地 でtransformantの 選 択 を 行 っ た. 6.TC耐 性Plasmidの 安 定 性 凍 結 保 存 し た 菌 液 を 自 然 解 凍 し,そ の10倍 希 釈 系 列 の 各0.1mlを25μg/ml TC加 及 び 無 添 加 感 受 性 試 験 用 培 地 に 塗 抹 し,37℃1晩 培 養 後,発 育 し た 集 落 数 を 算 定 し た. 成 績 1.TC耐 性Plasmidの 検 出 1991年9月,熊 本 市 で 発 生 し た 集 団 事 例 か ら 分 離 さ れ たS.Enteritidisの 薬 剤 感 受 性,Plasmid profileとphage型 別 をTable1に 示 し た.分 離 当 初 はSMとTCに 耐 性 で あ り,plasmid profile は 多 くのS.Enteritidisが 保 有 し て い る 約60kbの 他 に 約9と3kbの サ イ ズ のPlasmidを 保 有 し て い た.phage型 は1型 で あ っ た.し か し,こ れ ら の 株 の う ち12株 に つ い て 室 温 で 半 流 動 培 地 に 約3カ 月 間 保 存 後 に,TC耐 性 に つ い て 再 度 調 べ た と こ ろ,3株 がTC感 受 性 と な っ て い た.一 方SMに 平成6年11月20日

(3)

Table 2 Plasmid profiles, drugs resistant, phage types and colony hybridization of S. Enteritidis isolated from sporadic cases with diarrhea

*: On isolation from patients

, these strains were TC resistant, harboring 9kb and 3kb plasmids. However, after five months they changed to TC sensitive, losing both of plasmids. は 耐 性 の ま ま で あ っ た.そ こ で,こ れ ら の 株 の plasmid profileを 比 較 した と こ ろ,TC感 受 性 株 はTC耐 性 株 が 保 有 し て い た 約9と3kbのplas-midを 脱 落 し て い る こ とが 判 っ た(Fig.1).こ の こ とか ら,こ れ ら の 脱 落 し たplasmidの い ず れ か にTC耐 性 遺 伝 子 が 保 持 さ れ て い る こ と が 強 く示 唆 さ れ た.そ こ で,こ のTC耐 性 株 か らcleared lysateを 抽 出 し,TC感 受 性 と な っ たS.Enter-itidisとE.coliK12 C600のtransformation実 験 を 行 い,TC耐 性 と な っ たtransformantsのplas-mid profileを 調 べ た.そ の 結 果,TC感 受 性S Enteritidis株 のTC耐 性transformantsは 約60 と9kbのplasmidを 保 有 し て い た(Fig.2).ま た, E.coliK12C600のtransformantsも 約9kbの plasmidを 保 有 し,TC耐 性 と な っ た(Fig.3).し た が っ て,こ れ ら の2つ の 実 験 か ら約9kbのplas-midがTC耐 性 遺 伝 子 を 保 持 し,大 腸 菌 に お い て も 形 質 発 現 で き る こ と が わ か っ た.ま た,こ の

Fig. 1 Comparison between plasmid profiles of S. Enteritidis TCr and TO derivative

LN: Linear

CCC: covalently closed circular

1:LN marker A Hind 1

2:ccc marker pBR 322 (4.4kb)

3:ccc marker M13mp18(7.3kb)

4:ccc marker M13KU

(8.3kb)

5:TErstrain.of

S.Enteritidis(strain

no.40)

6:TCs derivative

(strain no.40d)

(4)

S.EnteritidisのTC耐 性Plasmid 1355

Fig. 2 Transformation of 9kb plasmid with TCs S. Enteritidis strains To determine which plasmid carries a gene encoding TC resistance, TO S. Enteritidis recipients were transformed with the cleared lysate of TC' S. Enter-itidis (strain no. 40), and the plasmid profiles of the TC` transformants were analyzed.

1:LN marker i Hind 1

2-12:TC' transformants

13-14:TC' S.Enteritidis

recipients

(strain

no.40d)

15:TC` S.Enteritidis

parent strain,

from which plasmid was isolated

for transformation.

(strain

no. 40)

Fig. 3 Transformation of 9kb plasmid with TCs E. coli strain

To determine which plasmid carries a gene encoding TC resistance, TCs E. coli recipients was transformed with cleared lysate of TCr S. Enteritidis (strain no. 40), and the plasmid profiles of the TC' transformants were analyzed.

1:LN marker ă Hind III 2-14: TCrtransformants

15:TCs E.coli recipient

16:TCr S.Enteritidis parent strain, from which plasmid was isolated for transformation. (strain no.40) 17:LN marker Z Hind II

Table 3 Stability of TCr plasmid

plasmidの 安 定 性 に つ い て,-80℃20%グ リ セ リ ン 加LB broth保 存 菌 液 に つ い て 調 べ た と こ ろ, TC加 平 板 に 発 育 し た 集 落 数 は 総 集 落 数 と比 較 し て10-2か ら10-3の 割 合 で 減 少 し て い た(Table 3). し た が っ て,通 常 の 遺 伝 子 保 持 の た め に 用 い ら れ て い る 保 存 法 に お い て も か な り の 頻 度 でplasmid の 脱 落 が 生 じ る こ とが わ か っ た. 2)TC耐 性plasmidの 侵 淫 状 況 熊 本 市 で 発 生 し た37件 の 散 発 事 例 か ら 分 離 さ れ たS.Enteritidis37株 の 薬 剤 感 受 性,plasmid profile,phage型 別 に つ い てTable2に 示 し た. plasmid profileは4種 類 の タ イ プ に 分 類 さ れ,タ イ プ1∼4に は 各 々8株,13株,15株,1株 が 分 類 さ れ た.こ の う ち タ イ プ1の8株 はTC感 受 性 で,約60kbの み を 保 有 し,約9kbのplasmidは 保 有 し て い な か っ た.phage型 は3,4,6,8で あ っ た.タ イ プ2と3は い ず れ もTC耐 性 で,約60及 び9kbのplasmidを 保 有 し て い た.そ の う ち タ イ プ3の 株 は さ ら に 約3kbのplasmidも 保 有 し て い た.こ れ ら の タ イ プ に 属 す る 株 のphage型 は1 株 を 除 く27株 が1型 で,残 り の1株 は7a型 で あ っ た.タ イ プ4に 分 類 さ れ た1株 はTC耐 性 で,約 200,60,2.5,2,1.5kbのplasmidを 保 有 し て い た が,約9kbのplasmidは 保 有 し て い な か っ た. phage型 は 型 別 出 来 な か っ た.し た が っ て,約9kb のplaSlnidを 保 有 し,TC耐 性 で あ っ た 株 は 散 発 事 例 由 来 株 の 約76%(28/37)を 占 め て い た.熊 本 以 外 で 発 生 し た 食 中 毒3事 例 及 び 液 卵 か ら検 出 さ れ たS.Enteritidisに つ い て の 調 査 結 果 をTable 1に 示 し た.北 九 州,福 岡,千 葉,で 発 生 し た 食 中 毒 事 例 由 来 株 と 液 卵 由 来 株 のplasmid prpfileは 各 々 タ イ ブ3,タ イ プ1,タ イ プ2,タ イ プ2で, 平成6年11月20日

(5)

福 岡 株 を 除 い て い ず れ もSM,TC耐 性 で,phage 型 は1で あ っ た. 今 回,散 発 事 例 か ら 分 離 さ れ た 株 のTC耐 性 と 我 々 が 集 団 事 例 か ら 確 認 し たTC耐 性plasmid と の 関 係 を 調 べ る た め に,SEnteritidisのTC耐 性transformantsのTC耐 性plasrnidをagar-osegelか ら抽 出 し た も の をprobeと し,ジ ゴ キ シ ゲ ニ ン で ラ ベ ル 後,colonyhybridizationを 行 っ た(Table2とFig.4).散 発 事 例 か ら分 離 さ れ た TC耐 性 の29株 の う ちcolonyhybridizationで 陽

Fig. 4 Colony hybridization test of S. Enteritidis isolated from sporadic cases with diarrhea 9kb TCr plasmid was used as a probe.

Each number indicates the strain number in Table 2. 性 を 示 し た も の が25株,陰 性 が4株 で あ っ た.分 離 当 初,約9kbのplasmidを 保 有 し て い た が,col-onyhybridizationで 陰 性 だ っ た3株(no.21,27, 30)に つ い て 再 度plasmidprofileとTC耐 性 を 確 認 し た 結 果,い ず れ も 既 に 陰 性 に 変 化 し て い る こ とが 判 っ た.残 り の1株 はTC耐 性 で あ っ た が, こ の サ イ ズ のplasmidを も た な い タ イ プ4の 株 で あ っ た.実 験 に 使 用 し た こ れ ら の37株 は20%グ リ セ リ ン加LBbrothで.80℃ に5カ 月 程 保 存 し た 株 で あ っ た.約9kbのplasmidを 保 有 し な い タ イ プ1と タ イ プ4の9株 に つ い て は,TC耐 性 の 有 無 に か か わ ら ずhybridization陰 性 で あ っ た. す な わ ち 約9kbのplasmid保 有 す る 株 の み が hybridization陽 性 で あ っ た.こ の こ と か ら散 発 事 例 か ら 分 離 さ れ た.S.Enteritidisが 保 有 す る 約9 kbのplasmidは 集 団 事 例 のSEnteritidisか ら 分 離 さ れ たTC耐 性plasmidと 同 じ で あ る こ と が 強 く示 唆 さ れ た.そ こ で,こ の 可 能 性 を さ ら に 詳 し く調 べ る た め に,同 じprobeを 用 い てSouth-ernhybridizationを 行 っ た(Fig.5).散 発 事 例 か ら のTC感 受 性3株,耐 性7株(約9kbのplasmid を 保 有 す る タ イ プ2と3か ら 無 作 為 に 選 ん だ6株 と こ のplasrnidを 保 有 し な い タ イ プ4の1株) と,北 九 州,福 岡,千 葉 で 発 生 し た 食 中 毒 由 来 の 各1株 及 び 液 卵 由 来1株 か ら 抽 出 し たplasmid に つ い て 調 べ た.positivecontrolと し てS EnteritidisのTC耐 性transformantに っ い て も 調 べ た.そ の 結 果,約9kbのplasmidの バ ン ド が 強 く反 応 し た.し た が っ て,こ れ ら の 株 が 有 す る 約9kbのplasmidは 集 団 事 例 か ら分 離 さ れ たTC

Fig. 5 Southern hybridization with plasmids of S . Enteritidis isolated from patients with diarrhea in sporadic and outbreak

(6)

S.EnteritidisのTC耐 性Plasmid 1357 耐 性plasmidと 同 じ も の で あ る 事 が 明 ら か と な っ た. 考 察 S.Enteritidisのplasmidprofileは 疫 学 マ ー カ ー の 一 つ と し て,全 国 で よ く調 べ ら れ て い る が, こ の 菌 の 薬 剤 耐 性Plasmidに つ い て は 接 合 伝 達 性 の あ る 大 き な サ イ ズ のplasmidが 数 例 報 告 さ れ て い る に す ぎ な い8)9). 我 々 は,1991年9月,熊 本 市 で 発 生 し た 集 団 事 例 由 来 のTC耐 性S.Enteritidisが 約3カ 月 間 の 室 温 保 存 で,12株 中3株 がTC感 受 性 に 変 化 し て い る こ と を 見 い だ し た.短 期 間 で の こ の よ う な 変 化 は,TC耐 性 遺 伝 子 がPlasmid上 に あ る 可 能 性 を 示 唆 す る も の で あ る こ と か ら,こ れ ら の 株 の plasmidprofileを 比 較 し た と こ ろ,TC感 受 性 に 変 化 し た 株 は 約9と3kbのPlasmidを 失 な っ て い た.TC感 受 性S.EnteritidisとE.coliを 受 容 菌 と し たtransformation実,験 で,約9kbplasrnid を 獲 得 し た 菌 株 がTC耐 性 に な っ た こ とか ら,TC 耐 性 遺 伝 子 は こ の 約9kbplasmid上 に保 持 さ れ て お り,大 腸 菌 に お い て も 形 質 発 現 で き る こ と が わ か っ た.ま た,こ のplasmidは20%グ リ セ リ ン 加 LBbrothで-80℃ に 保 存 し て も 容 易 に 脱 落 す る 傾 向 に あ っ た. と こ ろ で,我 々 は こ れ ま で に 報 告 の な い,こ の TC耐 性plasmidの 熊 本 市 に お け る 侵 淫 状 況 を 把 握 し,SEnteritidisの 疫 学 調 査 の 一 助 と す る た め に,散 発 事 例 由 来 株 に つ い てplasmidprofileを 調 べ た と こ ろ,そ のprofileは4つ の タ イ プ に 分 類 さ れ た.そ の う ち,2つ の タ イ プ が こ のTC耐 性 plasmidを 保 有 し,そ の 頻 度 は 約76%で あ っ た. し た が っ て,調 査 し た1992年7∼9月 の 熊 本 市 に お け るS.Enteritidisの 流 行 の 主 流 は こ のTC 耐 性plasmidを 保 有 し たphage1型 の 株 で あ っ た こ と が わ か っ た.ま た,S.Enteritidis食 中 毒 の 主 な 原 因 と し て 鶏 卵 の 汚 染 が 報 告 さ れ て い る10)11) が,熊 本 市 の 液 卵 製 造 業 者 か ら 収 去 さ れ た 液 卵 か ら も 同 様 の 株 を 見 い だ し た こ と か ら,こ のTC耐 性Plasmidを 保 有 す るS.Enteritidisも 鶏 卵 の 関 与 が 示 唆 さ れ た.1991年 に はTC耐 性plasmidと 同 じ サ イ ズ のPlasmidを 保 有 す るTC耐 性 のS. Enteritidisは 我 々 が 報 告 し た 以 外 に は な か っ た が,1992年 に な っ て,北 九 州12),千 葉3)で 集 団 発 生 し た 食 中 毒 由 来 株 か ら もTC耐 性plasmidを 検 出 し た.し か も,そ れ ら はphage1型 で あ っ た. 国 立 予 防 衛 生 研 究 所 の 報 告 に よ る と,phage1型 は1992年 に 急 増 し て い る が,そ の 検 出 頻 度 は27% で あ り,依 然 そ の 流 行 の 主 流 はphage4型 と な っ て い る2).し た が っ て 熊 本 市 で1992年7∼9月 に 既 にphage1型 が 散 発 事 例 の73%を 占 め て い る こ と は,全 国 に 先 駆 け てphage1型 が 流 行 し て い た の で は な い か と 考 え ら れ た.ま た,こ のTC耐 性 plasmidを 保 有 し て い る 株 の ほ と ん ど がphagel 型 で あ っ た こ と か ら,こ のTC耐 性Plasmidを 保 有 す るSEnteritidisもphage1型 と 同 じ よ う な 流 行 の 経 緯 を 経 た の で は な い か と考 え ら れ た. な お,TC耐 性Plasmid保 有SEnteritidisの ほ と ん ど がphage1型 で あ っ た こ と か ら,こ の plasmidの 保 持 に お け るphage型 特 異 性 の 有 無 や 伝i播様 式 等 に つ い て 現 在 検 討 中 で あ る. 謝辞 稿 を終 える に あた り,phage型 別 を して いた だ き ま した 国立 予 防 衛生 研 究 所 の 中村 明 子 博 士,plasmidサ イ ズマ ー カ ー菌 株 を分 与 して くだ さい ま した 東 京都 立 衛 生研 究 所 の楠 淳 先 生,散 発 事例 由来 株 を分 与 して い た だ き ま した 熊 本 市 医 師 会 検 査 セ ン ター 及 び 化 血 研 臨 床 検 査 セ ン タ ー細 菌 室 の皆 様 方 に深 謝 致 し ます.

1) 厚 生 省 生 活 衛 生 局 食 品 保 健 課: 平 成4年 食 中 毒 発 生 状 況. 食 品 衛 生 研 究, 520: 106-132, 1993. 2) 厚 生 省 保 健 医 療 局 疾 病 対 策 課:<特 集>サ ル モ ネ ラ ・エ ン テ リ テ ィ デ ィ ス 流 行1989. 1992. 10. 病 原 微 生 物 検 出 情 報, 14: 1-2, 1993. 3) 平 塚 奈 美 子, 岸 田 一 則, 小 岩 井 健 司, 鶴 岡 佳 久: 1986年 か ら1991年 に 千 葉 県 で 分 離 さ れ たSal-monella enterica subsp. enterica serovar Enter-itidisの プ ラ ス ミ ドプ ロ フ ァ イ ル,薬 剤 感 受 性 お

よ び フ ァー ジ型 に つ い て. 千 葉 県 衛 生 研 究 所 報, 16: 7-12, 1992.

4) 八 柳 潤, 斎 藤 志 保 子, 遠 藤 守 保, 佐 藤 宏 康,森 田 盛 大:秋 田 県 で 分 離 さ れ たSalmonella enter-icasubsp. enterica serovar Enteritidisの プ ラ ス ミ ドプ ロ フ ァ イ ル に つ い て (第1報). 秋 田 県 衛 生 科 学 研 究 所 報, 36: 39-41, 1992. 5) 金 子 通 治: 山 梨 県 に お け る 最 近3力 年 間 (1990-1992) の 散 発 性 下 痢 症 由 来 サ ル モ ネ ラ 血 清 型 サ ル モ ネ ラ ・エ ン テ リ テ ィ デ ィ ス の 疫 学 的 検 討. 山 梨 県 衛 生 公 害 研 究 所 報, 36: 33. 37, 1992. 平 成6年11月20日

(7)

6) 中 谷 林 太 郎: Rプ ラ ス ミ ドの 分 子 遺 伝 学 的 実 験 法, p.60, 菜 根 出 版, 1983.

7) 太 田 美 智 男: 新 し い 遺 伝 子 操 作 技 術 の 基 礎, p.55 -56 , 菜 根 出 版, 1989.

8) Lederberg, E. M. & Cohen, S. N.: Transforma-tion of Salmonella typhimurium by plasmid deoxyribonucleic acid. J. Bacteriol., 119: 1072 -1074

, 1974.

9) 堀 内 三 吉, 後 藤 延 一, 仲 谷 林 太 郎, 伊 藤 武, 高 橋 正 樹, 大 橋 誠: ヒ ト 由 来Salmonella typhimurium, S. enteritidis, Sbraenderuヵ プ ラ ス

ミ ド と薬 剤 耐 性. 感 染 症 誌, 61: 167-177, 1987. 10) 吉 田 好 文, 荒 井 健 三, 中 村 憲 久, 小 川 俊 雄, 田 村 延 一, 福 田 博 保, 富 樫 哲 也: 東 京 都 で 多 発 し たS. Enteritidisに よ る 食 中 毒 事 件 な ど の 疫 学 的 解 析 結 果. 食 品 衛 生 研 究, 510: 59. 65, 1992. 11) 本 田 武 司: 鶏 卵 内 サ ル モ ネ ラ 汚 染 と 食 中 毒 . メ デ ィヤ サ ー ク ル, 37: 293-298, 1992. 12) 加 野 成 明, 坂 田 和 歌 子, 杉 嶋 伸 緑: 二 つ の 食 中 毒 事 件 か ら検 出 さ れ たSalmonella Enteritidisに っ い て. 北 九 州 市 環 境 衛 生 研 究 所 報, 20: 73-74 , 1992.

Tetracycline-Resistant

Plasmid

of Salmonella

Enteritidis

Isolated

in Kumamoto

City

Reiko HONDA

Kumamoto Municipal Institute of Public Health

Hatsumi

TANIGUCHI

Department of Microbiology, University of Occupational and Environmental Health

We isolated Salmonella choleraesuis subsp. choleraesuis serovar . Enteritidis

(S. Enteritidis)

from a mass of cases which broke out in September , 1991 in Kumamoto City. The isolates were

shown to hold plasmids on which a tetracycline

(TC)-resistant

gene was located . The plasmid,

about 9 kb in size, was capable

of expressing

the gene in Escherichia coli

, unstable

in S.

Enteritidis

and Escherichia coli. Thus in order to investigate

the creeping prevalence

of the

TC-resistant

plasmid in Kumamoto

City and its spreading in other areas

, the strains, a total of

41, including 37 isolates from sporadic cases with diarrhea

in Kumamoto

City

, 3 isolates from 3

cases of food poisoning in Kitakyushu

, Fukuoka

and Chiba, and one strain isolated from egg

solution in Kumamoto

City, were examined by the hybridization

test with this plasmid as a probe

,

as well as for their drug sensitivity

and plasmid profile .

As a result, 28 strains of 37 tested from the sporadic cases , the strains from food poisoning

in Kitakyushu,

Chiba and the one from egg solution , all harbored the same 9 kb TC-resistant

plasmid.

From the above observations

, it was assured that, at the time of investigation,

July to

September

in 1992, the prevalence of S. Enteritidis in Kumamoto City was Predominated

by its

strain carrying

the TC-resistant

plasmid. Furthermore

, considering

the fact that the strain

harboring this plasmid was also found in the food poisoning in Kitakyushu

and Chiba

, it was

suggested that spreading of this strain was not restricted

to localities and was also associated

with Chicken eggs according to its detection from the egg solution .

Table  1  Plasmid  profiles,  drugs  resistant  and  phage  types  of  S.  Enteritidis  iso- iso-lated  from  food  poisoning  and  egg  solution
Table  2  Plasmid  profiles,  drugs  resistant,  phage types  and  colony  hybridization  of  S
Fig.  2  Transformation  of  9kb  plasmid  with   TCs  S.  Enteritidis  strains To  determine  which  plasmid  carries  a  gene  encoding  TC  resistance,  TO  S
Fig.  4  Colony  hybridization  test  of  S.  Enteritidis isolated  from  sporadic  cases  with  diarrhea 9kb  TCr  plasmid  was  used  as  a  probe.

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